第三章生物制品的制備課件

1、 第三章 生物制品的制備 （Preparation） 第一節(jié) 一般生物制品的制備方法 (Preparation of general bio-preparate )一、生物制品原料的選擇、預(yù)處理與保存方法 （Selection、pretreatment and preservation of raw material of biopreparate） 戶郡天堂汐業(yè)劍侈蠻抵明翹厭賽聘趨迄帥艷舜徐誣緞茬乖炸練甭螟筏峰性第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（1）原料選擇 原料的選擇原則： 有效成分含量高，新鮮； 原料來源豐富，產(chǎn)地較近； 原料中雜質(zhì)含量少； 原料成本低等。您逝艦蓄壺吾耳劑閏汀夾每

2、鑰趨羅報(bào)壯闖裔藍(lán)瞳研寐酚神讕組耿美芒留舉第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備原料的選擇注意事項(xiàng)： 植物原料生長的季節(jié)性； 微生物原料的對數(shù)期； 動物原料的年齡與性別。贓所血螟卵撼它延單毀廣潮蜘萄菲橡味瓊使搜疚椅皮較涅優(yōu)氰境茄晝奎艇第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（2）原料的預(yù)處理與保存： 動物原料：采集后要立即處理，去除結(jié)締組織、脂肪組織等，并迅速冷凍貯存。植物原料：要擇時采集并就地去除不用的部分，保鮮處理；微生物原料：要及時將菌細(xì)胞與培養(yǎng)液分開，進(jìn)行保鮮處理。 糖了竣因介圭億滲味骯鈉哈移汞基蹬侮葦求次并鱉內(nèi)近嬰莊滯瓶端驅(qū)箱瞧第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備原料的保存方法主

3、要有：冷凍法。該方法適用于所有生物原料。常用-40速凍。有機(jī)溶劑脫水法。常用的有機(jī)溶劑是丙酮。該法適用于原料少而價值高、有機(jī)溶劑對活性物質(zhì)沒有破壞作用的原料，如腦垂體等。防腐劑保鮮。常用乙醇、苯酚等。該法適用于液體原料，如發(fā)酵液、提取液等。 神拽蟻緊匆廢救賂補(bǔ)焊鑄粱干之畫塘淋憤裙磁拴采戶宙拙匝晾賃楞胰某賽第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備二、生物制品的提?。╡xtraction） (1)生物組織與細(xì)胞的破碎（obtrude of tissue and cell）：生物制品大部分存在于生物組織或細(xì)胞中，要提高提取率，破碎過程是非常重要的。常用的破碎方法： 磨切法，該法屬于機(jī)械破碎方法，設(shè)備

4、有組織搗碎機(jī)、膠體磨、勻漿器、勻質(zhì)機(jī)、球磨機(jī)、乳缽等。壓力法，有加壓與減壓兩種，常用的法蘭西壓釜使用效果良好。 酗插鬼伸刁企鍘樁露耳賦元酚滾楞倚貓人胺謀態(tài)局現(xiàn)腿題占鞭污怔賠其渴第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備反復(fù)凍融法，設(shè)備簡便，活性保持好，但用時較長。超聲波振蕩破碎法，該方法破碎效果較好，但由于局部發(fā)熱，對活性有損失。自溶法或酶解法，用得較少。哎筐坑搗聽供牙架許蜂巫罵件摩添三網(wǎng)棋扼輩沏鉛肋腺甚隅培巳侵牌皚捧第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（2）提?。╡xtraction） 生物組織與細(xì)胞破碎后要立即進(jìn)行提取。提取時，首先要根據(jù)活性物質(zhì)的性質(zhì)， 選擇提取試劑。提取試劑主要有：水

5、、緩沖溶液、鹽溶液、乙醇、其他有機(jī)溶劑（如氯仿、丙酮等）。 考慮提取溶劑的用量及提取次數(shù)、提取時間。 注意提取的溫度、pH、變性劑等因素。 抗覺縣饅稀鼎捌擂各理擇婁涵蒂杰鍛糞睡減嘯聾忠嫩萊扼藩輸忠屑奢埋鉗第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備三、分離純化的基本過程撓杯尸側(cè)看署創(chuàng)妝鴉潘繼蔓楷生恫堪停懾賄蚜卜鉑闊漬廉圣控兢腸駝矛拇第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備四、分離純化的基本技術(shù) (1)分離純化技術(shù)應(yīng)滿足的要求 技術(shù)條件要溫和，能保持目的產(chǎn)物的生物活性； 選擇性要好，能從復(fù)雜的混合物中有效地將目的產(chǎn)物分離出來，達(dá)到較高純化倍數(shù)； 收率要高； 兩個技術(shù)之間要能直接銜接，不需要對物料加以

6、處理或調(diào)整； 分離純化過程要快，能夠滿足高生產(chǎn)率的需求。 行穿聘硬魯卡懶坪單模目席守實(shí)院銀宛貨蚌安刮淺坊懾耐遼任訟旺例青罕第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備2.細(xì)胞破碎與固液分離 （ 1 ）細(xì)胞收集 常用離心分離的方法；膜過濾法也逐漸得到廣泛應(yīng)用。 （ 2 ）細(xì)胞破碎 有機(jī)械破碎法和非機(jī)械破碎法。（ 3 ）固液分離 分離細(xì)胞碎片是比較困難的，可以用離心、膜過濾或雙水相分配的方法，使細(xì)胞碎片分配在一相（通常為下相）而分離，同時也起部分純化作用。教菊邊旱笨悉妥幟主淌訝幾鵝鼎盲親溉義乍損復(fù)蘭剔萎駐搬誅僅氮婪么威第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備3.目的產(chǎn)物的分離純化 分離純化主要依賴色譜

7、分離方法。色譜技術(shù)是下游精制階段的常用手段，該法優(yōu)點(diǎn)是具有多種多樣的分離機(jī)制，設(shè)備簡單，便于自動化控制和分離過程中無發(fā)熱等有害效應(yīng)。色譜技術(shù)分為離子交換色譜、疏水色譜、反相色譜、親和色譜、凝膠過濾色譜、高壓液相色譜等。 統(tǒng)芯潭賣貴杠挨判保彩蚌饒鋤窮仕勁慮菩閹靈黔簍肉熒契誹到鉆鞘擱邵龜?shù)谌律镏破返闹苽涞谌律镏破返闹苽涞诙?jié) 各類生物制品的分離純化方法蛋白質(zhì)核酸糖類脂類氨基酸懦頓盲守羌陽略聞餐鴻呼冶鈴張罐貸余徘偶梢冠蔭漏兢暑貪就妮浸舵椿均第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備一、蛋白質(zhì)類制品的分離純化方法（Isolation and depuration of protein produ

8、ction） 包括蛋白質(zhì)、多肽和酶類等藥物。分離純化方法有： (1)沉淀法（precipitation）：蛋白質(zhì)、酶的初步純化往往用沉淀法。原理是使蛋白質(zhì)膠體顆粒破壞，從而沉淀蛋白質(zhì)。常用的有鹽析法（salting out）、有機(jī)溶劑沉淀法（organic solvent precipitation）、等電點(diǎn)沉淀法（isoelectric precipitation）、與靶物質(zhì)結(jié)合沉淀法（如抗體抗原）（target banding precipitation）等。 厭涌坦?jié)泊目髋芴塘特澟灪庇H快祟酮憫捧綴艦嬸犧找闊烷尤仍鑰兵第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備(2) 按分子大小分離的方

9、法：有超濾法（ultrafiltration）和透折法（dialysis）（即膜分離方法）、凝膠層析法（gel chromatography）、超速離心法（ultra centrifugation）等。其中膜分離法可用于生物大分子物質(zhì)的濃縮、分級和脫鹽。 響遷逛于劣沼慚粹潘汗害豆出摯銘狀咬糜琳嗓淳丑凡搪檻疤碴叔刪拙巫迪第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備(3)按分子所帶電荷進(jìn)行分離的方法氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶均為兩性電解質(zhì)。它們具有等電點(diǎn)，在離開等電點(diǎn)的pH時便會帶正或負(fù)電荷。例如某蛋白質(zhì)等電點(diǎn)為7.0，當(dāng)溶液pH為4.0時，分子則帶有正電荷。由于具有該性質(zhì)，利用帶電性質(zhì)進(jìn)行分離是極其有

10、效的方法。利用電學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分離的方法有離子交換柱層析法（ion-exchange chromatography）、電泳法（electrophoresis）、等電聚焦法（isoelectric focusing）等。沏恕爸狐卸兒墜臭肛罷昭錠塊熒憑閡墳嘉擬藉勝暑儒湍躬蛋浦匹炮雀水老第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（4）親和層析法（affinity chromatography）大部分生物活性物質(zhì)都有其作用的靶物質(zhì)，如酶與底物（或抑制劑）、抗原與抗體、激素與受體等，它們之間有特異的親合作用，利用該性質(zhì)設(shè)計(jì)的特異層析分離技術(shù)稱為親和層析。親和層析分離專一性強(qiáng)，操作簡便，是當(dāng)前應(yīng)用很廣泛的分離方

11、法之一。另外，最近出現(xiàn)的新方法還有疏水層析（hydrophobic interaction chromatography）等。 周聞?wù)貕ê辉跻蕾U耙宜藩眾被蒸敞殘券隱致賃騰院獸反耳汞稽撿石具上簾第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備二、核酸類制品的分離純化方法（Isolation and depuration of nucleic acid ）核酸類藥物生產(chǎn)方法主要有提取法和發(fā)酵法。提取法生產(chǎn)DNA和RNA，先提取核酸和蛋白質(zhì)復(fù)合物，再解離核酸與蛋白質(zhì)，然后分離RNA與DNA。發(fā)酵法主要用于生產(chǎn)單核苷酸。蠱燴綠訴車妥封漳蟲態(tài)陰館癬堿拌暗跺焙鞠豌赫撥規(guī)庶庚泅暇嬌遁咽凋柿第三章生物制品的制備第三章

12、生物制品的制備三、糖類制品的分離純化方法（ Isolation and depuration of sugar ） 由于各種糖類制品的性質(zhì)和原料來源不同，沒有統(tǒng)一規(guī)范的提取和純化工藝。這里只介紹多糖和粘多糖的一般分離純化方法。 稈勞舍柏注壹馴揩韭齲琺榴夸村杉破魚彥講窖坐澡隴謬規(guī)酬狠董蒼纏腔這第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（1）提取方法 （extraction） 非降解法適用于從含一種粘多糖的動物組織中提取粘多糖，提取采用的溶劑是水或鹽溶液。 降解法（degradation）適用于從組織中提取結(jié)合比較牢固的粘多糖（mucoitin）。如從軟骨中分離提取硫酸軟骨素（chondroitin

13、 sulfate），就是用堿處理進(jìn)行降解。又如用酶處理法可提取與蛋白質(zhì)結(jié)合的多糖。了凱潔媳藹背奪棵宮閩鴿蹈賠孰雌這鋇饑閃勺囑委屈峙躲頌悉棉籍禽褒槽第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備 （2）分離方法 （isolation） 常用的分離方法是沉淀法和離子交換層析法。乙醇沉淀法（alcohol precipitation）：是從提取液中沉淀多糖的最簡易方法，也適用于分級分離。4-5倍體積的乙醇可以使任何結(jié)締組織中的粘多糖完全沉淀。用季銨化合物也可沉淀粘多糖。粘多糖的聚陰離子能與某些陽離子表面活性劑結(jié)合成不溶于水的鹽，如十六烷基三甲基銨（CTA）等。 讀耳灸王憫戰(zhàn)炳首禿汕掏軋瓦濤犧泣循追孝伴蛛尊

14、巢冉芒棗睫葬漣搞矢迪第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備 離子交換層析法（ion exchange chromatagraphy)：粘多糖的聚陰離子能夠很好地被陰離子交換劑吸附和分離，如Dowex I-X2（商品名）離子交換樹脂、DEAE-離子交換纖維素（二乙胺乙基）等。洗脫可用NaC1溶液進(jìn)行梯度洗脫。近邁捌五跪瘤謾栽鼻租愁沙婦休暇村晌片體嘩共夢浮肥哼矢呵姥焦蒜痊猙第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備四、脂類制品的分離純化方法 （isolation and depuration of lipoid）（1）提取方法（extraction ） 脂類自然狀態(tài)下是以結(jié)合形式存在的。非極性脂是

15、與其他脂質(zhì)分子或蛋白質(zhì)分子的疏水區(qū)相結(jié)合的。提取脂質(zhì)就是要選擇適當(dāng)?shù)娜軇﹣砥茐倪@種結(jié)合鍵，將脂質(zhì)溶解出來。常用的溶劑有組合溶劑，醇是其中的主要成分，此外還有氯仿、甲醇、水等。 毋骸瑪丫歹敏集壯德凱神路菠咸辟矛赫托捅姿崖德匝凡晃品挽貨梗杖琢謊第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（2）純化方法（depuration） 沉淀法(precipitation) ：由于不同脂質(zhì)在丙酮中溶解度不同，故常用它進(jìn)行沉淀。吸附層析法(adsorption chromatography)：常用吸附劑有硅膠、氧化鋁等。它是通過極性和離子力等把各種化合物結(jié)合到固體吸附劑上。洗脫一般是采用極性逐漸增大的洗脫液來進(jìn)行，

16、非極性的先流出，極性的后流出。 爛設(shè)勞滿覺患太莢奄對備刻伙諱怪猛恥衷郵霧佰繹寧番膛橋峰茂裝秘風(fēng)屜第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備離子交換層析法（Ion exchange chromatography） : 脂質(zhì)分子的存在有非解離、兩性離子和酸式解離三種狀態(tài)。根據(jù)它們在一定pH條件下的解離情況，選擇適當(dāng)?shù)碾x子交換劑可將它們提純。如TEAE纖維素對分離脂肪酸和膽汁酸等特別有效。 理俯墮勢崖徘吭棧莎榜轉(zhuǎn)郝淀沏職然鴛菱烯著灘硼閥紊鉤柵婉薪篷樟跟拎第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備五、氨基酸類制品的分離純化方法 （isolation and depuration of Aa）（1）氨基酸的

17、生產(chǎn)方法（production of Aa）蛋白質(zhì)水解法（protein hydrolysis）：水解法有酸水解（acid hydrolysis）、堿水解（base hydrolysis）和酶水解（enzyme hydrolysis）三種。 透慕錘惱琺奠粕錠杯描缸鈕含而鈍惕婉代鋪箭伺逸獺瞳蓑績冕廬慫炳持勒第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備 用鹽酸水解為常用方法，其優(yōu)點(diǎn)是水解迅速、完全，產(chǎn)物全部是L型氨基酸，缺點(diǎn)是色氨酸全部被破壞，絲氨酸等部分被破壞。堿水解法易產(chǎn)生消旋作用，較少應(yīng)用。酶水解法水解不夠完全。 灸層即淖邢詫王焦郡夠架滬傈韓攬蠅諄煥眨形懼糊溶漓搓去漿規(guī)場祭峙斷第三章生物制品的制

18、備第三章生物制品的制備發(fā)酵法（fermentation）：菌株經(jīng)過發(fā)酵后，從培養(yǎng)液中提純氨基酸。 化學(xué)合成與酶促合成法化學(xué)合成法一般得到的是DL型氨基酸，尚需要對異構(gòu)體拆分；酶促合成法也是酶工程在醫(yī)藥工業(yè)上的應(yīng)用，優(yōu)點(diǎn)是技術(shù)工藝簡單，轉(zhuǎn)化率高，副產(chǎn)物少和易提純等。蛆沂繩悸硅再炯靈撲宗甜像燦郭屯獰臍酷宵董路兄杠快埔閑墾午疊咯兔設(shè)第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（2）氨基酸的分離方法（isolation of Aa） 有沉淀法（percipitation）、吸附法（adsorption）和離子交換法（ion-exchange ) 。沉淀法(percipitation)：根據(jù)形成沉淀的原理不

19、同分為兩種：是依據(jù)不同氨基酸在水中或其他溶劑中的溶解度差異進(jìn)行沉淀分離。是用特殊試劑沉淀某種氨基酸，如用鄰二甲苯-4-磺酸與亮氨酸形成不溶性鹽沉淀，再用氨水分解，使亮氨酸游離出來。郭弊澡自或鍛鋇扇妒砍恕釬拜抨遷咯圈膠褥造懦掛郊眺禁站茲捕君槍復(fù)撞第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備 吸附法(adsorption)：這是利用吸附劑根據(jù)氨基酸吸附力的差異進(jìn)行氨基酸分離的方法。苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的分離就是利用活性炭對其吸附的原理。 離子交換法（ion-exchange )：氨基酸是兩性電解質(zhì)，在一定pH條件下，不同氨基酸帶電性質(zhì)及解離狀態(tài)是不相同的，因此在離子交換劑上被吸附的強(qiáng)度不同。常用的

20、離子交換劑為強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂，洗脫主要用pH梯度洗脫。 貓尹幽辛胖市夕蹄在淋撣窗轉(zhuǎn)咱館強(qiáng)袱憊犁丙地穩(wěn)險(xiǎn)陸候劫狹踩走詛魯歹第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備第二節(jié) 人體來源生物制品制備實(shí)例 （Example of bio-preparation application to human）一、人血漿白蛋白制劑的制備（preparation of human blood plasma albumin）（1）結(jié)構(gòu)和性質(zhì) （structure and character）人血是一種紅色混濁的、具有一定腥味與粘滯性的液體。用適當(dāng)?shù)目鼓齽┏テ渲械挠行纬煞郑ㄈ缂t血球）而得到淡黃色、半透明的液體叫血

21、漿。拙繪八話峭迷會可哨韭積膨棕諱胃鳴買潦恒活潛敖研醇莢凋諺叁先紋噸坷第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備血漿中除含有大量的水分以外，還含有血漿蛋白等溶質(zhì)。白蛋白（albumin）又稱清蛋白，白蛋白是血漿蛋白中含量最高（3.84.8%）、分子量最小、分子數(shù)最多的一類蛋白質(zhì)。白蛋白對治療因失血、創(chuàng)傷、燒傷等引起的休克，腦水腫和大腦損傷性所致的腦壓增高，防止低蛋白血癥，肝硬化或者由腎病引起的水腫與腹水等嚴(yán)重疾病具有良好療效。籽成葫兒揭犀指巴寧藍(lán)篡淬荷蜀蒸盛廂冀玲蹦砍啪姿庇蘭穎棟嘎聊俄喚茲第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備白蛋白為單鏈分子，由584個氨基酸殘基組成，N端為天門冬氨酸，C端為亮

22、氨酸，分子量為6.6104，在離子強(qiáng)度為0.15時，pI為4.7，易溶于水，在60%硫酸銨飽和度以上沉淀。對酸較穩(wěn)定，受熱變性。從人體中分離的白蛋白有兩種：一種是從健康人血漿中分離制得的人血清白蛋白，另一種是從健康產(chǎn)婦胎盤中分離制得的胎盤白蛋白。貞又剖憤莆餐洪向樟嘆晦芋恃燃鬧麥碘咽出肥唐旭又殉嶼謊摔踴浴預(yù)氧諜第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備 血（無抗凝劑）自然凝固分離出血清（無纖維蛋白酶原、凝血因子等）血+混合抗凝劑 草酸銨草酸鉀離 心上清血漿總蛋白：6.2-7.9%白蛋白：3.8-4.8%水：90-92%（現(xiàn)常用肝素、檸檬酸鈉）輩階樟悉逗若癬磚飼夸基藩姓濃愛軟猴雁垢涸骯救窿賣絆救氖泰

23、岸夏秀薄第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（2）工藝路線（圖3-1） 圖3-1 白蛋白生產(chǎn)工藝路線利凡諾,NaHCO3pH8.6,離心分離絡(luò)合物蒸餾水，NaCl，HCl弱酸性，40，離心離心液濃 縮超 濾濃縮液滅活病毒 65，1h；60，10h熱處理液除菌除菌過濾白蛋白液干燥冷凍干燥白蛋白去雜蛋白人血漿（%）予膠鑿表眨仰疇屜楷凜姿掩蔓姚哦暢釜煉佃柔酣鞏驕晦事臘伊僚棗宣引諱第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（3）工藝要點(diǎn) 絡(luò)合對于絡(luò)合所要求的pH值，可以略高些，這樣，白蛋白絡(luò)合完全，絡(luò)合物形成一個相當(dāng)硬的塊，傾倒上清液方便，損失少。但不能太高，以防絡(luò)合血漿中的其它蛋白，影響解離與白蛋

24、白制劑的純度。若pH值偏低，絡(luò)合不完全，絡(luò)合物松軟，甚至成湯狀，不利于傾去上清液。血漿攪拌用NaHCO3調(diào)節(jié)pH至8.5-8.7之間，緩慢加入與血漿等體積的2.3%利凡諾溶液，邊加邊攪拌，充分絡(luò)合后。靜置24h，分離上清與絡(luò)合物沉淀。甄它疚瘦蔫況恒劃順勘續(xù)跪圣寂轍泄行缸冉話歲施鐘蕩邏哼仟軋娘驕逗損第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備加入2.3%利凡諾溶液比加入5%利凡諾溶液的效果好？因?yàn)榧?%利凡諾溶液常造成滅活時白蛋白部分變性或者分裝困難。加入2.3%利凡諾溶液的體積一般不超過血漿體積的一半。這可能是加入利凡諾溶液除去了解離物中過多的Cl-而澄清，或者是加入的利凡諾（過量）使白蛋白與利凡

25、諾的絡(luò)合物反溶，從而使造成混濁的物質(zhì)消失，達(dá)到澄清的目的。計(jì)柬忱警氰姐溝叉攜獄搔硫也唉遞異砂錠九競早酌聾卸界糊封哺帳矚郊謗第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備解離生產(chǎn)中要嚴(yán)格控制溶液的溫度。25左右室溫，絡(luò)合物形成一個硬塊，利于去上清和解離。溫度太低，雖然不影響絡(luò)合，但絡(luò)合物呈稀糊狀，傾倒上清液時常會丟失部分絡(luò)合物，而且絡(luò)合物內(nèi)殘存較多的利凡諾的水溶液。解離溫度要維持在40左右，是解離反應(yīng)的最適溫度。孰升泛疑叼撻崎遂齒渤銑柬墊獺憫徒孤誣就嚏主晦歪姆泣話曙桿妙宜豈址第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備解離液的pH值在1.281.45之間，解離效果良好。絡(luò)合物中加入解離液并攪拌均勻后，將解

26、離后混合溶液pH值控制在6.0左右較理想。以解離后解離混合溶液pH值決定加入解離液的體積。解離后解離混合液的pH值高于6.5時，表明加入的解離液少了，有部分絡(luò)合物未被解離開；低于5.85，表明加入的解離液多了，解離過度。這兩種情況下，解離效果均不佳。雌系挨論戰(zhàn)跪轍呈竿列戎逝稻兌雀藩鄭評詠寡霓噶橇棚吻躬浪捎推冊喻扳第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備在沉淀中加約二分之一血漿體積的滅菌蒸餾水解離所得到的絡(luò)合物沉淀，將解離混合物溶液用0.5mol/L HCl調(diào)節(jié)pH至5.5-6.0，加NaCl至0.15%0.2%，充分?jǐn)嚢琛?0過夜解離（8-10h）。串怎蟲砌鍋?zhàn)鰸岔憤{洗癌搜愧竅褂韶室桿淋廷揖彝

27、邏肥裙災(zāi)惦勝聊茅鄲蒜第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備在生產(chǎn)過程中常發(fā)現(xiàn)，由于解離效果差，從而不能使生產(chǎn)過程順利進(jìn)行。方法：（1）加入活性炭法：在解離效果略差，即能夠較順利地離心，得到部分或全部稍混濁的濾液，但不能正常進(jìn)行壓濾時，加入適當(dāng)?shù)幕钚蕴坑跒V液中，攪攔均勻后，立即離心，由于活性炭吸附溶液中粘稠物質(zhì)，形成大顆粒，經(jīng)離心可以除去雜質(zhì)，起到澄清的作用。窄寸勉排遠(yuǎn)茫寒垣垣棧刊殊塹碴鑄灼稠殿僚嚏掉蚊潤湍盞捆狡瑪慮痘社麗第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（2）加入利凡諾法：在解離時，在由加入的鹽酸或（和）鹽過多而造成解離物的濾液混濁的情況下，變性前后，向解離物中加入適量的利凡諾溶液均會

28、起到澄清的作用，而回收率卻不會降低太多。變性前加利凡諾溶液比變性后加利凡諾溶液的效果顯著。由于前者在變性過程中反應(yīng)溫度升高了，反應(yīng)時間增加了。釉缽猖可餡摻腸栗筷推爵聲戴戴撂遮亭敏漁獨(dú)攫分砂遏哎腦期啤原之姨捉第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（3）多次絡(luò)合法如果解離效果極差，用以上兩種方法處理都難以達(dá)到澄清的目的，那只有采取多次絡(luò)合法，即在盡量除去解離物中粘稠物質(zhì)后，將其pH值調(diào)至9.09.2，加入適量的5%利凡諾溶液，進(jìn)行重絡(luò)合，繼爾重解離，一般都會得到很理想結(jié)果。如果仍然出現(xiàn)解離不良的現(xiàn)象，重復(fù)以上處理過程，直到得到滿意的結(jié)果。這種方法使產(chǎn)品純度高，外觀變黃（棕），同時也使成本提高，回

29、收率降低。仕丹樸敗繞幣甩踐頭閱掌箔夢驟希邁因圓礙嘉瀕寨皮簡癬寇期抗竣屁聘沿第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備去雜蛋白：白蛋白具有生物活性，凡是使蛋白質(zhì)變性的溫度都會使白蛋白變性。65條件下變性1h，離心分離出上清液。熱處理：在600.5條件下處理10h，滅活病毒。 檢驗(yàn)方法：凍干品白色疏松物體。白蛋白含量占95%以上，水分1%，水溶后pH為6.6-7.2，硫酸銨殘量15000 IU/mg蛋白質(zhì)。 哉哪事惶奎酚庫違素綜叢浸射跑呈頓賀軌桅濁鷹追絕翌犯杯僳琶稈往休盔第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備三、絨膜促性激素（HCG）的制備（1）HCG的性質(zhì)（character of HCG）HC

30、G是一種糖蛋白，由、兩亞基組成，易溶于水，pI為3.2-3.3。HCG由胎盤滋養(yǎng)層合體細(xì)胞所分泌。婦女妊娠45-70天，尿中HCG含量可達(dá)30.000-50.000IU/24h。治療女性不育癥，神經(jīng)性皮炎。男性性功能過低癥和隱睪癥，子宮出血和習(xí)慣性流產(chǎn)。胸喉聾狠日惜屁射毅嘛潰暫攙歉漸確師靈圣康酌沫宜協(xié)英倡吩碾受橢勁頰第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備 圖3-3 HCG生產(chǎn)工藝路線孕婦尿粗制尿：苯甲酸：乙醇/1：0.075：5）用HCl調(diào)pH 4-5HCG(粗品）提取NaAC pH4.8提取液透析水，5以下透析內(nèi)液吸附（CM SepharoseCI-6B）羧甲基瓊脂糖凝膠吸附后交換劑洗滌，

31、峰NaAC,pH4.8,pH5.9洗滌后交換劑洗脫NaAC,pH8.5洗脫液冷凍干燥 30HCG精品 溶解蒸餾水，10以下HCG溶液透析pH6.8, 5以下透析內(nèi)液吸附羥基磷灰石，pH6.8吸附物解吸0.5mmol/L,1.0mmol/L磷酸鹽緩沖液（PBS),pH6.8解吸液干燥30HCG純品（2） HCG生產(chǎn)工藝路線沼佬沈察椒遙年腺蔡揪窒爆呸常柬邀雛肪簿茫只銷宋霍旬閩繩翹沒筑危醚第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（3）工藝要點(diǎn)吸附粗品：HCl調(diào)孕婦尿至pH4-5，加苯甲酸乙醇飽和液（孕婦尿：苯甲酸乙醇飽和液：乙醇 = 1:0.075:5）攪拌1h靜置2-3h，過濾，棄濾液，得吸附物。

32、在攪拌下加入95%乙醇，至苯甲酸全部溶解有絮狀沉淀產(chǎn)生，靜置過夜，離心，沉淀用95%乙醇和丙酮洗滌，干燥得粗制品。 眶鐘韌畦至距泰璃敬釩鑒績句虛鞠壺瞎旗沛幻擎戰(zhàn)慎紋音芍芽誹企扼書勞第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備提?。杭?0倍量的41/15 mol/L、pH4.8醋酸鹽緩沖液，攪拌4h，離心，取上清液。沉淀再提取2h。合并兩次提取液，棄去沉淀。離子交換層析：CM-Sepharose柱用0.01mol/L的醋酸鹽緩沖液平衡后樣品上柱。依次用pH4.8、0.01mol/L的醋酸鹽緩沖液和pH5.9、0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液洗滌出兩個峰（雜質(zhì)）。再用pH8.5、0.2mol/L的醋酸

33、鹽緩沖液洗脫，得到的第3峰即為HCG。橙郵袍袍灶譜注潦秩蘊(yùn)亦程博館魄添教付本葉盡盛污謎洛遠(yuǎn)淫惹角克曠慚第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備羥基磷灰石柱層析：柱用pH6.8、0.5mmol/L磷酸鹽緩沖液平衡。樣品用pH6.8、0.5mmol/L的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行層析上柱。洗脫先用pH6.8、0.5mmol/L再用pH6.8 1.0mmol/L的磷酸鹽緩沖液。得到I、II活性峰。然后冷凍干燥。HCG純品的比活性為10,000-12,000IU/mg蛋白質(zhì)。 磋閡寫肋漆瘩報(bào)趟揉鳳夢峙譯榆掌閹之軋菌畏礁拾諺扛鎖雁舜敗向恕奸貪第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備四、白細(xì)胞介素-2（IL-2）的

34、制備 （1）性質(zhì)：由活化的淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生的，糖蛋白有一個鏈內(nèi)二硫橋（58位，105位）。等電點(diǎn)為pH6.5。（2）工藝路線（圖3-4） 誘生白細(xì)胞培養(yǎng)液0.4mol/L NaCl,PBS,pH6.5UltrogelACA44柱，pH7.6圖3-4為IL-2生產(chǎn)工藝路線人血白細(xì)胞誘生雞瘟病毒，絲裂原培養(yǎng)液，37，CO2,孵育滅活病毒 HCl,pH2.0-2.5；NaOH,pH7.2-7.4上清液硫酸胺分級（0.35飽和度）離心 去變性雜蛋白上清液硫酸胺沉淀（0.85飽和度）離心沉淀除鹽10mmol/L磷酸鈉緩沖液，PBS透析，pH6.5透析內(nèi)液瓊脂糖Sepharose4B,pH6.5親和層析親和

35、層析載體洗滌親和層析載體解吸1.0mol/LNaCl,PBS,pH6.5IL-2組分凝膠層析凝膠載體0.2mol/L Tris-HCl,含0.1%PEG,2%正丁醇，0.5mol/L甘氨酸，pH7.6洗脫IL-2去變性雜蛋白艷郁蜂尺怔母須譬壘鍘飄午春沸繪照畔急蟻昌馴鄉(xiāng)涕小甲冗唁肉盈析拋坎第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（3）工藝要點(diǎn) 誘生：刺激人外周血白細(xì)胞，37培養(yǎng)。病毒滅活和固液分離：HCl調(diào)節(jié)pH再用NaOH調(diào),除去變性雜蛋白。分級沉淀：加飽和硫酸銨溶液至0.35飽和度，4靜置24h，離心，收集沉淀。除鹽：除沉淀溶于pH6.5、10mmol/L的磷酸鈉緩沖液（PBS）中（內(nèi)含2%

36、（g/100mL）正丁醇,0.15mol/L NaCl）。用pH6.5的10mmol/L PBS透析24h（更換5次透析外液）。 苞炭門滾棄賭盡甭魯羔倒添于轟桶潞縣頑蓖嚙鋸初頻緊辭晾鋸辯滾榴囪肚第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備藍(lán)色瓊脂糖層析：透析內(nèi)液通過Sepharose 4B層析柱，用200mL平衡柱緩沖液洗去不吸附蛋白，再用含0.4mol/L NaCl的PBS液洗滌親和柱，最后用含1.0mol/L NaCl的PBS液解吸IL-2活性組分。 凝膠層析：活性組分經(jīng)超濾濃縮，上Ultrogel ACA44層析柱，柱用含0.1%聚乙二醇MW6000的2%正丁醇和pH7.6的0.5mol/L

37、甘氨酸的0.2mol/L Tris-HCl洗脫，得IL-2。 敏頃患箭始剿俄亨荒瓤態(tài)營劈沫邊橡尼窟燒軟此獅舉僑疏擎責(zé)四姿菇習(xí)鍘第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備五、人體來源藥物的研究前景 （prospect）人體來源的原料雖只限于血液、胎盤、尿液、毛發(fā)等有限幾種，但利用前景很廣闊。1、可進(jìn)一步開發(fā)新產(chǎn)品 exploitation of new productio）（1）血液的利用，血漿蛋白可分離為I-V5個成分。目前僅利用了其中的I（纖維蛋白原）、II（免疫球蛋白）和V（白蛋白）3個組分，III和IV，目前基本未加以利用。夢瘴鐳卞塢構(gòu)馬往卡煤腸鍺祝石季傍霓求詩唉婉肢熱圓圖糟肅隕鷗悶賊浪第

38、三章生物制品的制備第三章生物制品的制備組分III中含有IgA、IgM、凝血因子II、VII、IX、X、蛋白C、纖溶酶原、2-巨球蛋白、-微球蛋白、補(bǔ)體成分C3、C4、C5和C8，以及許多其他和球蛋白。組分IV中含有抗凝血酶III、I抗胰蛋白酶、銅藍(lán)蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、觸珠蛋白、補(bǔ)體Ci脂酶抑制物、前白蛋白等。主要問題是含量較低，提純難度大，產(chǎn)量小而不被重視。 霞塢蛤夯橙哦愁滄次潰讕癸桶餃哨碉亂嬌尸燭敗珊粹戒鉻皇媚碧擯撥篷侍第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（2）對其他原料的利用，胎盤是重要的人類原料之一，較好利用的只有胎盤球蛋白、胎盤白蛋白等少數(shù)品種。尿液利用也只限于尿激酶、激肽釋放酶、CS

39、F等少數(shù)品種。 匯握緬札撓伴它踏匈稿尖鯨抿繪饞槳莊著躁雇準(zhǔn)贈競惜福郭滲底鋸馳擄在第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備2、用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)人類活性物質(zhì)（production for Human active substance）基因工程、蛋白質(zhì)工程、細(xì)胞工程、酶工程、發(fā)酵工程等技術(shù)在生物藥物研制方面發(fā)揮了重要作用。例如基因重組的組織型纖溶酶原激活劑（已于1987年獲準(zhǔn)正式生產(chǎn)，凝血因子VII、IX和白蛋白等亦在研究中?；蚬こ谈蓴_素、白細(xì)胞介素、紅細(xì)胞生長因子（EPO）等研究亦取得成功，并投放市場。 革涎諄搐跨汀先檀炒鈕逝磨扒捕藤邦烤陀煤出源契樊續(xù)罪鷗審疹兼米劊介第三章生物制品的制備第三章

40、生物制品的制備第三節(jié) 動物來源生物制品的制備一、動物來源藥物的特點(diǎn)我國應(yīng)用動物藥物歷史悠久，4000年前就已經(jīng)使用40多種動物藥。本草綱目中收集了440種，中國藥用動物志收載了1500多種。到20世紀(jì)50年代開始，我國陸續(xù)開展了動物藥物的研究與生產(chǎn)，其中取得的重大成果是關(guān)于胰島素的研究，1965年得到結(jié)晶牛胰島素。生物藥物在治療和預(yù)防疾病方面有其他藥物不可取代的特點(diǎn)，所以越來越引起人們的注意。溜津煥植峽沈凳恬佐虎撲靈湍世寄丟成盼役澄癱衣闊蔣雪淘昂叁孔調(diào)塑移第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備動物來源藥物的特點(diǎn)：原料來源豐富，牛、豬、羊的器官、組織、腺體、血液、毛角等都可做為原料，來源豐富且

41、健康、新鮮，品種繁多，可以制備出人體所需要的各種活性物質(zhì)；要重視安全性，動物與人體種屬差異大，活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)有一定的差異，蛋白質(zhì)是抗原，不同來源的蛋白質(zhì)注射于人體內(nèi)要產(chǎn)生抗原反應(yīng)，嚴(yán)重時會有生命危險(xiǎn)。兌武緣懊異慌遷聚畢畝售愁杏郴冒些紀(jì)膚桔黑陳說值讕寡硬遞鴕龍用靛逾第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備二、動物來源藥物的種類與用途1、動物多肽與蛋白質(zhì)類藥物（1）、動物多肽藥物的重要性與種類1）重要性：腦垂體所分泌的多肽激素，藥效顯著，且毒副作用小，細(xì)胞因子已有近百種，通過對這些活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能的研究，有助于我們設(shè)計(jì)和研制新型藥物。按倡猶磺輥到鎮(zhèn)屹甸顫慧洲瓦僚挑寐謬歌醇靈柑斬納親臣孤瑣濫荷鏡

42、蚌寺第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備2）種類：多肽類激素：垂體多肽激素（促腎上腺皮質(zhì)激素、促黑激素、脂肪水解激素、催產(chǎn)素、加壓素）；下丘腦激素（促甲狀腺激素釋放激素、生長素抑制激素、促性腺激素釋放激素）；甲狀腺激素（甲狀旁腺素、降鈣素）；胰島激素（胰高血糖素、胰解痙多肽）；胃腸道激素（胃泌素、膽囊收縮素-促胰酶素、腸泌素、腸血管活性肽、抑胃肽、緩激肽、P物質(zhì)）；胸腺激素（胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子）。多肽類細(xì)胞因子：腦氨肽、蛇毒、胎盤提取物、脾水解物、肝水解物、心臟激素、轉(zhuǎn)移因子、抗癌肽等。攀鮑允躺棧裙椿傈迭荔操誦矣攘邯潰皿憶譜娠戒咐適奉亞粟浚廚鴕姑衙訛第三章生物制品的制備第三章生物

43、制品的制備（2）、動物蛋白類藥物蛋白質(zhì)激素（生長素、催乳激素、促甲狀腺素、促黃體生成激素、促卵泡激素）；血漿蛋白質(zhì)，動物血漿制品不能用于人類；蛋白質(zhì)類細(xì)胞因子；粘蛋白（胃膜素、硫酸糖肽、內(nèi)在因子、血型物質(zhì)）；膠原蛋白（明膠、阿膠、氧化聚合明膠）；其他：硫酸魚精蛋白、胰蛋白酶抑制劑。貍漾施蔑交霧隋毒豺簧尸酥騎尼沾尉巫袖容鍘信捌頓艘互誕裙袒垂款請?jiān)谌律镏破返闹苽涞谌律镏破返闹苽?、動物酶與輔酶類藥物種 類：促消化酶類（胃酶可口服，蛋白酶，胰酶）；消炎酶類（溶菌酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶等可提高毛細(xì)血管通透性，消退浮腫）；治療心血管疾病（纖溶酶、尿激酶、凝血酶）；抗腫瘤的酶（天冬氨酰酶、谷氨酰

44、胺酶、半胱氨酸酶、組氨酸酶）；與氧化還原電子傳遞有關(guān)的治療酶（細(xì)胞色素c、超氧化物歧化酶、過氧化物酶）；其他藥用酶（有機(jī)磷解毒酶、青霉素酶）。動物輔酶類藥物：大多數(shù)屬于核苷酸類藥物。易隙棱樂街爬柯沂娟抿另侍軒鄭焦胞潑簍戍喇轉(zhuǎn)紅面排遂唉詠捆站廖湍供第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備3、動物核酸類藥物（1）、組成與作用核酸由核苷酸、核苷酸、核苷、堿基及其衍生物?？捎迷诎┌Y、肝炎、抗放射性、心臟病等方面的治療。（2）、主要種類和用途DNA：能改善機(jī)體虛弱疲勞、與細(xì)胞毒藥物合用可提高細(xì)胞毒藥物對癌細(xì)胞的選擇性作用，與紅霉素合用，可降低毒性、提高療效；RNA：口服可用于精神遲緩、記憶衰退、動脈硬化

45、性癡呆、靜注用于刺激造血和促進(jìn)白細(xì)胞生成、治療慢性肝炎、肝硬化和初期癌癥；輔酶A用于動脈硬化、白細(xì)胞、血小板減少，肝、腎病等；ATP用于心力衰竭、心肌炎、心肌梗死、腦動脈和冠狀動脈硬化、急性脊髓灰質(zhì)炎、肌肉萎縮、慢性肝炎等。 浦希娛先韭揖硼拽雷疽胡掣秩讀鎳?yán)垡睗L中嚙弊艘倆末鉸帛便洶靡蔡仁郵第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備4、動物糖類藥物單糖、寡糖、多糖。多糖以粘多糖為主，是一類胞外生物大分子物質(zhì)，是動物體內(nèi)蛋白多糖分子中的糖鏈部分，可抗凝血、降血脂、抗病毒、抗腫瘤和抗放射性。嶄聊千歹呈泥褐序鴛鞍夜前拒寥瀝回朔遣森煤貢滄府謹(jǐn)壇圃鈴青駛胞赦樓第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（1）、

46、粘多糖的種類與分布粘多糖（中性和酸性）、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等。粘多糖主要分布在動物骨、軟骨、皮、角、血管、腸、滑膜液、腦、角膜、肺、肝、心、尿等原料中。甲殼質(zhì)：蝦、蟹、昆蟲等甲殼動物外殼，高等植物細(xì)胞壁，人造皮膚、血管、手術(shù)線；消炎、降低膽固醇和血脂。肝素：腸黏膜、肺、肝、心、腎等部位，抗凝血藥物，外科手術(shù)后防止形成血栓，可預(yù)防血栓形成。餓祝蹤戈清葬貳執(zhí)恍談面耳腎琶匆稍撻良到炸珠帚婿冪柬虱壯魄韋咖綢師第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（2）、制備方法原料處理，提取有效成分，去除非粘多糖，脫色，脫蛋白，純化，用乙醇分級沉淀，季銨鹽絡(luò)合沉淀，離子交換柱層析，分子篩分離，親和層析等。茨直七昌

47、棲諱嗡靛吏步蟻菩壟奴則撰櫥巧站草歪坡震式愚實(shí)廈崗刑陶碟蹭第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備5、動物脂類藥物溶于氯仿、苯、石油醚等非極性溶劑，而不溶于或微溶于水中，可分為脂肪、類脂和衍生物，又可分為復(fù)合脂和簡單脂。（1）、脂類藥物的種類與分布脂肪酸及其衍生物、磷脂類、膽酸類、卟啉和衍生物。主要為脂肪酸和磷脂，分布在腦、脊髓等神經(jīng)組織中，脂肪組織、趕等含量也較豐富，膽酸分布在膽汁中，卟啉以血液為主。脂類藥物的一個特點(diǎn)是，從生物組織中制得的藥物再經(jīng)過分子改造可以得到更高療效的產(chǎn)品。腦磷脂可止血、防動脈硬化以及神經(jīng)衰弱；卵磷脂防治動脈硬化、神經(jīng)衰弱和肝病。砂瑞憶汐星瓢粘琴徑腹擱兼烴韌茄碾瑞涕軌虜

48、矣瑯肖售熒扶挽捏洋雕淳偶第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（2）、制備方法提取法：將原料粉碎后用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑進(jìn)行直接提取，再經(jīng)純化即得到。水解法：將目的產(chǎn)物與其他不需要的成分進(jìn)行水解分離，提取純化；生物轉(zhuǎn)化法：利用酶、微生物發(fā)酵、動植物細(xì)胞培養(yǎng)來生產(chǎn)藥物；化學(xué)合成或半合成。6、動物細(xì)胞因子 動物來源的細(xì)胞生長調(diào)節(jié)因子。 予篇廟局韋類絕鍺箭峭劫岔斤章守吃矮氓彌膽哇點(diǎn)李嚙痔努苔旨嚏屋英穎第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備三、動物來源生物制品制備的實(shí)例1、胰島素的制備 （production of insulin）（1）胰島素的性質(zhì)：pI=5.3-5.4，由A鏈、B鏈通過兩個二硫鍵連接

49、；A鏈含21個氨基酸，B鏈含30個氨基酸；是所有蛋白質(zhì)中研究得最多，也是研究得最清楚的蛋白。 枉忍稅天篡堤熊殷拳詭茶芬覺告涎刷譯痘睦癸舵耽臀搬盂知市帖桐疇正辟第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（2）工藝路線（圖3-5） 豬胰臟提取乙醇，草酸，10-15提取液堿化氨水，pH8-8.4堿化液酸化硫酸，pH3.6-3.8,5 酸化液濃縮30 以下，減壓濃縮液去脂速熱速冷去脂溶液鹽析NaCl,pH2-2.5鹽析物水、丙酮、氨水（pH4.24.3）除酸性蛋白濾液鋅沉淀氨水，Zn（Ac）2，pH6.0沉淀除堿性蛋白，結(jié)晶Zn（Ac）2，丙酮、氨水，pH8.0，5以下，檸檬酸調(diào)pH6.0結(jié)晶洗滌，干燥

50、水、丙酮、乙醚胰島素精品圖31 豬胰島素生產(chǎn)的工藝路線 宅扦倫競悠示砂蕭佑野拋久泊派故穎桃弛欲附恒腹啞街嫉悠打猜蔚止擯彼第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（3）工藝要點(diǎn)提?。航g碎胰臟，加2.3-2.6倍的86%-88%乙醇和5%的草酸，提取3h。濃縮：30減壓濃縮至比重為1.04-1.06為止。除酸性蛋白：加入7倍量的蒸餾水溶解，再加3倍量冷丙酮，用氨水調(diào)pH至4.2-4.3，補(bǔ)加丙酮，離心去除酸性質(zhì)白沉淀。 鋅沉淀：用氨水調(diào)pH為6.2-6.4，加入3.6%醋酸鋅溶液（20%濃度），再用氨水調(diào)pH至6.0，4放置過夜；收集沉淀。 南泉潮左頰語咯培尹擔(dān)盼別落燕胞毫綏瘟戲鉚果持侄粥思喀稀裕

51、羚擅驕章第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備除堿性蛋白、結(jié)晶：每克加冰冷的2%檸檬酸溶液50mL，6.5%醋酸鋅溶液2mL，丙酮16mL，用冰水稀釋至100mL，使充分溶解；冷至5以下，用氨水調(diào)至pH至8.0，過濾；濾液用10%檸檬酸溶液調(diào)pH6.0，補(bǔ)加丙酮，慢速攪拌3-5h使結(jié)晶析出；再轉(zhuǎn)入5左右放置3-4d，使結(jié)晶完全；收集結(jié)晶，用丙酮、乙醚脫水后，真空干燥，即得結(jié)晶胰島素?；斩苤v盂寧獻(xiàn)客臃桶奏拼培彥嬰全緒卞磺擦叫籬旗縛牲遺券降熄拔餡伙捌第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備2、超氧化物歧化酶（SOD）的制備超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）與機(jī)體

52、抗衰老、腫瘤發(fā)生、自身免疫疾病和輻射防護(hù)等有關(guān)。用于炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎及放射治療后的炎癥等。SOD存在于動物、植物、微生物中，有Cu-Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD等。牛紅細(xì)胞SOD為Cu-Zn-SOD，由兩個亞基組成，每個亞基含1個Cu和1個Zn。在pH7.6-9.0時穩(wěn)定。它催化超氧負(fù)離子歧化為H2O2。 敷胚誹肚型檢淑卵戴兜冪窮沾雷沛鋼桶瓤銷吻傅今札涼昂拿孰雜誨烴藏藥第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備新鮮豬血去血漿，離心紅細(xì)胞0.9%NaCl,反復(fù)洗滌3次收集（1）工藝路線（圖3-2）浮洗凈紅細(xì)胞溶血血去離子水，5,30min溶血物去血紅蛋白乙醇，氯仿

53、,15min上清液沉淀丙酮，0沉淀物去離子水55-65，10-15min黃綠色澄清液沉去不溶蛋白，透析丙酮，去離子水，0，6-8h透析液吸附、吸脫、超濾、濃縮、干燥DEAE-SephadexA50,磷酸緩沖液（K3PO4），pH7.6SOD成品圖3-6豬血SOD生產(chǎn)工藝路線烘蠶誕彤佃贅兼喳萎坪桂愈恭飽龜杰靖缺爭凋怕個陷乖需各白儀血功瘁悅第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（2）工藝要點(diǎn) 收集：離心去黃色血漿，紅細(xì)胞用0.9%NaCI溶液離心浮洗3次。溶血、去血紅蛋白：加去離子水，5下攪拌30min后加入乙醇和氯仿，攪拌15min；離心去血紅蛋白，收集上清液。 爛鴛墊憋般腕三頓鹽雇粕汝砍筋帥

54、勿榴蒙桶括棠躍妖橡蟄港率旋維所看爹第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備沉淀、熱處理：0下將上清液加入1.2-1.5倍體積的丙酮，產(chǎn)生絮狀沉淀；離心去上清液，得沉淀物；沉淀物加適量蒸餾水溶解，上清在55-65下熱處理10-15min，除去熱變性蛋白，收集黃綠色澄清液。沉淀、去不溶蛋白：澄清液在0下加入適量丙酮，使其產(chǎn)生大量絮狀沉淀；離心去上清液；沉淀用去離子水溶解，除不溶性蛋白；上清液置透析袋中得透析液。拄凌緬亦伯尾漚漲老應(yīng)椰俊慚粟猛誦果菌脾鏡嫌憑僳濾泛捧僵愁納廳備焚第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備吸附、洗脫、超濾、凍干：透析液加到用磷酸緩沖液平衡好的DEAE-Sephadex A5

55、0柱上吸附，用磷酸鉀緩沖液梯度洗脫，收集SOD活力洗脫液，超濾濃縮后，冷凍干燥得SOD成品。電泳鑒定條件：0.5%瓊脂糖凝膠平板電泳法，用聚丙稀酰胺凝膠電泳方法鑒定更靈敏。賂照正遺締瘓僻際捕鏈貞樊佑盧寄芬晉沂術(shù)拇喇梧需荷春皂旋樞察是佩寵第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備3、用肝臟生產(chǎn)核糖核酸（RNA） 用肝臟生產(chǎn)的動物RNA具有其他生物來源RNA所不具有的藥物功能。提純難度較大。 （1）工藝路線圖(圖3-7肝RNA生產(chǎn)工藝路線) 勻漿健康豬/牛肝0.1mol/LNaCl,0.05mol/L檸檬酸鈉，PVS(聚乙烯硫酸脂），Triton100(表面化性劑）清液提取三乙醇胺，SDS,EDTA

56、,苯酚，震蕩，離心清液除蛋白氯仿，震蕩，離心，反復(fù)三次清液沉淀醋酸鉀， 20乙醇，0 ，1h離心沉淀除糖原0.001mol/LEDTA,NaAc,K2HPO4,乙二醇甲醚，0離心清液精制制0.2mol/LNaAc,CTAB,0 ,離心0.5h沉淀洗滌0.1mol/LNaAc,EDTA,70%乙醇，反復(fù)洗5次，離心沉淀溶解0.001mol/L,EDTA,0.14mol/LNaAc,溶解，過濾除菌無菌RNA溶液制劑裝灌，凍干RNA成品苗眾閣委偷響靶漿唬挨旅搪疾倔供梳病乏陷付蔫遲否手略敵胎極糙激聶哲第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備（2）工藝要點(diǎn) 勻漿：肝用生理鹽水洗凈，切成小塊，加入1-2倍

57、量檸檬酸鈉、聚乙烯硫酸脂（PVS）Triton X100（pH7.0）溶液，用組織搗碎機(jī)搗成勻漿，離心。提取：加入等體積三乙醇胺、十二烷基磺酸鈉（SDS）、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA，pH9.0）溶液，攪拌均勻后，加等體積苯酚（含0.2% 8-羥基喹啉）及等體積氯仿；室溫振蕩30min，離心20min。 弄廷己杰噓賠華妒澎類職癥泰氨獎疼閹博竄翰感鎖餒漾硫匿霉伺靛嫉喊卉第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備除蛋白：離心清液中加入等量氯仿振蕩，反復(fù)2-3次，至中間界面無明顯蛋白層為止。 乙醇沉淀：清液中加入1/10體積KAC和兩倍體積20乙醇；0放置1h，離心得白色沉淀。除糖原：將沉淀溶于含ED

58、TA-0.01mol/L NaAc溶液中，加入等體積K2HPO4,攪拌下再加入等體積乙二醇甲醚，0放0.5h，離心得清液。出繹報(bào)錦諾濾樓錨害吞漱抵梧峙激馭甫屹威悅刨飯隙淵溝執(zhí)溜吱轄材代竅第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備絡(luò)合：清液在0下攪拌加入等體積0.2mol/L NaAc溶液和1/4體積1%十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）；0放0.5h；離心取沉淀。洗滌：沉淀用NaAc，70%乙醇溶液反復(fù)洗滌5次，至無泡沫為止。黃骨膚竟堵乍序臥誤訂熾擅抽訝找賀搬峙孜永意缽怎忽叛榷閑鐳象記產(chǎn)桔第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備 第四節(jié) 基因工程生物制品的制備（Biopreparate Prepa

59、ration of Gene Engineering）一、建立分離純化工藝的根據(jù) （reference of technique of isolation and depuration ）1、含目的產(chǎn)物的起始物料的特點(diǎn)（speciality） 各種因素均對分離純化技術(shù)和工藝有直接影響。 這些因素包括：菌種類型及其代謝特性。包括菌種的各種生物學(xué)性質(zhì)，產(chǎn)物和副產(chǎn)物種類、產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)所處的位置，表達(dá)方式，代謝物種類，產(chǎn)物類似物、毒物和能降解產(chǎn)物的酶類等；蠢箔閱聘組古收魯鑷尤裕閑耗泉肺忽臼種熏隘漳過海盞垃贏饞抬旁乙翁殘第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備原材料和培養(yǎng)基的來源及其質(zhì)量；生產(chǎn)工藝和條件

60、。包括滅菌方法和條件，生產(chǎn)方式（連續(xù)、批式、半連續(xù)），生產(chǎn)周期，生產(chǎn)能力，工藝控制條件、因素及方式等；初始物料的物理、化學(xué)和生物學(xué)特性。包括產(chǎn)物濃度、主要雜質(zhì)種類和濃度、鹽的種類和濃度、溶解度、pH、粘度、流體力學(xué)性質(zhì)和熱力學(xué)性質(zhì)等。爬暗囚九藻靡享狗僚帥乾煙挑被何客煎柳頒梢渦估啦誨架趁錫漲謎免舀等第三章生物制品的制備第三章生物制品的制備2、物料中雜質(zhì)的種類和性質(zhì)（Variety and characteristic of impurity）雜質(zhì)種類和性質(zhì)包括相關(guān)性和非相關(guān)性雜質(zhì)的含量、化學(xué)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、相對分子量、電荷性質(zhì)及數(shù)量、生物學(xué)特性、穩(wěn)定性、溶解度、分配系數(shù)、揮發(fā)性、吸附性能等。健甫揪稿