細(xì)菌培養(yǎng)以及鑒定

1、關(guān)于細(xì)菌的培養(yǎng)及鑒定第一張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月標(biāo)本采集原則1.及時(shí)采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查2.在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本3.采樣時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作4.標(biāo)本容器須無(wú)菌，但不得有消毒劑5.采樣后立即送檢6.送檢標(biāo)本應(yīng)注明來(lái)源和檢驗(yàn)?zāi)康牡诙?，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月咳痰方法病人先漱口，清潔口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集從下呼吸道咳出的痰液無(wú)痰可用35NaCl 5ml霧吸約5min導(dǎo)痰以清晨第二口痰為佳標(biāo)本采集后放置時(shí)間不超過(guò)2小時(shí) 第三張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月清潔中段尿液盡量取早晨第一次尿液囑患者留取標(biāo)本的前一天晚上少飲水 女性病人收集標(biāo)本

2、前用肥皂水沖洗外陰，再以滅菌清水沖洗尿道口排出幾毫升后，不停止尿流，采集中段尿男性病人翻轉(zhuǎn)包皮，清洗尿道口排出幾毫升后，不停止尿流,采集中段尿 采集標(biāo)本后立即送檢！第四張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月哥倫比亞血平板營(yíng)養(yǎng)要求高的細(xì)菌巧克力平板含V、X因子，主要培養(yǎng)嗜血桿菌、腦膜炎球菌和淋球菌用中國(guó)藍(lán)/麥康凱平板G-桿菌用SS平板沙門氏菌和志賀氏菌用M-H平板細(xì)菌藥敏用TCBS平板弧菌科細(xì)菌用沙包氏平板真菌培養(yǎng)用真菌顯色平板真菌培養(yǎng)用羅氏培養(yǎng)基分枝桿菌用常用的培養(yǎng)基種類和用途第五張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月臨床標(biāo)本培養(yǎng)基選擇血： 血培養(yǎng)瓶中斷尿：血平板、mac平板腦脊液：血

3、培養(yǎng)瓶、血平板、巧克力平板穿刺液：血培養(yǎng)瓶、血平板、巧克力平板、mac平板膽汁：血平板、巧克力平板、mac平板大便:.麥康凱、SS、血平板第六張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)菌接種的基本程序滅菌接種環(huán)沾取標(biāo)本接種滅菌接種環(huán)第七張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)菌接種法平板劃線接種法： 目的：使混合的細(xì)菌呈單個(gè)分散生長(zhǎng)，形成單個(gè)菌落，以便獲得純菌。 方法：分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本第八張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月分區(qū)劃線法(3區(qū))第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第九張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作

4、于2022年6月連續(xù)劃線法第十張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)菌培養(yǎng)法一般培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）：培養(yǎng)溫度：35（采用恒溫培養(yǎng)箱）培養(yǎng)時(shí)間：1824h二氧化碳培養(yǎng)法：燭缸法、二氧化碳培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)法：厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等第十一張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象菌落定義：指單個(gè)細(xì)菌在平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖，形成單一肉眼可見(jiàn)的細(xì)菌集團(tuán)。菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤(rùn)度、黏度、溶血性菌落類型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多個(gè)菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。第十二張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)

5、作于2022年6月菌 落第十三張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月菌落與菌苔第十四張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月菌落的三個(gè)類型：1.光滑型菌落（Smooth type Colony） ：又稱S型2.粗糙型菌落（Rough type Colony）：又稱R型3.粘液型菌落（Mucoid type Colony）又稱M型第十五張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1116 S型菌落 第十六張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月R型菌落第十七張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月M型菌落第十八張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月革蘭染色原理：通過(guò)結(jié)晶

6、紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽(yáng)性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí)，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會(huì)出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過(guò)乙醇脫色后仍呈無(wú)色，再經(jīng)復(fù)紅等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。第十九張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 革蘭染色步驟 涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片

7、 干燥 固定第二十張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月固定的目的：使細(xì)菌的細(xì)胞凝固，使菌體與玻片粘得更牢固；可改變菌體對(duì)染料的通透性；加熱固定可殺死細(xì)菌，比較安全。 第二十一張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 結(jié)晶紫 1 碘液 1 95%乙醇 30” 復(fù)紅1 沖洗 濾紙干燥 油鏡觀察沖洗沖洗沖洗革蘭染色程序初染媒染脫色復(fù)染第二十二張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月紫色（G）革蘭氏染色步驟示意圖革蘭染色甲菌乙菌初染結(jié)晶紫媒染碘液脫色乙醇復(fù)染稀釋復(fù)紅紫色（G）紅色（G-）革蘭染色步驟示意圖第二十三張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月【結(jié)果】細(xì)菌被染成紫色者，稱為革蘭陽(yáng)性

8、菌；而細(xì)菌染成紅色者，稱為革蘭陰性菌；陽(yáng)性菌紫色（G+b) 陰性菌紅色（G-b)第二十四張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月G+ 球菌第二十五張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月顯微鏡下的桿菌G-桿菌Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells第二十六張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月痰標(biāo)本涂片染色低倍鏡下分類 分級(jí) 白細(xì)胞（個(gè)） 上皮細(xì)胞（個(gè)） A 25 25 25 C 25A、B兩種情況的痰適合做培養(yǎng)，C不合格，應(yīng)重新留標(biāo)本第二十七張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月革蘭染色注意事項(xiàng)標(biāo)本涂片不宜太厚固定不宜過(guò)熱脫色不宜

9、過(guò)度選用培養(yǎng)18-24小時(shí)菌齡的細(xì)菌為宜第二十八張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月抗酸染色原理：分枝桿菌細(xì)胞壁含脂質(zhì)較多,其中主要成分為分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色時(shí)與石炭酸復(fù)紅結(jié)合牢固,能抵抗酸性乙醇的脫色作用,因此抗酸菌能保持復(fù)紅的顏色,達(dá)到染色目的。第二十九張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 抗酸染色步驟 1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片 干燥 固定第三十張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月抗酸染色步驟2、染色包括初染、脫色、復(fù)染三步。 石炭酸復(fù)紅維持 3-5 3%鹽酸酒精30 1 美藍(lán)復(fù)染1 沖洗 干燥 油鏡觀察沖洗沖洗初染脫色復(fù)染第三十一張，PPT共五

10、十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月抗酸染色結(jié)果抗酸菌呈紅色，常堆積成團(tuán)，排列無(wú)序，偶呈分枝狀生長(zhǎng)。背景及非抗酸性細(xì)菌呈蘭色。第三十二張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月抗酸桿菌報(bào)告300個(gè)視野僅見(jiàn)到18條抗酸桿菌填寫條數(shù)1+：鏡檢查見(jiàn)3-9條抗酸桿菌/100高倍鏡視野2+：鏡檢查見(jiàn)19條抗酸桿菌/10高倍鏡視野3+：鏡檢查見(jiàn)1-9條抗酸桿菌/高倍鏡視野4+:鏡檢查見(jiàn)9條抗酸桿菌/高倍鏡視野第三十三張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月抗酸染色注意事項(xiàng)染色充分脫色時(shí)間寧長(zhǎng)勿短在涂抹痰標(biāo)本時(shí)嚴(yán)禁對(duì)載玻片進(jìn)行加熱第三十四張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月臨床標(biāo)本培養(yǎng)基選擇生殖道標(biāo)本根據(jù)臨

11、床醫(yī)生所寫的檢驗(yàn)項(xiàng)目接種相應(yīng)的平板及操作： 淋球菌培養(yǎng)接種淋球菌平板;念珠菌培養(yǎng)接種沙保羅培養(yǎng)基；支原體培養(yǎng)則按支原體培養(yǎng)的操作規(guī)程操作；作普通培養(yǎng)則接種血平板和巧克力平板 第三十五張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月觀察細(xì)菌在平板上的生長(zhǎng)現(xiàn)象血平板：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤(rùn)度、黏度、溶血性mac平板：大小、形狀、顏色、透明度、濕潤(rùn)度、黏度巧克力平板：大小、形狀、顏色、透明度、濕潤(rùn)度、黏度第三十六張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1137 革蘭陰性菌 葡萄球菌第三十七張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)菌的初步分類細(xì)菌的分離與純化：自血平板

12、挑出待檢菌株的單菌落進(jìn)行初步的鑒定。如果混有雜菌，應(yīng)該重新轉(zhuǎn)種分純。染色與鏡檢： 首先通過(guò)革蘭氏染色確定基本的分類：（1）G+球菌（2）G-球菌（3）G-桿菌（4）G+桿菌。此外，如果鏡下發(fā)現(xiàn)革蘭氏染色陽(yáng)性、橢圓形、有芽孢狀的較大菌體，可能是真菌。第三十八張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月金黃色葡萄球菌最重要的致病葡萄球菌血平板上菌落有明顯溶血環(huán)，顏色呈金黃色、灰白色或檸檬色分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖和甘露醇血漿凝固酶和DNA酶陽(yáng)性 第三十九張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第四十張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1141葡萄球菌第四十一張，PPT共五十九頁(yè)

13、，創(chuàng)作于2022年6月第四十二張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第四十三張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月念珠菌顯色培養(yǎng)基綠色白色念珠菌藍(lán)色熱帶念珠菌白色其他，細(xì)菌被抑制紫色光滑粉色克柔假絲酵母菌第四十四張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第四十五張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第四十六張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月嗜血桿菌的鑒定途徑只能在營(yíng)養(yǎng)條件高的巧克力平板上生長(zhǎng)，菌落為中等大小、圓形、灰白色、透明革蘭染色：G-小桿菌衛(wèi)星實(shí)驗(yàn)就可以幫助初步鑒定第四十七張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1148嗜血桿菌第四十八張，PPT共五十

14、九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月奈瑟氏菌屬鑒定在血平板和巧克力平板上生長(zhǎng)，mac上不生長(zhǎng)血平板形成灰色、濕潤(rùn)、透明或半透明、不溶血的菌落巧克力平板上形成圓形、灰藍(lán)色的似露滴狀菌落革蘭染色： G-雙球菌，呈腎形或咖啡豆形，凹面相對(duì)氧化酶和觸酶都均為陽(yáng)性第四十九張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 奈瑟氏菌屬有11個(gè)種，臨床就淋病奈 菌和腦膜炎奈瑟菌 最為重要第五十張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月奈瑟氏菌屬鑒定流程 菌落觀察：灰色、濕潤(rùn)、透明或半透明、不溶血 涂片染色：G-雙球菌，呈腎形或咖啡豆?fàn)?氧化酶試驗(yàn)+ 觸酶+ + 麥芽糖 - 腦膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌第五十一張，PPT共五十九頁(yè)

15、，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)菌的鑒定與藥敏第五十二張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月衛(wèi)生部重點(diǎn)監(jiān)控的6種MDRO MASA:耐甲氧西林金黃色葡萄球菌判斷標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)苯唑西林耐藥或頭孢西丁誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性CRAB：耐碳青霉烯鮑曼不動(dòng)桿菌判斷標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)亞胺培南或美羅培南耐藥 VER：耐萬(wàn)古霉素腸球菌判斷標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥第五十三張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月ESBLs：產(chǎn)超廣譜內(nèi)酰胺酶細(xì)菌。包括：大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌等判斷標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)第3代和第4代頭孢菌素和氨曲南耐藥CRE:耐碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌判斷標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)亞胺培南等碳青霉烯類耐藥MDR/XDROA:多重耐藥/泛耐藥銅綠假單胞菌判斷標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)亞胺培南等碳青霉烯類耐藥第五十四張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月臨床常見(jiàn)問(wèn)題痰涂片與痰培養(yǎng)結(jié)果不一致？ 培養(yǎng)和涂片選擇的痰液不同；標(biāo)本采集時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，部分苛養(yǎng)菌死亡；選擇藥敏結(jié)果敏感的藥物，臨床治療無(wú)效？ 體外藥敏試驗(yàn)只能預(yù)測(cè)體內(nèi)治療效果，并不等同；一般來(lái)說(shuō)，耐藥=治療無(wú)效，敏感治療有效第五十五張，PPT共五十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月今天培養(yǎng)結(jié)果與前天結(jié)果不一樣？1）取材是否規(guī)范？2）痰標(biāo)本有時(shí)候選擇優(yōu)勢(shì)菌做，可能結(jié)果 不一樣3）