DB13-T1384-11-2011飼料中加麗素黃的測定

1、ICS 65.120B 46DB13河北省地方標(biāo)準(zhǔn)DB13/T 1384.112011飼料中加麗素黃的測定Determination of carophyll yellow in feed2011 - 05 - 10 發(fā)布2011 - 05 - 20 實(shí)施河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā) 布DB13/T 1384.112011I前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.12009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由負(fù)責(zé)起草，河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、河北醫(yī)科大學(xué)、石家莊市疾病預(yù)防控制中心、北京出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心、河北省飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張巖、叢斌、李揮、盧曉宇、

2、呂品、張宏、馬春玲、楊立學(xué)、沈磊、賈茜、米振杰、李志平、李強(qiáng)。 PAGE 3飼料中加麗素黃的測定范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中加麗素黃的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中加麗素黃的測定。本方法中高效液相色譜法的檢出限為1.0 mg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)驗(yàn)方法方法一高效液相色譜法方法提要試樣用乙腈提取，正己烷脫脂、濃縮后，高效液相色譜儀進(jìn)行檢測，外標(biāo)法定量。試劑和材料所有試劑除特殊注明外，均為分析純，水為GB/T

3、6682規(guī)定的一級水。乙腈：色譜純。正己烷：色譜純。正丙醇。2,6-二叔丁基對甲酚（BHT）：化學(xué)純。無水硫酸鈉：650灼燒 4 h，處于干燥器內(nèi)，冷卻后備用。乙腈提取劑：0.25 g BHT 溶液溶與 500 mL 乙腈。BTH-乙腈溶液：5 g BHT 溶液溶于 500 mL 乙腈。加麗素黃標(biāo)品：純度大于等于 90。標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別準(zhǔn)確稱取 5.00 mg 純品，精確至 0.01 mg 加麗素黃標(biāo)準(zhǔn)品，加入 BHT乙腈溶液溶解，定容于 200 mL 棕色容量瓶，配置成濃度為 25.0 g/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。充氮?dú)庋b置-18避光保存，可使用兩周。混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取加麗黃素標(biāo)準(zhǔn)儲備液，

4、用乙腈準(zhǔn)確稀釋成適宜濃度，即配即用。儀器設(shè)備高效液相色譜儀：配二極管陣列（DAD）或紫外可見（UVVis）檢測器。分析天平：感量 0.01 mg，0.01 g。旋渦混合器。超聲提取器。離心機(jī)。微孔濾膜：0.22 m，有機(jī)系。測定步驟提取與凈化稱取試樣約5 g（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，加入30 mL乙腈提取劑（4.8）及10 g 無水硫酸鈉（4.5）后，渦旋混合1 min，在35以下水浴超生提取10 min，再以3 000 r/min 離心5 min。將上清液移入預(yù)置有20 mL正己烷的125 mL分液漏斗中，振搖0.5 min后，靜置分層；收集下層乙腈相，正己烷相留在分液漏斗

5、，待本試樣后續(xù)脫脂重復(fù)使用。按上述步驟對離心管中殘留物質(zhì)每次有20 mL乙腈提取劑在重復(fù)提取兩次，所得提取液用上述正己烷相依次脫脂。合并三次脫脂后所收集的乙腈相，加入5 mL正丙醇，于40以下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干， 用乙腈溶解并定容至5.0 mL，0.20 m濾膜過濾，濾液待測。高效液相色譜法測定色譜條件色譜柱：C18柱，250 mm4.6 mm（內(nèi)徑），5 m，或相當(dāng)者； 柱溫：35；流動(dòng)相：乙腈水（955，體積比）； 流速：1.0 mL/min；檢測波長：452 nm； 進(jìn)樣量：20 L.色譜測定根據(jù)試樣中被測物的含量情況，選取相應(yīng)值適宜的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行色譜分析。標(biāo)準(zhǔn)工作液和待測樣中的加麗黃

6、素的響應(yīng)值應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。標(biāo)準(zhǔn)工作液與待測樣液等體積進(jìn)樣?？瞻讓?shí)驗(yàn)除不稱取試樣外，按上述測定步驟進(jìn)行。結(jié)果計(jì)算式中：X A c VAS m.(1)X試樣中加麗素黃的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）； A測定液中加麗黃素的峰面積； c標(biāo)準(zhǔn)工作液中加麗黃素的濃度，單位為微克沒毫升（g/mg）；V定容體積，單位為毫升（mL）； AS標(biāo)準(zhǔn)工作液中加麗黃素的峰面積； m最終樣液所代表的樣品質(zhì)量，單位為克（g）。精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的 10%。方法二定性方法試劑Sakaguchi 試劑：將 1 g 硼酸溶解于 100 mL 80的硫酸中。儀器體式顯微鏡電子天平食品研磨機(jī)分析步驟試樣處理取適量