同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科ISO15189體系文件03痰標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)

1、同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物組項(xiàng)目操作指導(dǎo)書TJYYJYKWSW/XMZ103第2版標(biāo)題：痰標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)第1章 第03號(hào)第 PAGE 5 頁(yè) 共 NUMPAGES 5 頁(yè)1 概述：痰培養(yǎng)主要針對(duì)下呼吸道感染病原菌的調(diào)查。正常人體的下呼吸道是無(wú)菌的，上呼吸道有正常菌群棲居。因下呼吸道分泌物須經(jīng)上呼吸道排出，常受該處的正常菌群的污染，因此，判斷下呼吸道的分泌物中是否有病原菌存在，須對(duì)上呼吸道的正常菌群有所了解。1.1 常居菌群 上呼吸道棲居菌群主要有：、溶血鏈球菌，微球菌，奈瑟菌（致病菌除外），嗜血桿菌（致病菌除外），表皮葡萄球菌，類白喉棒狀桿菌，擬桿菌，梭桿菌，厭氧球菌等。1.2 下呼吸

2、道感染常見(jiàn)病原菌，見(jiàn)表1。表1 下呼吸道感染常見(jiàn)病原菌革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌肺炎鏈球菌，A群鏈球菌,金黃色葡萄球菌，結(jié)核分枝桿菌，厭氧球菌，白喉棒狀桿菌，放線菌，奴卡菌卡他布蘭漢菌，腦膜炎奈瑟菌，流感嗜血桿菌，假單胞菌，鼠疫耶爾森菌，肺炎克雷伯菌，腸桿菌，嗜肺軍團(tuán)菌2 病人準(zhǔn)備和標(biāo)本采集 采集晨痰。先讓患者用清水漱口，囑患者用力自氣管深部咳出痰液，置無(wú)菌容器內(nèi)送檢。應(yīng)盡可能防止唾液及鼻咽部分泌物混入樣品。3 培養(yǎng)基與試劑3.1 綿羊血瓊脂平板，上海江南生物技術(shù)工程有限公司產(chǎn)品。3.2 麥康凱瓊脂平板，由上海市疾病控制中心生產(chǎn)的干粉培養(yǎng)基按說(shuō)明配制。3.3 巧克力瓊脂平板，上海伊華科技有限公司產(chǎn)品

3、。3.4 革蘭染液，本室自配。4 標(biāo)本處理：4.1 直接涂片檢查：挑取血性或膿性部分少許制成涂片。4.1.1 低倍鏡下觀察白細(xì)胞和鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)，確定標(biāo)本是否適合做細(xì)菌培養(yǎng)，見(jiàn)表2。表2 痰培養(yǎng)標(biāo)本細(xì)胞學(xué)篩查參考標(biāo)準(zhǔn)（低倍鏡視野）白細(xì)胞鱗狀上皮細(xì)胞評(píng)價(jià)252510-25適合做細(xì)菌培養(yǎng)252525不適合做細(xì)菌培養(yǎng),應(yīng)重送標(biāo)本10-252525不適合做細(xì)菌培養(yǎng),應(yīng)重送標(biāo)本不適合做細(xì)菌培養(yǎng),應(yīng)重送標(biāo)本4.1.2 革蘭染色： 涂片自然干燥,行革蘭染色后鏡檢,根據(jù)細(xì)菌形態(tài)排列和染色性報(bào)告。例：“找到革蘭陽(yáng)性球菌，形似葡萄球菌”。4.2 分離培養(yǎng)：標(biāo)本接種綿羊血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、巧克力瓊脂平板，置

4、35、5% CO2 培養(yǎng)18-24小時(shí),觀察結(jié)果；有些細(xì)菌生長(zhǎng)較慢，可延長(zhǎng)培養(yǎng)一天后觀察。4.3 抗酸菌涂片及培養(yǎng)：參見(jiàn):“抗酸菌檢驗(yàn)操作規(guī)程”。5 結(jié)果觀察：5.1 先看巧克力平板上的生長(zhǎng)情況，有無(wú)無(wú)色透明樣小菌落，氧化酶陽(yáng)性，疑似“嗜血桿菌”，作菌種鑒定和藥敏試驗(yàn)，參見(jiàn)“細(xì)菌鑒定操作規(guī)程”。5.2 觀察血平板及麥康凱瓊脂平板有無(wú)可疑致病菌菌落，可視需要作菌落涂片觀察，作菌種鑒定和藥敏試驗(yàn)，參見(jiàn)“細(xì)菌鑒定操作規(guī)程”。6 報(bào)告方式 痰中的病原菌不少屬于機(jī)會(huì)致病菌，與正常菌群同在，在報(bào)告中應(yīng)作說(shuō)明。對(duì)于機(jī)會(huì)致病菌，一般僅當(dāng)其數(shù)量超過(guò)正常菌群時(shí)才可報(bào)告鑒定結(jié)果及其藥敏試驗(yàn)結(jié)果。 檢出致病菌時(shí)，除報(bào)

5、告該菌的鑒定名稱外，還需同時(shí)報(bào)告正常菌群的情況 ，以報(bào)告草綠色鏈球菌和奈瑟菌作為正常菌存在的指標(biāo)。檢出的機(jī)會(huì)致病菌以及致病菌注明其所占比例，以“+”表示，判定方法見(jiàn)表3，如：甲型鏈球菌 3+，肺炎克雷伯菌2+；未檢出致病菌時(shí)，應(yīng)報(bào)告“正常菌群”。表3 痰標(biāo)本在血平板上的菌落量化指標(biāo)分級(jí)劃線區(qū)菌落數(shù)目第1區(qū)第2區(qū)第3區(qū)微量(+)1010510557 操作流程： 痰液 肉眼觀察：顏色、性狀 分離培養(yǎng) 涂片檢查 血瓊脂平板 巧克力平板 麥康凱平板 35、5% CO2 培養(yǎng) 觀察菌落和涂片染色鏡檢 選擇生化鑒定試驗(yàn) 藥敏試驗(yàn) 報(bào)告 臨床意義：痰標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)對(duì)下呼吸道感染性疾病的診斷、治療有重要意義，主要在于診斷病原菌，提供藥敏試驗(yàn)結(jié)果，指導(dǎo)臨床合理用藥。9 注意事項(xiàng)：9.1 痰液標(biāo)本的采集以晨痰為佳，咳前充分漱口，減少口腔正常菌的污染。9.2 患者接受抗菌素治療，使有關(guān)細(xì)菌受到抑制，可影響標(biāo)本的陽(yáng)性率，因此最好在用藥前 采集標(biāo)本。9.3 報(bào)告結(jié)果時(shí)，注意區(qū)分正常菌群、條件致病菌及致病菌。10 支氣管肺泡灌洗液( BAL) 標(biāo)本處理10.1 用Vortes 混勻30-60秒，先作涂片，革蘭染色鏡檢，上皮細(xì)胞數(shù)1%時(shí)，表明未受上呼吸道污染。10.2 用定量接種環(huán)(1ul )接種血平板，涂布均勻，另外接種一塊血平板，巧克力平板和麥康凱平板，35，5%CO2培養(yǎng)