熒光分析測(cè)定維生素cPPT課件

1、一、維生素 C及維生素的測(cè)定原理維生素C 維生素 C 又名抗壞血酸, 是維持機(jī)體正常生理 功能的重要維生素之一,而人體不能自身合成 ，只能 從食物和藥物中攝取，因此 ，食品、藥物中維生素 C 的分析具有重要意義。維生素C測(cè)定方法 維生素 C 的測(cè)定常用的方法有光度法 、 電化學(xué)法、滴定法、酶法、色譜法等。 本實(shí)驗(yàn)提出了一種新的測(cè)定維生素 C 的熒光 分析方法：維生素 C 被 Cu2 +氧化為脫氫 抗壞血酸，再與苯甲酸及十六烷基三甲基溴化銨產(chǎn)生熒光協(xié)同增敏作用，通過(guò)對(duì)體系熒光強(qiáng)度的測(cè)定進(jìn)行維生素 C 的定量分析。第1頁(yè)/共12頁(yè)二、熒光分析法測(cè)定維生素 C實(shí)驗(yàn) 1實(shí)驗(yàn)1. 1 主要儀器與試劑 分

2、子發(fā)光儀 :LS - 55 型 酸度計(jì) :pH - 211型 榨汁機(jī) :CW - JE04型 電熱恒溫水浴鍋 :HH. SY11 - N i1型 CuSO4溶液 :2. 0 10- 3 g m/ L 十六烷基三甲基溴化銨 (CTMAB )溶液 :6. 0 10- 4 g /mL 苯甲酸溶液：1. 0 10- 4 g m/ L 維生素 C 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 :5. 0 10- 4 g /mL, 2 8 （避光保存）； 維生素 C 標(biāo)準(zhǔn)溶液 :1. 0 10- 5 g /mL, 2 8 （避光保存）； NaOH -鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液:pH =6. 0； 第2頁(yè)/共12頁(yè)1. 2 實(shí)驗(yàn)步驟 （1）配置

3、待測(cè)樣品及空白對(duì)照 在 25 mL 比色管中依次加入 0. 6 m L CuSO4 溶液，2. 0 m L十六烷基三甲基溴化銨溶液，2. 0 m L 苯 甲酸溶液 ，一定體積的維生素 C 標(biāo)準(zhǔn)溶液 ，5. 0 mL NaOH -鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液, 用蒸餾水定容，搖勻；以不含維生素 C 溶液為 空白對(duì)照。（2）水浴加熱 在 35恒溫水浴中加熱 30 m in， 將溶液流水 冷卻至室溫 。（3）熒光分析 將待測(cè)樣品放置于樣品架上，設(shè)定激發(fā)波長(zhǎng)為 308 nm ，發(fā)射波長(zhǎng)為 408 nm ，測(cè)量熒光強(qiáng)度 F ，以不含維生素 C 的試劑空白為 F0 ，計(jì)算 F測(cè) =F - F0 。第3頁(yè)/共12

4、頁(yè)2 結(jié)果與討論 2. 1 激發(fā)光譜和發(fā)射光譜 取 3. 0 mL 維生素 C 標(biāo)準(zhǔn)溶液, 按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn) 行操作,分別在 290 330 nm、360 460 nm 內(nèi)掃描 得到激發(fā)光譜和發(fā)射光譜如圖 1、圖 2所示。從圖 1、圖 2中可看出 ,當(dāng)激發(fā)波長(zhǎng)為 308 nm , 發(fā)射波長(zhǎng) 為 408 nm 時(shí)體系的熒光強(qiáng)度最大,試劑空白的熒光 值比較低且穩(wěn)定, 故本實(shí)驗(yàn)選擇激發(fā)波長(zhǎng)為 308 nm ,發(fā)射波長(zhǎng)為 408 nm 。 1 C u2 + +BA +緩沖溶液 +CTMAB; 2 Cu2 +BA +維生素 C +緩沖溶液 +CTMAB1 C u2 + +BA +緩沖溶液 +CTMAB; 2

5、 Cu2 +BA +維生素 C +緩沖溶液 +CTMAB激發(fā)光譜發(fā)射光譜第4頁(yè)/共12頁(yè)2. 2 試劑加入順序 按照實(shí)驗(yàn)方法操作, 在各試劑加入量相同的情況下, 試驗(yàn)了試劑的不同加入順序?qū)晒鈴?qiáng)度的影 響。試驗(yàn)結(jié)果表明, 當(dāng)所加試劑順序依次為 CuSO4 溶液、苯甲酸溶液、維生素 C 標(biāo)準(zhǔn)溶液、NaOH -鄰 苯二甲酸氫鉀緩沖溶液時(shí) ,體系的熒光強(qiáng)度最大，因此選用此加入順序?yàn)樽罴言噭┘尤腠樞?。?頁(yè)/共12頁(yè)2. 3 緩沖溶液緩沖溶液 溶液的pH值對(duì)體系熒光強(qiáng)度有較大的影響，試驗(yàn)了不同的pH值對(duì)熒光強(qiáng)度的影響。由pH值 熒光強(qiáng)度的曲線可知 , 當(dāng) pH 值為 5. 9 6. 2 時(shí) ,熒光強(qiáng)度

6、達(dá)到最大值且比較穩(wěn)定 ,因此確定最佳 pH 值為 6. 0。緩沖溶液的種類對(duì)體系的熒光強(qiáng)度也有一定的影響。試驗(yàn)了以下幾種 pH 值為 6. 0 的緩沖溶液 :NaOH - KH 2 PO4 、KH2 PO4 - 硼砂、KH2 PO4 - Na2 H PO4 、NaOH - 鄰苯二甲酸氫鉀、Na2 H PO4 - 檸檬 酸、NaOH -檸檬酸鈉、HA c - NaA c等。試驗(yàn)結(jié)果表明 ,當(dāng)所加的緩沖溶液為NaOH -鄰苯二甲酸氫鉀時(shí),熒光強(qiáng)度最大且穩(wěn)定。因此本實(shí)驗(yàn)選擇NaOH - 鄰苯二甲酸氫鉀為緩沖溶液 ,其最佳用量為 5. 0 m L。2. 4 加熱溫度和加熱時(shí)間加熱溫度和加熱時(shí)間 試驗(yàn)了

7、不同溫度對(duì)體系熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明, 當(dāng)加熱溫度為 35時(shí)，既有利于提高體系反應(yīng)速度，又不使反應(yīng)物與產(chǎn)物結(jié)構(gòu)受到破壞。改變 加熱時(shí)間進(jìn)行試驗(yàn), 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在 35水浴中加熱30 m in，體系熒光強(qiáng)度達(dá)到最大值且相對(duì)穩(wěn)定。 第6頁(yè)/共12頁(yè)2. 5 硫酸銅和苯甲酸的用量硫酸銅和苯甲酸的用量其它條件不變，試驗(yàn)了硫酸銅和苯甲酸的用量對(duì)體系熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明，當(dāng)硫酸銅的用量為 0. 6 m L、苯甲酸的用量為 2. 0 mL 時(shí)，體系熒光強(qiáng)度最大。2. 6 表面活性劑表面活性劑 分別試驗(yàn)了十六烷基三甲基溴化銨 (CTMAB)、 十二烷基磺酸鈉及 -環(huán)糊精對(duì)體系熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明 ,表

8、面活性劑對(duì)體系的熒光強(qiáng)度有一定的增敏效果，其中 CTMAB 對(duì)體系的增敏效果最 好。進(jìn)一步試驗(yàn)了 CTMAB 的用量對(duì)體系的熒光強(qiáng)度的影響, 當(dāng) CTMAB 的用量為 2. 0 m L 時(shí), 體系熒光強(qiáng)度最大。 第7頁(yè)/共12頁(yè)三、熒光分析法測(cè)定維生素 C 應(yīng)用 樣品測(cè)定 取一片維生素C藥片，研細(xì)，混勻，準(zhǔn)確稱取 0. 152 0 g 溶于二次蒸餾水中 ，轉(zhuǎn)移至 500 mL 容量 瓶中定容，配成水溶液。再準(zhǔn)確移取10 m L此溶液，將其稀釋成 100 m L的溶液，作為樣品稀釋液。 對(duì)樣品稀釋液進(jìn)行測(cè)定并做加標(biāo)回收試驗(yàn)。 同時(shí)利用本法對(duì)西紅柿和果珍進(jìn)行測(cè)定。準(zhǔn)確稱取一定量的果珍，將其配成10

9、0 mL的溶液。將清洗干凈的西紅柿榨汁，稱取一定量的西紅柿汁， 將其配成100 m L的溶液。 其它步驟和維生素 C 藥片的測(cè)定方法 相同。 第8頁(yè)/共12頁(yè) 樣品測(cè)定結(jié)果列于表 3表 3 樣品測(cè)定結(jié)果(n =3)。由表3可知，用熒光分析法測(cè)定維生素C藥片、西紅柿和果珍中維生素C的含量，回收率為96. 7% 100. 5%準(zhǔn)確度較高。表 3 樣品測(cè)定結(jié)果(n =3) 熒光分析法測(cè)定維生素 C 具有操作簡(jiǎn)單 ,精密 度高 ,檢出限低等優(yōu)點(diǎn), 該法可以應(yīng)用于水果、蔬菜 和藥物中維生素 C 的檢測(cè), 適于推廣。第9頁(yè)/共12頁(yè)謝謝觀賞！第10頁(yè)/共12頁(yè) 利用某些物質(zhì)受光照射時(shí)所發(fā)生的熒光特性和強(qiáng)度，進(jìn)行物質(zhì)的定性分析或定量分析的方法，稱為熒光光譜分析。 使激發(fā)光的波長(zhǎng)和強(qiáng)度保持不變，而讓熒光物質(zhì)所發(fā)生的熒光通過(guò)發(fā)射單色器照射于檢測(cè)器上，調(diào)節(jié)發(fā)射單色器至各種不同波長(zhǎng)處,由檢測(cè)器測(cè)出相應(yīng)的熒光強(qiáng)度，然后以熒光波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)作圖，即為熒