乙型肝炎表面抗體定量檢測(cè)(共10頁(yè))

1、乙型肝炎表面抗體(kngt)定量檢測(cè) 1檢驗(yàn)(jinyn)目的 檢測(cè)HBsAb主要是用于監(jiān)測(cè)乙型肝炎疫苗是否有效，HBsAb的出現(xiàn)表明機(jī)體具有針對(duì)乙肝病毒感染的免疫力和抵抗乙肝病毒的侵入，同時(shí)定量檢測(cè)HBsAb還可以觀察急性乙肝恢復(fù)的動(dòng)態(tài)情況以及乙型肝炎的流行病學(xué)(li xn bn xu)調(diào)查（以往是否暴露接觸過(guò)乙肝病毒）。 2方法原理 采用了美國(guó)雅培公司的專(zhuān)利技術(shù)微粒子酶免疫分析（MEIA），即以rHBsAg包被微粒子（M-Ag）與標(biāo)本中的HBsAb形成M-Ag-Ab復(fù)合物，當(dāng)復(fù)合物被轉(zhuǎn)移到纖維杯上時(shí)，微粒子就不可逆地結(jié)合到纖維杯表面的玻璃纖維上，加入生物素化HBsAg（Ag-B）形成M-A

2、g-Ab-Ag-B復(fù)合物，再與加入的堿性磷酸酶標(biāo)記的抗生物素抗體結(jié)合，洗去未結(jié)合的游離物質(zhì)，加入底物四甲基傘形酮磷酸鹽，堿性磷酸酶脫去底物的磷酸基而發(fā)出熒光，通過(guò)MEIA光路元件檢測(cè)而得到定量結(jié)果。 3性能指標(biāo) MEIA定量檢測(cè)HBsAb在0.00-1000mIU/ml的范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，不精密度CVs為3-8%，檢出限0.1mIU/ml，靈敏度0.1mIU/ml。 4標(biāo)本收集 41標(biāo)本類(lèi)型：靜脈血或動(dòng)脈血的血清或血漿標(biāo)本均可作為檢測(cè)標(biāo)本（抗凝劑可用肝素鈉、枸櫞酸鈉、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝劑的質(zhì)量應(yīng)符合化試藥品要求化學(xué)純或分析純，使用的比例以廠家推薦為準(zhǔn)）；其他體液如尿液、唾液、

3、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等體液可以作為檢測(cè)標(biāo)本，但加熱滅活的血清和血庫(kù)的庫(kù)存血?jiǎng)t不宜作為檢測(cè)標(biāo)本。 42標(biāo)本留?。阂钥崭篂橐?，收到標(biāo)本后最好立即離心留取血清或血漿（凝固血應(yīng)待其充分凝固后收集血清），不能有殘留的紅細(xì)胞、纖維蛋白絲，使用(shyng)肝素治療的病人宜在肝素治療前抽血。 43標(biāo)本保存：留取的標(biāo)本最好在3小時(shí)內(nèi)檢測(cè)(jin c)，不能立即檢測(cè)的應(yīng)放置于2-8最長(zhǎng)達(dá)14天（可以含有凝塊但要密閉以防蒸發(fā)），或者-10最長(zhǎng)達(dá)14天（不能反復(fù)凍融也不能含有凝塊和紅細(xì)胞）。 44標(biāo)本(biobn)容器：盛放標(biāo)本的容器必須為潔凈的一次性真空采血管、玻璃試管、一次性的不同規(guī)格的塑料離心管 45

4、標(biāo)本外送：如涉及到需要外送的標(biāo)本，必須以規(guī)定的容器（0.5ml塑料離心管）存放并密封，并根據(jù)郵寄規(guī)則和要求進(jìn)行包裝，運(yùn)送時(shí)還要放入冰袋（2-8）或干冰（-10）由專(zhuān)人運(yùn)送至指定地點(diǎn)指定接收人。 46拒收標(biāo)本：凡與4.1-4.5所述內(nèi)容不符的標(biāo)本，檢驗(yàn)人員應(yīng)向臨床或就診者說(shuō)明拒收標(biāo)本的原因，并提出解決的方案或建議。 5分析系統(tǒng) 51分析儀器(yq)：為美國(guó)雅培公司提供的AXSYM全自動(dòng)免疫分析儀，儀器校準(zhǔn)請(qǐng)參見(jiàn)儀器操作規(guī)程。 52分析試劑(shj)：為美國(guó)雅培公司提供的配套的HBsAb試劑盒，規(guī)格為100test/盒，2-8貯存(zhcn)，有效期6個(gè)月；在效期內(nèi)使用試劑。 53定標(biāo)試劑：為美國(guó)

5、雅培公司提供的配套的HBsAb試劑盒中所附帶，2-8貯存，有效期6個(gè)月；每換一次不同批號(hào)試劑均應(yīng)進(jìn)行重新定標(biāo)。 54質(zhì)控試劑：為美國(guó)雅培公司提供的配套的質(zhì)控品，分為高、低二個(gè)濃度，2-8貯存，有效期6個(gè)月；每天隨常規(guī)工作一起檢測(cè)并保存質(zhì)控結(jié)果，每月一次質(zhì)控小結(jié)，失控要有記錄及糾正的結(jié)果。 55其他耗材：均為美國(guó)雅培公司提供，如MUP、Matrix cell液、4號(hào)液、探針清洗液、管道消毒液等，其中MUP為2-8貯存，其他均室溫存放。 6定標(biāo)程序 61儀器開(kāi)啟后（開(kāi)機(jī)程序參見(jiàn)儀器操作規(guī)程），從屏幕主菜單中選擇ORDERLIST。 62選擇F4（CAL）。 63選擇要定標(biāo)的項(xiàng)目HBsAb。 64輸

6、入標(biāo)本架的位置。 65輸入標(biāo)準(zhǔn)品的批號(hào)(p ho)和效期（可省略）。 66選擇定標(biāo)(dn bio)類(lèi)型MASTER曲線。 67選擇F6（ADD）確認(rèn)定標(biāo)(dn bio)申請(qǐng)。 68返回主菜單，選擇STORED RESULTS。 69選擇CALIBRATION REVIEW。 610選擇F4-NEW LOT。 611選擇：F4-SCAN用條碼閱讀器掃描主校正曲線，先上后下移動(dòng)條碼；或者用鍵盤(pán)手工輸入條碼數(shù)據(jù)。 612選擇F6-SAVE儲(chǔ)存主校正曲線數(shù)據(jù)。613返回主菜單，按RUN鍵運(yùn)行即可。6.14查閱定標(biāo)結(jié)果：從主菜單選擇STORED RESULTS/CALIBRATION REVIEW，選擇

7、F5（VIEW ALL），選擇項(xiàng)目HBsAb，查看定標(biāo)內(nèi)容，F(xiàn)6查看詳細(xì)內(nèi)容。 7標(biāo)本申請(qǐng)操作程序 71開(kāi)機(jī)以后檢查庫(kù)存是否足夠（包括纖維杯、bulk soIUtions、標(biāo)本架的有效性）和垃圾桶是否需要清理。 72從主菜單選擇ORDERLIST。 73選擇F6PATIENT。 74輸入標(biāo)本架的位置編號(hào)，如果系統(tǒng)設(shè)定自動(dòng)標(biāo)本位置定義，則無(wú)須此步驟。 75輸入標(biāo)本編號(hào)，如果系統(tǒng)自動(dòng)設(shè)定標(biāo)本編號(hào)定義，則無(wú)須此步驟。 76輸入以下信息（可選擇(xunz)）：病人編號(hào)、病人姓名、病人說(shuō)明，根據(jù)需要可以不輸。 77選擇該標(biāo)本要檢測(cè)的項(xiàng)目或項(xiàng)目組合（同時(shí)檢測(cè)多個(gè)項(xiàng)目的也可以(ky)手工選擇），在此還可選擇

8、稀釋模式、檢測(cè)次數(shù)和是否急診。 78選擇(xunz)F6ADD，確認(rèn)病人標(biāo)本申請(qǐng)。 79如果還有標(biāo)本需要申請(qǐng)，重復(fù)2-7步驟，如無(wú)則選擇F1EXIT返回病人項(xiàng)目申請(qǐng)（這時(shí)可以查看申請(qǐng)是否正確）。 710選擇F1-EXIT返回主菜單。 8質(zhì)量控制操作程序 81質(zhì)控品申請(qǐng)參照7“標(biāo)本操作”步驟執(zhí)行，即隨常規(guī)標(biāo)本一起申請(qǐng)檢測(cè)。 82質(zhì)控結(jié)果登記到本年度的“免疫室定量檢測(cè)項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控登記表”。 83每天將測(cè)定的質(zhì)控結(jié)果與質(zhì)控允許范圍進(jìn)行比較：HBsAb質(zhì)控血清一共有二個(gè)濃度（0mIU/ml、80mIU/ml），質(zhì)控范圍分別為0-2 mIU/ml、60-100mIU/ml。 84一旦發(fā)現(xiàn)失控，應(yīng)即時(shí)查找

9、和分析原因，并在該結(jié)果欄作詳細(xì)的批注和記錄解決的過(guò)程；失控情況處理及原因分析詳見(jiàn)9“失控處理”。 85每月進(jìn)行(jnxng)質(zhì)控小結(jié)。并將原始數(shù)據(jù)打印和存盤(pán)留檔。 9失控(sh kn)處理操作程序 91失控情況處理：操作者在分析質(zhì)控結(jié)果時(shí)，如發(fā)現(xiàn)(fxin)質(zhì)控違背了控制規(guī)則，應(yīng)填寫(xiě)失控報(bào)告單，上交專(zhuān)業(yè)室主管（組長(zhǎng)），由專(zhuān)業(yè)室主管（組長(zhǎng)）做出是否發(fā)出或重測(cè)與質(zhì)控品相關(guān)的該批次病人標(biāo)本檢驗(yàn)報(bào)告的決定。 92失控原因分析：失控信號(hào)的出現(xiàn)受多種因素的影響，這些因素包括操作上的失誤、試劑、校準(zhǔn)物的存貯條件改變、質(zhì)控品的失效、儀器維護(hù)不良以及采用的質(zhì)控規(guī)則、控制范圍、一次測(cè)定的質(zhì)控標(biāo)本數(shù)等等。失控信號(hào)一

10、旦出現(xiàn)就意味著與測(cè)定質(zhì)控品相關(guān)的該批病人標(biāo)本報(bào)告可能作廢，此時(shí)首先要查明導(dǎo)致失控的原因，是質(zhì)控品本身的原因還是質(zhì)控品以外的原因。如是質(zhì)控品以外的原因則應(yīng)判為真失控，與質(zhì)控品相關(guān)的同批次病人標(biāo)本重新檢測(cè)；如是質(zhì)控品本身的原因，則判為假失控，與質(zhì)控品相關(guān)的同批次病人標(biāo)本不必重測(cè)，可以發(fā)出報(bào)告。當(dāng)失控信號(hào)出現(xiàn)時(shí)，可以采取以下步驟去尋找原因： 9.2.1立即重測(cè)同一質(zhì)控品。此法主要用于查明人為誤差，每一步都應(yīng)該認(rèn)真仔細(xì)的操作，以查明失控的原因；另外，這一步還可以查出偶然誤差，如是偶然誤差，則重測(cè)的質(zhì)控結(jié)果應(yīng)在允許范圍（在控），可以認(rèn)為該批次的病人標(biāo)本不必重測(cè)。如仍不在允許范圍則可以進(jìn)行下一步。 9.2

11、.2新開(kāi)一瓶質(zhì)控品，重測(cè)失控項(xiàng)目。如果新開(kāi)的質(zhì)控血清結(jié)果正常，那么原來(lái)那瓶質(zhì)控血清可能過(guò)期或在室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而變質(zhì)，或者被污染，此時(shí)可以認(rèn)為該批次病人標(biāo)本不必重測(cè)。如仍不在允許范圍則可以進(jìn)行下一步。 9.2.3新開(kāi)另一批質(zhì)控品，重測(cè)失控項(xiàng)目。如果結(jié)果在控，則說(shuō)明前一批血清可能都有問(wèn)題，檢查它們的有效期和貯存環(huán)境，以查明問(wèn)題所在，可以認(rèn)為該批次病人標(biāo)本不必重測(cè)。如仍不在允許范圍則可以進(jìn)行(jnxng)下一步。 9.2.4進(jìn)行儀器維護(hù)，重測(cè)失控項(xiàng)目。檢查儀器狀態(tài)，檢查光源是否更換，對(duì)儀器進(jìn)行清洗維護(hù)，然后再測(cè)質(zhì)控品，如在控，則說(shuō)明是儀器原因，該批次的病人(bngrn)標(biāo)本應(yīng)重測(cè)。如仍不在允許范圍

12、則可以進(jìn)行下一步。 9.2.5更換另一試劑盒，重測(cè)失控項(xiàng)目。檢查試劑是否過(guò)期或貯存(zhcn)環(huán)境，更換試劑盒重新檢測(cè)質(zhì)控品，如在控則說(shuō)明試劑存在問(wèn)題，該批次病人標(biāo)本應(yīng)重測(cè)。如仍不在允許范圍則可以進(jìn)行下一步。 9.2.6重新校準(zhǔn)儀器，重測(cè)失控項(xiàng)目。使用新的校準(zhǔn)液校準(zhǔn)儀器，重新檢測(cè)質(zhì)控品，在控則說(shuō)明是校準(zhǔn)問(wèn)題，該批次病人標(biāo)本應(yīng)重測(cè)。如仍不在允許范圍則可以進(jìn)行下一步。 9.2.7請(qǐng)專(zhuān)家?guī)椭?。?步都未能得到在控結(jié)果，如果其他同類(lèi)型檢驗(yàn)項(xiàng)目在控，則需要聯(lián)系試劑廠家尋求技術(shù)幫助；如果其他同類(lèi)型項(xiàng)目也失控，則需要與儀器廠家工程師取得聯(lián)系了。 10注意事項(xiàng) 101血清（漿）中含有顆粒（如紅細(xì)胞、纖維蛋白絲

13、等）會(huì)引起錯(cuò)誤的結(jié)果(ji gu)，因此離心收集血清（漿）時(shí)應(yīng)不能將這些顆粒的物質(zhì)加樣品杯中。 102加樣時(shí)應(yīng)避免標(biāo)本產(chǎn)生(chnshng)氣泡，放置試劑時(shí)也應(yīng)避免試劑產(chǎn)生氣泡。 11結(jié)果(ji gu)計(jì)算 111 HBsAb定量檢測(cè)結(jié)果是依據(jù)定標(biāo)通過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得來(lái)的。手工稀釋時(shí)應(yīng)手工乘以稀釋倍數(shù)。 12參考區(qū)間 未接觸過(guò)乙肝病毒的人HBsAb應(yīng)為10mIU/ml，乙肝病毒感染者（尤其是高濃度HBsAg感染者）HBsAb應(yīng)為0mIU/ml。 13警告值 131當(dāng)HBsAb檢測(cè)值在5-12 mIU/ml之間一般視為低濃度區(qū)或灰區(qū)。 132當(dāng)HBsAb檢測(cè)值在1000 mIU/ml以上時(shí)，則提

14、示HBsAb濃度超出了儀器和試劑的檢測(cè)線性范圍，如需要準(zhǔn)確報(bào)告結(jié)果則應(yīng)稀釋重做（分儀器稀釋和手工稀釋?zhuān)瑑x器稀釋的結(jié)果不需要再乘以稀釋倍數(shù)，手工稀釋則需要乘以稀釋倍數(shù)。 14結(jié)果解釋 141標(biāo)本的HBsAb值10.0 mIU/ml被認(rèn)為HBsAg陰性，反之則被認(rèn)為陽(yáng)性結(jié)果。 142對(duì)處于灰區(qū)或可疑標(biāo)本，應(yīng)重復(fù)檢測(cè)或進(jìn)一步做確證(qu zhn)試驗(yàn)。 143對(duì)于假陽(yáng)性結(jié)果的原因可能有：血清標(biāo)本中含有顆粒性物質(zhì)（紅細(xì)胞）或纖維蛋白絲、前一份血清標(biāo)本含有高滴度的HBsAb使得在加樣時(shí)存在(cnzi)攜帶污染、非特異性反應(yīng)存在。 144診斷急、慢性乙型肝炎是否恢復(fù)，或者是否接觸過(guò)乙肝病毒，HBsAb檢

15、測(cè)必須同時(shí)結(jié)合乙型肝炎其他血清標(biāo)志物及病人的臨床表現(xiàn)進(jìn)行(jnxng)綜合判斷。 145由于機(jī)體免疫應(yīng)答的差異性，對(duì)接種乙肝疫苗后、急性乙肝恢復(fù)期的不同模式轉(zhuǎn)換期可能不出現(xiàn)HBsAb。 146對(duì)于其他體液標(biāo)本和血庫(kù)庫(kù)存血的檢測(cè)結(jié)果只能作為參考。 147對(duì)于反復(fù)凍融的血標(biāo)本或含有顆粒性物質(zhì)的血標(biāo)本應(yīng)離心后再進(jìn)行檢測(cè)。 148肝素治療病人的血標(biāo)本可能由于部分凝固而存在潛在的纖維蛋白絲，因此可能產(chǎn)生錯(cuò)誤的結(jié)果。 15安全防護(hù) 151對(duì)任何一份標(biāo)本（包括質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品及檢測(cè)試劑等）都應(yīng)視其為具有傳染性，操作人員在工作時(shí)應(yīng)戴乳膠手套、穿工作服。 152一旦發(fā)生標(biāo)本容器劃破手或身體、液體濺進(jìn)眼睛等粘膜處，應(yīng)立即用大量(dling)的水沖洗，同時(shí)向上級(jí)醫(yī)師或科領(lǐng)導(dǎo)報(bào)告，必要時(shí)施以丙種球蛋白預(yù)防。 16常見(jiàn)(chn jin)的誤差源 161儀器原因：儀器的性能(xngnng)、儀器的校準(zhǔn)等。 162試劑原因：試劑過(guò)期、定