反相高效液相色譜法測定炎可寧中黃芩苷的含量

1、反相高效液相色譜法測定炎可寧中黃芩苷的含量【關(guān)鍵詞】反相高效液相色譜法；,炎可寧；,黃芩苷摘要：目的測定炎可寧中有效成分-黃芩苷的含量。方法反相高效液相色譜法：色譜柱為Krasil18(4.6150,5)；流動相為甲醇-水-磷酸60400.2；檢測波長：280n；流速：1.0lin-1；柱溫：30。結(jié)果建立了對炎可寧片中黃芩苷進(jìn)展定量的測定方法，并將此方法用于3個不同廠家消費的炎可寧片中黃芩苷含量的測定。結(jié)論為中藥復(fù)方提供了更加簡便、合理、可靠的質(zhì)控方法。關(guān)鍵詞：反相高效液相色譜法；炎可寧；黃芩苷DeterinatinfBaialininYankeningbyRP-HPLAbstrat：bje

2、tiveTdeterinethebiativepundsntentfbaialininYankening.ethdsRP-HPL,Krasil18lun(4.6150,5)ithethanl-ater-phsphriaid(60400.2)asbilephase.Theflrateas1l/in,thelunteperatureas30anddetetinaseffeiveat280n.ResultsThisethdasappliedtdeterinebaialininYankeningprduedbydifferentfatriessuessfully.nlusinThisisarenven

3、ient,reasnableandrediblequalityntrlethdfrthehinesetraditinalediine.Keyrds：RP-HPL；Yankening；Baialin炎可寧為國家準(zhǔn)字號中成藥，由黃連、黃柏、板藍(lán)根、大黃、黃芩等5味中藥組成，主要用于清熱瀉火，消炎止粒作為處方中的主藥黃芩性苦寒，具有清熱燥濕，瀉火解毒，止血安胎的作用1，所含黃芩苷構(gòu)造式見圖1是一種黃酮類化合物，有抗炎、抗菌、解熱等作用2。以黃芩苷為定量監(jiān)控指標(biāo)可有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量。有關(guān)黃芩苷的含量測定方法有比色法3、分光光度法4、薄層掃描法5、高效液相色譜法6等。在?中國藥典?中對炎可寧中黃芩苷含量

4、的測定還沒有記載，本文研究了利用反相高效液相色譜法測定了3個不同廠家消費的炎可寧片中黃芩苷的含量。本法具有操作簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好等優(yōu)點，同時也為中藥復(fù)方提供了更加簡便、合理、可靠的質(zhì)控方法。1儀器與試劑美國aters公司高效液相色譜儀帶有aters1525液相泵，aters2996二極管陣列檢測器，超聲波清洗器KQ-250A，昆山市超聲波儀器廠，上皿電子天平FA2022，上海天平儀器廠，TG328B分析天平上海天平儀器廠，低速離心機(jī)北京醫(yī)用離心機(jī)廠。圖1黃芩苷構(gòu)造式略對照品：黃芩苷中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用。炎可寧片市售，甲醇天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，色譜純，無水乙醇沈陽新興試劑廠

5、，分析純，甲醇沈陽市合富化學(xué)試劑經(jīng)銷廠，分析純高錳酸鉀丹東市成功化工廠，二次蒸餾水自制。2方法與結(jié)果2.1溶液的制備對照品溶液的制備：精細(xì)稱量枯燥至恒重的黃芩苷對照品25g置于50l容量瓶中，用50甲醇進(jìn)展溶解，并超聲處理20in，水浴5010in，冷卻至室溫，再用50甲醇定容至50l，搖勻，即得0.5g/l的黃芩苷貯備液。準(zhǔn)確汲取貯備液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0l，分別置于10l容量瓶中，用50甲醇稀釋至刻度，所得對照品的濃度分別為25，50，100，150，200g/l。樣品溶液的制備：精細(xì)稱取除去糖衣的3個廠家的炎可寧樣品，參加甲醇30l，超聲處理20in，放置至室溫，再用離

6、心機(jī)以3500r/in的速度離心15in，取離心液5.0l，用甲醇稀釋至10l，即得樣品溶液。2.2色譜和檢測條件色譜柱：Krasil18分析柱(4.6150,5)；流動相：甲醇水磷酸60400.2；檢測波長：280n；流速：1.0lin-1；柱溫：30；進(jìn)樣體積：10l。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3線性關(guān)系的考察在上述條件下，黃芩苷分別在5個濃度點，平行測定3次均進(jìn)樣10l。以峰面積為縱坐標(biāo)，對照品濃度g/l為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示；回歸方程為：=2.986910-5A+4.08875,r=0.9995；黃芩苷在25200g/l范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.4精細(xì)度實驗精細(xì)汲取黃芩苷對

7、照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣體積為10l。測定峰面積分別為：5613129，5684194，5537458，5736715，5665029，5647305。RSD為1.3%。2.5回收率試驗取含量的樣品溶液1.0l，分別參加對照品溶液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0l，按樣品測定法，用上述色譜條件測定，所得結(jié)果見表1所示，說明回收率良好，滿足定量要求。表1加樣回收率實驗結(jié)果略2.6樣品中黃芩苷含量測定將樣品溶液經(jīng)0.45濾膜過濾直接進(jìn)樣，分別定量測定黃芩苷的含量。結(jié)果見表2。表23種炎可寧中黃芩苷的含量略三種樣品的色譜圖如圖25所示。圖2黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線略圖3樣品1的HPL圖略圖4樣品

8、2的HPL圖略圖5樣品3的HPL圖略3討論3.1由于黃芩苷在水和甲醇中的溶解度較小1，因此配制黃芩苷標(biāo)液時，其濃度不宜過大，為了加速溶解，最好經(jīng)超聲處理，而且要將樣品研細(xì)，并要不斷振蕩。3.2在配制黃芩苷標(biāo)樣的過程中，曾經(jīng)嘗試用不同的溶劑來溶解黃芩苷，分別為甲醇水冰醋酸47530.1，甲醇水磷酸60400.2，甲醇分析純，50甲醇，經(jīng)過比擬，得出由50甲醇溶解效果最好，由此而得的標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍最好。3.3流動相：以甲醇水冰醋酸47530.1和甲醇水磷酸60400.2進(jìn)展實驗比照，得出甲醇水磷酸60400.2的別離效果較滿意。3.4黃芩是炎可寧的主要成分，所含黃芩苷有抗炎、抗菌、解熱等作用。

9、因此以黃芩苷為定量監(jiān)控指標(biāo)可有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量。中成藥中黃芩苷的測定方法很多，如比色法、分光光度法、薄層掃描法、二階導(dǎo)數(shù)光譜法、高效液相色譜法等。本文利用高效液相色譜法測定炎可寧中黃芩苷的含量，通過線性關(guān)系的考察、精細(xì)度實驗、回收率實驗等一系列實驗，也證明了高效液相色譜法具有速度快、準(zhǔn)確性高、別離效果好等優(yōu)點，所得結(jié)果與炎可寧中黃芩苷實際含量根本一致。3.5?中國藥典?中對炎可寧中黃芩苷含量的測定沒有記載，有關(guān)對中成藥炎可寧中黃芩苷含量的測定至今未見報道。用本實驗方法測定了不同廠家消費的炎可寧片中黃芩苷的含量，結(jié)果也證明了此種方法的簡單、快捷、準(zhǔn)確,更合適制劑中黃芩苷含量測定。參考文獻(xiàn)：1國家藥典委員會.中國藥典S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000：248.2季宇琳.中藥有效成分藥理與應(yīng)用.哈爾濱：黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社，1995：60.3張乃吉，王健，趙嵐峰，等.茵梔華工內(nèi)注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的討論J.中成藥，1991，1311：11.4石淑琴