食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 乳制品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定

PAGE7乳制品及含乳飲料中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定第一法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了純牛乳產(chǎn)品、以牛乳為主要原料的液體乳制品產(chǎn)品及含牛乳的乳飲料產(chǎn)品中環(huán)己基氨基磺酸鈉含量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于純牛乳產(chǎn)品、以牛乳為主要原料的液體乳制品產(chǎn)品及含牛乳的乳飲料產(chǎn)品中環(huán)己基氨基磺酸鈉含量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定。本方法中環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢出限為0.01mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。3原理樣品經(jīng)稱量后再稀釋，使用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀檢測，外標(biāo)法定量。4試劑與材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，實驗用水為超純水。甲酸：優(yōu)級純。乙腈：色譜純。亞鐵氰化鉀。乙酸鋅。亞鐵氰化鉀溶液：106g/L。乙酸鋅溶液：219g/L。0.2%甲酸溶液：取2mL甲酸（4.1），用水定容至1000mL。環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥98%。100mg/L環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取5mg環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（4.8），加水溶解并定容至50mL容量瓶，4℃以下冷藏貯存，有效期6個月。環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液：取環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備液（4.9），分別用水稀釋成濃度為0.01mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L和0.50mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液，現(xiàn)用現(xiàn)配。5儀器和設(shè)備液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配有電噴霧（ESI）離子源。電子天平，感量0.0001g和0.1g。超聲波清洗儀。高速離心機(jī)。50mL具塞離心管。6分析步驟提取稱取5g（精確至0.01g）混勻樣品于50mL具塞離心管中，加入10mL水，混勻后加入5mL亞鐵氰化鉀溶液（4.5）和5mL乙酸鋅溶液（4.6），充分振搖后于超聲波清洗儀中超聲30min，取出靜置2min，過濾并用水定容至25mL容量瓶，取1mL定容后溶液于10000r/min離心3min，上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定。測定儀器條件色譜柱：強(qiáng)陽離子交換柱（150mm×2.5μm）；流動相：0.2%甲酸溶液（4.7）+乙腈（4.2）=95+5；流速：0.4mL/min；進(jìn)樣量：2μL；柱溫：30℃；離子源（ESI）溫度：230℃；離子源（ESI）電子轟擊能量：70eV；多反應(yīng)監(jiān)測方式（MRM）。監(jiān)測離子（m/z）：環(huán)己基氨基磺酸鈉178*、80；其中帶*離子為定量離子。在上述色譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)總離子流圖參見附錄A；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖參見附錄B。液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定6.2.2.1定性測定在相同試驗條件下，試樣中待測物與同時檢測的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時間之差在±2s之內(nèi)，并且所選擇的離子相對豐度比符合表1要求，可判定為試樣中存在該物質(zhì)。表1試樣離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)離子豐度比的允許偏差范圍占基峰相對豐度（％）最大允許偏差（％）＞50±10＞20～50±15＞10～20±20≤10±506.2.2.2定量測定以峰面積按內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行單點或多點校準(zhǔn)定量，標(biāo)準(zhǔn)工作液和試樣液中藥物響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測線性范圍內(nèi)。7結(jié)果計算試樣中環(huán)己基氨基磺酸鈉的含量按式（1）計算：………（1）式中：X－試樣中環(huán)己基氨基磺酸鈉含量，mg/kg；A－試樣中環(huán)己基氨基磺酸鈉的色譜峰面積；AS－標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中環(huán)己基氨基磺酸鈉的色譜峰面積；C－標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中環(huán)己基氨基磺酸鈉的濃度，mg/mL；V－樣液最終定容體積，mL；m－試樣溶液所代表試樣的質(zhì)量，g；1000－換算系數(shù)；結(jié)果保留小數(shù)點后兩位數(shù)字。8重復(fù)性 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測XX果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。第二法氣相色譜法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了純牛乳產(chǎn)品、以牛乳為主要原料的液體乳制品產(chǎn)品及含牛乳的乳飲料產(chǎn)品中環(huán)己基氨基磺酸鈉含量的氣相色譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于純牛乳產(chǎn)品、以牛乳為主要原料的液體乳制品產(chǎn)品及含牛乳的乳飲料產(chǎn)品中環(huán)己基氨基磺酸鈉含量的氣相色譜測定。本方法中環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢出限為10mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。3原理樣品經(jīng)沉淀蛋白處理后，用硫酸和亞硝酸鈉衍生，使用氣相色譜儀檢測，外標(biāo)法定量。4試劑與材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，實驗用水為超純水。亞鐵氰化鉀。乙酸鋅。亞硝酸鈉：優(yōu)級純。硫酸：優(yōu)級純。正己烷。亞鐵氰化鉀溶液：106g/L。乙酸鋅溶液：219g/L。50g/L亞硝酸鈉溶液：取亞硝酸鈉（4.3）25g，溶解于500mL水中，混勻。100g/L硫酸溶液：取硫酸（4.4）50g，溶解于500mL水中。環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥98%。1.0g/L環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取25mg環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（4.10），加水溶解并定容至25mL容量瓶，4℃以下冷藏貯存，有效期6個月。環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液：取環(huán)己基氨基磺酸鈉儲備液（4.11），分別用水稀釋成濃度為0.2g/L、0.4g/L、0.6g/L、0.8g/L和1.0g/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液，現(xiàn)用現(xiàn)配。5儀器和設(shè)備氣相色譜儀配FID檢測器。電子天平，感量0.0001g和0.1g。50mL具塞比色管。5mL移液管。10mL具塞離心管。離心機(jī)。6分析步驟分析步驟稱取20g（精確至0.01g）混勻樣品于50mL具塞比色管中，加入5mL亞鐵氰化鉀溶液（4.6）、5mL乙酸鋅溶液（4.7），充分振搖后靜置2min，濾出上清液20mL于另一50mL具塞比色管中，依次加入5mL亞硝酸鈉溶液（4.8）、5mL硫酸溶液（4.9），充分振搖后放入0℃冰水浴中冰浴30min，其間每10min振搖一次。取出后，加入10mL正己烷溶液（4.5），混勻2min，靜置分層后取上層液5mL于10mL具塞離心管中，4000r/min離心3-5min，上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，進(jìn)行氣相色譜儀測定。分別吸取濃度為0.2g/L、0.4g/L、0.6g/L、0.8g/L和1.0g/L的環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液10mL于50mL具塞比色管中，各加入10mL水后混勻，按上段“依次加入5mL100g/L亞硝酸鈉溶液……”起依法操作，進(jìn)行氣相色譜儀測定。測定色譜柱：5%聚硅氧烷毛細(xì)管柱（30m×0.32mm×0.25μm）或分析能力相當(dāng)?shù)钠渌?xì)管柱；載氣：高純氮氣（純度99.999%以上）；流速：3.0mL/min，恒流模式；進(jìn)樣口溫度：200℃；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比30：1；進(jìn)樣量：1μL；升溫程序：80℃恒溫直至樣品峰流出。檢測器溫度：220℃。在上述色譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)譜圖參見附錄C。定量測定以峰面積按外標(biāo)法進(jìn)行單點或多點校準(zhǔn)定量，標(biāo)準(zhǔn)工作液和試樣液中藥物響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測線性范圍內(nèi)。7結(jié)果計算試樣中環(huán)己基氨基磺酸鈉的含量按式（2）計算：……（2）式中：X－試樣中環(huán)己基氨基