高效液相色譜法測(cè)定連花清瘟膠囊中苦杏仁苷的含量

高效液相色譜法測(cè)定連花清瘟膠囊中苦杏仁苷的含量〔〕:

摘要：目的討論連花清瘟膠囊中苦杏仁苷的高效液相色譜測(cè)定方法，為連花清瘟膠囊的質(zhì)量控制提供參考。方法采用高效液相色譜法，色譜柱采用Diamonsil-C18色譜柱〔4.6mmx250mm，5.0m〕，流動(dòng)相為：乙腈:0.1%磷酸溶液=5:95，檢測(cè)波長為210nm，柱溫為35℃，流速為1.0mL/min。結(jié)果①連花清瘟膠囊中苦杏仁苷的線性關(guān)系方程為：A=0.0893x102C+0.0321x102，苦杏仁苷在35.17~215.85g/mL〔r=0.9998〕范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；②苦杏仁苷的平均加樣回收率為99.76%，99.75%，99.83%；③檢測(cè)限為

0.3517g/mL。結(jié)論高效液相色譜法用于對(duì)連花清瘟膠囊中有效成分苦杏仁苷含量進(jìn)展測(cè)定，方法操作簡(jiǎn)單，對(duì)膠囊測(cè)定方法的重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，為連花清瘟膠囊的質(zhì)量控制提供了科學(xué)的參考數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；連花清瘟膠囊；苦杏仁苷；線性回歸；檢測(cè)限

陳蕾,曾曉紅.高效液相色譜法測(cè)定連花清瘟膠囊中苦杏仁苷的含量[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘

DeterminationofAmygdalininLianhuaQingwenCapsulesbyHPLC

CHENLei1,ZENGXiao-hong2

〔1.XinjiangAutonomousRegionMedicalInstitutionDrugPurchasingCenter,Urumqi,Xinjiang,China;2.TheFirstPeople"sHospitalofUrumqi,Urumqi,

Xinjiang,China)

ABSTRACT:

ObjectiveToexploretheHPLCmethodforthedeterminationofAmygdalininLianhuaQingwencapsulesandprovidereferenceforqualitycontrolofLianhuaQingwencapsules.MethodsHPLCwasused.ThechromatographiccolumnwasDiamonsil-C18column(4.6mmx250mm,5.0m).Themobilephasewasacetonitrile:0.1%phosphoricacidsolution=5:95.Thedetectionwavelengthwas210nmandthecolumntemperaturewas35°C,and?owratewas1.0mL/min.Results①ThelinearequationofamygdalininLianhuaQingwencapsuleswas:A=0.0893x102C+0.0321x102.Thelinearrelationshipofamygdalinwasgoodintherangeof35.17to215.85g/mL(r=0.9998);②Theaveragerecoveryofglycosideswas99.76%,99.75%and99.83%;③Thedetectionlimitwas0.3517g/mL.ConclusionHPLCmethodwasusedtodeterminethecontentofAmygdalininLianhuaQingwencapsules,themethodissimple,therepeatabilityofthecapsulemeasurementmethodisgood,andtheaccuracyishigh.ItcanprovideSscientificreferencedataforthequalitycontrolforLianhuaQingwencapsules.

KEYWORDS:Highperformanceliquidchromatography;LianhuaQingwencapsules;Amygdalin;Linearregression;Detectionlimit

0引言

連花清瘟膠囊的中藥主要成分有金銀花、連翹、炒苦杏仁、炙麻黃、石膏、板藍(lán)根、魚腥草、大黃、廣藿香、綿馬貫眾、薄荷腦、紅景天以及甘草【1】，功能主治為清瘟解毒、宣肺泄熱，主要用于治療流行性感冒屬熱毒襲肺證，癥見發(fā)熱或者高熱，惡寒，肌肉酸痛，鼻塞流涕，咳嗽，頭痛，咽干咽痛，舌偏紅，苔黃或黃膩等[2-3]，連花清瘟膠囊在抗菌、鎮(zhèn)痛、退熱、抗炎、止咳、化痰和調(diào)節(jié)免疫功能的療效明顯，增強(qiáng)了機(jī)體的抗病康復(fù)才能【4】。連花清瘟膠囊中發(fā)揮降氣止咳平喘作用的為炒苦杏仁，同時(shí)還有潤腸通便的效果，炒苦杏仁中苦杏仁苷是降氣止咳平喘的藥效成分[5-6]。目前，以苦杏仁苷作為連花清瘟膠囊的質(zhì)量控制的研究報(bào)道較少，在本次研究中，我們采用了炒苦杏仁中的有效成分苦杏仁苷成為作為高效液相色譜法的測(cè)定對(duì)象，旨在更好地為連花清瘟膠囊質(zhì)量進(jìn)展控制提供數(shù)據(jù)參考。

1儀器與試藥

1.1試驗(yàn)儀器

美國Waters717高效液相色譜儀器〔裝備有恒溫自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)、Waters717色譜工作站〕，電子分析天平〔美國梅特勒公司消費(fèi)，精細(xì)度為0.0001g〕，德國Sartorius公司消費(fèi)的電子天平〔精細(xì)度為0.1g〕，美國Molecular公司消費(fèi)的1260DADVL型超純水儀器，天津奧特賽恩斯公司消費(fèi)的

SA7140BT超聲波清洗儀器〔功率為300W，頻率為40kHz〕。

1.2試驗(yàn)試藥

連花清瘟膠囊〔石家莊以嶺藥業(yè)股份，消費(fèi)批號(hào)分別為：A170512043、A170623023、A170715018〕規(guī)格為0.35g/粒，苦杏仁苷對(duì)照品〔中國藥品生物制品鑒定所，批號(hào)為110725-20221225，純度為93.60%〕【7】，乙腈、甲醇、水〔北京邁瑞達(dá)科技〕為色譜純，水為超純水，其他試驗(yàn)試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件的選擇

采用Diamonsil-C18色譜柱〔4.6mmx250mm，5.0m〕，流動(dòng)相為：乙腈:0.1%磷酸溶液=5:95，檢測(cè)波長為210nm，柱溫為35℃，流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量為15L。理論塔板數(shù)按照苦杏仁苷峰計(jì)算不低于25000。

2.2對(duì)照品溶液的制備

精細(xì)稱取苦杏仁苷對(duì)照品5.395mg，精細(xì)稱定后置于10mL容量瓶中，以2.1項(xiàng)下的流動(dòng)相溶液作為定容溶液稀釋至刻度后搖勻，得到0.5395mg/mL的對(duì)照品溶液，后置于-20℃冰箱中備用。

2.3供試品溶液的制備

取同一批次的連花清瘟膠囊適量，將膠囊中的內(nèi)容物取出后將藥物研碎后，取約2.0g后進(jìn)展精細(xì)稱定，將藥末放置于100mL具有瓶塞的錐形瓶中，50%甲醇溶液50mL參加錐形瓶中后回流提取60min，濾過，濾渣參加50%甲醇溶液40mL，洗滌1次，將2次的過濾液體及洗滌液體置于200mL蒸發(fā)皿中，文火蒸干后，將殘?jiān)蝺艉笾糜?0mL刻度容量瓶中，流動(dòng)相溶液定容至刻度，搖勻后靜置即得，置于-20℃冰箱中儲(chǔ)存，備用。

2.4陰性對(duì)照品溶液的制備

以連花清瘟膠囊說明書中藥材比例和制備工藝為主，將炒苦杏仁藥材去除后制備不含炒苦杏仁藥材的陰性膠囊樣品，按照2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法進(jìn)展陰性對(duì)照品溶液的配制，后放置于-20℃的冰箱中儲(chǔ)存，備用。

2.5系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

精細(xì)汲取2.2、2.3以及2.4項(xiàng)下的溶液各15L，按照2.1

項(xiàng)下的色譜條件對(duì)三種溶液進(jìn)樣測(cè)定并將色譜圖進(jìn)展記錄，可得到三種溶液的色譜圖，見圖1。由色譜圖可知，苦杏仁苷的色譜峰和其他相鄰的色譜峰別離明晰，別離度>1.5，陰性對(duì)照品溶液與對(duì)照品溶液相應(yīng)的保存時(shí)間點(diǎn)并未有其他的色譜峰出現(xiàn)，即說明了連花清瘟膠囊中的其他中藥材中的有效成分對(duì)苦杏仁苷的測(cè)定無任何影響。

2.6線性關(guān)系考察

精細(xì)汲取2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液0.8、1.0、1.4、1.6、1.8、2.0mL分別置于5mL容量瓶中，參加流動(dòng)相溶液定容至刻度后得不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，精細(xì)汲取上述對(duì)照組溶液各15L，按照2.1項(xiàng)下的色譜條件分別進(jìn)展測(cè)定，并記錄峰面積。以質(zhì)量濃度C作為橫坐標(biāo)，峰面積A作為縱坐標(biāo)進(jìn)展線性回歸方程，苦杏仁苷的回歸方程為：A=0.0893x102C+0.0321x102〔r=0.9998〕，苦杏仁苷檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為35.17~215.85g/mL。

2.7檢測(cè)限考察

取2.2項(xiàng)下儲(chǔ)藏溶液適量，等倍逐步稀釋后分別汲取15L，按照2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定，信噪比為3:1時(shí)得到苦杏仁苷的檢測(cè)限0.3517g/mL。

2.8精細(xì)度試驗(yàn)

精細(xì)汲取2.2項(xiàng)下的儲(chǔ)藏溶液15L，2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)展測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次后得到不同的峰面積，苦杏仁苷峰面積的RSD值為0.89%，說明HPLC儀器的精細(xì)度良好。

2.9穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2.3項(xiàng)下的供試品溶液，分別在0、4、8、12、16、20、24、30、36h按照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，苦杏仁苷峰面積的RSD平均值為0.71%，供試品溶液在室溫條件下放置36h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.10重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次的連花清瘟膠囊的內(nèi)容物適量，共6份，按照2.3項(xiàng)下制備方式配制溶液，以2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄峰面積后對(duì)含量進(jìn)展計(jì)算。結(jié)果說明苦杏仁苷的平均含量為1.52mg/g，RSD值為0.85%，說明檢測(cè)方法的重復(fù)性好。

2.11加樣回收率試驗(yàn)

取同批次消費(fèi)批號(hào)一樣的連花清瘟膠囊樣品內(nèi)容物0.5g共9份，精細(xì)稱定后置于100mL具有瓶塞的錐形瓶中，分別參加0.2175、0.2970、0.4764mg苦杏仁苷對(duì)照品，按照2.3項(xiàng)下溶液的配方法進(jìn)展溶液的制備，每個(gè)濃度平行制備3份后按照2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)展測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，見表1。

2.12樣品含量的測(cè)定