冰片修飾的丹參酮固體脂質(zhì)納米粒膠囊設(shè)計(共35頁)

1、冰片修飾的丹參酮固體(gt)脂質(zhì)納米粒膠囊(jio nn)設(shè)計專業(yè)(zhuny) 中藥制藥姓名 王巧瑩學(xué)號錄(ml) TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc407751269 前言 前言(qin yn)丹參(dn cn)為唇形科植物丹參（Salvia miltiorrhiza Bge）的干燥(gnzo)根及根莖，始載于神農(nóng)本草經(jīng)，被列為上品，是我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中常用的藥材之一，有悠久的臨床應(yīng)用歷史。丹參的功能與主治為：。祛瘀止痛，活血通經(jīng)，清心除煩。用于月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，瘸瘕積聚，胸腹刺痛，熱痹疼痛，瘡瘍腫痛，心煩不眠，肝脾腫大，心絞痛，說明丹

2、參具有多方面的功效，中醫(yī)有。一味丹參飲，功同四物湯。之說在中醫(yī)臨床上，丹參主要用來治療冠心病、腦血栓和肝炎肝硬化等。常用的丹參類制劑包括丹參注射液、丹參片、復(fù)方丹參片、復(fù)方丹參滴丸等，以丹參的水提取物制各的丹參注射液在臨床上廣泛用于冠心病、心肌梗塞和腦血管疾病的治療。丹參的化學(xué)成分主要分為水溶性和脂溶性兩大類，20世紀(jì)早期的研究主要集中在以丹參酮為代表的脂溶性成分方面。丹參酮（tanshinone，Tsn）是丹參中具有橙黃色和橙紅色特征的脂溶性二萜類化合物，按其結(jié)構(gòu)的不同可分為丹參酮I、丹參酮 = 2 * ROMAN IIA、丹參酮 = 2 * ROMAN IIB、隱丹參酮、二氫丹參酮I、羥基

3、丹參酮、丹參酮甲酯、異丹參酮、異隱丹參酮等10多種成分，其中丹參酮 = 2 * ROMAN IIA（TsnIIA）是丹參中脂溶性成分的代表（結(jié)構(gòu)見下圖）。由于醌類成分易被還原為二酚類衍生物，后者又被氧化而轉(zhuǎn)變?yōu)轷虼似鸬诫娮觽鬟f作用。它們作為生物體內(nèi)新陳代謝的產(chǎn)物，通過促進或干擾生物的多種生化反應(yīng)，從而表現(xiàn)出多種生物活性。丹參酮 = 2 * ROMAN IIA還具有天然抗氧化作用，大量的研究表明丹參酮在抗腫瘤、心腦血管疾病、抗菌消炎等方面均有良好的治療作用。1. 丹參酮的藥理作用1.1 抗腫瘤作用(zuyng)丹參酮是丹參的主要抗腫瘤活性成分，通過各種腫瘤細胞殺傷、誘導(dǎo)分化及誘導(dǎo)凋亡等機制發(fā)

4、揮抗腫瘤作用。誘導(dǎo)分化治療惡性腫瘤與傳統(tǒng)化學(xué)治療的根本區(qū)別在于它不殺傷腫瘤細胞，而是誘導(dǎo)腫瘤細胞分化成為正常細胞或接近正常細胞，對正常細胞無殺傷作用，且少有骨髓( su)抑制等副作用，其作用機制可能是通過抑制ras癌基因和PCNA表達(biod)，影響DNA多糖酶活性，抑制DNA的合成，從而抑制細胞的大量增殖，誘導(dǎo)細胞分化。故丹參酮抗腫瘤作用可能是誘導(dǎo)腫瘤細胞分化，同時誘導(dǎo)凋亡或誘導(dǎo)腫瘤細胞分化成熟，最終走向凋亡。1.2 抗菌消炎作用體外實驗表明，隱丹參酮、二氫丹參酮等對葡萄球菌、大腸桿菌、變形桿菌等致病菌有抑菌作用，尤其對耐藥金黃色葡萄球菌有顯著作用，并對兩種毛發(fā)癬菌有抗菌作用，并且能抑制白

5、細胞游走，抑制溶酶體釋放，抑制中性粒細胞趨化性，影響巨噬細胞和成纖維細胞的功能，降低血中的前列腺素F2a（PGF2a）和前列腺素E1（PGE1）含量，減少炎癥滲出。1.3 保護皮膚丹參酮對痤瘡丙酸桿菌高度敏感，且是一種緩和的雌激素樣物質(zhì)，起著抗雄激素的作用 ；還具有類似氫化可的松的抗炎作用。丹參乙醇提取物在高、中、低3個濃度均對蘑菇酪氨酸酶活性和黑色素生成量呈劑量依賴性激活和上調(diào)，表明丹參可提高白癜風(fēng)療效。丹參對痤瘡的各種損害均有效。1.4 抗脂質(zhì)過氧化和清除自由基作用清除有害自由基，防止或減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，是丹參(dn cn)防治心、腦血管病、肝病、腎臟病的作用機制之一。丹參水提物、丹參注

6、射液及丹參素、丹參酮A磺酸鈉有清除(qngch)超氧陰離子和羥自由基的作用。1.5 對消化系統(tǒng)(xiohu xtng)的作用丹參提取物F（DSEF）對大鼠胃黏膜再灌注損傷具有一定的保護作用。而且DSEF對胃黏膜體部損傷面積及深度損傷的抑制率高于竇部。1.6 對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用丹參有明顯的鎮(zhèn)靜作用，可使動物自發(fā)活動減少，大腦皮層自發(fā)電活動減少，并能延長環(huán)己烯巴比妥的睡眠時間。1.7 改善外周循環(huán)中醫(yī)認為丹參具活血化瘀之功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，丹參有改善外周血液循環(huán)、提高機體的耐缺氧能力、加快微循環(huán)血液流通和增加毛細血管網(wǎng)等作用，并能抑制凝血、激活纖溶。進一步研究表明，丹參是通過影響脯氨酸和賴氨

7、酸羥化酶的活性來抑制人體皮膚成纖維細胞合成膠原的，但不影響DNA及非膠原蛋白的合成，丹參對膠原合成的抑制率與劑量呈正相關(guān)。1.8 調(diào)節(jié)組織修復(fù)與再生丹參制劑能使實驗性心肌梗死狗壞死心肌清除加快，巨噬細胞活躍，成纖維細胞分化和膠原纖維形成較明顯，肉芽形成較成熟，還可使骨折局部瘀血減輕，骨折愈合時間縮短。丹參還可抑制纖維細胞的過度增生，用于治療硬皮病、瘢痕疙瘩等。2. 丹參酮的臨床應(yīng)用2.1 感染性疾病外科(wik)一般化膿性感染中應(yīng)用(yngyng)較多。丹參酮用于治療(zhlio)金黃色葡萄球菌及白色葡萄球菌感染的骨髓炎有較好的療效，對初發(fā)或感染較輕的病例療效較顯著。對病情較重、病程長，有竇道

8、和死骨的病例配合外科手術(shù)效果好。長期服用丹參酮未產(chǎn)生耐藥性，對耐抗生素的金葡菌仍敏感。2%丹參酮凡士林油膏外用，有抗菌、消腫、消炎作用，能促進傷口愈合。2.2 輔助治療惡性腫瘤丹參注射液聯(lián)合化療法具有協(xié)同、增效作用，用丹參注射液輔助治療惡性腫瘤，能提高腫瘤細胞對化療的敏感性，延遲腫瘤細胞對化療藥物的耐受性。同時可提高正常組織對化療藥物耐受性，并且對骨髓、心臟、消化道等重要器官有一定保護作用。2.3 治療心腦血管疾病丹參酮通過擴張冠狀動脈，增加冠狀動脈血流量供給心肌充足的氧，保護ATP酶的活性，糾正心肌細胞內(nèi)異常的鈣代謝，減少細胞內(nèi)Ca2+超載，從而對心肌起到保護作用，對冠心病有很好的治療效果。

9、丹參酮能夠擴張微動的小動脈，緩解血管痙攣，改善微循環(huán)，加快血流速度，從而改善心肌供血功能及減少心絞痛的發(fā)作，對于心絞痛有很好的治療效果。另外，丹參酮可以擴張腦血管，增加腦血流量，提高纖溶活性，改善血流動力學(xué)，促進血腫吸收，減少腦組織興奮性氨基酸的釋放，降低應(yīng)激性血糖升高而導(dǎo)致的腦出血。3. 冰片概況中藥冰片，可分天然冰片和合成冰片兩大類，天然冰片為腦香科植物龍腦香樹脂的加工品，因資源緊缺，現(xiàn)多使用以樟腦、松節(jié)油等為原料的人工合成品，簡稱為冰片。中醫(yī)認為冰片味辛苦，性涼，有開竅醒神、清熱止痛、生肌之效，目前冰片在臨床上的應(yīng)用極為廣泛，特別是在心腦血管疾病中的應(yīng)用尤引人關(guān)注。冰片是一種單萜成分，在

10、中藥配伍中有廣泛的應(yīng)用。中醫(yī)認為冰片。芳香走竄，引藥上行。、。獨行則勢弱，佐使則有功。研究表明，冰片能加速血腦屏障的開放，提高腦內(nèi)藥物分布，從而改善口服等給藥途徑的生物利用度。4. 固體(gt)脂質(zhì)納米粒概況(gikung)固體(gt)脂質(zhì)納米粒（solid lipid nanoparticles， SLN）是指粒徑在10-1000 nm之間的固態(tài)膠體顆粒，它以固態(tài)天然或合成的類脂如卵磷脂、三酰甘油等為載體，將藥物包裹或夾嵌于類脂核中制成固體膠粒給藥系統(tǒng)，是20世紀(jì)90年代初發(fā)展起來的一種可替代乳劑、脂質(zhì)體和聚合物納米粒的新型膠體給藥系統(tǒng)。其主要優(yōu)點是：顆粒粒徑小，平均在納米尺度，可用于注射給

11、藥；生理可接受，在制備過程中無有毒殘留物；對親脂性藥物有足夠的載藥能力，通過工藝調(diào)整，還可以包封親水性藥物；延長藥物釋放達數(shù)日至數(shù)周；通過冷凍干燥或噴霧干燥還可制成固體粉末；通過對其表面進行特征修飾，可實現(xiàn)靶向給藥；生理相容性好并可生物降解，可控制藥物釋放及有良好的靶向性，同時避免了有機溶劑不能完全去除的缺點。5. 立題依據(jù)丹參酮的水溶性差，生物利用度差，半衰期短，用藥頻率高，而心腦血管疾病需要長期用藥，因此現(xiàn)有劑型病人的順應(yīng)性差。應(yīng)用固體脂質(zhì)納米粒給藥系統(tǒng)能很好的解決這些問題，也有文獻報道，但很少?？紤]到中藥新劑型的研究要在中醫(yī)理論指導(dǎo)下進行，中藥間確實存在相互作用，已有的丹參方中冰片能夠提

12、高丹參的生物利用度，同時冰片還可以加速血腦屏障的開放，與固體脂質(zhì)納米粒協(xié)同作用，能提高腦靶向作用，更好地應(yīng)用于腦出血等疾病。因此，本文設(shè)計了冰片修飾的丹參酮固體脂質(zhì)納米粒，以達到緩釋、靶向的目的。第一章 提取(tq)分離(fnl)工藝(gngy)丹參酮是丹參中脂溶性化合物，為菲醒類化合物，包含有三十多種成分，丹參中的主要脂溶性有效成分包括丹參酮 = 2 * ROMAN IIA、隱丹參酮和丹參酮 = 1 * ROMAN I。由于丹參酮 = 2 * ROMAN IIA、隱丹參酮、丹參酮 = 1 * ROMAN I這三種成分在丹參植物中含量不低于2%，而且它們的藥理活性的比較顯著，因此，研究這三種脂

13、溶性的成分很具有代表性，在理論和應(yīng)用上都很有意義。國內(nèi)外的學(xué)者對丹參的提取分離以及結(jié)構(gòu)測定進行了大量的研究工作。丹參酮的提取、分離方法比較多，主要是柱層析方法，包括氧化鋁層析，分段切割法，硅膠柱層析配合制備型薄層分離法和多次柱層析，運用制備型高壓液相分離法等。最理想的丹參酮提取分離方法應(yīng)具備高效、環(huán)保、低毒、省溶媒、省時、節(jié)能等特點。1.1 預(yù)實驗1.1.1 提取工藝的確定本實驗利用加熱回流法、超聲波法和組織破碎法等三種提取方法同時提取丹參中脂溶性（丹參酮）成分，通過比較不同的提取方法對丹參提取物中丹參酮 = 2 * ROMAN IIA含量測定的影響，確定丹參酮的提取工藝。1.1.1.1 加熱

14、回流法取干燥粉碎過六號篩的丹參粉末50 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加熱回流提取三次（電熱套加熱，溫度設(shè)定為65 ）：每次精密加入400 mL 75%乙醇，浸泡20 min，提取時間分別為45 min、40 min、40 min，靜置10 rnin，過濾，濃縮，即得浸膏，精密稱定。同法制備三批樣品。1.1.1.2 超聲波取干燥粉碎過六號篩的丹參(dn cn)粉末50 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，利用(lyng)超聲波清洗機超聲波共提三次：每次精密(jngm)加入75%乙醇400 mL，浸泡20 min，提取時間分別為30 min、25 min、20 min，靜置10 min，過濾，濃縮，即得

15、浸膏，精密稱定。同法制備三批樣品。1.1.1.3 組織破碎法取丹參藥材50 g，采用75%乙醇組織破碎法進行提取，使用7倍量、6倍量、6倍量溶劑提取3 min、2 min、2 min，每次提取前浸泡20 min，提取后靜置10 min，過濾，合并三次濾液，濃縮即得浸膏。同法制備三批樣品。表1.1 不同提取方法提取丹參酮的研究超聲法加熱回流法破碎提取法醇濃度（%）757575溫度（）256525時間（min）130453225402320402溶劑量（mL）140040035024004003003400400300得膏率（%）丹參酮 = 2 * ROMAN IIA含量（%）1.1.2 色譜條件

16、的確定查閱文獻得到的HPLC色譜條件作為參考，在此基礎(chǔ)上進行調(diào)整，以確定色譜條件。YMC C18色譜(s p)柱（250 mm4.6 mm，5 m）；流速(li s)：1.0 mL/min；柱溫：25 ；進樣量：20 L。流動(lidng)相：甲醇（C）-0.5%甲酸水溶液（D）梯度洗脫，洗脫程序見表1.1。檢測波長：丹參酮 = 2 * ROMAN IIA為270 nm。表1.2 HPLC洗脫程序洗脫時間C泵（%）D泵（%）0-30 min356330-50 min80201.1.2.1 供試品溶液配制取浸膏50 mg，置于50 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度。1.1.2.2 對照品溶液的

17、配制精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品丹參酮 = 2 * ROMAN IIA5 mg，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為丹參酮 = 2 * ROMAN IIA對照品溶液。1.1.3 系統(tǒng)適用性檢查1.1.3.1 線性關(guān)系精密量取丹參酮IIA對照品溶液0.5，1.0，2.0，4.0和8.0 mL于50 mL棕色量瓶中，加乙睛至刻度，搖勻。依次吸取丹參酮IIA系列對照品溶液20 L，注入液相色譜儀，測定，以丹參酮IIA的峰面積為縱坐標(biāo)，進樣濃度為橫坐標(biāo)，計算回歸方程并考察線性關(guān)系。1.1.3.2 精密度試驗取供試品溶液(rngy)重復(fù)測6次，測得丹參酮IIA含量(hnling)并計算(j sun)RSD

18、，RSD應(yīng)小于2%。1.1.3.3 重現(xiàn)性試驗同一批樣品平行測定5份，測得丹參酮IIA的平均含量，并計算RSD，應(yīng)小于2%。1.1.3.4 穩(wěn)定性試驗將同一批待測樣品液每隔2 h測定一次，測定6次（即共12 h），計算RSD，應(yīng)小于2%。1.1.3.5 回收率試驗精密稱取丹參供試品25 mg，置入50 mL棕色容量瓶中，其中加入濃度為0.2 mg/mL的丹參酮IIA對照品溶液1 mL，得到供試品溶液，進色譜分析。具體如下表：表1.3 丹參酮IIA的回收率測定NO.稱樣量（mg）樣品中丹參酮IIA的含量（mg）加入丹參酮IIA對照品的含量（mg）丹參酮IIA實測含量（mg）回收率（%）平均回收率

19、（%）RSD（%）10.220.230.240.250.2RSD應(yīng)小于2%。1.2 提取(tq)工藝的研究在預(yù)實驗中確定一種(y zhn)提取方式，再對其進行優(yōu)化?？紤]以下幾個方面：1.2.1 提取(tq)溶劑的選擇丹參酮屬于脂溶性成分，根據(jù)相似相溶原理，溶劑極性的選擇應(yīng)適中，極性太小，不能把有效成分提取完全；極性太大，其它成分也會被提取出來；且應(yīng)考慮環(huán)境污染和成本問題，可選擇低毒價廉的石油醚、乙酸乙酯、乙醇等有機溶劑為提取溶劑，其中乙醇用的最多，本實驗考察50%、70%、95%三個濃度的乙醇。1.2.2 料液比的選擇溶劑體積的選擇，應(yīng)兼顧丹參酮得率和生產(chǎn)成本兩個方面。當(dāng)料液比一定時，丹參酮得

20、率達到較高值，再提高溶劑用量，丹參酮得率增加緩慢，當(dāng)溶劑用量增大時，溶劑的消耗也增多，增加了生產(chǎn)成本，并且，溶出其他成分的量也增多，給分離帶來了困難，可選擇的料液比為1: 4、1: 6、1: 8。1.2.3 提取時間的選擇隨著提取時間的延長，丹參酮的得率逐漸增大，當(dāng)達到一定的時間，丹參酮的得率增加不明顯，且考慮到能耗，應(yīng)以此時間為提取時間?？蛇x擇的提取時間為20 min、30 min、40 min。1.2.4 提取次數(shù)的選擇同樣，提取增加，丹參酮的得率也提高，達到一定的提取次數(shù)，丹參酮的得率就增加較為緩慢，因此，為了縮短提取時間，提高生產(chǎn)效率，提取次數(shù)應(yīng)適宜?？蛇x擇的提取次數(shù)為3次、4次、5次

21、。表1.4 丹參酮提取正交實驗表水平因素提取溶劑料液比提取時間（min）提取次數(shù)150%乙醇1: 4203270%乙醇1: 6304395%乙醇1: 84051.3 分離(fnl)工藝的研究目前(mqin)，丹參酮的富集純化多用柱層析方法(fngf)，選擇硅膠作為柱填料。1.3.1 薄板的制備取薄層層析硅膠若干克于研缽中，照硅膠: 7CMC-Na水溶液1: 2，加入CMC-Na水溶液調(diào)勻、研磨，順著一個方向攪拌，調(diào)成糊狀物鋪層，水平放置，待自然干燥硅膠顏色漸變色時，移烘箱中110 烘30 min活化，放干燥器中備用。1.3.2 洗脫劑的選擇分別精密稱取丹參總酮、丹參酮IIA對照品、丹參酮I對照

22、品、隱丹參酮對照品適量，用甲醇溶解，搖勻避光備用。選取三種不同的展開體系：苯: 石油醚、石油醚: 丙酮、石油醚: 乙酸乙酯，根據(jù)比移值Rf的范圍（應(yīng)在0.3-0.6之間）和總酮中各成分的分離情況，觀察分離效果。1.3.3 裝柱在層析柱出口塞入小量棉花，固定在鐵架臺上，保持垂直狀態(tài)，將柱的上端與漏斗連接，注入適量柱層析硅膠，輕輕敲打并在桌上撞實，如此反復(fù)，直至填好為止，為使裝填緊密，裝實后，與真空泵連接除氣，裝好備用。1.3.4 樣品(yngpn)的處理及上樣樣品用低沸點的溶劑(rngj)溶解，然后(rnhu)加入適量的硅膠拌勻，炒干。再均勻置于柱頂盡量使樣品帶平整。樣品在柱子上的載量取決于柱體

23、積、填料類型和分離的需要，本實驗以丹參酮IIA的得率為指標(biāo)，分別按上樣量: 硅膠量為1: 30、1: 40、1: 50、1: 60進行實驗，確定了最佳比例。1.3.5 洗脫及收集樣品上樣后將選擇好的洗脫劑緩緩加入柱內(nèi)，保持流速1-2 d/s，在洗脫過程中，會出現(xiàn)不同色段，收集不同色段，與丹參酮IIA對照品相對照，通過薄層檢識，合并相同流分，濃縮干燥后，HPLC測定相對含量。第二章 固體(gt)脂質(zhì)納米粒制備(zhbi)研究(ynji)2.1 固體脂質(zhì)納米粒的制備方法2.1.1 高剪切乳勻和超聲分散高剪切乳勻和超聲分散是藥劑學(xué)中廣為應(yīng)用的一種分散技術(shù)，可用來制備乳劑、脂質(zhì)體等，也可以用于固體脂質(zhì)

24、納米粒（SLN）分散體系的制備。它們的優(yōu)點是操作簡單，易于控制。缺點是體系中易出現(xiàn)微米級粒子，如果超聲時間大于15 min，則可能導(dǎo)致金屬的污染。2.1.2 高壓乳勻法高壓乳勻是目前制備SLN的經(jīng)典方法。其工作原理是利用高壓（10-200 MPa）推動液體通過一個狹窄的管道（幾個微米），液體通過很短的距離而獲得了很大的速度（超過1000 km/h），產(chǎn)生的高剪切力和空穴作用力使粒子分裂成納米級的小粒子。此法的優(yōu)點是可避免使用對人體有害的附加劑和有機溶劑，尤其適用于對熱不穩(wěn)定的藥物。所制得的納米粒粒徑小且分布范圍窄，高壓乳勻還便于進行大規(guī)模生產(chǎn)。乳勻有兩種基本的方法:熱乳勻和冷乳勻，這兩種方法都

25、可以制備SLN，但乳勻之前都需將藥物溶解或分散在熔化的脂質(zhì)中，即初步乳化。一般初步乳化如能得到幾個微米級的粒子則更有利于乳勻。2.1.2.1 熱乳勻熱乳勻是指在脂質(zhì)熔點以上的溫度進行操作，將脂質(zhì)和磷脂等加熱至高于脂質(zhì)的熔點10-15 左右融化，加入藥物，熔融液分散于含有表面活性劑的水相中，初乳化后，通過高壓乳勻機循環(huán)乳化即得。由于溫度升高降低了脂相的粘度，所以原則上講溫度越高得到的產(chǎn)品的粒徑就越小。但是并不是溫度越高就越好，因為在高溫下藥物和載體的降解速度也會加快。并且雖然乳勻的步驟可以重復(fù)幾次，但每次乳勻都會導(dǎo)致體系溫度的升高，平均壓力每升高50 MPa，可使體系的溫度增加100 。一般在5

26、0-150 MPa壓力下重復(fù)3-5次己足夠，如果循環(huán)次數(shù)增多和壓力增大反而會使SLN的粒徑增大，因為隨著體系溫度的升高，粒子聚集傾向加大。通過熱乳勻最初得到(d do)的僅是一種乳液，脂質(zhì)還處于(chy)一種液體狀態(tài)，必須使其溫度(wnd)降至寫班溫或熔點以下，才能形成SLN。由于粒徑小和乳化劑的存在，它會在一定的時問內(nèi)保持一種過冷熔化狀態(tài)。2.1.2.2 冷乳勻冷乳勻法的制備過程同熱乳勻法一樣，也需使藥物溶解或分散在熔融的脂質(zhì)中，熔化的樣品立即在干冰或液氮中冷卻。冷卻速度越快，藥物在脂質(zhì)基質(zhì)中的分布越均勻。再把已凝固的載有藥物的脂質(zhì)碾磨成微米級粒子。由于低溫凝固，脂質(zhì)脆性增加，更易被粉碎，通

27、過球磨或碾缽得到的粒子粒徑一般在50-100 m。然后將它們和含表面活性劑的冷凍溶液在低于脂質(zhì)熔點5-10 以下高壓勻質(zhì)。此法適用于對熱不穩(wěn)定的藥物和熔點低的脂質(zhì)，還可以避免熱乳勻過程中藥物向水相流失以及結(jié)晶過程中出現(xiàn)的晶型轉(zhuǎn)變和過冷態(tài)。但是該法所制得的SLN粒徑較大且粒徑分布范圍較寬。2.1.3 乳化蒸發(fā)法SLN的制備也可以采用PNP的制備方法，但它的一個明顯不足是使用了有機溶劑。將脂質(zhì)和藥物首先溶解于有機溶劑中，然后對有機相和含有表面活性劑的水相進行乳化，將有機溶劑蒸發(fā)后，即形成SLN。采用該法所得到的SLN粒徑很小，甚至可達到25 nm。2.1.4 微乳法微乳是由油相、乳化劑和輔助(fz

28、h)乳化劑及水所組成的澄清或帶有微弱藍色乳光的熱力學(xué)穩(wěn)定的分散體系。現(xiàn)在人們認為微乳并不是一種由微小液滴形成(xngchng)的真正的乳液，而是一種臨界(ln ji)溶液（critical solution）。微乳一方面具有乳液的一些性質(zhì)（如可以用激光光散射法測量它的粒徑），另一方面它又具有真溶液的一些性質(zhì)（如藥物在微乳中有一定的飽和濃度，而不是像乳劑那樣具有一定的油/水分配比例）。將微乳加入到水中會導(dǎo)致油相的沉降從而形成極細的顆粒。微乳的制備方法是用低熔點的脂肪酸（如硬脂酸）、乳化劑、輔助乳化劑和水在65-70 攪拌制成透明混合液。再在攪拌下向熱微乳中加入冷水（2-3 ），一般微乳和水的比率

29、為1: 25到1: 50，其稀釋程度取決于微乳的組成。為了使微乳中的油相在室溫下是固體，需要在制備時使體系的溫度高于脂質(zhì)的熔點。這樣SLN顆粒的大小主要受微乳小粒子沉淀影響，而與攪拌速度關(guān)系不大。在微乳中液滴己達到納米級，所以并不需要額外能量。對于微乳來說，不但配方組成，而且溫度下降速度與pH值都能影響制劑的質(zhì)量。降溫速度快可以促使脂質(zhì)快速結(jié)晶并避免納米粒聚集。2.2 固體脂質(zhì)納米粒的干燥方法盡管有文獻報道SLN的水溶液分散體的粒徑能穩(wěn)定12-36個月，但由于SLN分散體是熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，通常在短時間里就出現(xiàn)粒徑的增大、粒子聚合甚至膠凝的現(xiàn)象。為了提高SLN的化學(xué)和物理穩(wěn)定性，保持其原有的粒

30、徑，阻止Ostwald熟化和避免水解，常用的方法是將SLN分散液干燥成固體。另外SLN分散液干燥后，可將藥物制成固體制劑如片劑、膠囊等，可以增加藥物的給藥方式和給藥途徑。由于SLN的特殊性質(zhì)，常用的干燥法有冷凍干燥和噴霧干燥。2.2.1 冷凍干燥法樣品(yngpn)經(jīng)冷凍干燥變成固態(tài)后，具有更好的化學(xué)(huxu)和物理穩(wěn)定性。但是在凍干(dn n)過程中有兩種相變會影響其穩(wěn)定性。第一，在冷凍干燥過程中從水性分散體變成粉末時，由于樣品的滲透壓和pH值的改變，可能會引起不穩(wěn)定問題;第二，再增溶作用，粒子由于處在一個低含水量、高粒子濃度、高滲透壓的環(huán)境中，易發(fā)生聚合。冷凍干燥法將降低表面活性劑的保護

31、作用。己經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)SLN分散體的脂質(zhì)含量不超過5%時，脂質(zhì)粒子的直接接觸減少，有更高的升華速度和更高的比表面積，可以有效抑制粒子的聚合。冷凍防護劑的加入可以減少粒子的聚合，還能使得到的干燥產(chǎn)品具有更好的再分散特性。常用的冷凍防護劑有山梨醇、甘露糖、海藻糖、葡萄糖和聚乙烯吡咯烷酮等。冷凍防護劑可以占據(jù)離散的脂質(zhì)納米粒之間的空間位置，從而阻止其相互接觸，還能和表面活性劑的活性位點發(fā)生作用，形成一層假性水化殼。一般來講，冷凍防護劑的濃度在10-15%之間，SLN的平均粒徑和粒徑分布在冷凍干燥-再分散試驗后，平均粒徑一般增大1.5-2.4倍，沒有冷凍防護劑的樣品的粒徑增大得更多。冷凍防護劑的保護作用由

32、大到小為:海藻糖蔗糖葡萄糖和麥芽糖。以海藻糖的效果最好，它可以充分阻止粒子的聚合和藥物的滲漏。冷凍防護劑加入的時間也會影響最后產(chǎn)品的性質(zhì)。冷凍防護劑在乳勻之前加入效果最好，平均粒徑在凍干過程中幾乎不發(fā)生改變。冷凍防護劑和脂質(zhì)的重量比為2.6-3.9較合適。載藥的SLN通過冷凍干燥有可能使其穩(wěn)定性大大降低，這可能與游離的藥物分子有關(guān)。載藥納米粒Zeta電位降低，滲透壓和pH值改變進而導(dǎo)致粒子的穩(wěn)定性下降。因此提高藥物的包封率尤為重要。冷凍的過程會影響晶體的給構(gòu)和凍干粉的性質(zhì)。冷凍的速度取決于特定的樣品和條件?？焖倮鋬鰰W(xué)致小型和異質(zhì)晶體出現(xiàn)，增加了非晶型的含量，降低冷凍效果。晶體的大小是影響冷凍

33、干燥過程中升華速度的關(guān)鍵因素。大量小晶體和非晶區(qū)的出現(xiàn)導(dǎo)致形成非常緊密的凍干粉網(wǎng)，因而降低了升華速度。緩慢冷卻可以形成大晶體和自由的升華物，但是常常會增強冷凍所導(dǎo)致的不穩(wěn)定現(xiàn)象。此外，對冷凍的SLN分散體進行預(yù)處理（-22 處理2 h，接著降至-40 處理2 h）可能會提高凍干粉的質(zhì)量。2.2.2 噴霧干燥噴霧干燥比冷凍干燥法經(jīng)濟(jngj)，但較少用于SLN體系(tx)。主要(zhyo)是由于高溫、高剪切力和脂質(zhì)的部分熔化，易造成粒子的團聚。只有當(dāng)脂質(zhì)熔點大于70 ，冷凍防護劑和脂質(zhì)都能在噴霧干燥過程中保持SLN粒徑大小不變時才考慮采用此法。2.3 空白固體脂質(zhì)納米粒制備方法的篩選從制得的空

34、白固體脂質(zhì)納米粒外觀、粒徑等對以下方法進行篩選。2.3.1 溶劑乳化法稱取一定量的硬脂酸和卵磷脂溶于10 mL三氯甲烷中形成有機相，另稱取分子量為5000的PEG修飾物Myrj59溶于25 mL水中形成水相。用6#針頭注入2000 r/min攪拌的（752） 的水相中，邊注入邊攪拌，待有機溶劑揮干后，即得固體脂質(zhì)納米粒分散液。2.3.2 熔化-勻化法取一定量的硬脂酸加熱到（752） 熔融，另稱取Myrj59和卵磷脂溶于水中，攪拌使其充分溶解，加熱到（752） ，然后倒入75 熔化的硬脂酸中，快速攪拌，逐漸降到室溫，即得固體脂質(zhì)納米粒分散液。2.3.3 熔化-超聲分散法取適量的硬脂酸和卵磷脂放入

35、自制(zzh)的加熱套中加熱至（752） 熔融(rngrng)保溫，另稱取Myrj59溶于水中，攪拌(jiobn)使充分溶解，并加熱到（752） ，倒入熔融保溫的加熱套中，然后進行超聲。經(jīng)過適當(dāng)超聲后，逐漸降到室溫，即得固體脂質(zhì)納米粒分散液。2.3.4 薄膜-超聲分散法稱取卵磷脂和硬脂酸，溶于20 mL氯仿中得類脂溶液。將該類脂溶液倒入梨形燒瓶中，置于70 恒溫水浴中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在減壓的條件下蒸除有機溶劑，使磷脂等成膜材料在燒瓶壁形成一層薄的脂質(zhì)膜;向瓶中加入50 mL含Myrj59的蒸餾水，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直至形成均勻的脂質(zhì)體懸混液。再將該脂質(zhì)體懸混液超聲分散，即得SLN分散液。2.3.5

36、乳化蒸發(fā)-低溫固化法取處方量的硬脂酸和5 mL丙酮加入25 mL具塞梨形瓶中，超聲使其充分溶解，加入處方量的卵磷脂氯仿液，微熱使溶，構(gòu)成有機相。另取處方量的Myrj59溶于30 mL高純水中，構(gòu)成水相。將有機相以6#針頭注入1000 r/min攪拌的（752） 的水相，繼續(xù)攪拌約4 h，使有機溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮至約5 mL，將所得的半透明體系快速混于另一0-2 的1000 r/min攪拌的10 mL的水相，繼續(xù)攪拌2 h，即得硬脂酸納米粒的膠體懸混液。2.4 冰片修飾的丹參酮IIA固體脂質(zhì)納米粒的制備通過文獻比較，初步推測利用乳化蒸發(fā)-低溫固化方法制備較好。對冰片含量、表面活性劑、卵磷脂

37、、Myrj59的量采用正交設(shè)計法進行優(yōu)化。丹參酮IIA固體脂質(zhì)納米粒的制各方法如下：取10 mg丹參酮IIA、處方量的冰片和硬脂酸、5 mL的丙酮加入25 mL具塞梨形瓶中，超聲使其充分溶解，加入處方量的卵磷脂氯仿液，微熱使溶，構(gòu)成有機相。另取處方量的Myrj59溶于高純水30 mL中，構(gòu)成水相。將有機相以6#針頭注入1000 r/min攪拌的（752）的水相，繼續(xù)攪拌約4 h，使有機溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮至約5 mL，將所得的半透明體系快速混于另一0-2 的1000 r/min攪拌的10 mL的水相，繼續(xù)攪拌2 h，即得硬脂酸納米粒的膠體懸混液，體系定容至20 mL。表2.1 冰片(bn

38、pin)修飾的丹參酮IIA固體(gt)脂質(zhì)納米粒制備正交實驗表水平因素冰片（g）硬脂酸（mg）卵磷脂（g）Myrj5910.1800.214020.21000.320030.31200.4320第三章 固體(gt)脂質(zhì)納米粒的質(zhì)量評價3.1 外觀(wigun)及穩(wěn)定性觀察取上述(shngsh)制備的冰片修飾的丹參酮IIA固體脂質(zhì)納米粒懸混液樣本10份，其中5份放置于室溫，另外5份放置于4 冰箱內(nèi)。觀察24 h、1個月、3個月、6個月時其外觀的變化，觀察5000 r/min離心10 min懸混液是否分層或出現(xiàn)沉淀。3.2 形態(tài)以及粒徑分布取上述制備的固體脂質(zhì)納米粒懸混液適量加高純水稀釋，用激光粒

39、度儀測定納米粒懸混液的粒徑分布。取固體脂質(zhì)納米粒懸混液適量加高純水稀釋至一定倍數(shù)，然后滴加在覆蓋碳膜的銅網(wǎng)上，以2%的磷鎢酸鈉液負染，在透射電鏡下觀察其粒徑大小和形態(tài)。3.3 包封率的測定以Sephadex G50葡聚糖凝膠柱色譜方法分離固體脂質(zhì)納米粒和游離藥物，測定其包封率。吸取上述制得的固體脂質(zhì)納米粒0.5 mL上柱，以蒸餾水為洗脫介質(zhì)進行洗脫，根據(jù)最佳分離條件，收集含有冰片修飾的IIA丹參酮固體脂質(zhì)納米粒的洗脫液，吸取一定量洗脫液加入無水乙醇溶解。再吸取冰片修飾的IIA丹參酮固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?.5 mL，加入無水乙醇溶解，HPLC法分別測定兩樣品中丹參酮IIA的含量，根據(jù)下式求其包封

40、率：其中(qzhng)，W包表示(biosh)被包封的藥物量，W總表示(biosh)冰片修飾的IIA丹參酮固體脂質(zhì)納米?；鞈乙褐械目偹幜?。3.4 物相分析分別取硬脂酸、Myrj59、丹參酮IIA、冰片及其物理混合物和固體脂質(zhì)納米粒凍干品樣品，采用差式掃描熱量計分析，以空鋁坩為參比，另一鋁坩放入樣品約5 mg，升溫速率10 /min，掃描范圍為25-400 ，通入50 ml/min的N2保護。3.5 體外釋藥實驗精密稱取5 mL上述制備好的固體脂質(zhì)納米粒，放入處理過的透析袋中，透析袋兩端夾緊至不滲漏；精密量取pH7.4磷酸鹽緩沖釋放液50 mL，放入100 mL燒杯中;將裝藥透析袋移入裝有溶出介

41、質(zhì)的燒杯中，保持漏槽狀態(tài)，密封杯口;將燒杯置于恒溫震蕩器內(nèi)，設(shè)置溫度為（371），水平震蕩頻率為150次/min。于2、4、6、8、12、16、20、24、28、32、36 h取樣，分別將燒杯內(nèi)的溶出介質(zhì)全部取出，再加入50 ml新的同種介質(zhì)繼續(xù)恒溫震蕩。將取出的溶出介質(zhì)溶液用HPLC法測定丹參酮IIA的濃度，計算藥物的釋放率，以累積釋放率和時間的關(guān)系做出體外釋藥曲線。3.6 體內(nèi)實驗昆明種小白鼠40只，雌雄兼用，20-25 g，隨機分為8組，給藥前禁食12 h，以20 mg/kg的劑量（根據(jù)載藥量折算成固體脂質(zhì)納米粒的量后給藥）尾靜脈注射，分別在給藥后0.08, 0.25, 0.5, 1.0

42、, 1.5, 2.0,3.0, 4.0 h眼眶采血，同時在0.25, 1.0, 1.5, 2.0,4.0 h采集腦、心、肝、脾、肺、腎。血液置于預(yù)先肝素化的試管中，離心后移取血漿至塑料試管；組織用生理鹽水沖凈表面血液及內(nèi)容物后，和血漿于-20 保存至分析測定。精密(jngm)量取0.1 mL的血漿(xujing)于具塞5 mL小塑料管中，加入(jir)甲醇0.1 mL，渦旋混合1 min， 10 000 r/min離心10 min，吸取上清液50 L進樣。將組織稱重，按照1: 3的質(zhì)量濃度比例用甲醇勻漿，離心后移取上清至塑料試管中，按血漿樣品的處理方法處理后進樣。體內(nèi)實驗可評價該給藥系統(tǒng)的靶向

43、性以及能否提高生物利用度。第四章 口服冰片(bn pin)修飾的丹參酮IIA固體(gt)脂質(zhì)納米粒劑型研究4.1 固體(gt)脂質(zhì)納米粒的給藥方式4.1.1 注射給藥固體脂質(zhì)納米粒最初是為靜脈注射的靶向控釋藥物而設(shè)計。脂質(zhì)液滴（納米乳）轉(zhuǎn)變成為固體（SLN）以后，藥物的擴散系數(shù)減小，從而減慢了藥物的釋放。粒徑的分布對于靜脈注射用藥來說是一個關(guān)鍵問題，它可以導(dǎo)致毛細血管堵塞。造成脂肪栓塞等致死性的嚴重問題，最細毛細血管的管徑為9個微米。從安全的角度考慮，粒徑必須全部在亞微米級范圍內(nèi)。人體可以耐受一定數(shù)量的微米級的大液滴。但是這種情況不能適用固體脂質(zhì)納米粒，因為固體脂質(zhì)納米粒不能變形，一旦粒徑超過

44、毛細血管直徑，血管栓塞現(xiàn)象必然發(fā)生。低粘度的固體脂質(zhì)納米粒分散體在注射針頭內(nèi)會發(fā)生凝膠化，迅速變成一種高粘度的、含有會對人體造成危險的大粒子的懸混液。固體脂質(zhì)的不可變形性，以及在注射過程中可能發(fā)生凝膠化現(xiàn)象，是固體脂質(zhì)納米粒分散體用于靜脈注射給藥時在臨床上遇到的主要問題。所以在制備注射給藥的固體脂質(zhì)納米粒時必須嚴格控制粒徑及乳化劑和輔助乳化劑的比例，防止膠凝。4.1.2 口服給藥固體脂質(zhì)納米粒的日服劑型包括水性的分散體和含固體脂質(zhì)納米粒的傳統(tǒng)劑型形式，如片劑、丸劑或膠囊劑等。通過優(yōu)化乳化劑和脂質(zhì)的種類和劑量，可以得到在胃腸道中穩(wěn)定的固體脂質(zhì)納米粒。一般認為，酸性的、高離子強度的胃液微環(huán)境，易導(dǎo)

45、致納米粒聚合。但是實際上納米粒的聚合并不是決定因素。許多實驗數(shù)據(jù)表明，即使固體脂質(zhì)納米粒在一定程度聚合后，其生物利用度仍然很高。4.1.3 透皮吸收固體脂質(zhì)納米粒局部給藥具有很大的開發(fā)潛力和市場前景。固體脂質(zhì)納米粒被認為是替代脂質(zhì)體的新一代載藥系統(tǒng)。和脂質(zhì)體相似，固體脂質(zhì)納米粒是由生物耐受性良好的材料組成，其最突出的優(yōu)點在于它具有固態(tài)基質(zhì)，這樣可以保護化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定的物質(zhì)不被分解破壞，并可以調(diào)節(jié)藥物的釋放。固體脂質(zhì)納米粒的粒徑很小，具有一定的生物粘附性，比較容易粘附到皮膚上形成薄膜，它可以修復(fù)皮膚表面破損的脂質(zhì)層，并且具有一定的屏蔽作用。載藥量低和低粘度對于透皮制劑來說都是不利的。在大多數(shù)情況

46、下，固體脂質(zhì)納米粒分散體被制備成軟膏或凝膠等劑型，確保使用的方便，而這個制備過程使固體脂質(zhì)納米粒的濃度進一步減小。固體脂質(zhì)納米粒分散體的固體脂質(zhì)含量升高后，會變成一種半固體，凝膠樣的性狀，它可以直接涂抹在皮膚上，不需要做進一步的處理。一般來講，脂質(zhì)含量(hnling)的增加會導(dǎo)致粒徑的增大。但是(dnsh)鯨蠟醇十六酸酯制成的固體(gt)脂質(zhì)納米粒在脂質(zhì)含量高達30-40%時，竟然保持了膠態(tài)粒子的大小，且系統(tǒng)的可塑性也有很大增加。這種體系的流變學(xué)特性和傳統(tǒng)的皮膚用藥相似。以上結(jié)果表明，可以一步生產(chǎn)出脂質(zhì)含量高、粒徑小的透皮用固體脂質(zhì)納米粒體系?？上♂屩苽涑筛鄤豁氈苽涑赡z劑。固體脂質(zhì)納米粒

47、的一個明顯優(yōu)點是組成成分都是生物相容性原料，避免了對皮膚的刺激和毒性。還可以調(diào)節(jié)藥物在皮膚中的釋放，從而提高藥物在特定皮膚層中的分配。固體脂質(zhì)納米粒在皮膚上涂布后，隨著水分的損失和脂質(zhì)的變形，固體脂質(zhì)納米粒的結(jié)構(gòu)將發(fā)生改變。電子顯微鏡表明固體脂質(zhì)納米粒分散體在32 干燥后變成一層致密的膜，這和前面提到的球形結(jié)構(gòu)不同。這種致密膜的形成可以促進皮膚的閉合作用，提高藥物對皮膚的穿透率。4.1.4 肺部給藥迄今為止，脂質(zhì)納米粒的肺部給藥研究報道不多。為了證明脂質(zhì)納米粒肺部給藥的可行性，有人將脂質(zhì)納米粒懸混液霧化后，再收集霧化后的顆粒并分析其中納米粒的粒徑分布。結(jié)果表明霧化前和霧化后納米粒的粒徑分布幾乎

48、相同，僅有輕微的粒子聚集現(xiàn)象發(fā)生，這對肺部給藥沒有影響。另外，脂質(zhì)納米粒粉末可以制成干粉吸入劑，在噴霧干燥過程中，可以使用乳糖作為保護劑。脂質(zhì)納米粒的優(yōu)點在于它可以控制藥物(yow)在肺部的釋放，延長藥物在肺部的釋放(shfng)時間。與聚合物納米(n m)粒相比，脂質(zhì)納米粒的降解速度較快。另外，脂質(zhì)納米粒的體內(nèi)耐受性很好，適于裝載對肺巨噬細胞靶向的藥物。肺部的粒子易于被巨噬細胞吞噬，因此可以用脂質(zhì)納米粒來治療RES系統(tǒng)的感染。4.2 固體脂質(zhì)納米粒凍干粉的制備4.2.1 處方設(shè)計按表4.1將支架劑加入已制備好的固體脂質(zhì)納米粒膠體溶液中，振搖使溶，按常規(guī)冷凍干燥方法置低溫冷柜中預(yù)凍，然后在冷凍

49、干燥機中凍干，得到各處方的凍干產(chǎn)品。表4.1 固體脂質(zhì)納米粒支架劑的考察NO.支架劑（%）外觀色澤再分散性評價葡萄糖乳糖甘露糖11002400380040105040608070018004900810444110441240413440140004.2.2 評價指標(biāo)外觀：以飽滿，不塌陷(txin)，不皺縮，表面光潔為佳。色澤：均勻，無花斑，質(zhì)地(zhd)細膩為佳。再分散性：取各處方(chfng)凍干產(chǎn)品適量，加蒸餾水2 mL，振搖后能在30 s內(nèi)完全溶解得均勻淡黃色膠體溶液為佳。評分標(biāo)準(zhǔn)見表4.2，同一得分以輔料用量少者為佳。表4.2 凍干粉的評價分值外觀色澤再分散性0-2萎縮+分層，上下色

50、差明顯+90 s3-5萎縮+分層，上下色差明顯+60-90 s6-8萎縮+上下色差明顯30-60 s9-10飽滿均勻，無色差30 s4.3 膠囊劑成型采用有機玻璃制成的膠囊板填充。板分上下兩層，上層有數(shù)百孔洞。先將囊帽、囊身分開，囊身插入膠囊板孔洞中，調(diào)節(jié)上下層距離，使膠囊口與板面相平。將凍干粉鋪于板面，輕輕振動膠囊板，使填充均勻。填滿每個膠囊后，將板面多余粉末掃除，頂起囊身，套合囊帽，取出膠囊，即得。第五(d w)章 展望(zhnwng)心血管疾病、心血管病一直以來都給人類(rnli)嚴峻的挑戰(zhàn)。隨著醫(yī)學(xué)的進步!心血管疾病的病死率正在不斷降低，但由于患病率的不斷上升，它仍然是最常見的死亡原因

51、。作為補充和替代藥物，中藥有幾千年的歷史，并取得了巨大的貢獻。許多中藥的改善血液循環(huán)功能已得到廣泛認可，作為其中代表的丹參酮的研究在最近幾年取得了顯著的成果。丹參酮的多種藥理作用，包括血管舒張、抗血栓形成、抗發(fā)炎、抗氧劑、抗心律失常、抗纖維化等表明丹參酮是一個有前途的心臟保護劑。心腦血管疾病是一種需要長期服藥的疾病，而丹參酮在體內(nèi)的生物利用度低，半衰期短，病人的順應(yīng)性差，因此開發(fā)丹參酮的緩釋制劑勢在必行。固體脂質(zhì)納米粒是新一代亞微粒給藥系統(tǒng)，是極具發(fā)展和應(yīng)用前景的新型藥物載體，因其獨特的優(yōu)點和廣泛的應(yīng)用范圍，在新藥開發(fā)領(lǐng)域中舉足輕重。將丹參酮制成固體脂質(zhì)納米粒能提高其生物利用度，持續(xù)釋放藥物使

52、用藥次數(shù)減少。另外，固體脂質(zhì)納米粒也是在腦靶向方面也有一定的作用，搭配冰片，能更好的使藥物穿過血腦屏障，有利于腦出血等疾病的治療。復(fù)方丹參滴丸作為國內(nèi)目前第一例通過美國FDAII期臨床的中成藥，通過了全球最為嚴格的臨床試驗證明了其安全性和有效性，為將來進軍全球市場邁出了堅實的一步，對我國中藥現(xiàn)代化和國際化的戰(zhàn)略意義十分重大。丹參新劑型的開發(fā)也能更好地推動中藥走向國際市場，促進中藥的現(xiàn)代化和國際化。參考文獻1 王力娜. HMGB1、RAGE及TLR4在腦梗死大鼠腦組織的動態(tài)(dngti)表達及丹參酮 = 2 * ROMAN IIA 的神經(jīng)保護(boh)作用C.河北(h bi)醫(yī)科大學(xué), 2010

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