細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定

1、關(guān)于細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定第一張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月一 培養(yǎng)基的制備步驟：1 稱量藥品 2 溶解3 調(diào)節(jié)PH5 過濾分裝6 包扎標(biāo)記7 滅菌第二張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月二 消毒滅菌法物理滅菌法： 干熱滅菌法：150-170 維持 1-2h； 高壓蒸汽滅菌法121（101.53kPa）15-30min； 其他：過濾除菌法、紫外線滅菌法。化學(xué)滅菌法：主要使用一些化學(xué)消毒劑進(jìn)行，如：75酒精、1的新潔爾滅等。 第三張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月三 細(xì)菌的分離、接種與培養(yǎng)細(xì)菌的分離方法： 稀釋法、平板分區(qū)劃線法。細(xì)菌的接種方法： 斜面培養(yǎng)基接種法、液體培

2、養(yǎng)基接種法、穿刺接種法、傾注平板法、平板涂布法。細(xì)菌的培養(yǎng)方法： 需氧培養(yǎng)法 CO2培養(yǎng)法 厭氧培養(yǎng)法第四張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月3.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)方法連續(xù)稀釋法平板分區(qū)劃線 分區(qū)劃線分離法：此法常用于含菌量較多的標(biāo)本如混合細(xì)菌的分離。 連續(xù)劃線分離法：此法常用于含菌量不多的標(biāo)本或培養(yǎng)物中的細(xì)菌分離培養(yǎng) 第五張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月第六張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月1區(qū)2區(qū)3區(qū)4區(qū)1234平板分區(qū)劃線法（學(xué)生操作）第七張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月注意事項劃完前一區(qū)后，需重新灼燒接種環(huán)后再進(jìn)行下一區(qū)的劃線。相鄰兩區(qū)要有重疊區(qū)域。結(jié)

3、果觀察：觀察各區(qū)的生長情況，并看是否有單一菌落長出；菌落的形態(tài)、顏色、大小、邊緣、透明度都需記錄。第八張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月平皿送37溫箱培養(yǎng)24小時結(jié)果(要求)兩種單個菌落分四區(qū)無雜菌瓊脂不破第九張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月第十張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月3.2 細(xì)菌的接種斜面接種法 該法主要用于單個菌落的純培養(yǎng)、 保存菌種或觀察細(xì)菌的某些特性。 液體接種法 多用于一些液體生化試驗管或發(fā)酵的接種。穿刺接種法 此法主要用于半固體培養(yǎng)基、明膠 及雙糖管的接種。第十一張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月(1) 斜面瓊脂培養(yǎng)基接種法（2人一組）

4、大腸埃希菌/枯草芽孢桿菌/葡萄球菌送培養(yǎng)24小時(2支/組)一組 37溫箱一組 60溫箱一組 4 冰箱用接種環(huán)挑菌后在斜面表面劃折線第十二張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月(2) 液體培養(yǎng)基接種法（2人一組）1. 菌種 (任選一種）大腸埃希菌/枯草芽孢桿菌/葡萄球菌2. 接種每一菌種分別接種pH5.0 / 7.2 / 9.0的營養(yǎng)肉湯各一支3. 送37溫箱培養(yǎng)24小時第十三張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月液體培養(yǎng)基沉淀生長混濁生長表面生長第十四張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月(3) 瓊脂半固體接種法 （1人一份）1. 菌種大腸埃希菌/枯草芽孢桿菌/葡萄球菌2. 接種

5、用接種針穿刺接種3. 送37溫箱 培養(yǎng)24小時第十五張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月3.半固體培養(yǎng)法觀察細(xì)菌是否有動力1、3：有動力： 呈云霧狀2：無動力： 沿穿刺線生長，并變粗第十六張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月四、細(xì)菌的生化反應(yīng)1 糖發(fā)酵試驗(Fermentation of sugars) 2 IMViC 試驗靛基質(zhì)產(chǎn)生試驗（吲哚試驗）甲基紅試驗V-P試驗枸櫞酸鹽利用試驗3 硫化氫產(chǎn)生試驗4 尿素分解試驗第十七張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 糖發(fā)酵試驗 不同細(xì)菌分解糖類的能力和代謝產(chǎn)物不同。例如大腸桿菌能發(fā)酵葡萄糖和乳糖；而痢疾桿菌可發(fā)酵葡萄糖，但不能發(fā)酵

6、乳糖。即使兩種細(xì)菌均可發(fā)酵同一糖類，其結(jié)果也不盡相同，如大腸桿菌有甲酸脫氫酶，能將葡萄糖發(fā)酵生成的甲酸進(jìn)一步分解為CO2和H2，故產(chǎn)酸并產(chǎn)氣；而痢疾桿菌缺乏該酶，發(fā)酵葡萄糖僅產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。第十八張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月吲哚（靛基質(zhì)）試驗(Production of indole) 有些細(xì)菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而產(chǎn)生靛基質(zhì)，靛基質(zhì)無色，不能直接查見，此時滴加數(shù)滴吲哚試劑于培養(yǎng)基的液面上，上層呈玫瑰紅色者為陽性，仍呈黃色者為陰性。第十九張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 甲基紅（methyl red）試驗 將細(xì)菌接種于葡萄糖蛋白胨水中，37培養(yǎng)48h后，再向

7、其中加入甲基紅試劑3滴。 大腸桿菌等細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，但丙酮酸不被縮合成乙酰甲基甲醇，而轉(zhuǎn)化成甲酸、乙酸等酸性物質(zhì)，培養(yǎng)基中酸多，pH值低，故呈紅色，為陽性。 而產(chǎn)氣桿菌將丙酮酸縮合成乙酰甲基甲醇，培養(yǎng)基中酸少，pH值高，故呈黃色，為陰性。 第二十張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 VP（Voges-Proskauer）試驗 大腸桿菌和產(chǎn)氣大腸桿菌均能發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，兩者不能區(qū)別。但產(chǎn)氣桿菌能使丙酮酸脫羧生成中性的乙酰甲基甲醇，后者在堿性溶液中被氧化生成二乙酰，二乙酰與含胍基化合物反應(yīng)生成紅色化合物，是為VP試驗陽性。大腸桿菌不能生成乙酰甲基甲醇，故VP試驗陰性，第二十一

8、張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月枸櫞酸鹽利用試驗(Utilization of citrate) 將細(xì)菌接種于枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上，37培養(yǎng)48h。產(chǎn)氣桿菌等細(xì)菌能利用枸櫞酸鹽作為碳源，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，培養(yǎng)基中的指示劑（溴麝香草酚藍(lán)）由淡綠色轉(zhuǎn)為深藍(lán)色，為枸櫞酸鹽利用試驗陽性。大腸桿菌則不能分解枸櫞酸鹽，培養(yǎng)基顏色不變，為陰性。 第二十二張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月硫化氫產(chǎn)生試驗(Production of H2S) 將細(xì)菌穿刺接種于醋酸鉛培養(yǎng)基中，37培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。有些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸，生成硫化氫，穿刺部位呈黑褐色，是為反應(yīng)陽性。培養(yǎng)基顏色無變化，則為陰性。第二十三張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月尿素分解試驗(Splitting of urea) 將細(xì)菌接種于尿素培養(yǎng)基中，37培養(yǎng)1824h。變形桿菌能迅速(24h)分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基變堿而呈紫紅色，是為陽性反應(yīng)。 第二十四張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 實(shí)驗后處理將接種針和接種環(huán)放