山銀花含量分析方法確認(rèn)方案

1、 9/15山銀花含量分析方法確認(rèn)方案方案編號：JYYZFA- 09 - 00起草 日期審核 日期批準(zhǔn) 日期上海松華藥業(yè)有限公司目 錄一、確認(rèn)方案概述 3二、確認(rèn)范圍和目的 3三、確認(rèn)組織及分工 3四、確認(rèn)進(jìn)度計(jì)劃 4五、前期準(zhǔn)備及確認(rèn)相關(guān)支持 4六、確認(rèn)方式 5七、確認(rèn)實(shí)施項(xiàng)目及內(nèi)容 5八、確認(rèn)過程及結(jié)果詳見此方案配套驗(yàn)證報(bào)告 11九、確認(rèn)過程偏差 11十、再確認(rèn)或驗(yàn)證時(shí)間及建議 11十一、附件 11附件1參加人員會簽及驗(yàn)證結(jié)論12附件2 驗(yàn)證小組培訓(xùn)記錄 13一、確認(rèn)方案概述:傳統(tǒng)中藥飲片山銀花為中國藥典長期收載品種，幾次藥典修訂此品種的含量測定方法及實(shí)驗(yàn)條件均未變動。采用HPLC-UV-E

2、LSD聯(lián)動測定山銀花中綠原酸 、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙的含量。根據(jù)GMP要求，企業(yè)應(yīng)對變更后的檢驗(yàn)方法進(jìn)行方法確認(rèn)，以確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠。為了確保此檢驗(yàn)條件的準(zhǔn)確性和符合性特依據(jù)中國藥典分析技術(shù)檢測技術(shù)指南及藥品GMP指南、2015版中國藥典四部、一部相關(guān)部分要求結(jié)合上海市食品藥品檢驗(yàn)所中藥室老師指導(dǎo)起草此確認(rèn)方案。對檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)，以確保產(chǎn)品質(zhì)量。二、確認(rèn)范圍和目的本方案適用于2015版中國藥典一部山銀花含量項(xiàng)下所涉及的相關(guān)內(nèi)容。1.通過確認(rèn)證明現(xiàn)行藥典所采用的方法適合于相應(yīng)的檢測要求，保證該方法在我公司實(shí)驗(yàn)室具有良好的適用性。2.確認(rèn)公司所配備硬件、軟件即實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備及人員

3、符合并熟練撐握此實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。3.確認(rèn)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本方案規(guī)定的內(nèi)容進(jìn)行，若因特殊原因確需變更時(shí)，應(yīng)填寫確認(rèn)方案變更申請及批準(zhǔn)，報(bào)驗(yàn)證小組批準(zhǔn)。三、確認(rèn)組織及分工姓名部門確認(rèn)分工李志勇質(zhì)量部負(fù)責(zé)對確認(rèn)中出現(xiàn)的問題提出指導(dǎo)意見，負(fù)責(zé)審核批準(zhǔn)報(bào)告。韓子佩QA部負(fù)責(zé)審核確認(rèn)方案、確認(rèn)報(bào)告。劉潤雅QC部負(fù)責(zé)起草確認(rèn)方案，協(xié)調(diào)確認(rèn)試驗(yàn)安排及實(shí)施，收集各項(xiàng)確認(rèn)、試驗(yàn)記錄，并起草確認(rèn)報(bào)告。協(xié)助完成試驗(yàn)徐婷、韓曉鳳QC部含量檢驗(yàn)方法確認(rèn)的實(shí)施。四、確認(rèn)進(jìn)度計(jì)劃2019年06月03日2019年06月30日五、前期準(zhǔn)備及確認(rèn)相關(guān)支持5.1方案培訓(xùn)參與本次方法確認(rèn)的人員均應(yīng)過該方案的培訓(xùn)，培訓(xùn)記錄表見附件。5.

4、2文件資料（1）相關(guān)SOP文件資料方法確認(rèn)所需文件序號文件名稱文件編號生效日期是/否現(xiàn)行版文件1島津高效液高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序是 否2CP124S電子天平標(biāo)準(zhǔn)操作程序是 否3Varian380-LC蒸發(fā)光散射器標(biāo)準(zhǔn)操作程序是 否4金銀花露檢驗(yàn)操作檢驗(yàn)規(guī)程是 否（2）所有與確認(rèn)有關(guān)的儀器、儀表、計(jì)量器具應(yīng)進(jìn)行過校驗(yàn)，并達(dá)到合格要求。儀器儀表檢定記錄序號儀器型號/名稱儀器編號校驗(yàn)日期是/否在有效期內(nèi)1島津高效液相色譜儀是 否2Varian380-LC蒸發(fā)光散射器標(biāo)準(zhǔn)操作程序是 否3CP124S電子天平是 否4BT 25 S精密電子天平是 否5容量瓶（ ）是 否6移液管（ ）是 否（3） 對照

5、品、供試品及試劑及耗材信息名稱批號來源取用量對照品綠原酸灰氈毛忍冬皂苷乙川續(xù)斷忍冬皂苷乙供試品山銀花山銀花試劑乙腈乙酸甲醇色譜柱六、確認(rèn)方式依據(jù)法規(guī)藥品GMP指南之分析方法驗(yàn)證和確認(rèn)要求，采用方式一進(jìn)行：即，由兩名檢驗(yàn)人員分別獨(dú)立對同一批產(chǎn)品（如必要用不同儀器）進(jìn)行檢驗(yàn)。比較兩人檢測關(guān)鍵項(xiàng)目及結(jié)果來證明方法在本實(shí)驗(yàn)室的適用性。七、確認(rèn)實(shí)施項(xiàng)目及內(nèi)容7.1 確認(rèn)前準(zhǔn)備 7.1.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：7.1.1.1固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠。流動相：A相：乙腈 B相：0.4%醋酸溶液按下表進(jìn)行梯度洗脫時(shí)間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）01011.51588.5851012121818

6、301529293333458164716767557.1.1.2檢測條件：UV 綠原酸檢測波長：330nm。 ELSD 皂苷用蒸發(fā)光散射器檢測。7.1.1.3 理論板數(shù)：按綠原酸峰計(jì)算不低于1000。7.1.1.4 開啟儀器并按上述色譜條件及工作站界面要求進(jìn)行各項(xiàng)參數(shù)設(shè)定與系統(tǒng)預(yù)平衡。7.1.2 對照品溶液配制： 精密稱取綠原酸對照品約12.5mg、含灰氈毛忍冬皂苷乙對照品約15mg，置25ml棕色量瓶中，另取川續(xù)斷皂苷乙對照品約10mg，置10ml棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，精密量取5ml至上上述25ml棕色量瓶中加50%甲醇定容，制成每1ml含綠原酸0.5mg、含灰氈毛忍冬皂

7、苷乙0.6mg和川續(xù)斷皂苷乙0.2mg的混合溶液，即得。7.1.3 供試品溶液配制： 取供試品粉末(過四號篩)0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率40kHz）40分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。7.1.4 計(jì)算公式1：綠原酸：y=ax+b 式中：y為對照品或樣品峰面積或峰高； x為對照品或樣品的進(jìn)樣質(zhì)量。公式2：兩皂苷：LgA=aLgC+b式中： A為對照品或樣品峰面積或峰高； 7.1.4 檢驗(yàn)結(jié)果判定本品按干燥品計(jì)算，含綠原酸（C16H18O9）不少于2.0%,含灰氈毛忍冬皂苷乙

8、(C65H106O32) 和川續(xù)斷皂苷乙(C53H86O22)的總量不得少于5.0。即為符合規(guī)定。7.2專屬性確認(rèn)分別精密量取陰性對照溶液、對照品溶液、及供試品溶液各10l，依次注入液相色譜儀，按照上述色譜條件進(jìn)行測定?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)： 1、HPLC：檢測波長330nm：供試品溶液中綠原酸保留時(shí)間與對照溶液中綠原酸峰保留時(shí)間一致。綠原酸峰理論塔板數(shù)不低于1000。2、ELSD陰性對照圖譜中無干擾色譜峰；對照品色譜與供試品色譜峰中灰氈毛忍冬皂苷乙峰與川續(xù)斷忍冬皂苷乙相應(yīng)位置上無干擾色譜峰，且出峰保留時(shí)間一致。 表2綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙的專屬性結(jié)果 項(xiàng)目名稱 保留時(shí)間R第一人檢測結(jié)果

9、第二人檢測結(jié)果對照品樣品對照品樣品綠原酸灰氈毛忍冬皂苷乙川續(xù)斷忍冬皂苷乙結(jié)論匯總?cè)?日期： 復(fù)核人/日期：7.3 準(zhǔn)確度 （兩點(diǎn)法通過線性關(guān)系）考察7.3.1待系統(tǒng)平衡后將混合對照品溶液按上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液2ul、|10ul,為一組數(shù)據(jù)；2ul、|10ul結(jié)合 4ul、|8ul,為第二組、分別進(jìn)樣2針（可跟據(jù)驗(yàn)證實(shí)際情況做合法調(diào)整），觀察測定各峰面積。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中綠原酸以峰面積 Y對綠原酸對照品濃度 X進(jìn)行線性回歸,而灰氈毛忍冬皂苷乙與川續(xù)斷皂苷乙則分別以峰面積 Y對相對應(yīng)的對照品濃度 X的 log對數(shù)進(jìn)行線性回歸。3個(gè)成分的線性方程見表 3?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良

10、好，且R20.999表 3綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙的線性方程：名稱第一人檢測第二人檢測檢驗(yàn)員檢驗(yàn)日期色譜柱信息實(shí)驗(yàn)組別信息第一組第二組第一組第二組 檢測結(jié)果成分線性方程R2線性方程R2線性方程R2線性方程R2綠原酸灰氈毛忍冬皂苷乙川續(xù)斷忍冬皂苷乙結(jié)論產(chǎn)品批號： 匯總?cè)?日期： 復(fù)核人/日期： 15/157.4精密度7. 4.1重復(fù)性精密吸取樣品溶液各510L,按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣 5次 ,測得綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙、川續(xù)斷皂苷乙峰面積的記錄色譜圖RSD(n=5)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別匯總附件）?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：5針主峰峰面積RSD不大于2%。ELSD主峰峰面積RSD不大于5%符合標(biāo)準(zhǔn)表明儀

11、器精密度良好， （由于ELSD檢測器性能所限如遇個(gè)別參數(shù)超標(biāo)可視風(fēng)險(xiǎn)而判定）。名稱測定結(jié)果RSD12345平均綠原酸灰氈毛忍冬皂苷乙川續(xù)斷忍冬皂苷乙結(jié)論表4 含量精密度（重復(fù)性）測定結(jié)果匯總?cè)?日期： 復(fù)核人/日期：7. 4.2中間精密度及穩(wěn)定性由兩名實(shí)驗(yàn)員在不同天，分別用同一批對品溶液及配制供試品溶液，按上述色譜條件，分別進(jìn)樣分析，將實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別匯總相應(yīng)附件。表5含量中間精密度測定結(jié)果供試品批號： 名稱第一人檢測第二人檢測檢驗(yàn)員檢驗(yàn)日期儀器編號色譜柱綠原酸灰氈毛+川續(xù)斷兩次相對平均偏差綠原酸灰+川結(jié)論匯總?cè)?日期： 復(fù)核人/日期：7.4.3樣品測試（測試過程及實(shí)驗(yàn)信息詳見配套報(bào)告）可接受標(biāo)準(zhǔn)

12、：按藥典山銀花項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)判定其是否合格。7.4.3.1實(shí)驗(yàn)樣品測試；選用確認(rèn)批次山銀花YG05- 按現(xiàn)行藥典方法測試。7.4.3.2重現(xiàn)性測試；選用確認(rèn)批次山銀花YG05- 按本方案確認(rèn)方法委托第三方進(jìn)行測試結(jié)果同本單位結(jié)果進(jìn)行比對，證明儀器及方法的重性。7.5耐用性7.5.1應(yīng)用HPLC-UV-ELSD法進(jìn)行山銀花含量測定的方法學(xué)考察過程中，發(fā)現(xiàn)ELSD 檢測器的漂移管溫度和載氣流速對儀器的基線噪音和被測樣品的響應(yīng)值影響較大，最佳的參數(shù)應(yīng)該是可接受噪音的最低溫度和獲得最大檢測響應(yīng)值的最低氣體流量。本試驗(yàn)通過分別逐漸改變漂移管溫度和霧化器氣體流量，記錄峰面積的變化，選擇了最優(yōu)的溫度和載氣氮?dú)獾牧魉?，漂移管溫度、載氣流量 確定最佳的實(shí)驗(yàn)條件（見配套報(bào)告）。八、確認(rèn)過程及結(jié)果詳見此方案配套驗(yàn)證報(bào)告九、確認(rèn)過程偏差在確認(rèn)實(shí)施過程中發(fā)現(xiàn)的偏差必須進(jìn)行記錄和分析（表6）。內(nèi)容要包括：偏差的表現(xiàn)、查找引起偏差的原因及查找過程、偏差分析的結(jié)果、此偏差是否對驗(yàn)證結(jié)論有影響、有何影響。偏差概述引起偏差的原因及查找過程偏差分析及解決方案糾正和預(yù)防結(jié)論確認(rèn)人員/日期審核人員/日期批準(zhǔn)人員/日期偏差調(diào)查處理報(bào)告（表6）十、再確認(rèn)或驗(yàn)證時(shí)間及建議10.1法定相關(guān)檢查標(biāo)準(zhǔn)修改后需要對本方法重新進(jìn)行驗(yàn)證或確認(rèn)；10.2檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，檢驗(yàn)方法應(yīng)重新驗(yàn)證。十一、附件 11.1相關(guān)實(shí)驗(yàn)