人過氧化物酶體增殖物激活受體αPPAR

1、人過氧化物酶體增殖物激活受體a (PPAR-a )使用方法本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍： 96T10ng/L - 320ng/L使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中過氧化物酶體增殖物激活受體 a (PPAR-a )含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人過氧化物酶體增殖物激活受體a (PPAR-a )水 平。用純化的人過氧化物酶體增殖物激活受體a (PPAR-a )抗體包被微孔板，制成固相抗體, 往包被單抗的微孔中依次加入過氧化物酶體增殖物激活受體a (PPAR-a )，再與HRP標(biāo)記的 過氧化物酶體增殖物激活受體a (PPAR-a )抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶

2、標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng) 過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn) 化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的過氧化物酶體增殖物激活受體a (PPAR-a )呈正相 關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人過氧化物 酶體增殖物激活受體a (PPAR-a )濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml X 1 瓶7終止液6ml X 1 瓶2酶標(biāo)試劑6ml X 1 瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(640ng/L)0.5ml X 1 瓶3酶標(biāo)包被板12孔X8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml X 1 瓶4樣品稀釋液6ml X 1 瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml

3、X 1 瓶11封板膜2張6顯色劑B液6mlX 1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。320ng/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150山的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150山標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液160ng/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150山的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150山標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液80ng/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150山的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150山標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液40ng/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150

4、山的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150山標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20ng/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150山的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150山標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、 待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50卩1,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40卩1, 然后再加待測(cè)樣品10M （樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。溫育：用封板膜封板后置37C溫育30分鐘。配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑5

5、0卩1，空白孔除外。溫育：操作同 3。洗滌：操作同 5。顯色：每孔先加入顯色劑A50yl，再加入顯色劑B50yl，輕輕震蕩混勻，37C避光顯色 15分鐘.終止：每孔加終止液50卩1，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù), 即為樣品的實(shí)際濃度。注

6、意事項(xiàng)1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)伍倍）后再測(cè)定，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）o封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物請(qǐng)避光保存。嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必