免疫學(xué)防治與診斷課件

1、2022/9/24第四節(jié) 免疫學(xué)應(yīng)用應(yīng)用免疫學(xué)理論闡明疾病的發(fā)病機(jī)制和發(fā)展規(guī)律應(yīng)用免疫學(xué)原理和技術(shù)診斷和防治疾病重點(diǎn)：常見(jiàn)免疫學(xué)防治方法和常見(jiàn)的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)。2022/9/24免疫學(xué)防治免疫預(yù)防：利用各種生物或非生物制劑來(lái)建立機(jī)體的免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防疾病的目的。用免疫學(xué)原理，防病、治病所 采取的措施 免疫治療：應(yīng)用免疫學(xué)原理，針對(duì)疾病的發(fā)生機(jī)制，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，以達(dá)到治療目的所采取的措施。2022/9/24特異性免疫類型自然免疫人工免疫自然主動(dòng)免疫：自然感染自然被動(dòng)免疫： IgG通過(guò)胎盤、初乳SIgA人工自動(dòng)免疫：接種疫苗、類毒素人工被動(dòng)免疫：動(dòng)物免疫血清、胎盤球蛋白等2022/9/2

2、4（一）免疫學(xué)預(yù)防1.人工免疫的概念和種類 通過(guò)人工的方法使機(jī)體獲得免疫力，包括人工自動(dòng)免疫、人工被動(dòng)免疫。 （1）人工自動(dòng)免疫：是指給機(jī)體接種疫苗、類毒素等抗原物質(zhì),刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，以獲得免疫力的方法，也稱預(yù)防接種。主要用于傳染病的特異性預(yù)防。（2）人工被動(dòng)免疫：是給人體輸入抗體等制劑，使機(jī)體獲得特異性免疫力。臨床多用于治療和緊急預(yù)防。 2022/9/24人工自動(dòng)免疫與人工被動(dòng)免疫的比較比較類別人工自動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫輸入物質(zhì)抗原（疫苗、類毒素）抗體、活化的淋巴細(xì)胞、細(xì)胞因子等接種次數(shù)1-3次1次免疫力出現(xiàn)時(shí)間慢（23周）快（注射即生效）免疫力維持時(shí)間較長(zhǎng)，數(shù)月數(shù)年較短，23周用

3、途多用于預(yù)防多用于治療或緊急預(yù)防，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，治療腫瘤2022/9/24（1）死疫苗（滅活疫苗）是選用免疫原性強(qiáng)的病原體，經(jīng)理化方法使其失去活力制備而成的疫苗。如傷寒、乙型腦炎、霍亂、狂犬病疫苗等。（2）減毒活疫苗是用減毒或無(wú)毒力的活病原體制成的疫苗。脊髓灰質(zhì)病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的減毒活疫苗。2.人工自動(dòng)免疫常用生物制劑（3）類毒素：外毒素 類毒素0.3-0.4%甲醛2022/9/24種類死疫苗活疫苗制劑特點(diǎn)滅活，毒強(qiáng)株活，弱毒或無(wú)毒株接種途徑多采取皮下注射多模擬自然感染途徑、少數(shù)經(jīng)皮下注射制品類型可多種疫苗混合使用一般單獨(dú)使用接種量及次數(shù)量大，2-3次（7-10天）用量小，

4、1次保存及有效期易保存，穩(wěn)定，有效期1年不易保存，穩(wěn)定性差，4數(shù)周免疫效果較差，維持?jǐn)?shù)月-2年較好，維持3-5年甚至更長(zhǎng)時(shí)間副作用較大,但無(wú)毒力回復(fù)突變較小,但有毒力回復(fù)突變滅活疫苗與減毒疫苗比較2022/9/243.人工被動(dòng)免疫生物制品抗毒素：外/類毒素馬Ab人丙種球蛋白：血漿和胎盤丙種球蛋白細(xì)胞因子單抗/基因工程抗體人工被動(dòng)免疫注意事項(xiàng)注意防止超敏反應(yīng)早期和足量不濫用丙球 被動(dòng)免疫不能激活免疫系統(tǒng)，故不能產(chǎn)生記憶反應(yīng)，其保護(hù)作用是短暫的。溫馨提示2022/9/244 新型疫苗 1）亞單位疫苗：提取有效免疫原成分。如HA、NA，HBSAg 2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。 3）基因工程疫苗

5、編碼免疫原基因載體體內(nèi) 酵母菌、大腸桿菌（體外培養(yǎng)） 如：重組抗原疫苗、重組載體疫苗、DNA疫苗、轉(zhuǎn)基因植物疫苗2022/9/245.計(jì)劃免疫 我國(guó)兒童計(jì)劃免疫程序 年齡疫苗年齡疫苗出生時(shí)BCG，乙肝疫苗（第1針）6個(gè)月乙肝疫苗（第3針）1個(gè)月乙肝疫苗（第2針）8個(gè)月麻疹疫苗（初種）2個(gè)月三價(jià)脊灰疫苗（初服）1.5歲三價(jià)脊灰疫苗（加服），百白破（加強(qiáng)）3個(gè)月三價(jià)脊灰疫苗（復(fù)服），百白破（第1針）4歲三價(jià)脊灰疫苗（加服），麻疹疫苗（復(fù)種）4個(gè)月三價(jià)脊灰疫苗（復(fù)服），百白破（第2針）7歲BCG（復(fù)種），麻疹疫苗（復(fù)種），百白破（加強(qiáng)）5個(gè)月百白破（第3針）12歲BCG（農(nóng)村）2022/9/24人工

6、自動(dòng)免疫的注意事項(xiàng)接種對(duì)象：免疫功能低下、與病原體接觸機(jī)會(huì)多、易感者。 接種劑量、次數(shù)和間隔時(shí)間：死疫苗：23次，間隔710天?；钜呙缃臃N一次。類毒素接種2次，間隔需46周。 接種途徑：死疫苗：皮下；活疫苗：皮內(nèi)注射、皮上劃痕和自然途徑接種，脊髓灰質(zhì)炎疫苗以口服為佳，流感、腮腺炎疫苗以霧化吸入為好。 接種后反應(yīng)：常于接種后24小時(shí)發(fā)生，表現(xiàn)為局部紅腫、疼痛、淋巴結(jié)腫大。 禁忌癥：高熱、嚴(yán)重心血管疾病、急性傳染病、惡性腫瘤、甲亢、活動(dòng)性肺結(jié)核、糖尿病和免疫缺陷病等患者，均不宜接種疫苗。 2022/9/24（二）免 疫 治 療概念：指針對(duì)機(jī)體低下或亢進(jìn)的免疫狀態(tài)，人為地增強(qiáng)或抑制機(jī)體的免疫功能達(dá)到

7、治療疾病的治療方法。1.抗體免疫治療：?jiǎn)慰寺】贵w、多克隆抗體、基因工程抗體3.藥物治療免疫增強(qiáng)療法、免疫抑制療法2.細(xì)胞免疫治療造血干細(xì)胞、過(guò)繼免疫、腫瘤細(xì)胞疫苗2022/9/24（二）免 疫 治 療2022/9/24二、 免疫學(xué)診斷目的：用于多種免疫性疾?。ǜ腥拘约膊?、免疫缺陷 病、超敏反應(yīng)、自身免疫病、免疫增殖病、移 植排斥反應(yīng)和腫瘤等）的診斷、療效評(píng)估、發(fā) 病機(jī)制探討、以及對(duì)抗原性物質(zhì)或免疫細(xì)胞的 定性、定量，對(duì)細(xì)胞因子、粘附分子及細(xì)胞受 體的檢測(cè)等。方法：檢測(cè)抗原和抗體的體外實(shí)驗(yàn) 免疫細(xì)胞的測(cè)定 （一）體外免疫學(xué)檢測(cè) 1.體液免疫檢測(cè) 抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)外均可發(fā)生特異性結(jié)合，體外可出

8、現(xiàn)凝集、沉淀等反應(yīng)現(xiàn)象。據(jù)此可利用已知的抗原（抗體）檢測(cè)未知的抗體（抗原），抗原抗體結(jié)合反應(yīng)也稱為血清學(xué)反應(yīng)。具有特異性、可逆性、可見(jiàn)性、比例性等特點(diǎn)。 常見(jiàn)的血清學(xué)反應(yīng)有凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)及免疫標(biāo)記技術(shù)等。凝集反應(yīng)定義：顆粒性抗原+抗體凝集現(xiàn)象 （顆粒性抗原：細(xì)菌、細(xì)胞等）沉淀反應(yīng)定義：可溶性抗原+抗體沉淀現(xiàn)象（可溶性抗原：血清蛋白質(zhì)、細(xì)胞裂解液或組織浸液等）大多沉淀反應(yīng)是用半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)，進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散故也稱免疫擴(kuò)散。單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)是將一定量已知抗體混于瓊脂凝膠中制瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔后將抗原加入孔中擴(kuò)散?？乖跀U(kuò)散過(guò)程中與凝膠中的抗體相遇，形成以抗原孔為中心的沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗

9、原含量成正比相關(guān)。本法常用于測(cè)定血清IgG、IgM、IgA 和 C 3等的含量。含抗體的凝膠沉淀環(huán)雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) 是將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向周圍擴(kuò)散并相遇，在比例合適處形成沉淀線。如果反應(yīng)體系中含兩種以上的抗原抗體系統(tǒng)，則小孔間可出現(xiàn)兩條以上的沉淀線。本法常用于抗原或抗體的定性 、組成和兩種抗原相關(guān)性分析的檢測(cè)。對(duì)流免疫電泳是先將待側(cè)血清標(biāo)本作瓊脂凝膠電泳，血清中各蛋白組分被分成不同的區(qū)帶，然后與電泳方向平行挖一小槽，加入相應(yīng)的抗血清，把分成區(qū)帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴(kuò)散，在各區(qū)帶相應(yīng)的位置形成沉淀弧。該法常用于血清蛋白種類分析，以觀察Ig的異常增多或缺失。 定義：

10、是用酶、熒光素、放射性核素等標(biāo)記物標(biāo)記抗原或抗體的試驗(yàn)技術(shù)。通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記物來(lái)反映抗原抗體反應(yīng)情況，間接測(cè)出待檢抗原或抗體的含量。本法特異性強(qiáng)，敏感性高。主要的免疫標(biāo)記物類別 標(biāo)記物 用途熒光素 FITC、RB200、TRITC 免疫組化 鑭系元素螯合物 免疫分析測(cè)定放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析測(cè)定 125I、131I酶 HRP、AP 免疫組化 免疫分析測(cè)定化學(xué)發(fā)光物 Luminol、lucigenin 免疫分析測(cè)定金屬顆粒 膠體金、鐵蛋白 免疫組化 免疫分析測(cè)定 是用酶（常用的有辣根過(guò)氧化物酶，HRP和堿性磷酸酶，AP) 標(biāo)記的抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。EIA將抗原抗體反

11、應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過(guò)酶作用于底物后顯色來(lái)判定結(jié)果。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)( ELISA) ：是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行。用洗滌法將液相中游離成分洗除。主要有雙抗體夾心法、間接法等。測(cè)定可溶性抗原或抗體酶免疫組化法：測(cè)定組織中或細(xì)胞表面的抗原。酶免疫技術(shù)概念：用熒光素（常用的有異硫氰酸熒光素，F(xiàn)ITC) 與抗體連接成熒光抗體，再與待測(cè)標(biāo)本的抗原反應(yīng)，置熒光顯微鏡下觀察，抗原抗體復(fù)合物散發(fā)出熒光，借此對(duì)標(biāo)本中的抗原作鑒定和定位。有直接、間接及補(bǔ)體結(jié)合熒光法。直接熒光法：將熒光素直接標(biāo)記抗體作標(biāo)本染色。該法的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，但其缺點(diǎn)是每檢測(cè)一

12、種抗原必須制備相應(yīng)的熒光抗體。熒光免疫技術(shù)間接熒光法：用一抗與標(biāo)本中的抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的二抗染色。該法的優(yōu)點(diǎn)是敏感性比直接法高，制備一種熒光素標(biāo)記的二抗可用于多種抗原的檢測(cè)，但非特異性熒光亦會(huì)增加。補(bǔ)體結(jié)合熒光免疫法：此法是在間接法的第一步抗原抗體反應(yīng)時(shí)加入補(bǔ)體，使之與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合；再用熒光素標(biāo)記的抗C3抗體進(jìn)行示蹤。(RIA)是用放射性核素標(biāo)記抗原進(jìn)行的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)。它將放射性核素顯示的高靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合，使檢測(cè)的敏感性達(dá)pg水平。常用于標(biāo)記的放射性核素有I125和I131。常用于胰島素、生長(zhǎng)激素、藥物等微量物質(zhì)的測(cè)定。放射免疫技術(shù) Ag* Ab Ag 標(biāo)記抗

13、原 特異性抗體 待測(cè)抗原( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗體復(fù)合物分離Ag*-Ab 和游離Ag*從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀知含量測(cè)定Ag*-Ab和/或游離Ag*放射性 放射免疫測(cè)定法(RIA)示意圖是以硝酸纖維薄膜為載體吸附抗原，用膠體金標(biāo)記代替酶標(biāo)抗體的免疫標(biāo)記技術(shù)。斑點(diǎn)金免疫層析實(shí)驗(yàn)（一步金法）：HCG免疫膠體金技術(shù) 2. 細(xì)胞免疫檢測(cè)免疫細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)免疫細(xì)胞的功能檢測(cè)淋巴細(xì)胞類型和數(shù)量的測(cè)定 （1）E花環(huán)試驗(yàn)：E花環(huán)試驗(yàn)可用于檢測(cè)T細(xì)胞數(shù)目。EA花環(huán)試驗(yàn)可用于檢測(cè)B細(xì)胞數(shù)目。 （2）熒光免疫法：常采用間接免疫熒光法。 （3）流式細(xì)胞術(shù)：用流式細(xì)胞儀（FCM)?；ōh(huán)試驗(yàn)示意圖免疫細(xì)胞功能的測(cè)

14、定-T細(xì)胞功能測(cè)定體內(nèi)法 ： 用生物抗原或化學(xué)抗原作皮內(nèi)試驗(yàn)。 OT-PPD皮試 SD-SK皮試 體外法 ： T細(xì)胞增殖試驗(yàn)（淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)）形態(tài)學(xué)檢查 3H-TdR摻入法淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（形態(tài)學(xué)示意圖）原理：人T細(xì)胞表面有PHA或ConA受體，T細(xì)胞在體外受PHA或ConA的刺激后能轉(zhuǎn)化為體積較大、代謝旺盛、且能進(jìn)行分裂的淋巴細(xì)胞，以此測(cè)定T細(xì)胞的功能。 PHA刺激4872小時(shí)培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細(xì)胞全血分層液離心過(guò)濾測(cè)量放射性淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)（3H-TdR摻入法）示意圖靶細(xì)胞51Cr洗滌去除游離的51Cr效應(yīng)細(xì)胞測(cè)量上清液中釋放的51Cr混合培養(yǎng)4-6小時(shí)細(xì)胞毒試驗(yàn)（51Cr釋放法）示意圖（二）體內(nèi)免疫學(xué)檢測(cè) 1.體液免疫檢測(cè)（1）型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)：變應(yīng)原：青霉素免疫血清植物花粉浸液方法：皮內(nèi)注射或劃痕，20min觀察結(jié)果結(jié)果：局部紅斑、丘疹1cm或無(wú)紅腫但局部有氧感，或全身不適者為陽(yáng)性，有相應(yīng)的IgE存在。（2）中和反應(yīng)皮膚試驗(yàn)：臨床常用的有檢測(cè)對(duì)白喉及猩紅熱有無(wú)免疫力的錫克及狄克實(shí)驗(yàn)。 毒素抗毒素中和實(shí)驗(yàn)微量外毒素 前臂屈側(cè)皮內(nèi)陽(yáng)性：局部紅腫。表示受試者對(duì)此種外毒素?zé)o免疫力。陰性：無(wú)反應(yīng)。表明體內(nèi)