腹腔鏡結(jié)腸癌切除術(shù)對比開腹手術(shù)對圍手術(shù)期細胞免疫功能影響

1、學位論文原創(chuàng)性聲明和版權(quán)使用授權(quán)書學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的真實成果。除文中已注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本論文的研究做出重要奉獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承當。作者簽名手寫：導師簽名手寫：Xl仂I 年/ 月1日年 月 I 日學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學位論文作者完全了解學校有關(guān)保存、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)如國家圖書館、中國學術(shù)期刊電子雜志社的?中國優(yōu)秀博碩士學位論文數(shù)據(jù)庫?、中國科學技術(shù)信息研究所

2、的?中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫?等 送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)福建醫(yī)科大學可以將本學位論文的全部或局部內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。(保密的學位論文需辦理相關(guān)手續(xù)，在解密后適用本授權(quán)書作 者 簽 名 手 寫 ：A4導 師 簽 名 手 寫 :I o/年r J/ JrIlV年6E/IJ/萬方數(shù)據(jù)目錄縮 略 詞 表 . 1中文 摘 要 . 2英 文 摘 要 . 4引言. 6資 料 與 方 法 .9結(jié)討結(jié)果 . 12論 . 19論 . 24參 考 文 獻 . 25萬方數(shù)據(jù)致綜謝 . 27述 . 28縮略詞表縮寫CDMHCT

3、hCTLNKLSCSCD4/CD8FCMFCASCRPSAAPA英文名稱Cluster DifferentiationMajor Histocompatibility ComplexHelper T CellCytotoxic T-lymphocyteNatural Killer CellLaparoscopic SurgeryConventional Surgerythe CD4+/CD8+ ratioFlow CytometerFlow Cytometer AssayC-reactive ProteinSerum Amyloid APrealbumin中文名稱分化群主要組織相容性復合物輔

4、助 性 T 細胞細 胞 毒 性 T 細胞自然殺傷細胞腹腔鏡手術(shù)組開腹手術(shù)組CD4+/CD8+ 比值流式細胞儀流式細胞術(shù)C 反響蛋白血清淀粉樣蛋白 A前白蛋白1萬方數(shù)據(jù)腹腔鏡結(jié)腸癌切除術(shù)比照開腹手術(shù)對圍手術(shù)期細胞免疫功能的影響摘要目 的：研 宄 結(jié) 腸 癌 患 者 細 胞 免 疫 功 能 及 腹 腔 鏡 手 術(shù) 和 開 放 手 術(shù) 對 結(jié) 腸 癌 患 者術(shù) 后 細 胞 免 疫 功 能 的 影 響 ，并 進 一 步 了 解 結(jié) 腸 癌 患 者 細 胞 免 疫 功 能 影 響 因 素 及 各因素之間的關(guān)系。方 法 ：將 結(jié) 腸 癌 患 者 隨 機 分 為 腹 腔 鏡 手 術(shù) 組 與 開 腹 手 術(shù)

5、組 ，采 用 流 式 細 胞 術(shù)檢 測 兩 組 病 人 圍 手 術(shù) 期 術(shù) 前 1 天 ，術(shù) 后 7 天 細 胞 免 疫 功 能 指 標 淋 巴 細 胞 分類 指 標 ：CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、CD16、CD56)。研 宄 結(jié) 腸 癌 病 人 圍 手 術(shù)期 細 胞 免 疫 功 能 的 變 化 、可 能 的 影 響 因 素 及 各 因 素 之 間 的 關(guān) 系 。同時檢測 圍 手 術(shù)期 炎 癥 相 關(guān) 因 子 ，探 討 手 術(shù) 創(chuàng) 傷 與 細 胞 免 疫 之 間 的 關(guān) 系 。結(jié) 果 ：1 . 結(jié) 腸 癌 患 者 術(shù) 后 外 周 血 CD3+ T 細 胞 、CD4+ T 細 胞 及

6、 N K 細胞較術(shù) 前 稍 有 增 高 ，但 上 述 差 異 并 不 明 顯 。CD8+ T 細 胞 較 術(shù) 前 減 少 P0.05 ) ，CD4+/CD8+比 值 較 術(shù) 前 升 高 P0.05)。部 分 免 疫 指 標 較 術(shù) 前 改 善 ，可 能 與 手 術(shù)切除腫瘤后減輕了對機體免疫系統(tǒng)的抑制作用相關(guān)。2 . 病 理 分 期 較 早 期 的 患 者 (A JC C 病 理 分 期 I 、I I 期 相 比 較 晚 期 的 患 者 AJCC病 理 分 期 I I I 期 患 者 術(shù) 前 外 周 血 N K 細 胞 計 數(shù) 較 多 P0.05)，差 別 有 統(tǒng) 計 學 意義 。說 明 外 周

7、 血 的 N K 細 胞 數(shù) 量 與 病 理 分 期 有 關(guān) ，提 示 N K 細 胞 免 疫 功 能 與 結(jié) 腸癌 病 理 分 期 呈 負 性 相 關(guān) ，隨 著 病 理 分 期 的 提 高 ，外 周 血 N K 細 胞 數(shù) 量 有 下 降 的 趨勢數(shù)量。3.術(shù) 后 腔 鏡 組 患 者 CD3+、CD4+計 數(shù) 較 開 腹 組 高 P0.05)，差 別 有 統(tǒng) 計 學 意義 ；CD4/C D 8 比 值 也 較 開 腹 組 高 ，但 差 別 不 明 顯 ；說 明 腹 腔 鏡 手 術(shù) 對 結(jié) 腸 癌 患者 免 疫 功 能 的 抑 制 較 輕 ，且 腹 腔 鏡 手 術(shù) 后 細 胞 免 疫 功 能

8、恢 復 較 快 。結(jié) 論 ：手 術(shù) 對 機 體 免 疫 系 統(tǒng) 具 有 抑 制 效 應 ；惡 性 腫 瘤 患 者 手 術(shù) 后 遠 期 免 疫 功2萬方數(shù)據(jù)能 可 能 較 術(shù) 前 改 善 ；病 理 分 期 與 患 者 的 N K 細 胞 數(shù) 量 相 關(guān) ，病 理 分 期 越 晚 期 ，其N K 細 胞 的 數(shù) 量 也 呈 下 降 趨 勢 ；手 術(shù) 創(chuàng) 傷 造 成 機 體 急 性 應 激 反 應 ，其 高 峰 期 為 術(shù)后 3 天 ，術(shù) 后 第 7-10天 時 各 項 創(chuàng) 傷 指 標 明 顯 下 降 ；腹 腔 鏡 結(jié) 直 腸 癌 手 術(shù) 對 患 者術(shù) 后 免 疫 功 能 的 抑 制 較 輕 ，且

9、腹 腔 鏡 手 術(shù) 后 細 胞 免 疫 功 能 恢 復 較 傳 統(tǒng) 開 腹 手 術(shù)快。關(guān) 鍵 詞 ：結(jié) 腸 癌 ，腹 腔 鏡 ，細 胞 免 疫 ，流 式 細 胞 儀 ，手 術(shù) 創(chuàng) 傷 ，免疫抑制3萬方數(shù)據(jù)The effect on perioperative cellular immunity of laparoscopic colonic surgerycompared with conventional surgeryAbstractObjective: Our research work is about the cellular immunity of patients with co

10、loncancer. We focus on the effection of laparoscopic colonic surgery on perioperativecellular immunity compared with conventional surgery.We try to find out the internalcontact of the factors effect on the cellular immunity .Method: Patients with colon cancer were randomly divided into laparoscopic

11、surgery(LS) group and conventional surgery(CS) group. Blood samples were obtainedpreoperatively and on the seventh postoperative day. The cellular immunityparameters were determined by flow cytometry (Lymphocytes classification：CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、CD16、C D 5 6 ).Results: 1.Of all the patients, non s

12、ignificant increases of CD3+、CD4+ and NK wasobserved, the CD8+ decreased significantly (P0.05)， CD4/CD8 ratio increasedsignificantly(P0.05).The inhibition of cellular immunity caused by surgical traumalast for a short period after surgery，and the inhibiting effect became unconspicuous ina week. Some

13、 immunity parameters improved after surgery, probably because theresection of tumor reduced the inhibition of the cellular immunity.2. On day 7 postoperative, the patients whose pathology stage were I and II(AJCC) had more counts of NK cell than the patients whose pathology stage wereIII (P0.05).The

14、 immune fonction partly concerned to the pathological staging.3. The LS group had larger counts of CD3+、CD3+CD4+than the CS group(P0.05)，and the CD4+/CD8+ ratio ofLS was higher than the CS on day 7萬方數(shù)據(jù)postoperative, the differences were not significant;The counts4of NK cell werethelower than the CS

15、group (P0.05);The counts o f CD3+CD8+ was lower than the CS,the difference was not significant.Conclusion:Surgical trauma might inhibit cellular immunity; The long-term cellular immunity ofpatients with malignant tumor may improve after surgery;The NK cell countsprobably concerned to the pathologica

16、l staging; The immunity inhibition oflaparoscopic colorectal surgery is less than conventional surgery, and the cellulalimmunity of patients underwent laparoscopic colorectal surgery recover sooner thanthe patients underwent conventional surgery.Key Words: Colon cancer,Laparoscopic,Cellulal immunity

17、,FCM(Flow Cytometer), Surgical trauma, Immune suppression.5萬方數(shù)據(jù)引言結(jié) 腸 癌 是 最 常 見 的 惡 性 腫 瘤 之 一 ，近 年 來 在 我 國 的 發(fā) 病 率 有 增 高 的 趨 勢 ，在 我國 結(jié)腸癌的 發(fā) 病 率 位 于 惡性腫瘤中的 第三 位 發(fā) 病 原 因 與 遺 傳 、 結(jié)腸 腺瘤 、 息 肉 病 、慢 性 炎 癥 性 病 變 、 飲 食 習 慣 等 有 一 定 關(guān) 系 。手 術(shù) 治 療 仍 然 是 可 切 除 結(jié) 腸 癌 的 首 選 治 療 方 式 。結(jié) 腸 癌 的 傳 統(tǒng) 外 科 治 療 至 20世 紀 40年

18、代 已 發(fā) 展 成 熟 。上 世 紀 90年 代 以 來 ，腹 腔 鏡 結(jié) 腸 癌 切 除 術(shù) 逐 步 在 各 個 國家 開 展 起 來 ， 自1991年 Jacobs報 道 了 第 一 例 腹 腔 鏡 結(jié) 腸 癌 切 除 術(shù) 后 ，腹 腔 鏡 結(jié) 腸癌 切 除 術(shù) 至 今 已 獲 得 了 巨 大 的 進 步 2。隨 著 微 創(chuàng) 技 術(shù) 的 不 斷 發(fā) 展 完 善 ，腹腔鏡手術(shù) 已 經(jīng) 成 為 結(jié) 直 腸 癌 的 標 準 手 術(shù) 方 式 之 一 ，與 傳 統(tǒng) 手 術(shù) 相 比 ，其 具 有 創(chuàng) 傷 小 ，術(shù)后 恢 復 快 等 優(yōu) 勢 。由 于 手 術(shù) 創(chuàng) 傷 小 ，腹 腔 鏡 手 術(shù) 后 病 人

19、 能 較 快 的 恢 復 活 動 ，顯著的 縮 短 住 院 時 間 3。近 期 的 報 告 同 時 指 出 了 相 對 于 傳 統(tǒng) 開 腹 手 術(shù) ，微 創(chuàng) 手 術(shù) 降低了 術(shù) 后 腸 梗 阻 的 發(fā) 生 率 、切 口 感 染 率 及 心 肺 并 發(fā) 癥 的 發(fā) 生 率 。對 于 可 切 除的結(jié)腸癌而言，腹腔鏡手術(shù)的效果并不亞于開腹手術(shù)4。大 樣 本 隨機對 照 研宄 發(fā)現(xiàn) 腹腔鏡手術(shù)相對 于傳 統(tǒng)開腹手術(shù)具有明顯的 優(yōu) 勢，其 創(chuàng) 傷 小 ，術(shù) 后 疼 痛 輕 ，術(shù) 后 恢 復 快 ，住 院 時 間 短 。而 關(guān) 于 腹 腔 鏡 結(jié) 腸 癌 與 傳 統(tǒng)開 腹 手 術(shù) 的 近 遠 期 療 效

20、的 比 較 ，北 美 外 科 治 療 臨 床 療 效 研 宄 組 the clinicaloutcomes of surgical therapy study group, COST) 進 行 了 一 項 多 中 心 隨 機 對 照 試驗 。C O S T 試 驗 的 研 宄 結(jié) 果 表 明 ，結(jié) 腸 癌 腹 腔 鏡 手 術(shù) 和 開 腹 手 術(shù) 在 復 發(fā) 率 和 3年生 存 率 方 面 并 無 明 顯 差 異 5。而 關(guān) 于 戳 孔 種 植 問 題 得 出 的 結(jié) 論 是 與 操 作 者 經(jīng) 驗 相關(guān) ，并 不 能 說 腹 腔 鏡 手 術(shù) 增 加 了 戳 孔 種 植 的 幾 率6。根 據(jù) 上

21、 述 的 研 宄 結(jié) 果 我 們 得出 的 結(jié) 論 是 ：腹 腔 鏡 結(jié) 腸 癌 切 除 術(shù) 是 一 種 安 全 有 效 的 手 術(shù) 方 式 ，其療 效 并 不 比 傳統(tǒng)開腹手術(shù)差。關(guān) 于 腹 腔 鏡 手 術(shù) 創(chuàng) 傷 較 小 的 研 宄 已 基 本 獲 得 了 一 致 的 結(jié) 論 ，主 要 表 現(xiàn) 在 血 流動 力 學 、新 陳 代 謝 方 面 的 影 響 較 開 腹 手 術(shù) 小 ，而 關(guān) 于 其 對 免 疫 系 統(tǒng) 的 影 響如 何 目前 仍 存 在 諸 多 困 惑 。尤 其 是 當 惡 性 腫 瘤 患 者 的 細 胞 免 疫 系 統(tǒng) 已 遭 受 腫 瘤 抑 制 的 情6萬方數(shù)據(jù)況 下。腫

22、瘤 免 疫 主 要 以 細 胞 免 疫 為 主 ，機 體 通 過 殺 傷 性 T 細 胞 、N K 細 胞及 巨噬細 胞 直 接 殺 傷 腫 瘤 細 胞 。腫 瘤 抗 原 通 過 腫 瘤 細 胞 表 面 的 MHC-I類 分 子 提 呈 ，并由 CD8+ CTL 細 胞 識 別 ，通 過 直 接 殺 傷 進 而 達 到 殺 死 腫 瘤 細 胞 的 效 應 ，同時受腫瘤 抗 原 激 活 的 CD8+ T 細 胞 還 分 泌 各 種 細 胞 因 子 如 ：IFN-Y、TNF等 調(diào)節(jié)機體 抗 腫 瘤 免 疫 效 應 。腫 瘤 抗 原 被 抗 原 提 呈 細 胞 攝 取 ，并 通 過 抗 原 提 呈

23、細 胞 表 面 的MHC-II類 分 子 提 呈 ，被 CD4+Th細 胞 識 別 ，CD4+Th細 胞 通 過 釋 放 細 胞 因 子 ( 如 ：IL-2等 激 活 CTL、N K 及 巨 噬 細 胞 ，CTL等 激 活 后 可 直 接 殺 傷 腫 瘤 細 胞 ，同時活 化 的 CD4+Th細 胞 還 能 促 進 MHC-I類 分 子 的 表 達 ，有 利 于 CTL 等直接殺 傷腫瘤 細 胞 ，活 化 的 CD4+Th細 胞 還 通 過 促 進 B 細 胞 增 殖 、活 化 、分化對機體抗 腫瘤 體 液 免 疫 進 行 調(diào) 節(jié) 達 到 抗 腫 瘤 的 目 的 。N K 細 胞 能 夠 非

24、特 異 的 直 接 殺 傷 腫 瘤 細胞 ，不 需 要 抗 體 參 與 ，且 無 M H C 限 制 性 ，是 抗 腫 瘤 細 胞 免 疫 中 重 要 的 組 成 部 分7。同 時 惡 性 腫 瘤 細 胞 可 通 過 一 系 列 免 疫 逃 逸 機 制 避 免 被 免 疫 細 胞 殺 傷 ，如腫瘤 抗 原 缺 乏 、T 細 胞 抗 原 表 位 減 少 或 者 缺 失 等 ，導 致 機 體 免 疫 功 能 紊 亂 。腫瘤細胞 還 能 分 泌 免 疫 抑 制 因 子 如 ：TGF-0 ，IL-10等 直 接 抑 制 機 體 的 免 疫 功 能 ，進 一 步 導 致 機 體 免 疫 功 能 抑 制

25、。 同 時 外 科 手 術(shù) 也 造 成 了 機 體 的 免 疫 功 能 紊 亂8。研 宄 發(fā) 現(xiàn) 腹 腔 鏡 手 術(shù) 雖 然 對 機 體 免 疫 系 統(tǒng) 具 有 抑 制 作 用 ，但 較 開 腹 手 術(shù) 而 言 這 種效 應 相 對 較 小 ，雖 然 這 種 差 別 不 甚 明 顯 且 是 短 時 內(nèi) 的 效 應 9。 說 明 了 腹 腔 鏡 的 微創(chuàng) 還 表 現(xiàn) 為對機體免疫系統(tǒng)的抑制較 傳 統(tǒng)開腹手術(shù)為輕。我 們 通 過 研 宄 結(jié) 腸 癌 患 者 的 病 理 分 期 、住 院 時 間 、手 術(shù) 時 間 等 ， 同時測定圍 手 術(shù) 期 細 胞 免 疫 功 能 指 標 。包 括 術(shù) 前 術(shù)

26、前 1 天 及 術(shù) 后 術(shù) 后 7 天 淋巴細胞 各 亞 群 比 例 及 計 數(shù) 。通 過 對 比 腹 腔 鏡 手 術(shù) 組 與 開 腹 手 術(shù) 組 之 間 的 差 別 ，研宄 兩種 手術(shù)方式對結(jié)腸癌患者細胞免疫功能的影響。CD3+是 外 周 血 中 成 熟 T 淋 巴 細 胞 的 主 要 標 志 ，代 表 著 細 胞 免 疫 的 總 體 水7萬方數(shù)據(jù)平 ；人 成 熟 T 淋巴細胞按其表型不同分為 CD4+和 CD8+ T 細 胞 ，CD4+ 為輔助誘導 性 T 細 胞 ，CD8+ T 細 胞 按 其 表 面 有 無 CD28， 可 分 為 CD8+/CD28+ 和CD8+/CD28-兩 類 ，

27、CD28+細 胞 具 有 毒 細 胞 功 能 ， 而 CD28-細 胞 那么 有 免 疫 抑 制 作用 。CD4+/CD8+兩 者 比 值 約 1.22，它 反 映 機 體 免 疫 平 衡 的 重 要 指 標 ，此比值下 降 常 提 示 免 疫 功 能 紊 亂 ，假設(shè) 顯 著 下 降 或 倒 置 常 被 作 為 疾 病 嚴 重 和 預 后 不 良 的 指標。N K 細 胞 計 數(shù) 代 表 了 機 體 N K 細 胞 活 性 ，其 計 數(shù) 的 降 低 側(cè) 面 反 映 了 N K 細胞功 能 低 下 ，說 明 了 機 體 細 胞 免 疫 功 能 的 低 下 。8萬方數(shù)據(jù)資料與方法1 .1 資 料隨

28、 機 選 取 福 建 省 腫 瘤 醫(yī) 院 腹 部 外 科 2021年 6 月-2021年 3 月 初 次 就 診 結(jié) 腸 癌患 者 共 42例 ，其 中 男 性 26 例 (61.9% ) ，女 性 患 者 16例 (38.1% ) ，男 女 比 例 1.625:1，患 者 年 齡 53.719.46歲 。除 外 其 他 嚴 重 疾 病 、自 身 免 疫 性 疾 病 、H IV 感 染 、活動性 結(jié) 核 、應 用 免 疫 抑 制 劑 及 已 行 術(shù) 前 新 輔 助 放 化 療 患 者 。經(jīng) 腹 腔 鏡 手 術(shù) 中 轉(zhuǎn) 開 腹的患者及圍手術(shù)期 輸 血及血 漿 的患者也 排 除 出本項 研宄。首

29、先 ，將 患 者 隨 機 分 為 腹 腔 鏡 手 術(shù) 組 與 開 腹 手 術(shù) 組 ，用 臨 床 流 行 病 學 的 研 宄方 法 ，以 患 者 的 人 口 統(tǒng) 計 學 因 素 (性 別 、年 齡 ) 為 指 標 逐 一 配 對 。腹 腔 鏡 手 術(shù)組 與開 腹 手 術(shù) 組 在 性 別 、年 齡 等 一 般 情 況 上 的 差 異 無 統(tǒng) 計 學 意 義 見 表 1) 。告知所有 參 與 本 研 宄 的 病 人 將 在 圍 手 術(shù) 期 采 外 周 血 用 于 免 疫 功 能 評 價 ，簽 署知情 同意書 。分 別 于 手 術(shù) 前 1天 及 手 術(shù) 后 第 7 天 晨 起 空 腹 未 輸 液 時

30、由 護 士 抽 取 外 周 血 送 檢 。手 術(shù) 方 式 ：腹 腔 鏡 手 術(shù) 組 ：采 用 腹 腔 鏡 結(jié) 腸 癌 根 治 術(shù) 。開 腹 手 術(shù) 組 依 據(jù) 腫 瘤位 置 采 取 標 準 手 術(shù) 方 式 根 治 性 右 半 結(jié) 腸 切 除 術(shù) 、橫 結(jié) 腸 癌 根 治 術(shù) 、根 治性左 半結(jié) 腸 切 除 術(shù) 。手 術(shù) 后 依 據(jù) 患 者 體 重 予 靜 脈 營 養(yǎng) 、預 防 感 染 及 術(shù) 后 常 規(guī) 護 理 。不 進 行 可 能 影響 患 者 免 疫 功 能 的 治 療 包 括 化 療 、免 疫 治 療 、生 物 治 療 等 ?；?者 術(shù) 前 1 天 、術(shù) 后 7 天 清 晨 空 腹 未

31、輸 液 前 ，由 病 房 護 士 抽 取 外 周 血 2ml于 肝 素 鈉 抗 凝 管 中 送 檢 。9萬方數(shù)據(jù)表 1腹腔鏡手術(shù)組開腹手術(shù)組(Laparoscopic Surgery，LS )(Conventional Surgery，CS )P 值n=22, n%/ mean 士SDn=20, n%/ mean 士SD年齡56.829.76，50.308.26，0.117性別男14 (63.6%)12 (60.0%)女8( 36.4%)8 ( 40.0%)住院時間手術(shù)前時間11.091.143.00.77181.492.90.880.0120.784術(shù) 后 病 理 分 期 2021AJCC)

32、I期84I I 期III 期IV 期1Q40970手 術(shù) 時 間 min)腹腔內(nèi)感染術(shù)后出血呼吸道感染術(shù)后 1 天 WBC(X1Q9)141.0932. 1100214.99 2.76132.8030.0701116.002.210. 3200.3691.2材 料 與 儀 器紅 細 胞 裂 解 液 (Optilyse C)、小 鼠 抗 人 單 克 隆 抗 體 CD4、CD8、CD3、CD16+56+ 、C D 4 5 均 為 美 國 BECKMAN C O U L T E R 出 品 。流 式 細 胞 儀 FC 500 FlowCytometry) 是美國 BECKMANCOULTER 公 司

33、 生 產(chǎn) 。1.3研 究 方 法1.3.1外 周 血 淋 巴 細 胞 表 面 抗 原 表 達 的 測 定使 用 直 接 免 疫 熒 光 標 記 全 血 溶 血 法 ，流 式 細 胞 儀 測 定 腫 瘤 病 人 外 周 血 淋 巴 細胞表 面抗 原表 達 。淋 巴 細 胞 標 記 ：在 試 管 中 加 入 外 周 全 血 100叫 取 熒 光 標 記 單 克 隆10萬方數(shù)據(jù)抗 體 CD4，CD8，CD3，CD16，CD56各 IO pl放 入 試 管 中 ，室 溫 避 光 孵 育 15min。并作同型對 照 。1 .3.1.2 溶 血 加 入 Optilyse C 5001，混 勻 ，室 溫 避

34、 光 10min。1.3.1.3 洗 滌 離 心 1500r/min) 6min，棄 去 上 清 液 ，混 勻 。重 復 洗 滌 1 次 。1 .3.1.4 重 懸 加 入 1ml PBS，混 勻 ，制 成 單 細 胞 懸 液 。1.3.1.5 檢 測 上 機 ，每 個 樣 品 檢 測 5000個 以 上 細 胞 ，用 F C M 軟 件 分 析 ，計算 淋 巴 細 胞 中 各 亞 群 細 胞 的 百 分 率 。最 后 所 有 數(shù) 據(jù) 應 用 SPSS 18.0進 行 統(tǒng) 計 學 處理。1.3.2 炎 癥 因 子 CRP、PA、SA A 的檢測檢 測 方 法 ：凝 固 后 以 3000r/mi

35、n離 心 5min，分 離 血 清 ，使 用 德 靈 B N P 特定蛋 白 分 析 儀 及 西 門 子 對 應 試 劑 分 別 檢 測 ，測 定 原 理 是 散 射 免 疫 比 濁 法 。正常值按照 推 薦 參 考 值 設(shè) 定 為 ：CRP10.0mg/l、PA0.2-0.4 g/l、SAA6.8 mg/l。11萬方數(shù)據(jù)結(jié)果2 .1 手 術(shù) 相 關(guān) 因 素2.1.1 般情況腹 腔 鏡 組 入 組 病 例 平 均 年 齡 56.829.76歲 ，其 中 男 性 63.6% ， 開 腹 手 術(shù) 組入 病 例 平 均 年 齡 50.308.26歲 ，其 中 男 性 60.0%，兩 組 之 間 年

36、齡 結(jié) 構(gòu) 無 明 顯 差 異 ，基 礎(chǔ) 疾 病 情況根本 一致。2 .1 .2 住 院 周 期 、手 術(shù) 時 間 及 術(shù) 后 并 發(fā) 癥腹 腔 鏡 手 術(shù) 組 平 均 住 院 時 間 11.091.14天 ，手 術(shù) 前 時 間 3.00.77天 ，手術(shù)時 間 141.0932.11分 鐘 ，其 中 2 例 9 .1 % )術(shù) 后 出 現(xiàn) 肺 部 感 染 ，經(jīng) 治 療 痊 愈 ，無其 他嚴重 并 發(fā) 癥 發(fā) 生。傳 統(tǒng) 開 腹 手 術(shù) 組 平 均 住 院 時 間 181.49天 ，手 術(shù) 前 時 間 2.90.88天 ，手術(shù)時 間 132.8030.07分 鐘 ，其 中 1 例 5 .0 %

37、)術(shù) 后 出 現(xiàn) 肺 部 感 染 ，1 例 5.0% ) 術(shù)后 出 現(xiàn) 吻 合 口 出 血 ，經(jīng) 治 療 痊 愈 ，無 其 他 嚴 重 并 發(fā) 癥 發(fā) 生 。其 中 腹 腔 鏡 組 住 院 時 間 顯 著 縮 短 ，差 別 有 統(tǒng) 計 學 意 義 ，兩 組 之 間 的 手 術(shù) 前時 間 、術(shù) 后 并 發(fā) 癥 差 別 無 統(tǒng) 計 學 意 義 。關(guān) 于 手 術(shù) 時 間 ，雖 然 腹 腔 鏡 手 術(shù) 組 的 手 術(shù)時 間 較 開 腹 手 術(shù) 組 長 ，但 這 種 差 異 并 無 明 顯 統(tǒng) 計 學 意 義 ，造 成 這 種 差 異 的 原 因 可能 于 術(shù)者 非直 視 下 操 作及 精 細解 剖 有

38、關(guān)。12萬方數(shù)據(jù)C D 4 5 - F I T C 熒光設(shè)門從外周血分選出 CD45+ 成熟淋巴細胞G11.5%G224.5%102.-暴60.2.禮-26. . .: 3 4 :13.8%W .IIII11111III I IlI IIIIII I 1 1I 1 l l l l lII1010110WCD3-PC5C D 3 -P C 5及 C D 4 -P E 設(shè) 門 從 CD 45+淋巴細胞中分選出 C D 3+C D 4+淋 巴 細 胞 T h 細胞 )13萬方數(shù)據(jù).：C D 3 -P C 5及 C D 8 -E C D 設(shè) 門 從 C D 45+淋巴細胞中分選出 CD3+CD8+淋

39、巴 細 胞 c 及 抑 制 性 T細胞C D 3 -P C 5及 C D 5 6 -P C 7設(shè)門可以從 C D 45+分 選 出 CD 3-CD 56+淋 巴 細 胞 K 細胞14萬方數(shù)據(jù)TN2 . 2 淋巴細胞各亞 群的變化2 .2 .1 結(jié) 腸 癌 患 者 根 治 性 手 術(shù) 后 細 胞 免 疫 功 能 的 變 化就 參 與 研 宄 的 4 2 例 患 者 ，其 術(shù) 后 CD3+細 胞 較 術(shù) 前 有 所 上 升 ， 雖然上述差異 在 統(tǒng) 計 學 上 無 明 顯 意 義 ，CD4+細 胞 、N K 細 胞 也 較 手 術(shù) 前 稍 有 增 加 ，但上述差 異 并 沒 有 顯 著 的 統(tǒng) 計

40、 學 意 義 。CD8+細 胞 較 術(shù) 前 減 少 P0.05) C D 4/C D 8 比值 較 術(shù) 前 升 高 P 0 .0 5 ) 差 異 有 統(tǒng) 計 學 意 義 。見 表 3)表 2術(shù)前術(shù)后淋巴細胞各亞群的變化Descriptive StatisticsNMinimumMaximumMeanStci. Devi ati on術(shù)前 C D 3術(shù) C C D 3術(shù)前 C D 4術(shù) F I C D 4術(shù)前 C D 8術(shù) J HCD8術(shù)前 N K術(shù) JTiNK術(shù)前 tfT術(shù)后 trn4242424242424242424252.7345.4021.0027.808 . 739 . 907 .

41、404 . 03651.1180.3085.5061.5065.0038.7236.0031.9048.905.214 . 9667.114868.565942.253846.312424.119020.77821 9.907620.91242.10292.53657.7362912.429339.0267010.086928.112047.570506.5934213.146471.248221.08536Val i d N (I istwi se)4215萬方數(shù)據(jù)表 3 采 用 配 對 T 檢驗的方法測定術(shù)前術(shù)后各淋巴細胞亞群構(gòu)成變化Paired Samples TestP a ir e

42、d D iff e re n c e s9 5 % C o n f i d e n c e Interval o f theDiff ere n ceStd. E rrorM ea nStd. Dev ia tio nMeanLowerUppertdfSig. (2-t ailed)P aiMP air2P a i 3P air4PairS術(shù) 前C D 3 -術(shù) j f ；CD3術(shù) 前C D 4 -術(shù) jf|_CD4術(shù) 前C D 8 -術(shù) f C DS術(shù) 前N K -術(shù) F i N K術(shù) 前 咖 - 術(shù) 后 M-.72529-3.564123.11941-1.26882-.4764713.22

43、70710.972825 .0 0 3 1 714.95383.5 6 2 2 43.208042.661301.403693.62684.13636-7 . 5 2 6 0 39.20582.133128.95737-.765556 .0 7 5 4 42 .0 7 7 5 96 .1 0 5 7 06 .4 1 9 7 3-.18739- . 22 61 . 3 3 92 .21 4- . 35 0- 3 .4 9 441414141412 .2 .2 結(jié) 腸 癌 患 者 病 理 分 期 對 細 胞 免 疫 功 能 的 影 響由 表 4 見 病 理 分 期 早 期 的 病 例 與 病 理

44、分 期 較 晚 期 的 病 例 相 比 ，其 術(shù) 前 CD4+細 胞 數(shù) 量 較 低 ， CD8+細 胞 數(shù) 量 較 高 ， 但 差 別 無 統(tǒng) 計 學 意 義 ， N K 細 胞(CD16+CD56+)數(shù) 量 較 高 P0.05)，差 別 有 統(tǒng) 計 學 意 義 。早 期 患 者 術(shù) 后 CD3+、CD4+、CD4/CD8比 值 較 術(shù) 前 升 高 。晚 期 患 者 CD3+較 術(shù) 前 下 降 ，CD4+、CD4/CD8比 值 較 術(shù) 前 升 高 。但 上 述 差 異 均 不 明 顯 。而早期患 者 術(shù) 前 CD3-CD16+56+ (N K 細 胞 相 對 計 數(shù) 較 晚 期 患 者 明

45、顯 升 高 P0.05)，結(jié)果有統(tǒng)計學意義。表 4術(shù)前 I 天術(shù)后 7 天AJCC 1 期 、2 期AJCC 3 期PAJCC 1 期 、2 期AJCC 3 期PCD3+相對計數(shù)1CD3+CD4+相對計數(shù)CD3+CD8+相對計數(shù)CD3+CD4+/CD3+CD8+65.309.3839.329.9325.778.851.89 1.3468.476.3344.458.0022.887.672.261.210.370.210.430.5169.8712.9844.7511.7322.506.612.110.7767.6512.6547.419.2719.578.302.831.210.730.610

46、.450.19CD3-CD16+56+相對計數(shù) 23.474.9017.236.590.03*222.8617.9619.559.340.63不同病理分期外周血淋巴細胞各亞群的變化1 相對計數(shù)為百分比。2 *代表有統(tǒng)計學意義。16萬方數(shù)據(jù)_ 腹腔鏡手術(shù)與開腹手術(shù)對細胞免疫功能的影響術(shù) 后 腔 鏡 組 患 者 CD3+、CD3+CD4+數(shù) 量 較 開 腹 組 高 P0.05)，差異有統(tǒng)計 學 意 義 ；CD4/CD8也 較 開 腹 組 高 ，但 差 別 無 明 顯 統(tǒng) 計 學 意 義 ；N K 細 胞 較 開 腹組 低 P0.05)，差 異 有 統(tǒng) 計 學 意 義 ；CD3+CD8+數(shù) 量 較

47、開 腹 組 低 ，無 統(tǒng) 計 學 意義 。見 表 5。表 5 腹 腔 鏡 組 L S ) 與 開 腹 手 術(shù) 組 C S) 圍手術(shù)期外周血淋巴細胞各亞群的變化手術(shù)前 1 天手術(shù)后 7 天LS3mean士SDCS4mean士SDpLSmean士SDCSmean 士SDpCD3+相對計數(shù)CD3+CD4+相對計數(shù)CD3+CD8+相對計數(shù)CD3+CD4+/CD3+CD8+68.3811.7347.87士7.6822.82士7.982.43士1.2568.77士14.0044.55士12.5925.30士8.431.81士1.220.950.510.500.2771.24士6.4947.35士6.181

48、8.99士8.672.97士1.1963.36士7.0237 .6士8.8922.78士6.042.05士0.750.015*0.01*0.310.08CD3-CD16+56+相對計數(shù) 18.119.6724.06 士16.330.3716.1士5.7623.37士5.430.008*3 LS ：Laparoscopic Surgery4 C S：Conventional Surgery17萬方數(shù)據(jù)2 . 3 炎癥指標同 時 在 手 術(shù) 前 1 天 及 手 術(shù) 后 第 1 天 、第 3 天 、第 7 天 、第 10天清晨空腹由護 士 抽 取 外 周 血 2ml，于 肝 素 鈉 抗 凝 管 中

49、保 存 ，2 h 內(nèi) 送 檢 。圍手術(shù)期 PA、CRP、SAA檢 測 值 均值土標準差PA ( mg/1)CRP(mg/l)SAA(68mg/l)術(shù)前DlD3D7D100.23士0.0660.17士0.040.110.0280.160.0540.180.076.26士9.63 168.2士19.74112.60士35.1555.36士32.28 2434.92士28.043.4924.71356.33士89.72843.24士369.262.91士185.17105.67士116.92可 以 看 出 機 體 在 手 術(shù) 后 由 于 手 術(shù) 創(chuàng) 傷 而 處 于 急 性 應 激 狀 態(tài) ，且 根

50、據(jù) 創(chuàng) 傷 因 子的 波 動 可 以 看 出 ，應 激 反 應 的 高 峰 出 現(xiàn) 在 術(shù) 后 3 天 ，術(shù) 后 第 7-10天應激反響明顯下降。經(jīng) 配 對 T 檢 驗 ，術(shù) 后 PA、CRP、SAA 檢 測 值 在 術(shù) 后 不 同 天 數(shù) 間 均 有 顯 著 變化 P0.05)。18萬方數(shù)據(jù)討論腹 腔 鏡 結(jié) 腸 癌 根 治 術(shù) 是 一 種 安 全 有 效 的 手 術(shù) 方 式 ，其 療 效 并 不 低 于 傳 統(tǒng) 開腹 手 術(shù) ，關(guān) 于 腹 腔 鏡 手 術(shù) 優(yōu) 勢 主 要 表 現(xiàn) 為 創(chuàng) 傷 小 ，術(shù) 后 疼 痛 輕 ，術(shù) 后 恢 復 快 ，住院 時 間 短 ，近 年 來 關(guān) 于 微 創(chuàng) 外

51、 科 的 各 項 研 宄 不 斷 深 入 ，關(guān) 于 手 術(shù) 創(chuàng) 傷 對 患 者 的 影響 已 經(jīng) 有 了 定 論 ：手 術(shù) 創(chuàng) 傷 將 在 血 流 動 力 學 、新 陳 代 謝 及 免 疫 功 能 方 面 影 響 患 者的 術(shù) 后 恢 復 1()。關(guān) 于 手 術(shù) 對 機 體 免 疫 功 能 的 影 響 的 研 宄 進 展 有 限 U 。在 結(jié) 直 腸 外 科 ，腹腔鏡手 術(shù) 較 開 腹 手 術(shù) 的 創(chuàng) 傷 明 顯 減 少 ，術(shù) 后 疼 痛 輕 、腸 道 功 能 恢 復 快 ，住 院 日 短 、并發(fā) 癥 少 等 這 已 經(jīng) 得 到 了 廣 大 外 科 醫(yī) 生 的 認 同 ，而 手 術(shù) 的 安 全

52、 性 及 淋 巴 結(jié) 清 掃 的 徹底 性 近 年 來 越 來 越 多 的 學 者 也 傾 向 于 腹 腔 鏡 能 做 的 和 開 腹 手 術(shù) 一 樣 甚 至 更 好 。與傳 統(tǒng) 開 腹 手 術(shù) 相 比 ，其 對 腫 瘤 切 除 范 圍 和 淋 巴 結(jié) 清 掃 的 有 效 性 相 同 ，在 長 期 的 術(shù)后 生 存 率 和 轉(zhuǎn) 移 率 上 無 明 顯 差 異 。專 業(yè) 腹 腔 鏡 臨 床 培 訓 中 心 系 統(tǒng) 學 習 腹 腔 鏡 手 術(shù)技 術(shù) 的 外 科 醫(yī) 生 能 夠 熟 練 的 進 行 結(jié) 直 腸 癌 手 術(shù) ，且 安 全 、高 效 。對 淋 巴 結(jié) 的 清 掃完 全 、徹 底 。而 腹

53、 腔 鏡 對 機 體 免 疫 功 能 的 影 響 如 何 呢 ？腹 腔 鏡 手 術(shù) 及 開 腹 手 術(shù) 的 創(chuàng) 傷 均 對 患 者 造 成 打 擊 ，在 我 們 關(guān) 于 圍 手 術(shù) 創(chuàng) 傷因 子 的 檢 測 中 可 以 得 出 結(jié) 論 ：機 體 在 手 術(shù) 后 由 于 手 術(shù) 創(chuàng) 傷 而 處 于 急 性 應 激 狀 態(tài) ，且 根 據(jù) 創(chuàng) 傷 因 子 的 波 動 可 以 看 出 ，應 激 反 應 的 高 峰 出 現(xiàn) 在 術(shù) 后 3 天 ，之 后緩 慢恢復 ，術(shù) 后 第 7 天 時 已 基 本 恢 復 到 術(shù) 前 水 平 。Leung在 關(guān) 于 結(jié) 直 腸 癌 患 者 術(shù) 后 免 疫功 能 的 研

54、 宄 中 發(fā) 現(xiàn) 腹 腔 鏡 及 開 腹 結(jié) 直 腸 癌 手 術(shù) 后 病 人 外 周 血 IL-1，IL - 6 及 CRP水 平 都 出 現(xiàn) 了 一 個 分 泌 高 峰 12。開 腹 手 術(shù) 的 打 擊 明 顯 較 大 ，尤 其 是 在 免 疫 系 統(tǒng) 13。我 們 在 對 結(jié) 腸 癌 患 者 圍 手術(shù) 期 細 胞 免 疫 功 能 的 研 宄 中 也 得 到 類 似 的 結(jié) 論 ，手 術(shù) 創(chuàng) 傷 對 細 胞 免 疫 功 能 的 影 響主 要 表 現(xiàn) 為 CD4+、CD8+淋 巴 細 胞 的 顯 著 下 降 14,N K 細 胞 CD3-CD16+CD56+)也 有 顯 著 的 下 降 15。

55、在 我 們 的 研 宄 中 發(fā) 現(xiàn) CD4+淋 巴 細 胞 的 下 降 并 不 顯 著 ，可能與 我 們 手 術(shù) 后 觀 察 的 節(jié) 點 較 遲 有 一 定 的 關(guān) 系 ，而 CD8+ 淋 巴 細 胞 的 下 降 那么 可 以 明19萬方數(shù)據(jù)確 的 觀 測 到 ， CD8+T 細 胞 按 其 表 面 有 無 CD28， 可 分 為 CD8+/CD28+ 和CD8+/CD28-兩 類 ，CD28+細 胞 具 有 毒 細 胞 功 能 ， 而 CD28-細 胞 那么 有 免 疫 抑 制 作用 ，CD8+ T 淋 巴 細 胞 多 為 細 胞 毒 T 淋 巴 細 胞 ，CTL在 MHC-I類 分 子 的

56、 介 導 下能 夠 直 接 識 別 靶 細 胞 并 通 過 穿 孔 素 、顆 粒 酶 途 徑 直 接 殺 傷 靶 細 胞 。部 分 CD8+ 淋巴 細 胞 為 抑 制 性 淋 巴 細 胞 ，他 通 過 分 泌 抑 制 性 細 胞 因 子 在 免 疫 反 應 中 起 負 向 作 用 ，抑 制 CD4+ T 細 胞 及 B 細 胞 功 能 從 而 抑 制 細 胞 及 體 液 免 疫 ，免 疫 抑 制 狀 態(tài) 將 導致 腫 瘤 細 胞 更 易 于 生 長 ， 而 在 腫 瘤 發(fā) 展 過 程 中 又 可 誘 導 和 激 發(fā) CD8+ T 細 胞 ，產(chǎn) 生 類 似 正 反 饋 反 應 ，這 將 對 抗

57、腫 瘤 免 疫 產(chǎn) 生 不 利 影 響 16。并 且 經(jīng) 驗 證 具 有 統(tǒng) 計學意義。手 術(shù) 后 短 期 內(nèi) CD4+、CD8+淋 巴 細 胞 均 顯 著 下 降 ，然 后 緩 慢 回 升 。在本研宄 中 ，術(shù) 后 第 7 天 ，患 者 外 周 血 中 CD3+、CD4+T淋 巴 細 胞 亞 群 較 術(shù) 前 有 所 增 加 ，但 與 術(shù) 前 相 比 尚 無 顯 著 差 異 ，CD8+T淋 巴 細 胞 那么 表 現(xiàn) 出 明 顯 減 少 ，CD4+/CD8+比 值 顯 著 升 高 ，提 示 機 體 的 細 胞 免 疫 功 能 表 現(xiàn) 出 恢 復 并 較 術(shù) 前 改 善 的 跡 象 ，而N K 細

58、 胞 表 現(xiàn) 出 顯 著 性 的 降 低 ，提 示 術(shù) 后 N K 細 胞 功 能 的 抑 制 比 較 明 顯 ，且恢復較 慢 。研 宄 中 還 發(fā) 現(xiàn) ，N K 細 胞 與 CD3+CD4+T淋 巴 細 胞 亞 群 在 術(shù) 前 、術(shù)后存在負 相 關(guān) ，提 示 兩 者 可 能 存 在 某 些 聯(lián) 系 ?？?以 看 出 腹 腔 鏡 手 術(shù) 及 開 腹 手 術(shù) 均 對 機 體的 免 疫 系 統(tǒng) 產(chǎn) 生 不 同 程 度 的 抑 制 ，而 N K 細 胞 計 數(shù) 表 現(xiàn) 出 顯 著 性 的 降 低 ，提示術(shù)后 N K 細 胞 功 能 的 抑 制 比 較 明 顯 。但 尚 無 法 比 較 具 體 手 術(shù)

59、 方 式 對 機 體 免 疫 系 統(tǒng) 抑制作用的 程度 。病 理 分 期 對 患 者 免 疫 功 能 似 乎 有 明 顯 的 影 響 ，石 彥 等 的 研 宄 發(fā) 現(xiàn) 對 胃 癌 患者 外 周 血 T細 胞 亞 群 及 NK 細 胞 數(shù) 量 的 改 變 與 胃 癌 TNM分 期 有 關(guān) 17。我 們在 對不同病 理 分 期 的 結(jié) 腸 癌 患 者 外 周 血 淋 巴 細 胞 的 研 宄 中 發(fā) 現(xiàn) 早 期 結(jié) 腸 癌 患 者 NK 細 胞 數(shù)量 較 晚 期 患 者 為 高 。這 可 能 說 明 了 病 理 分 期 的 嚴 重 程 度 與 免 疫 系 統(tǒng) 功 能 存 在 相 關(guān)性。這 種 現(xiàn) 象

60、 可 能 與 惡 性 腫 瘤 細 胞 分 泌 某 些 抑 制 性 細 胞 因 子 如TGF-卩、IL-10)有 關(guān) ，腫 瘤 細 胞 分 泌 的 TGF-P可 抑 制 機 體 的 免 疫 功 能 ，幫 助 腫 瘤 細 胞 逃 避 宿 主 的20萬方數(shù)據(jù)免 疫 監(jiān) 視 。TGF-P首 先 抑 制 T淋 巴 細 胞 ，同 時 TGF-P可 以 通 過 直 接 作 用 于 內(nèi) 皮 細 胞和 促 進 血 管 生 成 的 細 胞 因 子 的 共 同 作 用 而 形 成 一 個 易 于 血 管 形 成 的 環(huán) 境 ，從而通過 對 腫 瘤 新 生 血 管 的 促 生 長 作 用 導 致 導 致 腫 瘤 的