菠菜葉中葉綠素的提取和分離

1、實(shí)驗(yàn) 菠菜葉中葉綠素的提取和分離一實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諒腻儾巳~中提取葉綠素的方法；二實(shí)驗(yàn)原理葉綠素提取高等植物體的葉綠體色素有葉綠素和類胡蘿卜素兩類，主要囊括葉綠素 a (Cs.sH72OsN.Mg),b(CToOeNtMg),B胡蘿卜素(GJL)和葉黃素(GoHsA4ab、B、丫三種異構(gòu)體，其中，0 的化學(xué)特性，可將它們從植物葉片中提取出來(lái)，并且經(jīng)過(guò)萃取、沉淀和色譜方法 將它們分離開(kāi)來(lái)。薄層色譜4罰卜1|R=H；葉黃素R= OH(Rf)表示物質(zhì)移動(dòng)的相關(guān)于距離：色斑最高濃度中心至原點(diǎn)中心的距離展開(kāi)劑前沿至原點(diǎn)中心的距離Rf 值計(jì)算示意圖色斑最高濃度中心至原點(diǎn)中心的距離展開(kāi)劑前沿至原點(diǎn)中心的距離溶劑中

2、。關(guān)于照，即可關(guān)于未知化合物辨別。薄層層析的器材選擇：基板：玻璃、塑料、金屬箔，常用玻璃板。吸附劑：吸附劑要有合適的吸附力，并且且必需與展開(kāi)劑和被吸附物質(zhì)均不起化學(xué)庾應(yīng)?？捎米魑絼?的物質(zhì)很多，常用的有硅膠和氧化鋁，由于吸附性好，適用于各類化合物的分離， 應(yīng)用最廣。選擇吸附劑時(shí)主要根據(jù)樣本的溶解度、酸戚性及極性。氧化鋁一般是微 堿性吸附劑，適用于堿性物質(zhì)及中性物質(zhì)的分離；而硅膠是微酸性吸附劑，適用于 酸性物質(zhì)及中性物質(zhì)的分離。以下簡(jiǎn)單介紹吸附劑的幾個(gè)基本參數(shù)。不常用：硅藻土、纖維素、糖類、活性碳符號(hào)：H無(wú)任何添加劑；G加有鍛石膏(Gypsum, CaS04 1/2 H20)粘合劑；F-加有熒

3、光素(Fluorescein)CMC-加有竣甲基纖維素鈉(Carboxymethylcellulose)GF254 254nm 的紫外 光下激發(fā)出熒光粒度：目：lcn)2200目,硅膠為 100、150 目。U：顆粒的平均直徑，以微米表示。例如：40“的顆粒與 100 目相當(dāng)?；钚裕何絼┌雌浜实亩嗌俑鞣譃槲鍌€(gè)等級(jí)：I 級(jí)含水量最少，活性最高；V 級(jí)含水量最多， 活性最低；但并且不是活性越高分離效果越好，選用哪種活性級(jí)別的吸附劑，要用實(shí)驗(yàn)的方法 來(lái)確定。酸戚性：pH 4、9-10；其中以中性氧化鋁應(yīng)用最廣，可用來(lái)分離 各種化合物，特別是那些關(guān)于酸、戚敏感的化合物。硅膠沒(méi)有酸堿性之分。展開(kāi)劑

4、在樣本組分-吸附劑-展開(kāi)劑三個(gè)因素中。關(guān)于一確定組分，樣本的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)可看作是一不 變因素，吸附劑和展開(kāi)劑是可變因素。而吸附劑的種類有限，因此選擇合適的展開(kāi)劑就成為 解決問(wèn)題的關(guān)鍵。展開(kāi)劑的選擇有以下要求：關(guān)于待測(cè)組分有很好的溶解度。能使待測(cè)組分與雜質(zhì)分開(kāi)，與基線分離。便展開(kāi)后的組分斑點(diǎn)圓而集中，不應(yīng)有拖尾現(xiàn)象。Rf 0.40.5,如樣本中待測(cè)組分較多，Rf 0.25 0.75 圈， Rf0. 1左右。由于薄層色譜法用途非常廣泛，國(guó)外均有現(xiàn)成的鋪 有吸附劑的薄層板出售。一般實(shí)驗(yàn)室中也可自己制備。不與組分發(fā)生化學(xué)反映，或在某些吸附劑存在下發(fā)生聚合。具有適中的沸點(diǎn)和較低的粘滯度。Rf 0.5 左右

5、。常用溶劑極性次序是： 石油瞇環(huán)己烷苯 乙瞇氯仿 乙酸丁酯 正丁醇 丙雨 乙醇甲醇。如一種溶劑不能充分展開(kāi)，可選用二元或多元溶劑系統(tǒng)。展開(kāi)槽與展開(kāi)：展開(kāi)：合適的展開(kāi)劑用量為浸及下端硅膠，但不浸及樣點(diǎn)；點(diǎn)樣端向下，每次只展開(kāi)一塊，放在 正中，以免爬斜(進(jìn)而展開(kāi)傾斜)。顯色：顯色的，可放在含少量碘墓氣的容器中顯色來(lái)檢查色點(diǎn) (因?yàn)樵S多化合物都能和碘成 黃棕色斑用顯色劑：藥三酮、三氯化鐵溶液等。三、實(shí)驗(yàn)儀器與藥品儀器：半微量玻璃儀器一箱，小燒杯，層析缸（槽），載玻片（100mmX25mm）干燥器，電吹風(fēng), 毛細(xì)管，移液管，研缽，布氏漏斗，抽濾裝置。試劑：硅膠，1% CMC,石油瞇（6090C）,乙醇

6、，丙酮，乙瞇，飽和 NaC 1 溶液，無(wú)水 NazSCL四、實(shí)驗(yàn)步驟1、 制板：1% （硅膠在平鋪玻璃板上能晃動(dòng)但不能流動(dòng)將其涂在載玻片上（100mniX25mni）,為使其坦平，可將載玻片用手端平晃動(dòng)，至平坦為止, 放105P 1 小時(shí)，取出放入干燥器待用。2、 葉綠素的提取在研缽中放入幾片（約菠菜葉（中輕壓吸左水分）。加人10mL2： 1 10 mL NaCl 溶液（防止生成乳濁液）除去水溶性物質(zhì)，分去比0 2g N/SOi 干燥。干燥后 的液體傾至另一錐形瓶中（如溶液顏色太淺，可在通風(fēng)柜中適當(dāng)蒸發(fā)濃縮）。3、 點(diǎn)樣用一根徑1mm 的毛細(xì)管，吸取適量提取液，輕輕地點(diǎn)在距薄板一端1.5cm 處，平行點(diǎn)兩點(diǎn)兩點(diǎn)相距l(xiāng)cm左右。若一次點(diǎn)樣不夠，可待樣本溶劑揮發(fā)后.再在原處點(diǎn)第二次，但點(diǎn)樣斑點(diǎn)直徑不得越過(guò)2mmo4、 展開(kāi)先在層析缸中放入展開(kāi)劑（6090 乜）-丙酮一乙瞇（加蓋使lOmin,lcrm 晾干或用電吹風(fēng)吹干薄層。五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)制板時(shí)用注意使板上硅膠厚度盡快一致。六、實(shí)驗(yàn)思考題1、 在混合物薄層色譜中，如何判定各組分在薄層上的位置？2,展開(kāi)劑的高度若超過(guò)了點(diǎn)樣線，關(guān)于薄