食品微生物檢驗(yàn)室建設(shè)與管理

1、第二章食品微生物檢驗(yàn)室建設(shè)與管理【知識目標(biāo)】. 了解食品微生物檢驗(yàn)室及配制情況，并做到檢驗(yàn)室科學(xué)規(guī)范管理，了解檢驗(yàn)室中該 用到哪些儀器設(shè)備。.理解食品微生物檢驗(yàn)室安全條例，理解玻璃器皿的種類及清洗滅菌的操作過程。.掌握檢驗(yàn)室中常用儀器的使用與維護(hù)，掌握無菌室的滅菌種類和方法。 【技能目標(biāo)】.會辦理食品微生物檢驗(yàn)室的設(shè)備配谿工作。.能處理檢驗(yàn)室常遇到的安全問題，如何將玻璃器皿清洗干凈，能處理微生物實(shí)驗(yàn)室 常用儀器設(shè)備長久安全使用與維護(hù)的技術(shù)問題。.能運(yùn)用無菌室的熏蒸消毒方法對玻璃器皿進(jìn)行包扎、滅菌?！景咐龑?dǎo)入】實(shí)驗(yàn)室是高等學(xué)校進(jìn)行教學(xué)和研究的重要基地，是新形勢下培養(yǎng)高素質(zhì)人材、出高水平成果、服務(wù)

2、經(jīng)濟(jì)建設(shè)的主要場所。我國著名的物理學(xué)家馮瑞院士說：“實(shí)驗(yàn)室是現(xiàn)代大學(xué)的心臟”。形象地說明了實(shí)驗(yàn)室的重要作用。但是，隨著我國高校對外開放力度的加大和學(xué)校 內(nèi)部管理體制改革的不斷深入，高校實(shí)驗(yàn)室使用頻繁，人員集中且流動性大，加之種類繁多的化學(xué)藥品、易燃易爆物品、劇毒物品和大量的儀器設(shè)備及其技術(shù)資料都存放在實(shí)驗(yàn)室。這就出現(xiàn)了許多新情況、新問題，其中以實(shí)驗(yàn)室安全問題最為突出，實(shí)驗(yàn)室事故的案例也時有發(fā)生。2004年的SARS實(shí)驗(yàn)室事件至今還依然讓人記憶猶新，當(dāng)時中國（包括臺灣在內(nèi)）、新加坡等國的一些實(shí)驗(yàn)室沒有經(jīng)過衛(wèi)生部的批準(zhǔn)就急于開展了針對SARS病毒的科學(xué)研究，由于實(shí)驗(yàn)室本身的條件不足、實(shí)驗(yàn)室人員的粗

3、心或?qū)嶒?yàn)室管理不善等引發(fā)了許多問題，最嚴(yán)重的就是發(fā)生了實(shí)驗(yàn)室感染，讓人們異常震驚。2007年8月，英格蘭南部薩里郡出現(xiàn)兩起口蹄疫事件，英國環(huán)境、食品和農(nóng)村事務(wù)部經(jīng)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)暴發(fā)的口蹄疫疫情源自疫情發(fā)生地附近動物衛(wèi)生研究所和梅里亞爾動物保健公司的實(shí)驗(yàn)室，而人類活動可能是病毒得以傳播的途徑。因此說，我們實(shí)驗(yàn)室管理人員要遵守食品微生物檢驗(yàn)室的規(guī)章制度，確保檢驗(yàn)室安全規(guī)則順利實(shí)施，維護(hù)好儀器設(shè)備，盡量杜絕實(shí)驗(yàn)事故的發(fā)生， 以減少個人危害及環(huán)境的污染。第一節(jié)微生物檢驗(yàn)室一、食品微生物檢驗(yàn)室基本要求食品微生物檢驗(yàn)室以質(zhì)量管理、衛(wèi)生以及監(jiān)控危害分析和關(guān)鍵控制點(diǎn)計劃的有效性進(jìn)為目的，進(jìn)行檢測、鑒定或描述食品中

4、致病微生物存在與否的實(shí)驗(yàn)室。由于微生物的特殊生物學(xué)特性，對致病性微生物的檢測必須在特定的食品微生物檢驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。食品微生物檢驗(yàn)室完善的組織與管理、 規(guī)劃建設(shè)和配套環(huán)境設(shè)施的科學(xué)性和合理性、 檢驗(yàn)人員的良好檢驗(yàn)器具和耗材的質(zhì)量、檢驗(yàn)方法的合適性、儀器設(shè)備的狀態(tài)、檢驗(yàn)質(zhì)量的準(zhǔn)確性，關(guān)系到食品微生物的檢測質(zhì)量，而且關(guān)系到食品安全，甚至關(guān)系到個人安全、社區(qū)安全和經(jīng)濟(jì)貿(mào)易，因此必須通過適當(dāng)?shù)谋O(jiān)控手段和科學(xué)合理的驗(yàn)證試驗(yàn)來對其進(jìn)行管理。管理要求食品微生物檢驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)國際通用標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范， 結(jié)合食品檢驗(yàn)的實(shí)際情況， 嚴(yán)格食品微生 物室質(zhì)量控制規(guī)范，把食品微生物檢測室管理納入科學(xué)化和規(guī)范化管理軌道，以便于提高食品

5、微生物檢驗(yàn)室的整體質(zhì)量管理水平，進(jìn)而提供食品安全檢驗(yàn)的技術(shù)保證。同時，食品微生物檢驗(yàn)室應(yīng)具有明確的法律地位。不應(yīng)因經(jīng)濟(jì)或政治的因素 （例如誘惑）而影響檢測。檢測結(jié)果應(yīng)具有一定的權(quán)威性。食品微生物檢測室要履行對良好職業(yè)行為、檢驗(yàn)工作質(zhì)量的承諾。食品微生物檢驗(yàn)室有義務(wù)完成職責(zé)范圍內(nèi)的食品微生物檢測工作，對檢出客戶要求以外的食源性致病微生物， 應(yīng)將結(jié)果報告客戶，必要時通知相關(guān)部門。 并有檢驗(yàn)室管理人員負(fù)責(zé) 對實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系及全部的食品微生物檢測活動進(jìn)行監(jiān)督和評審，要設(shè)有對技術(shù)工作和所需資源供應(yīng)全面負(fù)責(zé)的技術(shù)管理者，以保證所要求的檢驗(yàn)室工作質(zhì)量。食品微生物檢測室還應(yīng)該建立并實(shí)施一套技術(shù)記錄進(jìn)行識別

6、、收集、索引、訪問、存放、維護(hù)以及安全處置的程序。所有記錄均應(yīng)清晰明確， 便于檢索。并有專人負(fù)責(zé)應(yīng)有程序保護(hù)和備份以電子形式存儲的記錄，以防止未經(jīng)授權(quán)的侵入和修改。環(huán)境條件要求.檢驗(yàn)室內(nèi)要經(jīng)常保持清潔衛(wèi)生，每天上下班應(yīng)進(jìn)行清掃整理，桌柜等表面應(yīng)每天用 消毒液擦拭，保持無塵，杜絕污染。.檢驗(yàn)室應(yīng)井然有序，不得存放實(shí)驗(yàn)室外及個人物品、儀器等，實(shí)驗(yàn)室用品要擺放合 理且有固定位置。.隨時保持檢驗(yàn)室衛(wèi)生，不得亂扔紙屑等雜物，測試用過的廢棄物要倒在固定的箱筒 內(nèi)，并及時處理。.檢驗(yàn)室應(yīng)具有優(yōu)良的采光條件和照明設(shè)備。.檢驗(yàn)室工作臺面應(yīng)保持水平和無滲漏，墻壁和地面應(yīng)當(dāng)光滑和容易清洗。.檢驗(yàn)室布局要合理，一般檢

7、驗(yàn)室應(yīng)有準(zhǔn)備間和無菌室，無菌室應(yīng)有良好的通風(fēng)條件, 如安裝空調(diào)設(shè)備及過濾設(shè)備，無菌室內(nèi)空氣測試應(yīng)基本達(dá)到無菌。技術(shù)要求.檢驗(yàn)人員的要求食品微生物檢驗(yàn)室的檢驗(yàn)人員應(yīng)具備接受檢驗(yàn)工作所必需的設(shè)備操作、微生物檢測技能（如倒平板、菌落計數(shù)、無菌操作等），積極參加檢驗(yàn)室管理和生物安全等方面的培訓(xùn)。檢驗(yàn)人員應(yīng)具有一定資質(zhì)的微生物學(xué)或相近專業(yè)的知識，能夠操作或指導(dǎo)微生物檢 驗(yàn)。應(yīng)按要求根據(jù)相應(yīng)的教育、培訓(xùn)、經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行資格確認(rèn)，檢驗(yàn)員的基本知識和基本經(jīng)歷在 評審中顯得尤其突出。因?yàn)槲⑸餀z驗(yàn)是通過形態(tài)特征、生理生化反應(yīng)征、生態(tài)特征、血清 學(xué)反應(yīng)等來鑒定菌種的，這需要一個受過微生物方面專門培訓(xùn)具有一定的理論基礎(chǔ)，

8、并且具有一定的檢驗(yàn)經(jīng)歷的檢驗(yàn)人員才能正確地檢驗(yàn)食品中的微生物。檢驗(yàn)人員進(jìn)入檢驗(yàn)室必須穿工作服，進(jìn)入無菌室換無菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非檢 驗(yàn)員不得進(jìn)入檢驗(yàn)室，嚴(yán)格執(zhí)行安全操作規(guī)程。檢驗(yàn)室管理者應(yīng)授權(quán)專門人員進(jìn)行特殊類型的抽樣、檢測、發(fā)布檢測報告、提出意見和解釋以及操作特殊類型的設(shè)備。 授權(quán)的報告簽發(fā)人應(yīng)具有相關(guān)的工作經(jīng)驗(yàn)和專業(yè)知識，包括有關(guān)法規(guī)和技術(shù)要求等。檢驗(yàn)人員要定期檢查試劑有無明晰標(biāo)簽，定期檢查、保養(yǎng)、檢修儀器，切不可在冰箱內(nèi)存放和加工私人食品。對各種器材應(yīng)建立領(lǐng)取消耗記錄，貴重儀器要有使用記錄， 對破損遺失的器材應(yīng)填寫報告； 藥品、器材、菌種不經(jīng)批準(zhǔn)不得擅自外借和轉(zhuǎn)讓，更不得私自拿出，

9、應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行菌種保管制度。檢驗(yàn)人員不能在檢驗(yàn)室內(nèi)吸煙、進(jìn)餐、會客、喧嘩，離開檢驗(yàn)室前認(rèn)真檢查水、電、 暖氣、門窗，對于有毒、有害、易燃、污染、腐蝕的物品和廢棄物品應(yīng)按有關(guān)要求執(zhí)行。.設(shè)施的要求食品微生物實(shí)驗(yàn)室的選址應(yīng)考慮對周圍環(huán)境的關(guān)系。微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇在水電齊 全、環(huán)境潔凈、空氣清新的地方，盡量避免與飼料倉庫及排放“三廢”的工廠相鄰。尤其是 夏季，更應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室周圍的環(huán)境衛(wèi)生。一級食品微生物實(shí)驗(yàn)室無需特殊選址，普通建筑物即可，但應(yīng)有防止昆蟲和嚙齒動物進(jìn)入的設(shè)計。二級食品微生物實(shí)驗(yàn)室可用普通建筑物，但應(yīng)自成一區(qū)，宜設(shè)在建設(shè)物的一端或一側(cè)，與建筑物其他部分可相通， 但應(yīng)安裝自動關(guān)閉的門，新建實(shí)驗(yàn)

10、室應(yīng)遠(yuǎn)離公共場所。三級食品微生物實(shí)驗(yàn)室可共用普通建筑物，但應(yīng)自成一區(qū)，宜設(shè)在建設(shè)物的一端或一側(cè)，與建筑物其他部分不相通，新建實(shí)驗(yàn)室應(yīng)遠(yuǎn)離公共場所，主實(shí)驗(yàn)室與外部建筑物的距離應(yīng)不小于外部建筑物高度的1.2倍。四級食品微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建造在獨(dú)立建筑物的完全隔離區(qū)域內(nèi)，該建筑物應(yīng)遠(yuǎn)離公共場所和居住建筑，其間應(yīng)設(shè)植物隔離帶，主實(shí)驗(yàn)室與外部建筑物的距離應(yīng)不小于外部建筑物高度的1.5倍。微生物實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計要求和地址選擇都應(yīng)當(dāng)盡量滿足微生物生長、發(fā)育的需要，能保證實(shí)施菌種分離和擴(kuò)大培養(yǎng)的無菌操作規(guī)程，使接種的菌種能有一個潔凈、恒溫和空氣清新的培養(yǎng)環(huán)境，以提高微生物的成活率和純培養(yǎng)質(zhì)量。食品微生物檢驗(yàn)室應(yīng)具有進(jìn)

11、行微生物檢測所需的適宜的、充分的設(shè)施條件，檢驗(yàn)室應(yīng)有檢測設(shè)施及輔助設(shè)施（大門、走廊、管理樣品室、洗手間、儲存室等）。某些檢測設(shè)備可能需要特殊的環(huán)境條件。檢驗(yàn)室負(fù)責(zé)人應(yīng)制定科學(xué)合理的環(huán)境監(jiān)測程序（使用諸如空氣采樣器、 沉降平板、接觸盤或棉拭子等方法監(jiān)測空氣和表面微生物污染）。應(yīng)保證工作區(qū)潔凈無塵，空間應(yīng)與微生物檢測需要及檢驗(yàn)室內(nèi)部整體布局相稱。通過自然條件或換氣裝置或使用空調(diào)，保持良好的通風(fēng)和適當(dāng)?shù)臏囟取Ｊ褂每照{(diào)時，應(yīng)根據(jù)不同工作類別檢查、維護(hù)和更換合適的過濾設(shè)備。依據(jù)所檢測微生物的不同等級，檢驗(yàn)室應(yīng)對授權(quán)進(jìn)入的人員采取嚴(yán)格限制措施，根據(jù)具體檢測活動（如檢測種類和數(shù)量等），有效分隔不相容的業(yè)務(wù)活

12、動。應(yīng)采取措施把交叉污染的風(fēng)險降低到最小。檢驗(yàn)室的設(shè)計應(yīng)能將意外傷害和職業(yè)病的風(fēng)險降到最低，并能保證所有工作人員和來訪者免受某些已知危險的傷害。應(yīng)準(zhǔn)備足夠數(shù)量的洗手設(shè)施和急救材料。獨(dú)立的洗手池，非手動控制效果更好，最好在檢驗(yàn)室的門附近，并有發(fā)生泄漏時的處理程序。微生物檢測室地面為環(huán)氧樹脂材料，具有無縫隙、耐腐蝕、平整、容易清洗的特征。 地面地腳線用陰角鋁材裝飾，美觀且嚴(yán)密性好。整個實(shí)驗(yàn)室通過科學(xué)設(shè)計，精心施工，使實(shí) 驗(yàn)室內(nèi)形成堅固、無縫、平滑、美觀、不反光、不積塵、不生銹、防潮、抗菌、性能優(yōu)良的 無菌表面和內(nèi)殼。.設(shè)備和藥品的要求食品微生物檢驗(yàn)室設(shè)備應(yīng)配有：溫控設(shè)備（培養(yǎng)箱、冰箱、冰凍機(jī)、烤箱

13、）、測具（溫度計、計時器、天平、酸度計、菌落計數(shù)器等）、定容設(shè)備（吸管、自動分液器、移液管等）、 除菌和滅菌設(shè)備（超凈工作臺或生物安全柜、高壓滅菌鍋）、其他設(shè)備（顯微鏡、離心機(jī)、均質(zhì)器、振蕩器、生化培養(yǎng)箱、厭氧培養(yǎng)設(shè)備等）。儀器安放合理，貴重儀器有專人保管， 建立儀器檔案，并備有操作方法，保養(yǎng)、維修、 說明書及使用登記本，做到經(jīng)常維護(hù)、保養(yǎng)和檢查，精密儀器不得隨意移動，若有損壞需要 修理時，不得私自拆動、應(yīng)寫出報告、通知管理人員，經(jīng)科室負(fù)責(zé)人同意填報修理申請、送 儀器維修部門。設(shè)備應(yīng)達(dá)到規(guī)定的性能參數(shù)，并符合相關(guān)檢測指標(biāo)。無論何時，只要發(fā)現(xiàn)設(shè)備故障,應(yīng)立即停止使用，必要時檢查對以前結(jié)果的影響。

14、應(yīng)根據(jù)使用頻率在特定時間間隔內(nèi)進(jìn)行維護(hù)和性能驗(yàn)證，并保存相關(guān)記錄，以確保其處于良好工作狀態(tài)。各種儀器（冰箱、溫箱除外），使用完畢后要立即切斷電源，旋鈕復(fù)原歸位，待仔細(xì)檢查后，方可離去，同時蓋好有儀器套罩的設(shè)備。依據(jù)食品檢測任務(wù)，制定各種藥品試劑采購計劃，寫清品名、單位、數(shù)量、純度、包裝規(guī)格，出廠日期等，領(lǐng)回后建立文檔，專人管理，每半年做出消耗表，并清點(diǎn)剩余藥品。藥品試劑陳列整齊，放置有序、避光、防潮、通風(fēng)干燥，瓶簽完整，劇毒藥品加鎖存放、易燃、揮發(fā)、腐蝕品種單獨(dú)貯存。稱取藥品試劑應(yīng)按操作規(guī)范進(jìn)行，用后蓋好，必要時 可封口或黑紙包裹。不使用過期或變質(zhì)藥品。二、微生物檢驗(yàn)室的生物安全與質(zhì)量控制微生

15、物檢驗(yàn)室的生物安全致病微生物是影響食品安全各要素中危害最大的一類，食品微生物污染是涉及面最廣、影響最大、問題最多的一類污染， 而且這種現(xiàn)象還將持續(xù)下去。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO猜計，全世界每分鐘就會有 10名兒童死于腹瀉病，再加上其他的食源性疾病，如霍亂、傷寒等，在全世界范圍內(nèi)受到食源性疾病侵害的人數(shù)更令人震驚。食品微生物檢測是食品安全監(jiān)控的重要組成部分，但由于微生物的特殊生物學(xué)特性，對致病性微生物的檢測必須在特定的食品微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行， 食品微生物實(shí)驗(yàn)室的規(guī)劃建設(shè)和配套環(huán)境設(shè)施的科學(xué)性和合理性，不僅關(guān)系到食品微生物的檢測質(zhì)量，而且關(guān)系到個人安全和環(huán)境安全。近年來隨著中華人民共和國國務(wù)院令第4

16、24號病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理條例的頒布，以及 GB19489-2004實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求、GB 50346-2004生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范等有關(guān)生物實(shí)驗(yàn)室的相關(guān)管理條例和強(qiáng)制性技術(shù)規(guī)范的出臺，在多個方面規(guī)范了生物安全實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計、建造、檢測、驗(yàn)收的整個過程，從根本上改變了我國缺乏食品微生物實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范和評價體系以及食品微生物實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一管理規(guī)范的現(xiàn)狀，將把涉及生物安全的實(shí)驗(yàn)室建設(shè)和管理納入標(biāo)準(zhǔn)化、法制化、實(shí)用性和安全性軌道。依據(jù)實(shí)驗(yàn)室所處理感染性食品致病微生物的生物危險程度，可把食品微生物實(shí)驗(yàn)室分為與致病微生物的生物危險程度相對應(yīng)的食品微生物實(shí)驗(yàn)室，其中一級對生物安全隔離的要

17、求最低，四級最高。不同級別食品微生物實(shí)驗(yàn)室的規(guī)劃建設(shè)和配套環(huán)境設(shè)施不同。食品微生物實(shí)驗(yàn)室所檢測微生物的生物危害等級大部分為生物安全二級，少數(shù)為生物安全三級和四級（比如霍亂弧菌）。微生物實(shí)驗(yàn)室是一個獨(dú)特的工作環(huán)境，工作人員受到意外感染的報道卻并不鮮見，其原因主要是對潛在的生物危害認(rèn)識不足、防范意識不強(qiáng)、不合理的物理隔離和防護(hù)、人為過錯和不規(guī)范的檢驗(yàn)操作。除此之外，隨著應(yīng)用微生物產(chǎn)業(yè)規(guī)模的日益擴(kuò)大，一些原先被認(rèn)為是非病原性且有工業(yè)價值的微生物的抱子和有關(guān)產(chǎn)物所散發(fā)的氣溶膠，也會使產(chǎn)業(yè)人員發(fā)生不同程度的過敏癥狀，甚至影響到周圍環(huán)境，造成難以挽回的損失。微生物實(shí)驗(yàn)室生物危害的 受害者不局限于實(shí)驗(yàn)者本人

18、，同時還有其周圍同事， 另外被感染者本人也很有可能是一種生物危害，作為帶菌者，也可能污染其他菌株、生物劑，同時又是生物危害的傳播者，這種現(xiàn) 象必須引起高度重視。因此說微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的生物危害值得高度警惕，其危害程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過一般公害。為了消除實(shí)驗(yàn)室生物安全隱患，應(yīng)注意做到以下五個方面的安全措施。1.通風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)必須安裝獨(dú)立的通風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)以控制實(shí)驗(yàn)室氣流方向和壓強(qiáng)梯度。該系統(tǒng)必須確保實(shí)驗(yàn)室使用時， 室內(nèi)空氣除通過排風(fēng)管道經(jīng)高效過濾排出外，不得從實(shí)驗(yàn)室的其他部位或縫隙排向室外；同時確保實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的氣流由清潔”區(qū)域流向 污染”區(qū)域。通風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)為直排系統(tǒng)，不得采用部分回風(fēng)系統(tǒng)。環(huán)境參數(shù)：相對于實(shí)

19、驗(yàn)室外部，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部保持負(fù)壓。實(shí)驗(yàn)間的相對壓強(qiáng)以-30Pa-40Pa為宜，緩沖間的相對壓強(qiáng)以 -15Pa-20Pa為宜。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的溫、濕度以控制在人體舒 適范圍為宜，或根據(jù)工藝要求而定。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的空氣潔凈度以GB 50073-2001潔凈廠房設(shè)計規(guī)范中所定義的七級至八級為宜。實(shí)驗(yàn)室人工照明應(yīng)均勻，照度不低于500lx。為確保實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的氣流由清潔”區(qū)域流向 污染”區(qū)域，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不應(yīng)使用雙側(cè)均勻分布的排風(fēng)口布局。不應(yīng)采用上送上排的通風(fēng)設(shè)計。由生物安全柜排出的經(jīng)內(nèi)部高效過濾的空氣可通過系統(tǒng)的排風(fēng)管直接排至大氣，也可送入建筑物的排風(fēng)系統(tǒng)。應(yīng)確保生物安全柜與排風(fēng)系統(tǒng)的壓力平衡。實(shí)驗(yàn)室的進(jìn)風(fēng)應(yīng)經(jīng)初、中、高

20、效三級過濾。實(shí)驗(yàn)室的排風(fēng)必須經(jīng)高效過濾或加其他方法處理后，以不低于12m/s的速度直接向空中排放。該排風(fēng)口應(yīng)遠(yuǎn)離系統(tǒng)進(jìn)風(fēng)口位置。 處理后的排風(fēng)也可排入建筑物的排風(fēng)管道， 但不 得被送回到該建筑物的任何部位。進(jìn)風(fēng)和排風(fēng)高效過濾器必須安裝在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)設(shè)有圍護(hù)結(jié)構(gòu)的風(fēng)口處，有助于避免污染風(fēng)管。必要時可完全關(guān)實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng)系統(tǒng)中， 在進(jìn)風(fēng)和排風(fēng)總管處應(yīng)安裝氣密型調(diào)節(jié)閥門, 閉，以進(jìn)行室內(nèi)化學(xué)熏蒸消毒。實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng)系統(tǒng)中所使用的所有部件必須為氣密型，不能使用帶有木框架的高效過濾器。（10）應(yīng)安裝風(fēng)機(jī)啟動自動聯(lián)鎖裝置，確保實(shí)驗(yàn)室啟動時先開排風(fēng)機(jī)后開送風(fēng)機(jī)。關(guān)閉時先關(guān)送風(fēng)機(jī)后關(guān)排風(fēng)機(jī)。.安全裝置及特殊設(shè)備在主實(shí)

21、驗(yàn)室內(nèi)必須設(shè)置n級或出級生物安全柜。連續(xù)流離心機(jī)或其他可能產(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備應(yīng)置于物理抑制設(shè)備之中，該裝置應(yīng)能將其可能產(chǎn)生的氣溶膠經(jīng)高效過濾器過濾后排出。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)設(shè)置的所有其他排風(fēng)裝置（通風(fēng)櫥、排氣罩等）的排風(fēng)均必須經(jīng)過高效過濾器過濾后方可排出，其室內(nèi)布置應(yīng)有利于形成氣 流由 清潔”區(qū)域流向 污染”區(qū)域的氣流流型。實(shí)驗(yàn)室中必須設(shè)置不產(chǎn)生蒸汽的高壓滅菌鍋或其他消毒裝置。實(shí)驗(yàn)室與外部應(yīng)設(shè)置傳遞窗。 傳遞窗雙門不得同時打開， 傳遞窗內(nèi)應(yīng)設(shè)物理消毒裝置。感染性材料必須放置在密閉容器中方可通過傳遞窗傳遞。必須在實(shí)驗(yàn)室入口處的顯著位置設(shè)置壓力顯示報警裝置，顯示實(shí)驗(yàn)室和緩沖間的負(fù)壓狀況。當(dāng)負(fù)壓指示偏離預(yù)設(shè)區(qū)

22、間時， 必須能通過聲、光等手段向?qū)嶒?yàn)室內(nèi)外的人員發(fā)出警報。 也可在該裝置上增加送、排風(fēng)高效過濾器氣流阻力的顯示。實(shí)驗(yàn)室啟動工作期間不能停電。應(yīng)采用雙路供電電源。 如難以實(shí)現(xiàn)，則應(yīng)安裝停電時可自動切換的后備電源或不間斷電源，對關(guān)鍵設(shè)備（比如生物安全柜、通風(fēng)櫥、排氣罩以及照明等）供電。可在緩沖間設(shè)有洗手池： 洗手池的供水截門最好設(shè)有自動開關(guān)。洗手池如設(shè)在主實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，下水道必須與建筑物的下水管線分離，且有明顯標(biāo)志。下水必須經(jīng)過消毒處理。洗手 池僅供洗手用，不得向內(nèi)傾倒任何感染性材料。供水管必須安裝防回流裝置。不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)安設(shè)地漏。.其他室內(nèi)安全措施實(shí)驗(yàn)臺表面應(yīng)不漏水，耐腐蝕、耐熱。實(shí)驗(yàn)室中的家具應(yīng)

23、牢固。為便于清潔，各種家具和設(shè)備之間應(yīng)保持一定的間隙。應(yīng)有專門放置生物廢棄物容器的臺（架）。家具和設(shè)備的邊角和突出部位應(yīng)光滑、無毛刺，以圓弧形為宜。所需真空泵應(yīng)放在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。真空管線必須裝置在線高效過濾器。壓縮空氣等鋼瓶應(yīng)放在實(shí)驗(yàn)室外。穿過圍護(hù)結(jié)構(gòu)的管道與圍護(hù)結(jié)構(gòu)之間必須用不收縮的密封材料加以密封。氣體管線必須裝置在線高效過濾器和防回流裝置O實(shí)驗(yàn)室內(nèi)必須設(shè)置通訊系統(tǒng)， 便于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的實(shí)驗(yàn)記錄等資料通過傳真機(jī)發(fā)送至實(shí)驗(yàn)室外。.廢棄物的處理廢料銷毀：所有包含微生物及病毒的培養(yǎng)基為了防止泄漏和擴(kuò)散，必須放在生物醫(yī)療廢物盒內(nèi)經(jīng)過去污染、滅菌后才能丟棄；所有污染的非可燃的廢物(玻璃或者銳利器具)在 丟棄

24、前必須放在生物醫(yī)療廢物盒內(nèi)；所有的液體廢物在排入干凈的下水道前必須經(jīng)過消毒處理；碎玻璃必須放在紙板容器或其他的防止穿透的容器內(nèi)；其他的銳利器具、 所有的針頭及注射器組合要放在抗穿透的容器內(nèi)丟棄， 針頭不能折彎、摘下或者打碎，銳利器具的容器應(yīng) 放在生物醫(yī)療廢物盒中。廢氣處理：少量有毒氣體可以通過排風(fēng)設(shè)備排出室外，被空氣稀釋。毒氣量大時，必須處理后再排出。如氧化氮、二氧化硫等酸性氣體用堿液吸收，可燃性有機(jī)廢液可在燃燒爐中通氧氣完全燃燒。含酚、鼠、汞、銘、神的廢液處理：低濃度含酚廢液：加次氯酸鈉或漂白粉使酚氧化為二氧化碳和水；高濃度含酚廢水：用乙酸丁酯萃取，重蒸儲回收酚；含氧化物的廢液：用氫氧化鈉溶

25、液調(diào)至 pH10以上，再加入3%的高鎰酸鉀使 CN-氧化分解；CN-含量高的廢液：用堿性氯化法處理，即在 pH10以上加入次氯酸鈉，使 CN-氧化分解；含汞鹽的廢液：先調(diào)至pH810,加入過量硫化鈉，使其生成硫化汞沉淀，再加入共沉淀劑硫酸亞鐵，生成的硫化鐵將水中的懸浮物硫化汞微粒吸附而共沉淀，排出清液，殘渣用焙燒法回收汞、或再制成汞鹽；銘酸洗液失效：濃縮冷卻后加高鎰酸鉀粉末氧化， 用砂芯漏斗濾去二氧化 鎰后即可重新使用。廢洗液用廢鐵屑還原殘留的Cr (IV)到Cr (出)，再用廢堿中和成低毒的Cr(OH)3沉淀；含神廢液：加入氧化鈣，調(diào)節(jié)pH為8,生成神酸鈣和亞神酸鈣沉淀?；蛘{(diào)節(jié)pH10以上，

26、加入硫化鈉與神反應(yīng)， 生成難熔、低毒的硫化物沉淀； 含鉛、鎘廢液： 用消石灰將pH調(diào)至810,使Pb2+和Cd2+生成Pb(OH)2和Cd(OH)2沉淀，加入硫酸亞鐵 作為共沉淀劑。.意外事故的處置在操作及保存二類、三類及四類危害微生物的實(shí)驗(yàn)室，一份詳細(xì)的處理意外事故的方案是必需的。緊急情況下的程序要與所有的人員溝通。實(shí)驗(yàn)室管理層、上一級安全管理層、單 位護(hù)衛(wèi)、醫(yī)院及救護(hù)電話都應(yīng)張貼在所有的電話附近。應(yīng)配備醫(yī)療箱、擔(dān)架及滅火器。如果在生物安全柜內(nèi)發(fā)生溢出事件，為了防止微生物外溢，應(yīng)立即啟動去污染程序： 用有效的消毒劑擦洗墻壁、工作臺面及設(shè)備；用消毒劑充滿工作臺面、排水盤、盆子，并 停留20mi

27、n;用海綿將多余的消毒劑擦去。食品微生物檢測實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制.術(shù)語和定義食品微生物檢測實(shí)驗(yàn)室(food microbiological laboratory),它是指以質(zhì)量管理、衛(wèi)生以 及監(jiān)控HACC時劃的有效性進(jìn)行評價為目的，進(jìn)行檢測、鑒定或描述食品中致病微生物存在與否的實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室可以提供其檢查范圍內(nèi)的咨詢性和技術(shù)性服務(wù)，包括結(jié)果解釋和為進(jìn)一步適當(dāng)檢查提供建議以及相應(yīng)的措施。在食品微生物檢測質(zhì)量方面，我們會用到一些專業(yè)術(shù)語，這里將常見的術(shù)語列出來。校準(zhǔn)(calibration )：在特定條件下，采取一系列步驟建立測量儀器、測量系統(tǒng)，標(biāo)準(zhǔn) 物質(zhì)或參考菌株表現(xiàn)值與標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的對應(yīng)數(shù)值之間的關(guān)系。

28、標(biāo)準(zhǔn)參考菌株(certified reference material):具有認(rèn)證的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其中一個或更多 特征值有一個被認(rèn)證的程序，這個程序建立了準(zhǔn)確表達(dá)物質(zhì)特性的可追溯性，同時每個被鑒定值都有一個一定置信區(qū)間的不確定度。測定限度(limit of determination)：主要用于定量的微生物檢測，是指在所用方法的 試驗(yàn)條件下所測定的在一個限定變化范圍內(nèi)估算的微生物最低數(shù)量。檢測限度(limit of detection )：用于定性的微生物檢測，是指在數(shù)量上無法準(zhǔn)確統(tǒng)計 的可檢測的最低微生物數(shù)量。陰性偏差(negative deviation )：在參考方法得出一個陽性結(jié)果時，而另

29、一個方法卻得 出陰性結(jié)果。當(dāng)真實(shí)結(jié)果被證明是陽性時，這種偏離便是一個假陰性。陽性偏差(positive deviation )：在參考方法得出一個陰性結(jié)果時，而另一個方法卻得 出陽性結(jié)果。當(dāng)真實(shí)結(jié)果被證明是陰性時，這種偏差便是一個假陽性。參考培養(yǎng)物(reference cultures)：參考菌株、參考原菌株和工作菌株的統(tǒng)稱。參考方法(reference method)：為了測定與預(yù)期在準(zhǔn)確度和精確性上同量的一個或多 個特征值的方法，即清晰確切的描述必要條件和程序的精確的調(diào)查方法。因此通常用于驗(yàn)證同一測定的其它方法的準(zhǔn)確度，尤其是描述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。一般是國內(nèi)或國際標(biāo)準(zhǔn)。參考原株(reference

30、 stocks)：由實(shí)驗(yàn)室獲得或由供應(yīng)商提供的參考原株在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過 一代轉(zhuǎn)接后的同種菌株。(10)重復(fù)性(repeatability)：在同一實(shí)驗(yàn)室且在相同的測定條件下，用相同方法的連續(xù)測 定結(jié)果的接近程度。(11)再現(xiàn)性(reproducibility ):在不同實(shí)驗(yàn)室變化的測定條件下進(jìn)行的相同方法的測定結(jié) 果的接近程度。敏感性(sensitivity )：在假定檢查中正確分配的陽性培養(yǎng)物或菌落總數(shù)的份數(shù)。特異性(specificity ):在假定檢查中正確分配的陰性培養(yǎng)或菌落總數(shù)的份數(shù)。(14)工作菌株(working culture ):由參考原株轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。(15)原始樣品(

31、primary sample ):從一個系統(tǒng)中最初取出的一個或多個部分，準(zhǔn)備送檢或 實(shí)驗(yàn)室收到并準(zhǔn)備進(jìn)行檢驗(yàn)的樣品。(16)委托實(shí)驗(yàn)室(referral laboratory ):接受樣品進(jìn)行補(bǔ)充或確認(rèn)檢驗(yàn)程序和報告的外部實(shí) 驗(yàn)室。.質(zhì)量管理體系實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立、實(shí)施并保持與其工作范圍相適應(yīng)的質(zhì)量體系，并將其政策、方針、過程、計劃、程序和指導(dǎo)書等制定成文件，以確保檢測質(zhì)量，還要把體系文件傳達(dá)至所有相關(guān)人員，讓他們理解并執(zhí)行。質(zhì)量管理體系不僅包括內(nèi)部質(zhì)量控制和參加有組織的實(shí)驗(yàn)室間的比對活 動(如外部質(zhì)量評審計劃)，還要在質(zhì)量手冊中予以規(guī)定質(zhì)量管理體系的方針和目標(biāo)，總體 目標(biāo)應(yīng)在質(zhì)量方針聲明中予以文件

32、化，該方針應(yīng)簡潔易懂，并便于有關(guān)人員及時獲得。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊的目錄可包括以下內(nèi)容：引言；實(shí)驗(yàn)室概述，其法律地位、資源以及 主要職責(zé)；質(zhì)量方針和質(zhì)量目標(biāo)；人員的教育與培訓(xùn)；質(zhì)量體系；文件控制；合同評審；設(shè) 施和環(huán)境條件；儀器，試劑和/或相關(guān)消耗品的管理；檢驗(yàn)程序的驗(yàn)證；安全規(guī)范(見GB19489-2004 );研究和開發(fā)(如適用)；檢驗(yàn)程序列表；申請程序，原始樣品，實(shí)驗(yàn)室樣 品的采集和處理；內(nèi)部審核；質(zhì)量控制(包括實(shí)驗(yàn)室間比對)；實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)；對投訴的補(bǔ)救措施和處理；與委托實(shí)驗(yàn)室和供應(yīng)商的交流及相關(guān)活動；結(jié)果的質(zhì)量保證；結(jié)果的報告。文件控制實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立并保持有關(guān)程序，對構(gòu)成質(zhì)量文件的所有文件和

33、信息(包括政策聲明、教科書、程序、說明、校準(zhǔn)表及其來源、圖表、海報、公告、備忘錄、軟件、圖片、計劃書和 外源性文件如法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)或檢驗(yàn)程序等)進(jìn)行控制。應(yīng)遵循國家、地區(qū)和當(dāng)?shù)赜嘘P(guān)文件保留 的規(guī)定，將每一份受控的文件制作一份以適當(dāng)?shù)募垙埢蚍羌垙埫浇閭浞荽鏅n以備日后參考， 并由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人規(guī)定其保存期限。同時需要建立總目錄或相應(yīng)的文件控制程序，以標(biāo)明現(xiàn)行修改狀態(tài)和質(zhì)量體系內(nèi)的文件發(fā)布情況，并應(yīng)隨時可得，以避免使用失效。所有與質(zhì)量管理體系有關(guān)的文件均應(yīng)能唯一識別，包括標(biāo)題、版本或當(dāng)前版本的修訂日期或修訂號，以及發(fā)行機(jī)構(gòu)、來源的標(biāo)識。質(zhì)量記錄實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立并實(shí)施一套對質(zhì)量及技術(shù)記錄進(jìn)行識別、采集、索引、查

34、取、存放、維護(hù) 以及安全處理的程序。質(zhì)量記錄需要包括內(nèi)部審核和管理評審、糾正和預(yù)防措施記錄。內(nèi)部審核應(yīng)根據(jù)質(zhì)量管理體系的規(guī)定對體系的所有管理及技術(shù)要素進(jìn)行定期的內(nèi)部審核，以證實(shí)體系運(yùn)作持續(xù)符合質(zhì)量管理體系的要求。內(nèi)部審核應(yīng)包含體系的所有要素，尤其是對食品微生物檢測有重要影響的方面。 要明確內(nèi)部審核的程序并形成文件，其中包括審核類型、頻次、方法學(xué)以及所需相關(guān)文件。如果發(fā)現(xiàn)有不足或有待改進(jìn)之處，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取適當(dāng)?shù)募m正或預(yù)防措施，并將這些措施形成文件，經(jīng)討論后在約定的時間內(nèi)實(shí)施。正常情況下，應(yīng)每12個月對質(zhì)量體系的主要要素進(jìn)行一次內(nèi)部審核。此外，內(nèi)部審核的結(jié)果還應(yīng)該提交實(shí)驗(yàn)室管理層進(jìn)行評審。管理評審

35、實(shí)驗(yàn)室管理層應(yīng)對實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系及實(shí)驗(yàn)室全部的食品微生物檢測活動進(jìn)行評審， 包括檢測及咨詢工作，以確保在食品微生物檢測工作中保持穩(wěn)定的服務(wù)質(zhì)量，并及時進(jìn)行必要的變動或改進(jìn)。 評審的結(jié)果應(yīng)列入一個含有目標(biāo)、目的和措施的計劃中。 管理評審的典型周期為每項12個月一次。在建立質(zhì)量體系期間， 建議評審間隔應(yīng)盡量短些，以保證在發(fā)現(xiàn)該質(zhì)量管理體系或其它活動有需要改進(jìn)之處時，及早采取應(yīng)對措施，至少每年進(jìn)行一次內(nèi)審。管理評審結(jié)果以及應(yīng)采取的措施均應(yīng)記錄歸檔，同時應(yīng)將評審結(jié)果及評審決定向?qū)嶒?yàn)室人員通報。實(shí)驗(yàn)室管理層應(yīng)確保將這些措施在適當(dāng)?shù)募s定時間內(nèi)公布。所有記錄均應(yīng)清晰明確，便于檢索。應(yīng)符合國家、地區(qū)或當(dāng)?shù)胤?/p>

36、規(guī)的要求，提供一個適 宜的環(huán)境，以適當(dāng)?shù)男问竭M(jìn)行存放，保證安全和保密，避免損毀、破壞、丟失、被人盜用或 未授權(quán)的接觸，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有程序保護(hù)和備份以電子形式儲存的記錄，以防止未經(jīng)授權(quán)的侵入和修改。糾正措施糾正措施程序應(yīng)包括一個抽查過程，以確定問題產(chǎn)生的根本原因或潛在原因。某些情況下會發(fā)展為預(yù)防措施。糾正措施應(yīng)與問題的嚴(yán)重性及其帶來的風(fēng)險的大小相適應(yīng)。調(diào)查問題后采取了相應(yīng)糾正措施， 如果需要對操作程序進(jìn)行改動時，實(shí)驗(yàn)室管理層應(yīng)將這些改動形成文件并執(zhí)行。實(shí)驗(yàn)室管理層應(yīng)負(fù)責(zé)監(jiān)控每一糾正措施所產(chǎn)生的結(jié)果，以確定這些措施是否有效地解決所識別出的問題。如果識別出的不符合項或偏離對實(shí)驗(yàn)室與其本身的相關(guān)政策、程序

37、或質(zhì)量管理體系的符合性產(chǎn)生懷疑時，則實(shí)驗(yàn)室管理人員應(yīng)保證依據(jù)內(nèi)部審核的規(guī)定對相應(yīng)方面的 活動進(jìn)行審核。糾正措施的結(jié)果應(yīng)提交實(shí)驗(yàn)室管理評審。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該對糾正措施進(jìn)行監(jiān)控，以確保所采取的糾正措施是有效的。預(yù)防措施無論是技術(shù)方面的還是相關(guān)的質(zhì)量預(yù)防措施應(yīng)確定不符合項的潛在來源和所需的改進(jìn), 體系方面。如果需要采取預(yù)防措施，還應(yīng)制定、執(zhí)行和監(jiān)控這些措施計劃。預(yù)防措施程序要包括啟動措施和應(yīng)用控制，以確保其有效性。除對操作程序進(jìn)行評審之外，預(yù)防措施還可能涉及數(shù)據(jù)分析，包括趨勢和風(fēng)險分析以及外部質(zhì)量保證。這里需要注意的是，預(yù)防措施是事先主動識別改進(jìn)可能性的過程，而不是對已發(fā)現(xiàn)的問題或投訴的反應(yīng)。技術(shù)要求試劑

38、實(shí)驗(yàn)室有對試劑進(jìn)行檢查、 接受或拒收和貯存的程序和標(biāo)準(zhǔn)，保證涉及到的試劑質(zhì)量適用于檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)該在保存期限內(nèi)，使用可以溯源至認(rèn)可的國家或國際的陰性和陽性標(biāo)準(zhǔn)菌株，檢查對食品微生物檢驗(yàn)起決定性作用的每一批試劑的適用性，在確定這些物品達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格，或已達(dá)到相應(yīng)的規(guī)程中所規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)之前，不得使用，并記錄歸檔。應(yīng)建立一套供貨清單控制系統(tǒng)， 該系統(tǒng)中應(yīng)該包括全部相關(guān)試劑、 質(zhì)量控制材料以及校 準(zhǔn)品的批號、實(shí)驗(yàn)室接收日期以及這些材料投入使用的日期。 所有這些質(zhì)量記錄應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室 管理評審中提供。實(shí)驗(yàn)室要確保所有的試劑（包括儲存溶液）、培養(yǎng)基、稀釋劑和其它的懸浮液都貼上標(biāo)簽，標(biāo)明其適用性、特性、濃度、儲

39、存條件、準(zhǔn)備日期、有效期和（或）推薦的儲存時期。 負(fù)責(zé)微生物檢驗(yàn)準(zhǔn)備的試驗(yàn)人員可以從記錄中確認(rèn)。培養(yǎng)基檢查實(shí)驗(yàn)室內(nèi)制備的培養(yǎng)基、稀釋劑和其它懸浮液的性質(zhì)是否合適，原料（包括商業(yè)脫水配料和單獨(dú)配料）是否儲存在合適的條件下，例如低溫、干燥和避光等。所有的容器，尤 其是那些用于培養(yǎng)基脫水的容器，需高度密封。結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基不能使用。 除非實(shí)驗(yàn)方法有特殊要求， 試驗(yàn)用水需要經(jīng)蒸儲、 去離子的或反轉(zhuǎn)滲透處理。同時要確定和驗(yàn)證合適的儲存條件下預(yù)制培養(yǎng)基的保存時間。即用型培養(yǎng)基在使用前需驗(yàn)證所有準(zhǔn)備使用的或部分完成的培養(yǎng)基（包括稀釋劑和其它懸浮液）的有效性，應(yīng)估算目標(biāo)微生物的復(fù)蘇或存活能力，或

40、全面定量評估對非目標(biāo)微生物的抑制程度；使用客觀的標(biāo)準(zhǔn)對其品質(zhì)（例如物理和生化性質(zhì)）進(jìn)行評審。作為培養(yǎng)基確認(rèn)的一部分，要求實(shí)驗(yàn)室使用人員充分了解制造商所提供的產(chǎn)品質(zhì)量說明 書，鑒定每一批培養(yǎng)基時，需要證明所接收的每批培養(yǎng)基滿足質(zhì)量要求，制造商應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)室人員能及時接到其關(guān)于質(zhì)量規(guī)格的任何改變的通知。如果培養(yǎng)基制造商被權(quán)威質(zhì)量系統(tǒng)認(rèn)可，則實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)詳細(xì)說明書對其產(chǎn)品有效性的符合度進(jìn)行檢查。在其他情況下，必須對接收的培養(yǎng)基進(jìn)行足夠的檢查。設(shè)備維護(hù)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)備的維護(hù)應(yīng)根據(jù)使用頻率定期進(jìn)行。保存具體記錄。以下儀器設(shè)備需要清潔、維修、損壞檢查、常規(guī)檢查甚至滅菌加以維護(hù)：常規(guī)保養(yǎng)的設(shè)備：濾器、玻璃和塑料

41、容器（瓶子、試管）、玻璃或塑料制成的帶蓋培養(yǎng)皿、采樣工具、接種針或接種環(huán);培養(yǎng)箱、水浴鍋和干燥箱的維護(hù)應(yīng)確定并記錄培養(yǎng)箱、水浴鍋、干熱滅菌箱及保溫室的溫度的穩(wěn)定性、溫度分布的均勻性和達(dá)到平衡狀態(tài)時所需時間，尤其要注意其是否在正常使用（如多個帶蓋培養(yǎng)皿之間的位置、空間、高度）。每次經(jīng)過修理和校正后，都應(yīng)檢查和記錄最初驗(yàn)證設(shè)備時所記錄的各參 數(shù)的穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)監(jiān)控這類設(shè)備的運(yùn)行溫度，并保存記錄。高壓滅菌鍋，包括培養(yǎng)基制備儀的維護(hù)下面大致列出了有關(guān)校準(zhǔn)、確定和監(jiān)控運(yùn)行的一般性方法。然而，高壓滅菌鍋所進(jìn)行的數(shù)量檢驗(yàn)及相應(yīng)項目，如能適應(yīng)高壓滅菌鍋的內(nèi)外變化，這也就提供了同等的質(zhì)量保證。高壓滅菌鍋必須具

42、備指定的時間和溫度允許范圍。壓力儀不能只適于一個壓力量程。用來控制和監(jiān)督工作循環(huán)的感應(yīng)器需要進(jìn)行校準(zhǔn)并對其計時器進(jìn)行性能測試；最初的測定包括實(shí)際應(yīng)用中每個工作循環(huán)和每一種裝載狀態(tài)時的性能研究（空間熱分布測試）。在經(jīng)過大型維修或校正（如更換溫度調(diào)節(jié)的探測儀或程序器，調(diào)整安裝位置及工作循環(huán)）后，或?qū)ε囵B(yǎng) 基的質(zhì)量控制檢驗(yàn)結(jié)果表明需要時，應(yīng)當(dāng)重復(fù)前述性能測試過程。必須安裝足夠的溫度感應(yīng)器（如在充滿水或培養(yǎng)基的容器中）以指示不同位置的不同溫度。至于培養(yǎng)基制備儀，一般 認(rèn)為安裝使用兩個感應(yīng)器 （一個靠近控制探測儀， 另一個位于遠(yuǎn)離控制探測儀處） 是適當(dāng)?shù)模?除此之外，沒有更加合適的方法。應(yīng)確認(rèn)和考慮溫度

43、上升和下降的適宜性及滅菌時間。在確認(rèn)和重新確認(rèn)的過程中， 應(yīng)提供基于加熱分布圖的清晰明了的操作說明。制定接受/拒絕的標(biāo)準(zhǔn)和高壓滅菌鍋的使用記錄，包括每個循環(huán)的溫度和時間，可以通過下列措施之 一進(jìn)行監(jiān)控：應(yīng)用熱電偶和記錄儀打印輸出圖表；直接觀察最高的溫度值和當(dāng)時的時間。除直接監(jiān)控高壓滅菌鍋的溫度外，還應(yīng)使用化學(xué)或生物指示劑檢查每個滅菌和消毒循環(huán)的效力。高壓滅菌鍋的記錄帶和指示條帶只能說明一項工作已經(jīng)進(jìn)行，而不能證明完成了一個可以接受的循環(huán)。測定體積的設(shè)備：吸液管、自動分液器、移液管等；在微生物實(shí)驗(yàn)室中經(jīng)常會用到測定體積白設(shè)備，如自動分液器，分液器/稀釋器，機(jī)械性的手動移液管和多功能移液管等。實(shí)驗(yàn)

44、室應(yīng)該對測定體積的設(shè)備進(jìn)行最初的確證，之后定期檢查以保證儀器按要求正常使用。對于具有一定性能范圍的玻璃器皿，確證工作就不是必須的。應(yīng)檢查儀器設(shè)備的指定體積的準(zhǔn)確度而不是固定體積（如在體積可變設(shè)備的不同設(shè) 置），也應(yīng)測定重復(fù)使用的精確度。對于單獨(dú)使用的多功能體積測定儀器，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)要求供應(yīng)商提供一份相應(yīng)的質(zhì)量認(rèn)可系統(tǒng)。經(jīng)過初步的實(shí)用性確認(rèn)后，建議隨時對其進(jìn)行準(zhǔn)確度檢查。如果公司無法提供質(zhì)量認(rèn)可系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對設(shè)備的適用性進(jìn)行檢驗(yàn)。測量設(shè)備：溫度計、計時器、天平、酸度計、菌落計數(shù)器等。溫度直接影響分析結(jié)果或?qū)υO(shè)備的正確性能來說是至關(guān)重要的，如安裝在培養(yǎng)箱和高壓滅菌鍋上的液體玻璃溫度計、熱電偶適應(yīng)器和

45、鉗電阻溫度計。如需校準(zhǔn)設(shè)備，則應(yīng)遵循國家或國際有關(guān)的溫度標(biāo)準(zhǔn)，精確度在允許范圍內(nèi)， 被證明符合國家或國際生產(chǎn)規(guī)定者才可以工作，例如儲藏用電冰箱、制冰機(jī)、培養(yǎng)箱及水浴鍋這類精確性可以在允許的溫度范圍內(nèi)變動 的設(shè)備。必須對此類設(shè)備進(jìn)行性能測試。測重儀和天平應(yīng)按國家規(guī)定及其使用目的在一定時間內(nèi)進(jìn)行校準(zhǔn)。其它設(shè)備定期檢驗(yàn)傳導(dǎo)計、氧氣表、pH計和其它類似儀器的性能，或在使用前對其進(jìn)行性能檢驗(yàn)。在合適的條件下儲存檢驗(yàn)用緩沖液，并且標(biāo)記有效期。如果濕度對于檢驗(yàn)結(jié)果很重要， 則要根據(jù)國內(nèi)或國際標(biāo)準(zhǔn)對濕度計進(jìn)行校準(zhǔn)。定時器，包括高壓消毒鍋的定時器，須使用一個已經(jīng)過校準(zhǔn)的定時器或國內(nèi)時間信號來進(jìn)行確證。若檢驗(yàn)步驟

46、中使用離心機(jī)，應(yīng)該評估離心力是否對檢驗(yàn)有決定性作用，如果答案是肯定的，則需要校準(zhǔn)離心機(jī)。第二節(jié)無菌室的建設(shè)一、無菌室的結(jié)構(gòu)與要求無菌室的結(jié)構(gòu)無菌室一般為45平方米、高2.5米的獨(dú)立小房間（與外間隔離），內(nèi)部裝修應(yīng)平整、 光滑，無凹凸不平或棱角等，四壁及屋頂應(yīng)用不滲水的材質(zhì)，以便于擦洗及殺菌。無菌室專 辟于微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，可以用板材和玻璃建造， 其周圍需要設(shè)有緩沖走廊，走廊旁再設(shè)緩沖間。緩沖室的面積可小于無菌室，另設(shè)有小窗，以備進(jìn)入無菌間后傳遞物品。無菌室和緩沖 室進(jìn)出口應(yīng)設(shè)拉門，門與窗平齊，窗戶應(yīng)為雙層玻璃，并要密封，門縫也要封緊，兩門應(yīng)錯 開，以免空氣對流造成污染；室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空

47、氣過濾裝置，另需設(shè)有日光燈及消毒用的紫外燈，殺菌紫外燈離工作臺以1米為宜，其電源開關(guān)均應(yīng)設(shè)在室外。在獲得了無菌環(huán)境和無菌材料后，只有保持無菌狀態(tài)， 才能對某種特定的已知微生物進(jìn)行研究。所以控菌能力和控菌穩(wěn)定性是無菌室的核心驗(yàn)收指標(biāo)。業(yè)內(nèi)同行的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)為 100級潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過 1個菌落，10000級潔凈室平均不得超過 3個菌落。無菌室室內(nèi)溫度宜 控制在2024C,濕度45%60%。無菌室的使用要求無菌室應(yīng)保持清潔整齊， 工作后用消毒液拭擦工作臺面，室內(nèi)只能存放最必需的檢驗(yàn)用具如酒精燈、酒精棉、火柴、鐐子、接種針、接種環(huán)、玻璃鉛筆等。室內(nèi)檢驗(yàn)用具及桌凳 等位置保持固定，不隨便移動。

48、每隔23周左右的時間，要用 2%的石炭酸水溶液擦拭工作臺、1、窗、桌、椅及地面，然后用甲醛加熱或噴霧滅菌。30W無菌室使用前后應(yīng)將門關(guān)緊，打開紫外線，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時，需 紫外燈，距離在1.0m處，照射時間不少于 30min,使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線 下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕拭擦，除去上面灰塵和油垢，以減 少紫外線穿透的影響。無菌室的操作要求進(jìn)入無菌室前，必須于緩沖室更換消毒過的工作服、工作帽及工作鞋。操作人員還要在進(jìn)無菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球?qū)⑹植粮蓛?。進(jìn)行接種所用的吸管、 平皿及培養(yǎng)基等必須進(jìn)行消毒滅菌操作， 各種玻璃器皿、注射

49、器等，要置于高溫干燥箱中160c滅菌2ho另外打開包裝但未使用完的器皿也要消毒，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用 95%酒精點(diǎn)燃燒灼3次后使用。從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時， 吸管尖部不能觸及試管或平皿邊接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作，接種環(huán)和接種針均要經(jīng)火焰燒灼；接種細(xì)菌或樣品時，吸管從包裝中取出后要通過火焰消毒。為了避免被接種物灑落，微生物接種環(huán)的直徑應(yīng)為23mm并完全封閉，柄長度應(yīng)小于 6cm以減小抖動。使用封閉式微型電加熱器 消毒接種環(huán)，能夠避免在明火上加熱所引起的感染性物質(zhì)爆濺。最好使用不需要再進(jìn)行消毒的一次性接種環(huán)。觀察平板時不要開蓋，如果需

50、要蘸取菌落檢查時，必須靠近火焰區(qū)操作， 平皿蓋也不能大開，而是適當(dāng)開個小縫即可。進(jìn)行可疑致病菌涂片染色時，應(yīng)使用夾子夾持蓋玻片， 切勿用手直接拿蓋玻片，以免造成污染，用過的蓋玻片也應(yīng)置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗滌。吸管吸取菌液或樣品時，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取， 不能向含有感染性物質(zhì)的溶液中吹入氣體。操作應(yīng)嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)定進(jìn)行，操作中少說話，不喧嘩，以保持環(huán)境的無菌狀態(tài)。工作結(jié)束，收拾好工作臺上的樣品及器材，最后用消毒液（含有1%有效氯的溶液或 3%過氧化氫的溶液也可）擦拭工作臺。二、無菌室的熏蒸消毒微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養(yǎng)基、 被污染和接種的培養(yǎng)物等，必須經(jīng)滅菌后方能使用。

51、實(shí)驗(yàn)室中常見的化學(xué)試劑消毒法.用甲醛和高鎰酸鉀混合熏蒸：一般每平方米需40%甲醛10毫升、高鎰酸鉀8毫升，進(jìn)行熏蒸。使用時，先密閉門窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高鎰酸鉀，人員 隨之離開接種室，關(guān)緊房門，熏蒸 2030分鐘即可。. 0.1 %升汞水消毒：用 0.1 %升汞水浸過的紗布或海綿進(jìn)行指擦，或用噴霧器噴霧滅 菌，使箱內(nèi)的上下左右都沾上升汞水，手也可用升汞水消毒，并把袖子卷起來。噴霧后2030分鐘，箱內(nèi)的雜菌和霧滴一起落到箱底被殺死，內(nèi)部的空氣就變得很清潔。.紫外線照射滅菌：在無菌箱中裝一支200伏、30瓦的紫外線燈管；每次開 2030分鐘，就能達(dá)到空間殺菌的目的。照射結(jié)束后，

52、罩黑布半小時，以增強(qiáng)殺菌效果。.石炭酸噴霧：在每次接種之前，用5%石炭酸溶液噴霧，可促使空氣中的微粒和雜菌沉降，防止桌面微塵飛揚(yáng)，并有殺菌作用。.石灰揩擦：經(jīng)常用藥物熏蒸，易造成酸性環(huán)境，特別用甲醛和高鎰酸鉀熏蒸長久， 污染往往越來越嚴(yán)重，預(yù)防辦法可把各種藥品交替使用，過一段時間（約五周）用石灰擦洗 一遍。實(shí)踐證明，這樣做效果很好。干熱消毒與滅菌.焚燒法：利用點(diǎn)燃燃料或在焚燒爐內(nèi)燃燒的方法使被處理對象燃為灰燼，排出的廢 氣應(yīng)不污染環(huán)境。一般分為兩級焚燒，一級溫度約為800C ,二級溫度應(yīng)高于1100Co焚燒法主要用于有傳染性的廢棄物處理，如接觸傳染源的敷料、衣物、食物、垃圾等。.燒灼法：燒灼滅

53、菌適用于微生物實(shí)驗(yàn)室小件耐熱物品滅菌，利用酒精燈或煤氣燈火 焰殺滅微生物，如接種棒、剪刀、攝子、試管等。燒灼時，應(yīng)注意將器材放在操作者與火焰 相隔的彼方，并逐漸靠近火焰，防止污染物突然進(jìn)入火焰而發(fā)生爆沾，以致污染周圍環(huán)境。.干烤法：用電熱、電磁輻射線等依靠空氣傳導(dǎo)加熱物體，因而加熱過程較慢。干熱 主要用于耐高熱物品消毒或滅菌，如玻璃器材、金屬器械、油脂、粉劑等。一般情況下，加熱至160c2 h; 170C1 h; 180c 30 m in可達(dá)到滅菌效果。粉劑和油脂滅菌時，厚度一般不 超過1.3 cm。紙張、有機(jī)物品滅菌時，溫度不宜超過170C,且在干烤箱溫度降至 80c后，才可開啟干烤箱，以防

54、玻璃遇到冷空氣炸裂、紙張迂氧燃燒。近年來出現(xiàn)了真空電烤箱，裝 載物品后，關(guān)閉箱體，抽真空至 0. 27 KPa,然后加熱可至250C,縮短了滅菌時間，且物品 不易被氧化，延長了使用壽命。濕熱消毒與滅菌高溫、高濕的環(huán)境可以使微生物的原生質(zhì)和酶發(fā)生不可逆變性，導(dǎo)致微生物死亡。常用 的濕熱消毒滅菌方法有煮沸消毒法、流通蒸汽消毒法、巴氏消毒法及高壓蒸汽滅菌法。.煮沸消毒：煮沸消毒時，將物品浸沒于水中加熱至沸點(diǎn)，細(xì)菌繁殖體510min可被殺滅；注射器滅菌應(yīng)煮沸 30 m in；水中加10 g /L碳酸鈉或磷酸鈉可提高水的沸點(diǎn)至105C,殺菌作用隨之增強(qiáng)。煮沸消毒時，應(yīng)將物品清洗干凈，所用水應(yīng)是蒸儲水，避

55、免物品沾上水 垢；煮沸過程中不要中途添加新的物品，待水沸后開始計時。如需要?dú)⑺姥堪麆t應(yīng)該煮沸 13小時。此法主要用于一般注射器、膠管和食具等的消毒。.間歇滅菌法：此法適用于不宜高溫滅菌的物質(zhì)，如不耐熱的藥品、含血清的培養(yǎng)基 等。其具體方法：根據(jù)被滅菌物品的耐熱程度將其置于間歇滅菌器內(nèi)，加熱至80C-100C,維持3060 m in,此時物品上的細(xì)菌繁殖體可被殺滅。此后放入恒溫箱，在37c左右維持18 20 h,然后，重復(fù)上述處理三次，使其中由細(xì)菌芽抱復(fù)蘇為繁殖體而被殺滅。全過程可 將物品上污染的細(xì)菌全部殺滅。.巴氏消毒：巴氏消毒法是以較低溫度殺滅液體中的病原菌，而液體中不耐熱物質(zhì)不 受損失的一

56、種消毒方法。主要用于血清、疫苗、牛奶消毒。消毒時將其加熱至56 C65C,持續(xù)3060 m in,可殺滅細(xì)菌繁殖體。 但在處理牛奶過程中發(fā)現(xiàn)此溫度不足以殺滅牛結(jié)核分 枝桿菌，后改為 62. 8c65. 6C,作用30 m in。.高壓蒸汽滅菌法：此法是滅菌效果最好、目前應(yīng)用最廣的滅菌方法。利用高壓蒸汽 滅菌鍋進(jìn)行滅菌，由于密閉容器加溫所產(chǎn)生的高壓飽和水蒸汽能獲得較高的溫度，通常在 1.05kg/cm2的壓力下，溫度達(dá) 121.3C,維持1530分鐘，可殺死包括細(xì)菌芽胞在內(nèi)的所有 微生物。此法適用于高溫和不怕潮濕物品的滅菌，如普通培養(yǎng)基、生理鹽水、注射器、敷料 和橡皮手套等。在同樣溫度下，濕熱滅

57、菌的效果比干熱滅菌好，原因有三：一是濕熱中菌體吸收水分， 蛋白質(zhì)較易凝固。二是濕熱比干熱的穿透力好，這主要是由于水或飽和水蒸汽傳導(dǎo)熱能的效 率明顯高于空氣。蒸汽容易穿透到物體的深部，使滅菌的物體內(nèi)部溫度迅速上升。三是蒸汽有潛熱存在。每一克水在 100c時，由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)可放出529卡的熱量。當(dāng)蒸汽與被滅菌的物體接觸時凝結(jié)成水，放出潛熱，能迅速提高滅菌物體的溫度。其他消毒滅菌法.過濾除菌法過濾除菌是指用阻留技術(shù)去除氣體或液體中的微生物，在微生物實(shí)驗(yàn)室中主要用于液體的除菌和空氣凈化處理，還有一些不能耐受高溫或化學(xué)藥物滅菌的藥液、毒素、血液等，也 可使用過濾除菌法除菌。.紫外線殺菌法紫外線殺菌原理是

58、通過干擾細(xì)菌DNA的合成，波長253.7nm的殺菌力最強(qiáng)。紫外線作用的特點(diǎn)是（1）穿透力弱，只能用于房間空氣、物體表面消毒；（2）殺菌效果與照射時間，距離和強(qiáng)度有關(guān)；（3）對眼睛角膜和皮膚有損傷作用，工作人員切勿在紫外線燈照射下進(jìn)行操 作，佩戴保護(hù)眼鏡。那么滅菌后的物品該如何處理呢？滅菌后物品，按正常情況已屬無菌， 從滅菌器中取出應(yīng)仔細(xì)檢查放置，以免再度污染。取出后的合格滅菌物品，應(yīng)存放于貯藏室或防塵柜內(nèi)，嚴(yán) 禁于未滅菌物品混放。凡屬合格物品，應(yīng)標(biāo)有滅菌日期及有效期限。每批滅菌處理完成后， 記錄滅菌品名、數(shù)量、溫度、時間、操作者。三、無菌室無菌程度的測定在超凈工作臺開啟的斗犬態(tài)下,取內(nèi)徑90m

59、m的無菌培養(yǎng)皿 35個，無菌操作分別注入融化并冷卻至約 45c的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約 15ml,放至凝固后，倒置于37c培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 48 小時，證明無菌后，取平板 35個，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露30分鐘后，倒置于37c培養(yǎng)箱培養(yǎng) 48小時，取出檢查。（100級潔凈區(qū)）平板雜菌數(shù)平均不得超過1個菌落，如超過限度，應(yīng)對無菌室進(jìn)行徹底消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止。第三節(jié)微生物檢驗(yàn)室主要儀器設(shè)備的使用與維護(hù)食品微生物檢驗(yàn)室常用下列儀器：顯微鏡、超凈工作臺、高壓蒸汽滅菌器、培養(yǎng)箱、干 燥箱、水浴箱、搖床、天平、離心機(jī)、其他。一、顯微鏡顯微鏡的種類很多，在檢驗(yàn)室中常用的有：普通光學(xué)顯微鏡、

60、暗視野顯微鏡、相差顯微 鏡、熒光顯微鏡和電子顯微鏡等。而在食品微生物檢驗(yàn)中最常用的還是普通光學(xué)顯微鏡。.普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)和基本原理（1）結(jié)構(gòu)：光學(xué)顯微鏡由光學(xué)放大系統(tǒng)和機(jī)械裝置兩部分組成。光學(xué)系統(tǒng)一般包括目鏡、 物鏡、聚光器、光源等；機(jī)械系統(tǒng)一般包括鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、鏡臺、鏡臂和底座等。標(biāo)本 均放大主要由物鏡完成，物鏡放大倍數(shù)越大，它的焦距越短。焦距越小，物鏡的透鏡和載玻 片間距離也小。油鏡的工作距離很短，使用時需格外注意。目鏡只起放大作用，不能提高分 辨率，標(biāo)準(zhǔn)目鏡的放大倍數(shù)是10倍。聚光鏡能使光線照射標(biāo)本后進(jìn)人物鏡，形成一個大角度的錐形光柱，因而對提高物鏡分辨率是很重要的。聚光鏡可以上