第十三周周三化學(xué)實驗の8紙層析

1、紙層析1 實驗?zāi)康?了解紙層析的基本原理2 掌握紙層析的基本操作技術(shù)2 實驗原理紙層析：濾紙作為載體；固定相為紙纖維上吸附的水 分；流動相為與水不相混溶的有機溶劑。 把試樣點在濾紙的原點位置上，當(dāng)流動相溶 劑在濾紙的毛細管作用下，連續(xù)不斷地沿著 濾紙前進通過原點時，試樣中各組分便隨著 流動相溶劑向前移動，并在流動相和固定相 溶劑之間連續(xù)發(fā)生一次又一次的分配。色譜法(Chromatography) ：混合物中各組分在流動相與固定相間的分配比不同而使之分離 3結(jié)果，分配比較大的物質(zhì)移動速度較快，移動的距離較遠；分配比較小的物質(zhì)移動速度慢，移動的距離較近。這樣，便把試樣中各組分分開聚集在濾紙的不同位

2、置上。這種分離過程叫展開。因此，流動相溶劑又叫做展開劑。當(dāng)分離的物質(zhì)是有色的，如甲基橙，層析后在濾紙上可以直接看出它的色斑。當(dāng)分離的是無色的物質(zhì)，如氨基酸，就必須用顯色劑使之顯色。無色的氨基酸可以用茚三酮使之顯紅色，所用的茚三酮就是顯色劑。ABA+B4樣品經(jīng)層析展開后，被分離的各化合物可通過它的Rf值（比移值）來鑒定。lmnABA+BRf值隨各化合物的結(jié)構(gòu)、濾紙的種類、展開劑、溫度的不同而異。但在上述條件固定的情況下，對于某一化合物來說， Rf值是一個常數(shù)。故Rf值可作為定性鑒定的依據(jù)。5儀器：層析缸層析濾紙直尺鉛筆毛細管電吹風(fēng)試劑：展開劑： 正丁醇:醋酸:乙醇:水 = 4:1:1:2顯色劑:

3、 1%茚三酮丙酮溶液樣品: 丙氨酸(2%)乙醇溶液 丙氨酸(2%)和亮氨酸(2%)混合溶液丙氨酸：亮氨酸：實驗儀器與試劑61、準備在距濾紙一端約2cm處用鉛筆輕輕劃一橫線作起點線，并在橫線上標(biāo)上A、B兩點。 注意：A、B兩點不要太靠近濾紙邊緣，以免產(chǎn)生邊緣效應(yīng)。在準備過程中手不要接觸濾紙中部。AB 實驗步驟72、點樣用毛細管吸取已準備好的樣品，毛細管垂直于紙面在標(biāo)有A、B記號處，分別點兩個樣品，其中一個是丙氨酸樣品，另一個是丙氨酸和亮氨酸的混合液。風(fēng)干，按上述方法重復(fù)一次。 注意：點的樣直徑不超過3mm，動作要輕，點一個樣風(fēng)干后再點另一個樣。AB84、顯色用裝有顯色劑溶液的噴霧器，在濾紙已展開

4、部分均勻噴上茚三酮溶液，然后用電吹風(fēng)吹干溶劑，再用熱風(fēng)吹濾紙條，直至濾紙條上有紫紅色斑點出現(xiàn)。5、結(jié)果處理找出濾紙條上有幾個斑點，并能辨認出各個斑點是由哪一個氨基酸顯現(xiàn)的。用鉛筆劃出斑點的輪廓，標(biāo)出斑點的中心，最后分別計算丙氨酸和亮氨酸的Rf值。2+（-H3O+）+ RCHO + CO2紫紅色9 實驗數(shù)據(jù)Rf =原點至層析斑點中心的距離原點至展開劑前沿的距離計算 Rf 測 = ？nml103、展開將已點樣的濾紙垂直掛于帶有小鉤的層析缸蓋上，使濾紙下端浸入展開劑中。當(dāng)展開劑的前沿位置達到距濾紙上端約12cm處時，小心取出濾紙趁濕用鉛筆劃出展開劑前沿位置，然后用電吹風(fēng)吹干。 注意：展開劑不要淹沒濾紙上起點線，在起點線下1cm左右；起點線應(yīng)與展開劑液面平行；濾紙不要跟層析缸玻璃壁接觸；展開時層析缸封閉。11注意事項實驗過程中手不要接觸濾紙中部。實驗成敗決定于點樣的好壞，要求點的樣直徑不超過3mm。展開劑不要淹沒濾紙上起點線；起點線應(yīng)與展開劑液面平行；濾紙不要跟層析缸玻璃壁接觸；展開時層析缸封閉。分別計算丙氨酸和亮氨酸的Rf值每人單獨操作，樣品層析濾紙附在實驗報告上。121、Rf值的意義是什么？哪些因素會影響Rf值？2、在紙層析時，層析缸