發(fā)明專利撰寫實(shí)例(生物技術(shù))

1、頁(yè)腳.說(shuō)明書去除甘蔗宿根矮化病的方法技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種去除甘蔗宿根矮化病的方法。 背景技術(shù)甘蔗宿根矮化病是一種由細(xì)菌引起的病害，繁殖、生產(chǎn)和推廣脫毒種苗是防 止種苗帶病傳播，是提高甘蔗產(chǎn)量和糖分的一項(xiàng)重要舉措，去除甘蔗宿根矮化病 原物方法已在澳大利亞、美國(guó)、巴西、古巴、南非、菲律賓及中國(guó)省等地應(yīng)用多 年?，F(xiàn)有去除甘蔗宿根矮化病生產(chǎn)甘蔗健康種苗多采用溫水浸泡種莖或溫水浸 泡結(jié)合莖尖組培技術(shù)脫除甘蔗宿根矮化病的病原。然而，溫水浸泡的溫度通常為5052C,該溫度極為接近甘蔗芽的臨界致 死溫度，另外老芽和嫩芽能承受的溫度也不一樣，溫度過低脫毒效果差，溫度過 高，又容易導(dǎo)

2、致甘蔗芽死亡。而莖尖脫毒培養(yǎng)技術(shù)需要取的莖尖大小為0.1 0.2mm,此法需要精密的儀器以及對(duì)操作人員的要求比較高，這與市場(chǎng)要求的低 成本，高效率不相符合。發(fā)明容本發(fā)明的目的是針對(duì)上述存在問題，提供一種去除甘蔗宿根矮化病的方法， 達(dá)到優(yōu)化甘蔗病原物脫除流程，提高效率的目的，為甘蔗去除宿根矮化病技術(shù)提 供新的方法。本發(fā)明的具體步驟如下：1、大田選材在大田選擇正常生長(zhǎng)的甘蔗植株。2、腋芽培養(yǎng)采用常規(guī)腋芽培養(yǎng)技術(shù)誘導(dǎo)甘蔗腋芽的叢生芽，且腋芽苗是在透光的耐熱塑 料袋中進(jìn)行培養(yǎng)，以備后續(xù)脫毒使用，以下簡(jiǎn)稱“袋培腋芽苗”。3、袋培腋芽苗溫水脫毒袋培腋芽苗溫水脫毒生產(chǎn)流程：將水浴鍋的溫度調(diào)到50-52（一通

3、電加熱至設(shè)定溫度一將袋培腋芽苗整體直接浸沒于水浴鍋中60T20niin 一經(jīng)抽檢合格的 袋培腋芽苗一按生產(chǎn)數(shù)量需求進(jìn)行后續(xù)的繼代增殖、生根及假植移栽等常規(guī)生產(chǎn) 程序f獲得計(jì)劃數(shù)量的合格健康種苗。上述的無(wú)菌操作步驟、繼代增殖、病原物檢測(cè)及生根培養(yǎng)等甘蔗健康種苗培 育程序均為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知，即為本領(lǐng)域技術(shù)人員的公知常識(shí)，培養(yǎng)的 條件和配方也與常規(guī)的甘蔗健康種苗相同。傳統(tǒng)的甘蔗宿根矮化病去除程序?yàn)椋?、甘蔗種莖一溫水脫毒處理一病原物檢測(cè)一無(wú)病種苗擴(kuò)繁。2、甘蔗種莖一溫水脫毒處理一在38C下催芽f莖尖培養(yǎng)一病原物檢測(cè)一 無(wú)病種苗擴(kuò)繁。本發(fā)明的甘蔗健康種苗生產(chǎn)程序?yàn)椋焊收岱N莖一腋芽培養(yǎng)一袋裝腋芽

4、苗溫水 脫毒處理一病原物檢測(cè)一無(wú)病種苗擴(kuò)繁從上述流程可見，與傳統(tǒng)的甘蔗健康種苗生產(chǎn)程序相比較，本發(fā)明的有益效 果：本發(fā)明直接用袋裝的甘蔗腋芽苗進(jìn)行溫水脫毒處理，克服了因甘蔗老芽和嫩 芽能承受的溫度不一樣，無(wú)法準(zhǔn)確控制溫度及莖尖培養(yǎng)技術(shù)需要取的莖尖大小為 0. 10. 2mm,需要精密的儀器和高素質(zhì)的操作人員的缺點(diǎn)，因此本發(fā)明的去除甘 蔗宿根矮化病方法可以達(dá)到優(yōu)化生產(chǎn)程序、降低技術(shù)操作門檻和降低生產(chǎn)成本的 目的。附圖說(shuō)明圖1是本發(fā)明去除甘蔗宿根矮化病流程示意圖。具體實(shí)施方式實(shí)施例1：為了便于理解，在描述具體的實(shí)施例之前，先對(duì)本發(fā)明的原理進(jìn)行一個(gè)簡(jiǎn)單 的介紹。下面描述一個(gè)依據(jù)上述原理并采用袋培腋芽

5、苗直接溫湯去除甘蔗宿根矮化 病實(shí)施例，其包括如下步驟：1、大田選材在甘蔗生產(chǎn)大田選取正常生長(zhǎng)的甘蔗植株，為確保試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，選取經(jīng)檢 測(cè)已感染宿根矮化病的甘蔗植株。2、腋芽培養(yǎng)切取上述已感染宿根矮化病的甘蔗植株的蔗稍部位，在接種室中經(jīng)過無(wú)菌操 作步驟，逐層剝開包裹的葉鞘，每剝開一片葉鞘，即露出一個(gè)帶腋芽的節(jié)位，用 無(wú)菌手術(shù)刀切取該帶腋芽的節(jié)，置于叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽的誘導(dǎo)。叢 生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為液體。大約培養(yǎng)30-45天即可誘導(dǎo)出叢生腋芽苗，在接種室中 將叢生腋芽苗轉(zhuǎn)接至透光的聚丙烯塑料袋中進(jìn)行繼代培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)基為液體。 3、袋培腋芽苗溫水脫毒袋培腋芽苗溫水脫毒生產(chǎn)流程：首先將水添加至

6、水浴鍋體積的大約3/4處一 將水浴鍋的溫度調(diào)到50. 5七一通電加熱至50. 5C一將袋培腋芽苗整體直接浸沒 于水浴鍋中120min一經(jīng)抽檢合格的袋培腋芽苗一按生產(chǎn)數(shù)量需求進(jìn)行后續(xù)的繼 代增殖、生根及假植移栽常規(guī)生產(chǎn)程序一獲得計(jì)劃數(shù)量的合格健康種苗。上述的無(wú)菌操作步驟、繼代增殖、病原物檢測(cè)及生根培養(yǎng)等甘蔗健康種苗培 育程序均為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知，培養(yǎng)的條件和配方也與常規(guī)的甘蔗健康種 苗相同。（請(qǐng)補(bǔ)充兩個(gè)實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，包括樣本中陽(yáng)性的比例，經(jīng)過處理之 后陽(yáng)性的比例，加熱對(duì)于腋芽苗的成活率等是否有影響，以實(shí)臉數(shù)據(jù)說(shuō)明）表1不同處理溫度、不同處理時(shí)間對(duì)去除甘蔗宿根矮化病的影響處理溫 度。C）

7、抽檢數(shù)量（袋）60分鐘陽(yáng)性（袋）90分鐘陽(yáng)性（袋）120分鐘陽(yáng)性（袋）50.05032252150.550135051.05063051.55052052.050000ck5050注：本試驗(yàn)甘蔗宿根矮化病的檢測(cè)方法為斑點(diǎn)的標(biāo)免疫試驗(yàn)法（DB-EIA）檢測(cè)RSD病菌 表2不同處理溫度、不同處理時(shí)間對(duì)袋培腋芽苗成活率的影響處理溫 度處理數(shù)量（袋）60分鐘成活率 （%）90分鐘成活率 （%）120分鐘成活率 （%）50.050100.0100.095.850.550100.095.390.651.05071.251. 442.851.55065. 145.520. 152.050000ck50100

8、.0100.0100.0注：成活率數(shù)據(jù)為每袋成活率的平均數(shù)。實(shí)施例2：該實(shí)施例中，步驟1和步驟3及后續(xù)育苗程序均同實(shí)施例1,所不同的是步驟2,現(xiàn)具體介紹如下：2、腋芽培養(yǎng)浸種催芽將已感染宿根矮化病的甘蔗植株剝掉蔗葉后在自來(lái)水下沖洗干凈，切成單芽 段，用濃度1%。的甲基多布菌溶液進(jìn)行浸種消毒30min后置于溫度38C的人工氣 候箱中催芽7-箱天。溫室培養(yǎng)切取上述催芽了 7T0天的腋芽，在接種室中經(jīng)過無(wú)菌操作步驟，逐層去除 包裹的心葉，取出腋芽的頂端生長(zhǎng)點(diǎn)組織l-2mm進(jìn)行離體培養(yǎng)，該培養(yǎng)基為固體 培養(yǎng)基。培養(yǎng)30-45天即可誘導(dǎo)出叢生芽，將叢生芽轉(zhuǎn)接至聚丙烯塑料袋中進(jìn)行 繼代增殖培養(yǎng)。以上所述，

9、僅為本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)圍并不局限于此， 任何不經(jīng)過創(chuàng)造性勞動(dòng)想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)圍之。因此， 本發(fā)明的保護(hù)圍應(yīng)該以權(quán)利要求書所限定的保護(hù)圍為準(zhǔn)。表3不同處理溫度、不同處理時(shí)間對(duì)去除甘蔗宿根矮化病的影響處理溫 度抽檢數(shù)量（袋）60分鐘陽(yáng)性（袋）90分鐘陽(yáng)性（袋）120分鐘陽(yáng)性（袋）50.05025151050.55093051.05042051.55031052.050000ck5050注：本試驗(yàn)甘蔗宿根矮化病的檢測(cè)方法為斑點(diǎn)靜標(biāo)免疫試臉法（DB-EIA）檢測(cè)RSD病菌 表4不同處理溫度、不同處理時(shí)間對(duì)袋培腋芽苗成活率的影響處理溫 度（C）處理數(shù)量（袋）60

10、分鐘成活率 （%）90分鐘成活率 （%）120分鐘成活率 （%）50.050100.0100.091.550.550100.092.488.651.05070.348. 340.351.55063.243. 518.452.050000ck50100.0100.0100.0注：成活率數(shù)據(jù)為每袋成活率的平均數(shù)。權(quán)利要求書1、去除甘蔗宿根矮化病的方法，包括如下步驟：甘蔗主栽品種或新品種生長(zhǎng)正 常植株，其中包括已感染宿根矮化病的甘蔗植株一取蔗稍腋芽或全莖腋芽一誘導(dǎo) 腋芽苗叢生芽一腋芽苗叢生芽轉(zhuǎn)接至塑料袋進(jìn)行繼代增殖一甘蔗腋芽苗溫水脫 毒處理一甘蔗宿根矮化病病原物檢測(cè)一無(wú)病種苗增殖擴(kuò)繁，進(jìn)行常規(guī)后續(xù)生

11、產(chǎn)流 程一獲得預(yù)期規(guī)格數(shù)量的健康種苗，其特征在于：直接用溫水脫毒處理誘導(dǎo)出的 甘蔗腋芽苗，所述的溫水溫度為50-52（之間。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除甘蔗宿根矮化病的方法，其特征在于：所述甘蔗 腋芽苗溫水脫毒處理，處理時(shí)間60min-120min。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的去除甘蔗宿根矮化病的方法，其特征在于：所述水浴 鍋的溫度設(shè)置為50.51,處理時(shí)間為120min。4、根據(jù)權(quán)利要求1至3所述的去除甘蔗宿根矮化病的方法，其特征在于：所述 的塑料袋為透光的聚丙烯材料制作。5、去除甘蔗宿根矮化病的方法，包括如下步驟：（1）大田選材：在甘蔗生產(chǎn)大田選取正常生長(zhǎng)的甘蔗植株，包括經(jīng)檢測(cè)已感染 宿根矮化

12、病的甘蔗植株；（2）腋芽培養(yǎng)：切取上述已感染宿根矮化病的甘蔗植株的蔗稍部位，在接種室 中經(jīng)過無(wú)菌操作步驟，逐層剝開包裹的葉鞘，每剝開一片葉鞘，即露出一個(gè)帶腋 芽的節(jié)位，用無(wú)菌手術(shù)刀切取該帶腋芽的節(jié)，置于叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生 芽的誘導(dǎo)，所述的叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為液體；培養(yǎng)30-45天即可誘導(dǎo)出叢生腋芽 苗，在接種室中將叢生腋芽苗轉(zhuǎn)接至透光的聚丙烯塑料袋中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，繼代 培養(yǎng)基為液體；（3）袋培腋芽苗溫水脫毒：袋培腋芽苗溫水脫毒生產(chǎn)流程：首先將將水浴鍋的 溫度設(shè)定50. 5。（:一通電加熱至50. 5C一將袋培腋芽苗整體直接浸沒于水浴鍋中 120minf經(jīng)抽檢合格的袋培腋芽苗一按生產(chǎn)數(shù)量需

13、求進(jìn)行后續(xù)的繼代增殖、生根及假植移栽常規(guī)生產(chǎn)程序一獲得計(jì)劃數(shù)量的合格健康種苗。6、去除甘蔗宿根矮化病的方法，包括如下步驟：（1）大田選材：在甘蔗生產(chǎn)大田選取正常生長(zhǎng)的甘蔗植株，包括經(jīng)檢測(cè)已感染 宿根矮化病的甘蔗植株；（2）腋芽培養(yǎng)：將已感染宿根矮化病的甘蔗植株剝掉蔗葉后在自來(lái)水下沖洗干 凈，切成單芽段，用濃度1%。的甲基多布菌溶液進(jìn)行浸種消毒30min后置于溫度 38C的人工氣候箱中催芽7T0天；切取上述催芽了 7T0天的腋芽，在接種室中 經(jīng)過無(wú)菌操作步驟，逐層去除包裹的心葉，取出腋芽的頂端生長(zhǎng)點(diǎn)組織1-2 mm進(jìn) 行離體培養(yǎng)，該培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基；培養(yǎng)30-45天誘導(dǎo)出叢生芽，將叢生芽轉(zhuǎn) 接至聚丙烯塑料袋中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)；（3）袋培腋芽苗溫水脫毒：袋培腋芽苗溫水脫毒生產(chǎn)流程：首先將水浴鍋的溫 度設(shè)定50. 5七一通電加熱至50. 5七一將袋培腋芽苗整體直接浸沒于水浴鍋中 120Hiin一經(jīng)抽