基于深度測序技術(shù)的非侵入性胎兒染色體非整倍體檢測課件

1、中南大學(xué)湘雅醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心湖南家輝遺傳專科門診部鄔玲仟 基于深度測序技術(shù)的非侵入性胎兒染色體非整倍體檢測染色體非整倍體定義：體細(xì)胞染色體數(shù)目增加或減少一條或數(shù)條的個(gè)體類型：a. 單體型：2n-1；X，21，22號(hào)丟失常見。b. 三體型：2n+1；常染色體13、18、21三體常見，性染色體三體型有XXX、XXY、XYY。c. 多體型：僅見于性染色體；如48，XXXX49，XXXYY。21三體綜合征唐氏綜合征（Downs Syndrome， DS）先天愚型足月新生兒最常見的染色體疾病，發(fā)病率1/700至今沒有根治方法我國每年約2000萬新生兒,每年約有26600個(gè)DS兒出生。我國有大約60萬以上

2、的DS患者。特殊面容：面部扁平、鼻梁低平、眼距寬、外眥上斜、內(nèi)眥贅皮、張口吐舌等智力障礙：患者智商（IQ）通常為3060。生長發(fā)育遲緩和肌張力減退：出生體重偏低，肌張力低下，身材矮小，短頸，頸背皮膚松垂，手短而寬、通貫掌、小指彎曲等。至少1/3的患者伴發(fā)先天性心臟病。十二指腸閉鎖和氣管食管瘺等伴發(fā)癥也較其它疾病常見?；及籽〉娘L(fēng)險(xiǎn)為正常人群的15倍。 臨床表現(xiàn)18三體綜合征18三體綜合征是次于先天愚型的第二種常見染色體三體征。新生兒發(fā)生率約為1/7500。主要臨床表現(xiàn): 智力障礙、生長發(fā)育遲緩、胸骨短、嚴(yán)重的心臟畸形以及肌張力亢進(jìn)等。顱面部的畸形包括小頜畸形、枕部突出、小耳以及低位耳等。雙手呈

3、特征性的握拳狀，搖椅足。13三體綜合征發(fā)病率為1/2000025000。主要臨床表現(xiàn)：嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)畸形，內(nèi)臟畸形，顱面部的畸形，手足畸形等；13三體綜合征 血清學(xué)篩查存在的問題孕周的確定不準(zhǔn)確許多單位未嚴(yán)格控制孕期篩查的時(shí)限取血時(shí)間與開單時(shí)間，稱體重時(shí)間不一致的問題實(shí)驗(yàn)室操作缺乏統(tǒng)一的技術(shù)規(guī)范染色體綜合征侵入性產(chǎn)前診斷侵入性產(chǎn)前診斷的利與弊47, XY, +21利：目前金標(biāo)準(zhǔn)弊：a）一定的流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)：1% b）報(bào)告周期長：1個(gè)月 c）孕婦和家屬承受較大思想壓力 主要參考文獻(xiàn)：Tabor A, et al. RCT of amniocentesis in 4606 low risk wome

4、n. Lancet 1986;1:1287-93母體血漿DNA的存在形式分娩后母體cffDNA快速降解Lo et al. Am J Hum Genet 1998; 62:768cffDNA半衰期16.3min，2h后檢測不到 VS 母血胎兒細(xì)胞持續(xù)存在數(shù)年血漿DNA的高母體DNA背景血漿母體 DNA胚胎 DNA20% 胚胎 DNA母體DNA高背景帶來的檢測難度血漿20% 胚胎 DNA1011第二代測序技術(shù)用于檢測胚胎染色體拷貝數(shù)變化采集母體血漿提取血漿DNA制備測序文庫在第二代測序儀上測序測得的序列與人的參考基因組比對并作統(tǒng)計(jì)分析 母血胎兒游離DNA拷貝數(shù)檢測技術(shù)平臺(tái)抽取外周血 分離血漿文庫制

5、備 生物信息分析新一代測序自2008年以來醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)收集了700多份各類孕婦外周血槳，同時(shí)，所有樣本均有金標(biāo)準(zhǔn)的核型分析數(shù)據(jù)。通過與北京貝瑞和康生物技術(shù)有限公司技術(shù)合作，成功地完成了其中401例樣本的雙盲檢測，結(jié)果顯示13、18、21、X、Y五大染色體檢測的靈敏度達(dá)到100%，特異性99%以上，處在國際領(lǐng)先水平。研究結(jié)果檢測結(jié)果總結(jié)假陰性：0/28 = 0%假陽性：0/373 = 0%47,XY,+2126/46,XY24：Z = 4.7746,XX,der(21;21)+21 : Z = 9.59T21檢測結(jié)果假陰性：0/3 = 0%假陽性：0/398 = 0%假陰性：0/12 = 0%假陽性：0/389 = 0%T13檢測結(jié)果T18檢測結(jié)果X/Y染色體檢測結(jié)果基于新一代測序技術(shù)的非侵入性產(chǎn)前非整倍體檢測的優(yōu)點(diǎn)非侵入性，避免流產(chǎn)，感染等風(fēng)險(xiǎn)，降低孕婦心理擔(dān)憂高靈敏度，高特異性檢測周期短5天通量大，質(zhì)控容易合作單位北京貝瑞和康生物技術(shù)有限公司周代星高揚(yáng)侯穎張建光王珺田鳳周可香港中文大學(xué) (CUHK)