拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ切斷DNA分子兩股鏈-生物化學(xué)與分子生物學(xué)課件

1、第三篇基因信息的傳遞Central Dogma描述遺傳信息流動(dòng)的方向1958年 F.crick逆轉(zhuǎn)錄酶1970年 對(duì)中心法則進(jìn)行了補(bǔ)充James Watson (1928 )Francis Crick (19162004)1953年發(fā)現(xiàn)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)1962年諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。 美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)傳染性腫瘤學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)教授Howard Temin和加州理工學(xué)院的教授David Baltimore于1970年在雞肉瘤中發(fā)現(xiàn)了逆轉(zhuǎn)錄酶，發(fā)展了中心法則。于1975年獲得諾貝爾獎(jiǎng)。 DNA replication* RNA transcription* Protein biosynthesis* R

2、egulation of gene expression* Gene recombination and gene engineering第十章 DNA生物合成(復(fù)制)DNA Biosynthesis (Replication) Section 1* General features of DNA replicationSection 2* Enzymes in DNA replication Section 3 Process of DNA replicationSection 4 Reverse transcription and othersSection 5* DNA damage a

3、nd repair 復(fù)制(replication)是指遺傳物質(zhì)的傳代，以母鏈DNA為模板合成子鏈DNA的過(guò)程。復(fù)制親代DNA子代DNA第一節(jié)復(fù)制的基本規(guī)律Basic Rules of DNA Replication 一、半保留復(fù)制的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和意義子鏈繼承母鏈遺傳信息的幾種可能方式 全保留式 半保留式 混合式 密度梯度實(shí)驗(yàn) DNA生物合成時(shí)，母鏈DNA解開(kāi)為兩股單鏈，各自作為模板(template)按堿基配對(duì)規(guī)律，合成與模板互補(bǔ)的子鏈。子代細(xì)胞的DNA，一股單鏈從親代完整地接受過(guò)來(lái)，另一股單鏈則完全從新合成。兩個(gè)子細(xì)胞的DNA都和親代DNA堿基序列一致。這種復(fù)制方式稱為半保留復(fù)制。半保留復(fù)制的概

4、念按半保留復(fù)制方式，子代DNA與親代DNA的堿基序列一致，即子代保留了親代的全部遺傳信息，體現(xiàn)了遺傳的保守性。半保留復(fù)制的意義遺傳的保守性，是物種穩(wěn)定性的分子基礎(chǔ)，但不是絕對(duì)的。原核生物復(fù)制時(shí)，DNA從起始點(diǎn)(origin)向兩個(gè)方向解鏈，形成兩個(gè)延伸方向相反的復(fù)制叉，稱為雙向復(fù)制。 二、雙向復(fù)制復(fù)制中的放射自顯影圖象A. 環(huán)狀雙鏈DNA及復(fù)制起始點(diǎn)B. 復(fù)制中的兩個(gè)復(fù)制叉C. 復(fù)制接近終止點(diǎn)(termination, ter)oriterA B C真核生物每個(gè)染色體有多個(gè)起始點(diǎn)，是多復(fù)制子的復(fù)制。習(xí)慣上把兩個(gè)相鄰起始點(diǎn)之間的距離定為一個(gè)復(fù)制子(replicon) 。復(fù)制子是獨(dú)立完成復(fù)制的功能

5、單位。 真核生物53oriorioriori535533553復(fù)制子3三、復(fù)制的半不連續(xù)性3535解鏈方向35335領(lǐng)頭鏈(leading strand)隨從鏈(lagging strand)順著解鏈方向生成的子鏈，復(fù)制是連續(xù)進(jìn)行的，這股鏈稱為領(lǐng)頭鏈。另一股鏈因?yàn)閺?fù)制的方向與解鏈方向相反，不能順著解鏈方向連續(xù)延長(zhǎng)，這股不連續(xù)復(fù)制的鏈稱為隨從鏈。復(fù)制中的不連續(xù)片段稱為岡崎片段(okazaki fragment)。 領(lǐng)頭鏈連續(xù)復(fù)制而隨從鏈不連續(xù)復(fù)制，就是復(fù)制的半不連續(xù)性。 DNA復(fù)制的酶學(xué)The Enzymology of DNA Replication第二節(jié)參與DNA復(fù)制的物質(zhì) 底物(subst

6、rate): dNTP聚合酶(polymerase): 依賴DNA的DNA聚合酶， 簡(jiǎn)寫(xiě)為 DNA-pol模板(template) : 解開(kāi)成單鏈的DNA母鏈(ssDNA）引物(primer): 提供3-OH末端使dNTP可以依次聚合 其他的酶和蛋白質(zhì)因子一、復(fù)制的化學(xué)反應(yīng) (dNMP)n + dNTP (dNMP)n+1 + PPi 聚合反應(yīng)的特點(diǎn)DNA 新鏈生成需引物和模板； 新鏈的延長(zhǎng)只可沿5 3方向進(jìn)行 。二、DNA聚合酶全稱：依賴DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase,DDDP)簡(jiǎn)稱：DNA-pol活性：1. 53 的聚合活性2. 核酸外切酶

7、活性5 A G C T T C A G G A T A 3 | | | | | | | | | | |3 T C G A A G T C C T A G C G A C 5 3 5外切酶活性 5 3外切酶活性?能切除突變的 DNA片段。能辨認(rèn)錯(cuò)配的堿基對(duì)，并將其水解。 核酸外切酶活性 （一）原核生物的DNA聚合酶DNA-pol DNA-pol DNA-pol 美國(guó)科學(xué)家, Kornberg 1955年從E.Cole 中發(fā)現(xiàn)了DNA 聚合酶，為DNA的復(fù)制打下了基礎(chǔ)。為此，Kornberg 1959年獲得諾貝爾獎(jiǎng)。Arthur Kornberg功能：對(duì)復(fù)制中的錯(cuò)誤進(jìn)行校讀，對(duì)復(fù)制和修復(fù)中出現(xiàn)的空

8、隙進(jìn)行填補(bǔ)。DNA-pol （109kD）復(fù)制產(chǎn)生短片斷的DNA323個(gè)氨基酸小片段5 核酸外切酶活性大片段/Klenow 片段 604個(gè)氨基酸DNA聚合酶活性 5 核酸外切酶活性N 端C 端木瓜蛋白酶DNA-pol Klenow片段是實(shí)驗(yàn)室合成DNA，進(jìn)行分子生物學(xué)研究中常用的工具酶。 DNA-pol （120kD） DNA-pol II基因發(fā)生突變，細(xì)菌依然能存活。 它參與DNA損傷的應(yīng)急狀態(tài)修復(fù)。 功能是原核生物復(fù)制延長(zhǎng)中真正起催化作用的酶。 DNA-pol (250kD)復(fù)制產(chǎn)生長(zhǎng)片斷的DNA（二）真核生物的DNA聚合酶DNA-pol 起始引發(fā)，有引物酶活性。延長(zhǎng)子鏈的主要酶，有解螺旋

9、酶活性。參與低保真度的復(fù)制 。在復(fù)制過(guò)程中起校讀、修復(fù)和填補(bǔ)缺口的作用。在線粒體DNA復(fù)制中起催化作用。DNA-pol DNA-pol DNA-pol DNA-pol 三、復(fù)制保真性的酶學(xué)依據(jù)復(fù)制按照堿基配對(duì)規(guī)律進(jìn)行，是遺傳信息能準(zhǔn)確傳代的基本原理。復(fù)制保真性的酶學(xué)機(jī)制：（一）DNA-pol的核酸外切酶活性和及時(shí)校讀 （二）復(fù)制的保真性和堿基選擇（一）DNA-pol的核酸外切酶活性和及時(shí)校讀A：DNA-pol的外切酶活性切除錯(cuò)配堿基；并用其聚合活性摻入正確配對(duì)的底物。B：堿基配對(duì)正確， DNA-pol不表現(xiàn)活性。（二）復(fù)制的保真性和堿基選擇 DNA聚合酶靠其大分子結(jié)構(gòu)協(xié)調(diào)非共價(jià)（氫鍵）與共價(jià)（

10、磷酸二酯鍵）鍵的有序形成。 嘌呤的化學(xué)結(jié)構(gòu)能形成順式和反式構(gòu)型，與相應(yīng)的嘧啶形成氫鍵配對(duì)，嘌呤應(yīng)處于反式構(gòu)型。 1. 遵守嚴(yán)格的堿基配對(duì)規(guī)律；2. 聚合酶在復(fù)制延長(zhǎng)時(shí)對(duì)堿基的選擇功能；3. 復(fù)制出錯(cuò)時(shí)DNA-pol的及時(shí)校讀功能。DNA復(fù)制的保真性至少要依賴三種機(jī)制 四、復(fù)制中的分子解鏈及DNA 分子拓?fù)鋵W(xué)變化 DNA分子的堿基埋在雙螺旋內(nèi)部，只有把DNA解成單鏈，它才能起模板作用。 （一）解螺旋酶和單鏈DNA結(jié)合蛋白 解螺旋酶(helicase)利用ATP供能，作用于氫鍵，使DNA雙鏈解開(kāi)成為兩條單鏈引物酶(primase)復(fù)制起始時(shí)催化生成RNA引物的酶單鏈DNA結(jié)合蛋白(single s

11、tranded DNA binding protein, SSB)在復(fù)制中維持模板處于單鏈狀態(tài)并保護(hù)單鏈的完整108 局部解鏈（二）DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶(DNA topoisomerase) 解鏈過(guò)程中正超螺旋的形成拓?fù)洚悩?gòu)酶作用特點(diǎn)既能水解 、又能連接磷酸二酯鍵 拓?fù)洚悩?gòu)酶 拓?fù)洚悩?gòu)酶分 類拓?fù)洚悩?gòu)酶切斷DNA雙鏈中一股鏈，使DNA解鏈旋轉(zhuǎn)不致打結(jié)；適當(dāng)時(shí)候封閉切口，DNA變?yōu)樗沙跔顟B(tài)。反應(yīng)不需ATP。拓?fù)洚悩?gòu)酶切斷DNA分子兩股鏈，斷端通過(guò)切口旋轉(zhuǎn)使超螺旋松弛。利用ATP供能，連接斷端， DNA分子進(jìn)入負(fù)超螺旋狀態(tài)。作用機(jī)制 五、DNA連接酶連接DNA鏈3-OH末端和相鄰DNA鏈5-P末端，使

12、二者生成磷酸二酯鍵，從而把兩段相鄰的DNA鏈連接成一條完整的鏈。 DNA連接酶(DNA ligase)作用方式HO5335DNA連接酶ATPADP5353DNA連接酶在復(fù)制中起最后接合缺口的作用。在DNA修復(fù)、重組及剪接中也起縫合缺口作用。也是基因工程的重要工具酶之一。功能（一）復(fù)制的起始需要解決兩個(gè)問(wèn)題：1. DNA解開(kāi)成單鏈，提供模板。2. 合成引物，提供3-OH末端。一、原核生物的DNA生物合成 E.coli復(fù)制起始點(diǎn) oriC GATTNTTTATTT GATCTNTTNTATT GATCTCTTATTAG 113 17 29 32 44 TGTGGATTA-TTATACACA-TTT

13、GGATAA-TTATCCACA58 66 166 174 201 209 237 245 串聯(lián)重復(fù)序列 反向重復(fù)序列53531. DNA解鏈1）復(fù)制起始點(diǎn)的識(shí)別2）解螺旋酶解開(kāi)雙鏈4）SSB參與維持DNA的單鏈結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定3） DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶(可能主要是II型酶的作用)，在將要打結(jié)或已打結(jié)處作切口。 Dna A Dna B、 Dna CDNA拓?fù)洚悩?gòu)酶SSB3535 Dna A Dna B、 Dna CDNA拓?fù)洚悩?gòu)酶引物酶SSB35352. 引發(fā)體的形成含有解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶和DNA復(fù)制起始區(qū)域的復(fù)合結(jié)構(gòu)稱為引發(fā)體。 引物酶復(fù)制是在一段RNA引物的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，催化引物合成的是

14、一種RNA聚合酶，它不同于催化轉(zhuǎn)錄過(guò)程的RNA聚合酶，因此稱為引物酶。 DDRP DNA dependent RNA polymerase由于DDDP不可以催化兩個(gè)單dNTP之間的反應(yīng)，DDRP可以催化兩個(gè)NTP起始合成小的RNA片斷引物酶合成的小的RNA片斷稱為“引物”，為DNA的合成提供 3OH3535引物是由引物酶催化合成的短鏈RNA分子。 引物3 HO5引物酶 復(fù)制開(kāi)始后由于DNA雙鏈解開(kāi)，在兩股單鏈上進(jìn)行復(fù)制，在電子顯微鏡下均看到伸展成叉狀的復(fù)制現(xiàn)象，稱為復(fù)制叉。 在DNA聚合酶III的作用下，新鏈第一個(gè)脫氧核苷酸就加到引物的3-OH末端上，形成磷酸二酯鍵。復(fù)制開(kāi)始。（二）復(fù)制的延長(zhǎng)

15、復(fù)制的延長(zhǎng)指在DNA-pol催化下，dNTP以dNMP的方式逐個(gè)加入引物或延長(zhǎng)中的子鏈上，其化學(xué)本質(zhì)是磷酸二酯鍵的不斷生成。 5 35dATPdGTPdTTPdCTPdTTPdGTPdATPdCTPOH 33DNA-pol 領(lǐng)頭鏈的合成：DDDP沿著模板35滑動(dòng)，第一個(gè)進(jìn)入配對(duì)的dNTP與RNA引物上的3OH形成3,5磷酸二酯鍵，留下3OH繼續(xù)合成隨從鏈的合成岡崎片段的形成 兩條鏈?zhǔn)窃谕粋€(gè)DNA-pol的催化下進(jìn)行延長(zhǎng)的過(guò)程階段一階段二階段三階段四原核生物基因是環(huán)狀DNA，雙向復(fù)制的復(fù)制片段在復(fù)制的終止點(diǎn)(ter)處匯合。oriterE.coli8232ori terSV40500（三）復(fù)制

16、的終止555RNA酶OHP5DNA-pol dNTP55PATP ADP+Pi55DNA連接酶 隨從鏈上不連續(xù)性片段的連接復(fù)制過(guò)程簡(jiǎn)圖哺乳動(dòng)物的細(xì)胞周期DNA合成期G1G2SM二、真核生物的DNA生物合成 細(xì)胞能否分裂，決定于進(jìn)入S期及M期這兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。G1S及G2M的調(diào)節(jié)，與蛋白激酶活性有關(guān)。 蛋白激酶通過(guò)磷酸化激活或抑制各種復(fù)制因子而實(shí)施調(diào)控作用。 真核生物每個(gè)染色體有多個(gè)起始點(diǎn)，是多復(fù)制子復(fù)制。復(fù)制有時(shí)序性，即復(fù)制子以分組方式激活而不是同步起動(dòng)。 復(fù)制的起始需要DNA-pol（引物酶活性）和pol（解螺旋酶活性）參與。還需拓?fù)涿负蛷?fù)制因子(replication factor, RF)。

17、 增殖細(xì)胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)在復(fù)制起始和延長(zhǎng)中起關(guān)鍵作用。 （一）復(fù)制的起始3553領(lǐng)頭鏈3535親代DNA隨從鏈引物核小體（二）復(fù)制的延長(zhǎng)染色體DNA呈線狀，復(fù)制在末端停止。復(fù)制中岡崎片段的連接，復(fù)制子之間的連接。染色體兩端DNA子鏈上最后復(fù)制的RNA引物，去除后留下空隙。（三）復(fù)制的終止53355335+5333355端粒(telomere)是指真核生物染色體線性DNA分子末端的結(jié)構(gòu)部分，通常膨大成粒狀。結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 由末端單鏈DNA序列和蛋白質(zhì)構(gòu)成。 末端DNA序列是多次重復(fù)的富含G、T堿基的短序列。TTTTGGGGTT

18、TTGGGG功能 維持染色體的穩(wěn)定性 維持DNA復(fù)制的完整性端粒酶(telomerase)端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR)端粒酶協(xié)同蛋白(human telomerase associated protein 1, hTP1)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase, hTRT) 組成端粒酶的催化延長(zhǎng)作用爬行模型DNA聚合酶復(fù)制子鏈進(jìn)一步加工 端粒維持著染色體的穩(wěn)定。端粒因細(xì)胞分裂而變短到一定程度時(shí)，細(xì)胞就會(huì)死亡。 端粒破損會(huì)導(dǎo)致DNA變得脆弱、容易發(fā)生變異，可能導(dǎo)致一些與衰老有關(guān)的疾病，如動(dòng)脈硬化和某些癌

19、癥。逆轉(zhuǎn)錄和其他復(fù)制方式Reverse Transcription and Other DNA Replication Ways第四節(jié)逆轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcriptase) 逆轉(zhuǎn)錄(reverse transcription) RNADNA 逆轉(zhuǎn)錄酶一、逆轉(zhuǎn)錄病毒和逆轉(zhuǎn)錄酶 逆轉(zhuǎn)錄病毒細(xì)胞內(nèi)的逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象RNA 模板逆轉(zhuǎn)錄酶 DNA-RNA 雜化雙鏈RNA酶單鏈DNA逆轉(zhuǎn)錄酶雙鏈DNA逆轉(zhuǎn)錄酶有三種酶的活性：RNA或DNA作模板的dNTP聚合酶活性和RNase活性 逆轉(zhuǎn)錄酶 A A A A T T T T AAAASI核酸酶 DNA聚合酶堿水解 T T T T分子生物學(xué)研究可應(yīng)用

20、逆轉(zhuǎn)錄酶，作為獲取基因工程目的基因的重要方法之一，此法稱為cDNA法。 以mRNA為模板，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成的與mRNA堿基序列互補(bǔ)的DNA鏈。 試管內(nèi)合成cDNAcDNA complementary DNARNA 模板逆轉(zhuǎn)錄酶 DNA-RNA 雜化雙鏈RNA酶單鏈DNA逆轉(zhuǎn)錄酶雙鏈DNA整合宿主DNARNA病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制成雙鏈的DNA，稱為前病毒，前病毒可以獨(dú)立繁殖在某些條件下，前病毒的基因組通過(guò)基因重組，參加到細(xì)胞基因組內(nèi)，并且隨著宿主的基因一起復(fù)制和表達(dá)整合前病毒獨(dú)立繁殖或者整合，都可成為致病的原因反轉(zhuǎn)錄病毒細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制二、逆轉(zhuǎn)錄研究的意義 逆轉(zhuǎn)錄酶和逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象，是分子生物學(xué)研究中的重大發(fā)現(xiàn)

21、。 逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象說(shuō)明：至少在某些生物，RNA同樣兼有遺傳信息傳代與表達(dá)功能。對(duì)逆轉(zhuǎn)錄病毒的研究，拓寬了20世紀(jì)初已注意到的病毒致癌理論。 滾環(huán)復(fù)制(rolling circle replication)三、滾環(huán)復(fù)制和D環(huán)復(fù)制 是某些低等生物的復(fù)制形式，如X174和M13噬菌體等。3-OH5-P55533335滾環(huán)復(fù)制55335dNTPDNA-pol D環(huán)復(fù)制(D-loop replication) 是線粒體DNA (mitochondrial DNA，mtDNA)的復(fù)制形式。 DNA損傷（突變）與修復(fù)DNA Damage (Mutation) and Repair第五節(jié)遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)改變而引起的

22、遺傳信息改變，均可稱為突變。在復(fù)制過(guò)程中發(fā)生的DNA突變稱為DNA損傷(DNA damage)。從分子水平來(lái)看，突變就是DNA分子上堿基的改變。 一、突變的意義（一）突變是進(jìn)化、分化的分子基礎(chǔ)（二）突變導(dǎo)致基因型改變（三）突變導(dǎo)致死亡（四）突變是某些疾病的發(fā)病基礎(chǔ) 二、引發(fā)突變的因素物理因素:紫外線(ultra violet, UV)、各種輻射 UV紫外線照射可引起核酸鏈上相鄰的兩個(gè)胸腺嘧啶形成二聚體TT（胸腺二聚體）?；瘜W(xué)因素三、突變的分子改變類型錯(cuò)配 (mismatch)缺失 (deletion)插入 (insertion)重排 (rearrangement)框移(frame-shift)

23、 DNA分子上的堿基錯(cuò)配稱點(diǎn)突變(point mutation)。發(fā)生在同型堿基之間，即嘌呤代替另一嘌呤，或嘧啶代替另一嘧啶。 1. 轉(zhuǎn)換發(fā)生在異型堿基之間，即嘌呤變嘧啶或嘧啶變嘌呤。 2. 顛換（一）錯(cuò)配鐮形紅細(xì)胞貧血病人Hb (HbS) 亞基N-val his leu thr pro val glu C 肽鏈CAC GTG基因正常成人Hb (HbA)亞基N-val his leu thr pro glu glu C 肽鏈CTC GAG基因（二）缺失、插入和框移缺失：一個(gè)堿基或一段核苷酸鏈從DNA大分子上消失。插入：原來(lái)沒(méi)有的一個(gè)堿基或一段核苷酸鏈插入到DNA大分子中間?？蛞仆蛔兪侵溉?lián)體密

24、碼的閱讀方式改變，造成蛋白質(zhì)氨基酸排列順序發(fā)生改變。 缺失或插入都可導(dǎo)致框移突變。谷 酪 蛋 絲5 G C A G U A C A U G U C 丙 纈 組 纈正常5 G A G U A C A U G U C 缺失C缺失引起框移突變（三）重排DNA分子內(nèi)較大片段的交換，稱為重組或重排。 由基因重排引起的兩種地中海貧血基因型四、DNA損傷的修復(fù) 修復(fù)(repairing) 是對(duì)已發(fā)生分子改變的補(bǔ)償措施，使其回復(fù)為原有的天然狀態(tài)。光修復(fù)(light repairing)切除修復(fù)(excision repairing)重組修復(fù)(recombination repairing)SOS修復(fù) 修復(fù)的主

25、要類型（一）光修復(fù)光修復(fù)酶(photolyase) UV 光修復(fù)過(guò)程是通過(guò)光修復(fù)酶催化而完成的，需300600nm波長(zhǎng)照射激活UvrAUvrBUvrCOHPDNA聚合酶OHP （二）切除修復(fù)是細(xì)胞內(nèi)最重要和有效的修復(fù)機(jī)制，主要由DNA-pol和連接酶完成。DNA連接酶ATPE.coli的切除修復(fù)機(jī)制（三）重組修復(fù) 這是DNA的復(fù)制過(guò)程中所采用的一種有差錯(cuò)的修復(fù)方式。(recombination repairing) DNA分子受到較大范圍損傷,使復(fù)制受到抑制時(shí)這種修復(fù)機(jī)制用SOS借喻細(xì)胞處于危急狀態(tài)。損傷誘導(dǎo)一種特異性較低的新的DNA聚合酶，以及重組酶等的產(chǎn)生。繼續(xù)催化損傷部位DNA的復(fù)制。通

26、過(guò)SOS修復(fù)，復(fù)制如能繼續(xù)，細(xì)胞是可存活的。然而DNA保留的錯(cuò)誤較多，導(dǎo)致較廣泛、長(zhǎng)期的突變。 （四）SOS修復(fù)選擇題練習(xí)DNA 復(fù)制1、DNA復(fù)制時(shí)，下列哪一種酶是不需要的？ A DNA指導(dǎo)下的DNA聚合酶 B DNA連接酶 C 拓?fù)洚悩?gòu)酶 D 解鏈酶 E 限制性內(nèi)切酶2、合成DNA的原料是 A dNMA B dNDP C dNTP D NTP E NMP3、真核細(xì)胞進(jìn)行DNA復(fù)制的部位是 A 細(xì)胞膜 B 細(xì)胞漿 C 細(xì)胞核 D 核蛋白體 E 微粒體 原核細(xì)胞進(jìn)行DNA復(fù)制的部位是其擬核區(qū) A 由DNA為模板合成的DNA片段 B 由DNA為模板合成的RNA片段 C 由RNA為模板合成的DNA

27、片段 D 由RNA為模板合成的RNA片段 4、DNA復(fù)制中的引物是 A 5-TCTA-3 B 5-ATCT-3 C 5-UCUA-3 D 5-GCGA-3 E 3-TCTA-5 5、DNA復(fù)制時(shí)，模板序列 5-TAGA-3 將合成哪種互補(bǔ)序列？ 6、關(guān)于DNA復(fù)制中DNA聚合酶的錯(cuò)誤說(shuō)法是 A 底物是dNTP B 必須有DNA模板 C 合成方向是53 D 需要Mg2+參與 E 需要ATP參與7、下列關(guān)于大腸桿菌DNA聚合酶 的敘述哪一項(xiàng)是正確的 A 具有3 5外切酶活性 B 不需要引物 C 需要四種不同的三磷酸核苷 D dUTP是它的一種作用底物 E 可以將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái) 8、DNA連

28、接酶： A 使DNA形成超螺旋 B 使DNA鏈 上切口的兩個(gè)末端連接起來(lái) C 合成引物 D 將雙螺旋解鏈 E 去除引物，填補(bǔ)空缺 9、DNA復(fù)制需要 (1) helicase，(2) primase， (3) DNA polymerase，(4) DNA topoisomerase， (5) DNA ligase。其作用順序是： A (1) (5) (2) (4) (3)B (1) (2) (3) (4) (5)C (1) (2) (4) (3) (5)D (2) (1) (3) (4) (5)E (3) (1) (4) (5) (2)F (4) (1) (2) (3) (5)10、Okazaki 片段是 A DNA模板上的DNA片段B 引物酶催化合成的RNA片段C 隨從鏈上合成的DNA片段D 領(lǐng)頭鏈上合成的DNA片段11、DNA復(fù)制時(shí)，子鏈的合成方向是 A 一條子鏈 5 3，另一條子鏈 3 5B 兩條子鏈均為 5 3C 兩條子鏈均為 3 512、