反相高效液相色譜法測(cè)定鼻炎滴劑中綠原酸和黃芩苷的含量

1、反相高效液相色譜法測(cè)定鼻炎滴劑中綠原酸和黃芩苷的含量【摘要】目的建立測(cè)定鼻炎滴劑中綠原酸和黃芩苷含量的方法。方法采用RP-HPL法，色譜柱為DiansilT18(2504.6,5)柱,以甲醇-水-磷酸(52480.1)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)320n,流速為1.0lin-1。結(jié)果綠原酸在4.3034.40gl-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程為：A=127.3-4.396，r=0.9999,平均回收率102.1%，RSD=0.94%;黃芩苷在15.52108.64gl-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程為：A=38.15+55.1，r=0.9997,平均回收率100.8%，RSD=1.4%。結(jié)論該法靈敏、

2、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,可用于鼻炎滴劑的質(zhì)量控制。【關(guān)鍵詞】鼻炎滴劑;綠原酸;黃芩苷;反相高效液相色譜Abstrat：bjetiveTestablishaethdfrdeterinatinfhlrgeniaidandbaialininryzadrippingslutin.ethdsRP-HPLethdasused.ThelunasDiansilT18(2504.6,5),thebilephaseasethanl-ater-phsphriaid(52480.1),theflrateas1.0lin-1,thedetetinavelengthas320n.ResultsThelinearityfhlrgeni

3、aidasgdintherangef4.3034.40gl-1,regressequatinasA=127.3-4.396,r=0.9999,andaveragereveryrateas102.1%,RSD=0.94%;thelinearityfbaialinasgdintherangef15.52108.64gl-1,regressequatinasA=38.15+55.1，r=0.9997,averagereveryrateas100.8%,RSD=1.4%.nlusinTheethdissensitive,siple,aurate,andanbeusedfrthequalityntrlf

4、ryzadrippingslutin.Keyrds：ryzadrippingslutin;hlrgeniaid;Baialin;RP-HPL鼻炎滴劑是中西復(fù)方溶液制劑(噴霧劑)，收載于?衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)?中藥成方制劑第十八冊(cè)，屬中藥保護(hù)品種，主要成分為金銀花提取液、辛夷油、冰片、黃芩苷、鹽酸麻黃堿等，具有散風(fēng)、清熱、通竅之功能，臨床用于風(fēng)熱蘊(yùn)肺型急、慢性鼻炎1。原標(biāo)準(zhǔn)中只用薄層法鑒別辛夷油，分光光度法測(cè)定黃芩苷。鼻炎滴劑的質(zhì)量控制，有報(bào)道用鹽酸麻黃堿作為質(zhì)量控制指標(biāo)，用G法測(cè)定其含量2;還有用薄層法鑒別鼻炎滴劑中的金銀花和鹽酸麻黃堿，HPL法測(cè)定黃芩苷的質(zhì)量控制方法3。用其中綠原酸和黃芩苷兩種活

5、性成分作為質(zhì)量控制指標(biāo)的方法目前未見(jiàn)報(bào)道。本文研究建立了同時(shí)測(cè)定鼻炎滴劑中綠原酸和黃芩苷含量的反相高效液相色譜法，對(duì)控制鼻炎滴劑的質(zhì)量具有一定意義。1儀器和試劑Agilent1200全自動(dòng)高效液相色譜儀(四元泵、柱溫箱、自動(dòng)控溫進(jìn)樣器、紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器)。Agilent化學(xué)工作站。JA1203A型電子天平(上海精細(xì)科學(xué)儀器);TQ-250超聲波清洗器(北京醫(yī)療設(shè)備二廠)。化學(xué)對(duì)照品:綠原酸(中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)：110753-200212),黃芩苷(中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)：110715-202214)。供試品:鼻炎滴劑(市售規(guī)格：10l/瓶,廣東佛山

6、德眾藥業(yè)消費(fèi)：批號(hào)06001、07015、07062)。試劑：甲醇(進(jìn)口色譜純),磷酸(優(yōu)質(zhì)純),重蒸水(自制)。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱:DiansilT(鉆石)18(2504.6,5);流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸(52480.1);流速：1.0lin-1;柱溫：30;檢測(cè)波長(zhǎng)：320n;進(jìn)樣量：20l。在上述色譜條件下，綠原酸和黃芩苷的色譜峰與相鄰峰的別離度均大于2，理論塔板數(shù)以綠原酸計(jì)算大于3000。經(jīng)紫外檢測(cè)器檢測(cè)，供試品中綠原酸和黃芩苷的保存時(shí)間與對(duì)照品一致(見(jiàn)色譜圖1)。A.對(duì)照品B.鼻炎滴劑.陰性對(duì)照1.綠原酸2.黃芩苷?qǐng)D1對(duì)照品和鼻炎滴劑HPL圖2.2對(duì)照品溶液制備精細(xì)稱取

7、綠原酸對(duì)照品2.15g，黃芩苷對(duì)照品3.88g，分別置25l量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度。綠原酸對(duì)照品溶液的濃度為每毫升含86.0g，黃芩苷對(duì)照品溶液的濃度為每毫升含155.2g。2.3供試品溶液的制備精細(xì)量取鼻炎滴劑1.0l置10l量瓶中,加50%甲醇稀釋到刻度,搖勻,用0.45微孔濾膜過(guò)濾,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精細(xì)量取綠原酸對(duì)照品溶液,加50%甲醇制成綠原酸濃度分別為4.30，8.60，12.90，17.20，21.50，25.80，30.10，34.40gl-1的對(duì)照品溶液。精細(xì)量取黃芩苷對(duì)照品溶液,加50%甲醇制成黃芩苷濃度分別為15.52，31.04，46

8、.56，62.08，93.12，108.64gl-1的對(duì)照品溶液。按上述色譜條件,進(jìn)樣20l,記錄色譜峰面積。以峰面積A對(duì)濃度(gl-1)進(jìn)展線性回歸,求得回歸方程為：綠原酸：A=127.3-4.3964，r=0.9999;黃芩苷：A=38.15+55.1，r=0.9997。綠原酸的線性范圍為4.3034.40gl-1;黃芩苷的線性范圍為15.52108.64gl-1。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.5精細(xì)度實(shí)驗(yàn)按上述色譜條件,取線性關(guān)系項(xiàng)下對(duì)照品溶液,取20l進(jìn)樣,連續(xù)進(jìn)樣5次，綠原酸峰面積的RSD為0.07%，黃芩苷峰面積的RSD為0.13%，結(jié)果說(shuō)明精細(xì)度良好。2.6陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)按處方和工藝自

9、配不含金銀花和黃芩苷的陰性制劑，再按供試品制備方法制備溶液并測(cè)定，結(jié)果陰性溶液在綠原酸和黃芩苷對(duì)照品一樣保存時(shí)間處未出現(xiàn)色譜峰，故認(rèn)為無(wú)干擾。2.7穩(wěn)定性和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取同一供試液，每2h進(jìn)樣20l，結(jié)果在12h內(nèi)綠原酸峰面積的RSD為0.52%;黃芩苷峰面積的RSD為0.37%。說(shuō)明樣品至少在12h內(nèi)穩(wěn)定。取同一批號(hào)(06001)的鼻炎滴劑，按供試品溶液制備方法制備5份供試品溶液，各進(jìn)樣20l，測(cè)得綠原酸的平均含量為0.2658gl-1(RSD=0.61%);黃芩苷的平均含量為21.41gl-1(RSD=0.55%)。2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)綠原酸回收率的測(cè)定：精細(xì)汲取含量的樣品(2022015)

10、0.84l，置10l量瓶中，平行7份，分別參加綠原酸對(duì)照品溶液0.80，0.84，0.88，0.92，0.96，1.0，1.04l，用50%甲醇稀釋至刻度,搖勻。按樣品的測(cè)定方法測(cè)定，按標(biāo)準(zhǔn)參加法計(jì)算回收率。黃芩苷回收率的測(cè)定：精細(xì)汲取含量的樣品(2022015)0.1l置100l量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻(濃度為20.87gl-1)。再精細(xì)汲取此液3.0l至10l量瓶中，平行7份，分別參加黃芩苷對(duì)照品溶液0.86，0.90，0.94，0.98，1.02，1.06，1.10l，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻。按樣品的測(cè)定方法測(cè)定，按標(biāo)準(zhǔn)參加法計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。2.9樣品的測(cè)定取一

11、種濃度的被測(cè)組分的對(duì)照溶液20l進(jìn)樣,取峰面積的平均值，與試樣液在一樣條件下進(jìn)樣所得峰面積用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。3討論在色譜條件的考察中，為使鼻炎滴劑中的綠原酸和黃芩苷與其它組分達(dá)完全別離，曾對(duì)流動(dòng)相的組成和比例進(jìn)展了探究，采用甲醇-水-冰醋酸(25751)作流動(dòng)相，黃芩苷在50in內(nèi)不出峰;用甲醇-水-磷酸(43570.3)作流動(dòng)相，綠原酸和相鄰雜峰別離度1.5;增加流動(dòng)相中甲醇的比例，綠原酸和相鄰雜峰的別離度逐漸增大，當(dāng)采用甲醇-水-磷酸(52480.1)作流動(dòng)相時(shí)，綠原酸和黃芩苷的色譜峰與相鄰峰的別離度均大于2,且峰形好,應(yīng)選擇甲醇-水-磷酸(52480.1)作為流動(dòng)相。表1

12、方法的回收率表2鼻炎滴劑的測(cè)定結(jié)果經(jīng)紫外檢測(cè)，綠原酸的最大吸收波長(zhǎng)為324n，黃芩苷的最大吸收波長(zhǎng)為278n。鼻炎滴劑中綠原酸和黃芩苷的含量相差懸殊，為進(jìn)步含量低的綠原酸的檢測(cè)靈敏度，我們?cè)x擇綠原酸的最大吸收波長(zhǎng)324n作為檢測(cè)波長(zhǎng)，但黃芩苷的峰形不好，經(jīng)屢次試驗(yàn)，選擇接近綠原酸的最大吸收波長(zhǎng)且黃芩苷又有一定吸收的320n作為檢測(cè)波長(zhǎng)。在回收率的測(cè)定中，我們?cè)诤康臉悠分型瑫r(shí)定量參加綠原酸和黃芩苷的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按標(biāo)準(zhǔn)參加法同時(shí)測(cè)定兩組份的回收率，但因制劑中黃芩苷的含量比綠原酸高得多，黃芩苷的參加量較小，故測(cè)定誤差較大。兩組份的回收率按標(biāo)準(zhǔn)參加法分別測(cè)定，得到了滿意結(jié)果。本文建立的RP-HPL法可以同時(shí)測(cè)定鼻炎滴劑中綠原酸和黃芩苷的含量，即可用這兩種活性成分作為質(zhì)量控制指標(biāo)。與衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)相比，既增加了質(zhì)量控制指標(biāo)成分，又克制了分光光度法影響因素多、測(cè)定誤差大的缺點(diǎn)。此法專屬