人胚胎生殖干細(xì)胞對卵巢癌細(xì)胞體內(nèi)外生長抑制的研究課件

1、人胚胎生殖干細(xì)胞對卵巢癌細(xì)胞體內(nèi)外生長抑制的研究 山東大學(xué)齊魯醫(yī)院 宋欣燕 孔北華研究背景人類胚胎干細(xì)胞具有正常的核型及自我更新能力，在發(fā)育過程中能分化成多種正常表型的細(xì)胞，其生長分化受到多種細(xì)胞因子及分子信號通路的調(diào)節(jié)，如PI3K、BMP、TGF等；腫瘤細(xì)胞與干細(xì)胞有較多相似性，包括某些與自我更新等有關(guān)的分子信號通路；這些信號通路的改變與腫瘤的發(fā)生、侵襲有關(guān)；腫瘤的發(fā)展也與周圍微環(huán)境有關(guān)，二者相互作用影響腫瘤的生長、侵襲；因而，我們設(shè)想這種能支持正常發(fā)育過程的全能干細(xì)胞及其微環(huán)境能否逆轉(zhuǎn)異常的腫瘤細(xì)胞表型。加拿大麥克馬斯特癌癥與干細(xì)胞研究所(McMaster Cancer and Stem

2、Cell Research Institute)的研究人員報告說，胚胎干細(xì)胞可以制造特別的壁龕細(xì)胞，然后這些壁龕細(xì)胞會釋放干細(xì)胞所需的蛋白質(zhì)，保證這些“母體”平穩(wěn)運(yùn)行。Nature, 2007, 448:1015-21Dr. Hendrix報道人胚胎干細(xì)胞微環(huán)境可以誘導(dǎo)惡性黑 素瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)為正常皮膚細(xì)胞表型，并降低侵襲力。J. Fair報道鼠胚胎干細(xì)胞可以在體外抑制胰腺癌細(xì)胞生長。Stem Cells, 2006,24:501-505 J Sur Res, 2004,121:342 胚胎生殖干細(xì)胞（EG細(xì)胞）屬于全能干細(xì)胞，來源于原始生殖細(xì)胞，本實(shí)驗設(shè)計研究人EG細(xì)胞對卵巢癌細(xì)胞SKOV3在體內(nèi)

3、外生長抑制的作用，并設(shè)計通過定量PCR、western blot 等檢測AKT信號通路的表達(dá)情況。方法與路線研究EG細(xì)胞在體內(nèi)對卵巢癌細(xì)胞生長的作用 利用SKOV3卵巢癌細(xì)胞在SCID小鼠皮下建立人卵巢癌的動物模型，在小鼠皮下出現(xiàn)可觸到的瘤塊時（約在接種后7天，瘤塊直徑約0.5cm），將培養(yǎng)的人胚胎生殖細(xì)胞注入腫瘤組織內(nèi)，并以PBS作為對照，比較兩組小鼠腫瘤生長情況。培養(yǎng)的EG細(xì)胞呈克隆樣生長，邊界清楚，似鳥巢狀，AP染色陽性。HEG細(xì)胞鑒定結(jié)果A： SSEA-1B: SSEA-3C: SSEA-4D: TRA-1-60E: TRA-1-81結(jié)果HEG細(xì)胞的鑒定免疫細(xì)胞化學(xué)檢測Caspase9

4、的表達(dá)Real time PCR檢測AKT mRNA表達(dá)結(jié)果Western blot檢測p-akt、akt蛋白的表達(dá)結(jié)果 腫瘤生長曲線同期觀察測量實(shí)驗組腫瘤生長慢于對照組結(jié) 論與生殖干細(xì)胞體外共培養(yǎng)后，卵巢癌SKOV3細(xì)胞的生長顯著受到抑制；體內(nèi)注射實(shí)驗也表明能夠抑制腫瘤生長。Tunel結(jié)果初步表明： 此抑制現(xiàn)象可能是通過誘導(dǎo)凋亡途徑發(fā)生。PI3Ks/Akt信號通路與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，在人類腫瘤譜中廣泛失調(diào), p-AKT可以通過激活或抑制下游的受體蛋白BAD、Caspase 9等，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及遷移等；本實(shí)驗結(jié)果顯示AKT信號通路參與了此誘導(dǎo)凋亡過程，表現(xiàn)為： p-AKT表達(dá)減少，使凋亡抑制被解除；caspase-9被激活，引起SKOV3細(xì)胞的凋亡。干細(xì)胞對癌細(xì)胞的影響是通過胞外分泌形式還是細(xì)胞接觸途徑？需進(jìn)一步驗證。干細(xì)胞表達(dá)的產(chǎn)物多種多樣，具體是哪些蛋白或蛋白