64生物化學(xué)方法及其在中醫(yī)研究中的應(yīng)用-6_第1頁
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1、.:.;第六章 第四節(jié) 生物化學(xué)方法及其在中醫(yī)研討中的運(yùn)用一生物化學(xué)的主要實(shí)驗(yàn)方法有哪些?答題要點(diǎn):一生物大分子物質(zhì)的分別和提純生物大分子主要指蛋白質(zhì)、核酸、糖類和脂類等物質(zhì)。制備高度純化的生物大分子是研討大分子構(gòu)造與功能的前提,整個(gè)分別提純過程可分為以下幾個(gè)階段: 1資料選擇。原那么是:選取所需成分含量較高、來源豐富、工藝簡(jiǎn)單、本錢低廉的資料。例如,胰島素的提取可選擇豬胰。還要留意取材新穎,要進(jìn)展預(yù)處置,對(duì)于蛋白質(zhì)和核酸的提取要在低溫條件下進(jìn)展,防止生物大分子的變性、失活。 2細(xì)胞破碎。生物大分子絕大部分存在于細(xì)胞內(nèi)。根據(jù)資料來源及實(shí)驗(yàn)要求,可選取勻漿器研磨、高速組織搗碎器、反復(fù)凍融、超聲波

2、破碎、自溶、酶消化、外表活性劑處置法等。 3亞細(xì)胞器的分別。各類生物大分子在細(xì)胞內(nèi)分布往往是區(qū)域化的。例,DNA幾乎全部在細(xì)胞核中,電子傳送鏈和氧化磷酸化酶系分布在線粒體,蛋白質(zhì)合成酶系在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)微粒體上,Na+-K+-ATP酶分布在細(xì)胞膜上等,因此細(xì)胞破碎后,可以先分別亞細(xì)胞器,這有助于制備純度更高的生物大分子。亞細(xì)胞器的分別,普通采用不同密度梯度介質(zhì),經(jīng)差速離心法制備。 4提取。提取過程,首先要使生物大分子與其他物質(zhì)別分開來,使大分子物質(zhì)充分釋放出來,在此過程中,特別要思索溶劑性質(zhì)、pH值、離子強(qiáng)度、介電常數(shù)、抽提溫度等多種影響溶解度的要素,然后可結(jié)合閱歷并根據(jù)詳細(xì)實(shí)驗(yàn)條件靈敏地選取某一試劑

3、進(jìn)展提取。 5分別純化。剛提獲得到的大分子物質(zhì),往往是粗制品,含有許多雜質(zhì),必需進(jìn)一步分別純化。分別提純各種生物大分子,主要根據(jù)各種物質(zhì)的分子大小、溶解度、帶電性、親和力大小等差別,選用有機(jī)溶劑沉淀,等電點(diǎn)沉淀,鹽析,層析,電泳,超離心,吸附,結(jié)晶等方法。 6濃縮、枯燥及保管。經(jīng)過分別、純化得到的提取液有時(shí)很稀,體積較大,需求采用蒸餾法、冰凍法、吸收法、超濾法等,去除水分而濃縮。最后低溫保管,有時(shí)還需參與防腐劑或穩(wěn)定劑,防止生物大分子變性失活。二離心技術(shù)離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力,使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮,從而使某些顆粒到達(dá)濃縮或與其他顆粒分別之目的。這里的懸浮

4、顆粒往往是指制成懸浮形狀的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時(shí),當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時(shí),顆粒分開軸心方向挪動(dòng),發(fā)生沉降;假設(shè)顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時(shí),那么顆粒朝向軸心方向挪動(dòng)而發(fā)生漂浮。常用的離心機(jī)有多種類型,普通低速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速不超越6000rpm,高速離心機(jī)在25000rpm以下,超速離心機(jī)的最高速度達(dá)30000rpm以上。根據(jù)離心原理,可設(shè)計(jì)多種離心方法,常見以下三大類型: 1差速離心法。經(jīng)過逐漸添加相對(duì)離心力,使一個(gè)非均相混合液內(nèi)外形不同的大小顆粒分步沉淀。 2密度梯度離心法。離心前,離心管內(nèi)先裝入分別介質(zhì)如蔗糖、甘油等,使構(gòu)成延續(xù)的或不延續(xù)的密度梯

5、度介質(zhì),然后參與樣品進(jìn)展離心,詳細(xì)又可分為: 1速度區(qū)帶離心法。離心前,離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì),待分別樣品鋪在梯度液的頂部,離心管底部或梯度層中間,同梯度液一同離心,利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同,使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi),到達(dá)彼此分別的目的。本法可分別各種細(xì)胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。 2預(yù)制梯度等密度離心法。要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì),常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等,待分別樣品普通鋪在梯度液頂上,如需挾在梯度液中間或管底部,那么需調(diào)理樣品液密度。離心后,不同

6、密度的樣品顆粒到達(dá)與本身密度相等的梯度層,即到達(dá)等密度的位置而獲得分別。 3自成梯度等密度離心法。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會(huì)自成梯度,例Percoll,可迅速構(gòu)成梯度,CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。需求離心分別的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合,離心開場(chǎng)后,梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸構(gòu)成管底濃而管頂稀的密度梯度,與此同時(shí),可以帶動(dòng)原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布,到達(dá)與其本身密度相等的梯度層里,即到達(dá)等密度的位置而獲得分別。 3沉降平衡離心法。根據(jù)被分別物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)展分別,所用的介質(zhì)起始密度約等于被分別物質(zhì)的密度,介質(zhì)在離心過程中構(gòu)成密度梯度,被分

7、別物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并構(gòu)成區(qū)帶。三層析技術(shù)層析法又稱色譜法,是目前廣泛運(yùn)用的一類分別分析技術(shù)。它是利用混合物各組分理化性質(zhì)上的差別,例如吸附力、溶解度、分配系數(shù)、帶電性、分子大小、親和力等,使各組分以不同程度分布在二個(gè)相中,其中一個(gè)為固定相,另一個(gè)為流動(dòng)相,當(dāng)混合物隨流動(dòng)相經(jīng)過固定相時(shí),由于各組分受固定相的阻力和流動(dòng)相的推力不同,而使各組分挪動(dòng)速度各異,以到達(dá)分別的目的。主要有: 1根據(jù)分別的原理可劃分為: 1吸附層析。是利用混合物隨流動(dòng)相經(jīng)過由吸附劑組成的固定相時(shí),因吸附劑對(duì)各組分的吸附才干的不同,而使各組分流動(dòng)速度不同,將各組分分別。吸附層析根據(jù)支持物裝填方式的

8、不同有柱層析和薄層層析類,前者常用于分別非極性或極性較小的有機(jī)物,后者用于分別氨基酸、類固醇激素等。 2分配層析。利用混合物隨流動(dòng)相非極性溶劑經(jīng)過含極性溶劑的載體組成的固定相時(shí),由于各組分在二相中的分配系數(shù)的不同,而使混合物各組分在兩相間發(fā)生不同的分配景象而逐漸分開。分配層析運(yùn)用最廣泛的是紙層析。 3離子交換層析。離子交換層析是利用離子交換劑作為固定相,離子交換劑是一類具有酸性或堿性基團(tuán),能與溶液中的陽離子或陰離子發(fā)生交換的不溶性物質(zhì),流動(dòng)相通常是具有一定pH值和一定離子強(qiáng)度的電解質(zhì)溶液。將混合溶液參與離子交換柱,由于離子交換劑對(duì)混合液中各種離子具有不同的親和力而產(chǎn)生不同的吸附作用,當(dāng)流動(dòng)相流

9、經(jīng)離子交換柱時(shí),可以降低離子交換劑對(duì)吸附離子的親和力而被交換洗脫下來,從而到達(dá)分別的目的。 4凝膠層析。以多孔性網(wǎng)狀構(gòu)造的凝膠葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠等為固定相裝柱,將分子量大小不同的混合組分參與柱,用一種洗脫液作為流動(dòng)相進(jìn)展洗脫。小分子物質(zhì)易進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部使流程延伸,大分子物質(zhì)不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)而被排阻在外,流程較短,經(jīng)過一定洗脫時(shí)間后,可將混合物按分子大小不同別分開來。 5親和層析。親和層析是根據(jù)生物大分子與其配基之間具有高度專注性的親和力而設(shè)計(jì)的一種層析技術(shù)。具有專注親和力的生物分子對(duì)主要有:酶與底物包括輔酶與輔基、激素與受體、抗原與抗體、DNA與RNA、凝集素與糖蛋白等

10、,由于結(jié)合雙方是互配的,因此分子對(duì)任何一方均可作為配基,經(jīng)過化學(xué)法銜接到載體上作為固定相裝柱,將欲分別的混合物分子對(duì)另一方參與柱,由于分子對(duì)雙方有高度親和力而被吸附結(jié)合在柱上,其它雜質(zhì)首先隨流動(dòng)相被洗脫下來,然后改動(dòng)流動(dòng)相成分,將吸附結(jié)合在柱上的親合分子洗脫下來。 2根據(jù)兩相物理形狀可劃分為: 1液相層析。流動(dòng)相為液體的層析,如上述各種層析。 2氣相層析。流動(dòng)相為氣體的層析。固定相有固體或液體,故又分作氣固層析或氣液層析。 3根據(jù)支持物的裝填方式可劃分為:柱層析將支持物裝在管子中成柱形,在柱中進(jìn)展層析,薄層層析支持物鋪在玻璃板上成一薄層,在薄層上進(jìn)展層析,紙層析用紙做支持物的層析。四電泳技術(shù)帶

11、電顆粒在電場(chǎng)作用下,向著其電性相反方向挪動(dòng)的景象稱為電泳。由于被分別物質(zhì)各自的帶電性、帶電量、分子顆粒大小和外形等的不同,在同一電埸下它們的挪動(dòng)速度各異,經(jīng)過一定時(shí)間電泳后可被別分開來。在電泳過程中,帶電顆粒的遷移率在一定條件下與其所帶電量、顆粒半徑和溶液的粘度相關(guān)。此外還有以下要素可以影響物質(zhì)的電泳遷移率:電場(chǎng)強(qiáng)度、溶液的pH值、溶液的離子強(qiáng)度、電滲作用等。 目前采用的電泳大致有三大類:顯微電泳、自在界面電泳和區(qū)帶電泳。其中區(qū)帶電泳運(yùn)用較為廣泛。所謂區(qū)帶電泳是指在電埸作用下,被分別的各組分在支持物上相互分別為不同的區(qū)帶。分類如下: 1按支持物的物理性狀不同可分為:1濾紙及其他纖維紙電泳,2粉

12、末電泳,3凝膠電泳、4緣線電泳。 2按支持物的安裝方式不同可分為:1平板式電泳,2垂直板式電泳,3垂直柱式電泳,4延續(xù)液動(dòng)電泳。 3按pH的延續(xù)性不同可分為:1延續(xù)pH電泳,2非延續(xù)pH電泳。五光譜技術(shù) 光譜技術(shù)是利用各種化學(xué)物質(zhì)所具有的發(fā)射、吸收或散射輔射能的特性,對(duì)物質(zhì)進(jìn)展定性或定量的一類分析技術(shù)。它具有靈敏度高,測(cè)定簡(jiǎn)便、快速,試樣不被破壞等優(yōu)點(diǎn),是一類最常用的生化測(cè)定技術(shù)。 1比色分析法 比色法是利用有色物質(zhì)對(duì)一定波長(zhǎng)的光的吸收特性來進(jìn)展定量的一種分析方法。在一定濃度范圍內(nèi),溶液中有色物質(zhì)的濃度與溶液顏色的深度成正比,用可見光400-760nm作光源,比較溶液的顏色深淺度以測(cè)定所含有色

13、物質(zhì)濃度的方法,叫做比色法。常用的有: 1規(guī)范對(duì)照法。將樣品和規(guī)范樣品溶液在一樣條件下分別測(cè)定它們的吸光度,計(jì)算出試樣溶液的濃度。 2規(guī)范曲線法。配制一系列濃度不同的規(guī)范品溶液,按一定操作方法顯色,在選定波長(zhǎng)條件下分別測(cè)定它們的吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),規(guī)范溶液的濃度為橫坐標(biāo),作一條規(guī)范曲線或任務(wù)曲線。以后只需在一樣條件下實(shí)驗(yàn),測(cè)定未知樣品溶液的吸光度,從規(guī)范曲線上求得相對(duì)應(yīng)的濃度值,即為未知樣品液的濃度,一條規(guī)范曲線,如測(cè)定條件不變,可供多次運(yùn)用,否那么應(yīng)重新繪制。 2分光光度法 分光光度是根據(jù)被測(cè)物質(zhì)對(duì)各種波長(zhǎng)光的吸收才干吸光度或光密度,繪制吸收光譜曲線,不同的物質(zhì),分子構(gòu)造不同,其吸收曲

14、線各有特殊方式,根據(jù)曲線的特征,用于物質(zhì)的定性定量。分光光度法波長(zhǎng)范圍較大(200-1000nm),因此,既可用于可見光,也可用于紫外光和紅外光的分光測(cè)定,故測(cè)定物質(zhì)既可是有色物,也可是無色物,擴(kuò)展了運(yùn)用范圍。由于分光光法采用單色光器棱鏡,得到單色光,其波長(zhǎng)范圍比濾光片波長(zhǎng)更狹窄,提高了分析的靈敏度、準(zhǔn)確度和選擇性。所用的儀器721分光光度計(jì)、752紫外分光光度計(jì)等。 3熒光光度 某些物質(zhì)經(jīng)紫外光照射能發(fā)出比原激發(fā)光的頻率低,波長(zhǎng)長(zhǎng)的可見光,這種光稱為熒光。各種物質(zhì)經(jīng)紫外光激發(fā)后能發(fā)出的熒光特性與物質(zhì)的化學(xué)性有關(guān)。在激發(fā)光強(qiáng)度和所經(jīng)過的溶液厚度不變時(shí),在一定濃度范圍內(nèi)該物質(zhì)所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度與其

15、濃度成正比。因此,可以用知濃度的規(guī)范與待測(cè)樣品同樣操作,經(jīng)過測(cè)定熒光強(qiáng)度F,按前述的規(guī)范曲線法和規(guī)范對(duì)照法,求得待測(cè)物質(zhì)的濃度。所用的儀器如國(guó)產(chǎn)930型、910型等熒光光度計(jì)。 4比濁法 比濁法是利用混懸溶液中顆粒對(duì)光線產(chǎn)生散射特性進(jìn)展測(cè)定。其測(cè)定的實(shí)際、方法和計(jì)算等類似于比色分析法,因此根本上任何一種光電比色計(jì)或分光光度計(jì)都能用于比濁測(cè)定。六分子雜交技術(shù)詳見第八節(jié)二心氣虛證血清SOD活性、血清LPO含量和血漿內(nèi)核酸含量的變化怎樣?其意義如何?答題要點(diǎn):1心氣虛證患者紅細(xì)胞SOD活性明顯下降,而血清LPO含量那么顯著升高,推測(cè)由于紅細(xì)胞SOD活性下降不能維護(hù)心肌免受超氧自在基的攻擊,以致產(chǎn)生心

16、氣虛的臨床病癥。2心氣虛患者血漿核酸總量及DNA、RNA含量均低于正常對(duì)照組,提示心氣虛患者蛋白質(zhì)合勝利能有一定的妨礙。三試述脾虛證主要的物質(zhì)代謝異常表現(xiàn)。答題要點(diǎn):1用檸檬酸刺激前后唾液淀粉酶活性和唾液流量的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常人酸刺激前后唾液淀粉酶活性多上升,而脾虛病人那么酶活性下降,提示脾虛病人腮腺細(xì)胞對(duì)外源性刺激的反響性降低,這能夠是脾虛病人的虛象的表現(xiàn)。血清胃泌素和胰淀粉酶活性低下,胃腸蠕動(dòng)紊亂,小腸吸收功能低下。闡明脾虛患者的胃腸功能確有紊亂。脾虛患者木糖排泄率較正常人顯著降低。脾虛證的食少、腹脹滿、大便不調(diào)、神疲氣短四大主癥的分級(jí)量比值與木糖排泄率下降有一致性的規(guī)律。血清淀粉酶及其

17、同功酶和胰脂肪酶均顯著下降,且脾氣虛的三個(gè)主癥食欲減退、食后腹脹與大便溏泄與胰淀粉酶活性同功酶活性降低呈正相關(guān),脾氣虛的胰淀粉酶活性和胰脂肪酶活性與對(duì)照組之間有顯著性差別,闡明胰腺外分泌功能的降低可視為脾氣虛證的特異性診斷目的之一,且淀粉酶總活性的降低取決于胰淀粉酶同功酶的下降,而與唾液淀粉酶無關(guān),為脾氣虛證診斷提供了一個(gè)更準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?血清必需脂肪酸檢測(cè):血清花生四烯酸減少,與亞油酸比值也下降,甘油三酯TG增高,總膽固醇TC增高,高密度脂蛋白膽固醇HDL-C比值下降。脾氣虛證、脾陽虛證、脾陰虛證模型的血清脂質(zhì)過氧化物L(fēng)PO明顯升高,抗氧化酶活性下降。血清丙二醛MDA含量升高,其中以脾

18、腎兩虛型的MDA含量最高。6血清游離氨基酸FAA、必需氨基酸、支鏈氨基酸明顯降低,纈、甘、蘇、色、異亮、絲、丙、組氨酸等8種氨基酸含量也明顯降低;FAA含量、必需氨基酸、支鏈氨基酸含量及木糖吸收率之間、FAA總量與血清總蛋白、白蛋白、淋轉(zhuǎn)率、補(bǔ)體C3之間和支鏈氨基酸與白蛋白之間均顯著正相關(guān),提示脾氣虛患者血清FAA含量降低與腸道吸收不良、血清蛋白濃度和免疫功能低下有關(guān)。 四試述腎虛證物質(zhì)代謝異常的主要表現(xiàn)。答題要點(diǎn):老年腎虛證患者血清過氧化脂質(zhì)LPO含量明顯高于老年安康組。脂褐素LPF含量增高,超氧化物歧化酶SOD、過氧化氫酶活性以及銅藍(lán)蛋白含量降低。血清鐵、鋅含量下降。五試述脾虛證能量代謝異

19、常的主要表現(xiàn)。答題要點(diǎn):1肌酸磷酸激酶CPK、琥珀酸脫氫酶、輔酶1-四氮唑復(fù)原酶NADH-TR活性、肌球蛋白腺苷三磷酸酶M-ATPase活性降低,肌糖原含量減少,線粒體發(fā)生改動(dòng),骨骼肌有氧氧化效率降低,糖酵解供能途徑妨礙,能量代謝受阻;CPK和肌型肌酸磷酸激酶CPK-MM活性的降低與脾氣虛的輕重程度有量的相關(guān)性。2骨骼肌細(xì)胞ATP含量和能荷值顯著減小,與無氧酵解相關(guān)的乳酸脫氫酶LDH以及有氧氧化相關(guān)的琥珀酸脫氫酶SDH活性顯著升高,提示能量代謝異常,與之相關(guān)的微量元素鋅和鐵含量也相應(yīng)升高,而與肌肉收縮有關(guān)的元素銅、砷、鈉減少而鈣增多。紅細(xì)胞膜Na+-K+-ATPase活性也顯著低于正常組。六心

20、氣陰虛證神經(jīng)內(nèi)分泌異常表現(xiàn)有哪些?答題要點(diǎn):1心氣虛、肺氣虛和心肺氣虛患者血漿心鈉素含量顯著降低,而心陰虛、肺陰虛和肝腎陰虛患者血漿心鈉素含量那么升高。2心陰虛證存在左心功能低下和心血管植物神經(jīng)功能紊亂,多與高血壓、心功能不全及交感腎上腺能神經(jīng)偏亢有關(guān)。心功能不全,激活了腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)RAAS,從而添加了外周阻力。心陰虛患者紅細(xì)胞電泳時(shí)間明顯縮短,血糖含量較正常組高,糖耐量降低,并發(fā)現(xiàn)該證患者血漿雌二醇E2、睪酮T含量低于正常人。七脾虛證神經(jīng)內(nèi)分泌異常表現(xiàn)有哪些?答題要點(diǎn):1血清乙酰膽堿程度明顯升高,膽堿酯酶活性明顯下降,闡明脾氣虛證患者副交感神經(jīng)系統(tǒng)處于興奮形狀。2血、尿PGE

21、2 、PGF2含量及其與中醫(yī)證型的關(guān)系:脾氣虛組、肝胃不和組和脾胃濕熱組PGE2程度均明顯高于對(duì)照組,其中以脾胃濕熱組升高最明顯,而且明顯高于脾氣虛證和肝胃不和組,PGE2/PGF2比值,脾胃濕熱組也明顯高于對(duì)照組、脾氣虛證和肝胃不和組,三組證型的尿與血中PG程度有類似的變化,能夠是與血中PG經(jīng)代謝滅活后從尿中排泄有關(guān)。上述結(jié)果初步闡明,PG程度變化對(duì)脾氣虛證并非特異,但提示了脾氣虛證構(gòu)成過程中有PGE2參與調(diào)理。脾虛患者胃粘膜PGE2、PGI2的代謝產(chǎn)物6-酮-前列腺素F16-Keto-PGF1、血栓素A2TXA2的代謝產(chǎn)物血栓素B2TXB2含量之比值及環(huán)核苷酸cAMP含量均明顯低于對(duì)照組,

22、且胃粘膜PGE2、6-Keto-PGF1與cAMP呈正相關(guān)。3血漿cAMP含量明顯降低,交感神經(jīng)系統(tǒng)功能低下,副交感神經(jīng)系統(tǒng)功能相對(duì)亢進(jìn),脾陰虛證,包括消化道疾病、甲亢、多種癌手術(shù)后和夏季熱等,其血漿cAMP降低,cGMP升高,變化趨勢(shì)與脾氣虛相近。4脾虛證胃竇粘膜中D細(xì)胞數(shù)明顯減少,D細(xì)胞分泌的生長(zhǎng)激素有抑制胃泌素、胃酸和胃蛋白酶原分泌的作用,推測(cè)D細(xì)胞減少系脾虛證患者的一個(gè)重要病理形狀學(xué)標(biāo)志。大鼠脾虛證的血漿、胃竇及空腸組織中生長(zhǎng)抑素SS含量均較正常對(duì)照組升高。脾氣虛證患者血清中胃泌素程度降低,胃排空時(shí)間延遲,健脾益氣藥能添加胃泌素的分泌。5急腹癥與腹部手術(shù)后脾虛證患者血清T3程度顯著低下,rT3明顯增高,T3/ rT3比值減小。八腎虛證神經(jīng)內(nèi)分泌有何異常表現(xiàn)?一下丘腦-垂體-性腺軸與腎虛 1腎陽虛患者性腺軸調(diào)理功能呈現(xiàn)一定程度的紊亂。腎陰虛者促卵泡素FSH偏低較多,腎陽虛者雌二醇升高,睪酮偏低較多,部分患者黃體生成素亦有明顯變化,闡明腎陰虛與腎陽虛之間的激素程度有明顯差別;腎陰、陽俱虛那么FSH、LH和T均低下。2腎虛者的血

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