基因工程-獲取目的基因課件

基因工程基本操作的四個(gè)步驟1、目的基因的獲取2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4、目的基因的檢測(cè)與鑒定一、目的基因的獲取(一)、目的基因主要是______________________編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因（二）、獲取目的基因的常用方法有哪些?1、從基因文庫中獲取2、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增3、人工合成限制酶基因組DNA基因重組轉(zhuǎn)化細(xì)菌體外包裝1)基因組文庫(Genomiclibrary)是指將某種生物體的全部基因組DNA用限制性內(nèi)切酶或機(jī)械力量切割成一定長度范圍的DNA片段，再與合適的載體在體外重組后，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，這個(gè)群體就稱為該生物基因組文庫。其目的是分離有用的目的基因和保存某種生物的全部基因。一、目的基因的獲?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯荧@取1.基因文庫一、目的基因的獲?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯荧@取cDNA(互補(bǔ)DNA)：是由生物的某一特定器官或特定發(fā)育時(shí)期細(xì)胞內(nèi)的mRNA經(jīng)體外反轉(zhuǎn)錄后形成的互補(bǔ)DNA片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，這個(gè)受體菌群就叫做這種生物的cDNA文庫2)cDNA文庫(cDNAlibrary)基因重組反轉(zhuǎn)錄酶mRNAcDNA一、目的基因的獲?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯荧@取按照外源DNA片段的來源：從特定組織提取的染色體基因組DNA ---基因組DNA文庫（總）mRNA反轉(zhuǎn)錄成的cDNA拷貝----cDNA文庫（部分）②基因文庫的目的為了在不知目的基因序列的情況下，便于獲得所需的目的基因。①基因文庫的分類2、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因參與的組分在DNA復(fù)制中的作用解旋酶打開DNA雙鏈DNA母鏈提供DNA復(fù)制的模板4種脫氧核苷酸合成子鏈的原料DNA聚合酶催化合成DNA子鏈引物使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸生物體內(nèi)DNA分子復(fù)制的條件①②③④⑤ATGCATGC5，端含磷酸基團(tuán)3，端含羥基3，端5，端3’5’5’DNA的復(fù)制方向高溫解決了打開雙鏈的問題，但是，又導(dǎo)致DNA聚合酶失活的問題，耐高溫的TaqDNA聚合酶解決了高溫導(dǎo)致DNA聚合酶失活的問題，促成了PCR技術(shù)的自動(dòng)化。1、PCR的反應(yīng)步驟

PCR一般經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)可以分為三個(gè)步驟──變性、復(fù)性和延伸。循環(huán)之前的一次預(yù)變性，以便增加大分子模板DNA徹底變性的概率。PCR的反應(yīng)過程950C變性550C復(fù)性720C延伸第一輪②DNA聚合酶只能特異性地復(fù)制處于兩個(gè)引物之間的DNA序列，使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴(kuò)增。①從第二輪循環(huán)開始，上一次循環(huán)的產(chǎn)物也作為模板參與反應(yīng)，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA單鏈