病毒肺炎病例密切接觸者管理方案3-21-30

/r/n22/r/n附件4/r/n病毒/r/n的肺炎/r/n實(shí)驗(yàn)室/r/n檢測(cè)技術(shù)指南/r/n（第三版）/r/n為指導(dǎo)各級(jí)疾控部門和其他相關(guān)機(jī)構(gòu)開展/r/n病毒/r/n的肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作，特制定本技術(shù)指南。本指南/r/n主要介紹目前/r/n已經(jīng)比較成熟、易于實(shí)施的核酸檢測(cè)/r/n方法。/r/n/r/n一、標(biāo)本采集/r/n（/r/n一/r/n）采集對(duì)象/r/n。/r/n病毒/r/n的肺炎/r/n疑似病例、/r/n疑似聚集性病例患者，其他/r/n需要進(jìn)行/r/n病毒/r/n診斷或鑒別診斷者，/r/n或/r/n其/r/n他/r/n需要進(jìn)一步篩查檢測(cè)的/r/n環(huán)境或生物/r/n材料（如溯源分析）。/r/n(二)/r/n標(biāo)本采集要求/r/n。/r/n1.從事/r/n病毒/r/n檢測(cè)標(biāo)本采集的技術(shù)人員應(yīng)經(jīng)過生物安全培訓(xùn)（培訓(xùn)合格）和具備相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)技能。采樣人員/r/n個(gè)人防護(hù)/r/n裝備（/r/np/r/nersonalprotectiveequipment/r/n，PPE/r/n）/r/n要求：N95及以上防護(hù)口罩、護(hù)目鏡/r/n、/r/n連體防護(hù)服、雙層乳膠手套、/r/n防水靴套/r/n；如果接觸了患者血液、體液、分泌物或排泄物，應(yīng)及時(shí)更換外層乳膠手套。/r/n2.住院病例的標(biāo)本由所在醫(yī)院/r/n的/r/n醫(yī)護(hù)人員采集。/r/n3/r/n./r/n密切接觸者標(biāo)本由當(dāng)?shù)?r/n指定的/r/n疾控機(jī)構(gòu)/r/n、醫(yī)療機(jī)構(gòu)/r/n負(fù)責(zé)采集。/r/n4/r/n．/r/n根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的需要，可結(jié)合病程多次采樣。/r/n/r/n（/r/n三/r/n）標(biāo)本采集種類/r/n。/r/n每個(gè)病例/r/n必須/r/n采集/r/n急性期/r/n呼吸道標(biāo)本/r/n（包括/r/n上呼吸道標(biāo)本和下呼吸道標(biāo)本/r/n）；重癥/r/n病例優(yōu)先采集下呼吸道標(biāo)本（如支氣管或肺泡灌洗液等）/r/n；/r/n出現(xiàn)眼部感染癥狀的病例，/r/n需/r/n采集/r/n眼結(jié)膜/r/n拭子/r/n標(biāo)本/r/n；出現(xiàn)腹瀉癥狀的病例，需留取便標(biāo)本?？筛鶕?jù)臨床表現(xiàn)與采/r/n樣/r/n時(shí)間間隔/r/n進(jìn)行/r/n采集/r/n。/r/n其他/r/n研究材料依據(jù)設(shè)計(jì)需求采集。/r/n標(biāo)本種類/r/n：/r/n1/r/n．/r/n上呼吸道標(biāo)本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物/r/n等/r/n。/r/n2/r/n．/r/n下呼吸道標(biāo)本：包括深咳痰液/r/n、/r/n呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液、肺組織活檢標(biāo)本。/r/n3/r/n．血液標(biāo)本：盡量釆集發(fā)病后7天內(nèi)的急性期抗凝血。采集量5ml,以空腹血為佳，建議使用含有EDTA抗凝劑的真空釆血管采集血液。/r/n4./r/n血清標(biāo)本：/r/n盡量釆集急性期、恢復(fù)期雙份血清。第一份血清應(yīng)盡早（最好在發(fā)病后7天內(nèi)）釆集，第二份血清應(yīng)在發(fā)病后第3～4周釆集。采集量5ml,建議使用無/r/n抗凝/r/n劑的真空釆血管。血清/r/n標(biāo)本/r/n主要/r/n用于抗體的測(cè)定，/r/n從/r/n血清抗體水平/r/n對(duì)/r/n病例的感染狀況進(jìn)行確認(rèn)。血清標(biāo)本不進(jìn)行核酸檢測(cè)/r/n。/r/n5．眼結(jié)膜標(biāo)本/r/n：出現(xiàn)眼部感染癥狀的病例需采集/r/n眼/r/n結(jié)膜/r/n拭子/r/n標(biāo)本/r/n。/r/n6．便/r/n標(biāo)本：出現(xiàn)腹瀉癥狀的患者/r/n需/r/n采集便標(biāo)本。/r/n（/r/n四/r/n）標(biāo)本采集方法/r/n。/r/n1/r/n．/r/n咽拭子：用2根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子同時(shí)擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將拭子頭浸入含3ml病毒保存液（也可使用/r/n等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液或磷酸鹽緩沖液/r/n）的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。/r/n2/r/n．/r/n鼻拭子：將1根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。取另一根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子以同樣的方法采集另一側(cè)鼻孔。上述兩根拭子浸入同一含3ml采樣液的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。/r/n3/r/n．/r/n鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。將收集器頭部插入鼻腔或氣管，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出，收集抽取的粘液，并用3ml采樣液沖洗收集器1次（亦可用小兒導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集器）。/r/n4/r/n．/r/n深咳痰液：要求病人深咳后，將咳出的痰液收集于含3ml采樣液的50ml螺口塑料管中。/r/n5/r/n．/r/n支氣管灌洗液：將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入氣管（約30cm深處），注入5ml生理鹽水，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液沖洗收集器1次（亦可用小兒導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集）。/r/n6/r/n．/r/n肺泡灌洗液：局部麻醉后將纖維支氣管鏡通過口或鼻經(jīng)過咽部插入右肺中葉或左肺舌段的支管，將其頂端契入支氣管分支開口，經(jīng)氣管活檢孔緩緩加入滅菌生理鹽水，每次30~50ml，總量100~250ml，不應(yīng)超過300ml。/r/n7/r/n．血液標(biāo)本：建議使用含有EDTA抗凝劑的真空釆血管采集血液標(biāo)本5ml/r/n，室溫靜置30分鐘，1500～2000rpm離心10分鐘，/r/n分別/r/n收集血/r/n漿和血液中細(xì)胞/r/n于無菌螺口塑料管中。/r/n8./r/n血清標(biāo)本：用真空負(fù)壓采血管采集血液標(biāo)本5ml，室溫靜置30分鐘，1500～2000rpm離心10分鐘，收集血清于無菌螺口塑料管中。/r/n9/r/n．糞便/r/n標(biāo)本：/r/n如/r/n患者/r/n發(fā)病早期出現(xiàn)/r/n腹瀉癥狀，則留取/r/n糞便標(biāo)本3-5ml；/r/n10/r/n．眼結(jié)膜/r/n拭子/r/n標(biāo)本/r/n：/r/n眼結(jié)膜表面/r/n用/r/n拭子/r/n輕輕擦拭后，/r/n將拭子頭/r/n進(jìn)入/r/n采樣管/r/n中，/r/n尾部棄去/r/n，/r/n懸緊/r/n管蓋。/r/n其他/r/n材料：依據(jù)設(shè)計(jì)需求規(guī)范采集。/r/n（/r/n五/r/n）標(biāo)本包裝/r/n。/r/n標(biāo)本采集后在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)分裝。/r/n1/r/n．/r/n所有標(biāo)本應(yīng)放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有墊圈、耐冷凍的樣本采集管里，擰緊。容器外注明樣本編號(hào)、種類、姓名及采樣日期。/r/n2/r/n．/r/n將密閉后的標(biāo)本放入大小合適的塑料袋內(nèi)密封，每袋裝一份標(biāo)本。/r/n樣本包裝要求要符合《危險(xiǎn)品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則》相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。/r/n3.涉及/r/n外部標(biāo)本運(yùn)輸?shù)?r/n，/r/n應(yīng)根據(jù)標(biāo)本類型，按照/r/nA類/r/n或/r/nB類/r/n感染性物質(zhì)進(jìn)行三層包裝。/r/n（/r/n六/r/n）標(biāo)本保存/r/n。/r/n用于病毒分離和核酸檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)，能/r/n在/r/n24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)的標(biāo)本可置于4/r/n℃/r/n保存；24小時(shí)內(nèi)無法檢測(cè)的標(biāo)本則應(yīng)置于-70/r/n℃/r/n或以下保存（如無-70/r/n℃/r/n保存條件，則于-20/r/n℃/r/n冰箱暫存）。血清可在4/r/n℃/r/n存放3天，-20/r/n℃/r/n以下可長(zhǎng)期保存。應(yīng)設(shè)立專庫或?qū)９駟为?dú)保存標(biāo)本。標(biāo)本運(yùn)送期間應(yīng)避免反復(fù)凍融/r/n。/r/n（/r/n七）/r/n標(biāo)本送檢/r/n。/r/n標(biāo)本/r/n采集后應(yīng)盡快送往實(shí)驗(yàn)室，/r/n如果/r/n需要/r/n長(zhǎng)途/r/n運(yùn)/r/n輸標(biāo)本，/r/n建議/r/n采用/r/n干冰/r/n等/r/n制冷/r/n方式進(jìn)行/r/n保藏。/r/n1/r/n．/r/n上送標(biāo)本：各?。ㄗ灾螀^(qū)/r/n、/r/n直轄市）首例檢測(cè)結(jié)果陽性/r/n、/r/n疑似聚集性病例及聚集性病例的標(biāo)本/r/n，上送/r/n中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所/r/n進(jìn)行/r/n檢測(cè)復(fù)核/r/n，并附樣本送檢單（見附件）/r/n。/r/n2．病原體及標(biāo)本運(yùn)輸/r/n2.1/r/n/r/n國內(nèi)運(yùn)輸/r/n病毒/r/n毒株或其他潛在感染性生物材料的運(yùn)輸包裝分類屬于A類，對(duì)應(yīng)的聯(lián)合國編號(hào)為UN2814，包裝符合國際民航組織文件Doc9284《危險(xiǎn)品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則》的PI602分類包裝要求；環(huán)境樣本屬于B類，對(duì)應(yīng)的聯(lián)合國編號(hào)為UN3373，包裝符合國際民航組織文件Doc9284《危險(xiǎn)品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則》的PI650分類包裝要求；通過其他交通工具運(yùn)輸?shù)目蓞⒄找陨蠘?biāo)準(zhǔn)包裝。/r/n病毒/r/n毒株或其他潛在感染性材料運(yùn)輸應(yīng)按照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》（原衛(wèi)生部令第45號(hào)）辦理《準(zhǔn)運(yùn)證書》。/r/n2.2/r/n/r/n國際運(yùn)輸/r/n病毒/r/n毒株或樣本在國際間運(yùn)輸?shù)?，?yīng)規(guī)范包裝，按照《出入境特殊物品衛(wèi)生檢疫管理規(guī)定》辦理相關(guān)手續(xù)，并滿足相關(guān)國家和國際相關(guān)要求。/r/n2.3毒株/r/n和樣本管理/r/n病毒/r/n毒株及/r/n其/r/n樣本/r/n應(yīng)由/r/n專人管理，準(zhǔn)確記錄毒株和樣本的來源、種類、數(shù)量，編號(hào)/r/n登記/r/n，采取有效措施確保毒株和樣本的安全，嚴(yán)防發(fā)生無用、/r/n惡意/r/n使用、被盜、被搶、丟失、/r/n泄露/r/n等事件。/r/n/r/n二、/r/n病毒/r/n的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)/r/n病毒/r/n的常規(guī)檢測(cè)方法是通過/r/n實(shí)時(shí)熒光RT-PCR/r/n鑒定。任何/r/n病毒/r/n的檢測(cè)都必須在具備適當(dāng)條件的實(shí)驗(yàn)室由經(jīng)過相關(guān)技術(shù)安全培訓(xùn)的人員進(jìn)行操作。/r/n本/r/n指南中的/r/n核酸/r/n檢測(cè)方法主要/r/n針對(duì)/r/n病毒/r/n基因組中開放讀碼框1ab（/r/nopen/r/n/r/nre/r/nad/r/ning/r/nframe1ab/r/n，/r/nORF1ab）和核殼蛋白（nucleocapsidprotein，N）。/r/n在實(shí)驗(yàn)室要確認(rèn)一個(gè)病例為陽性，滿足/r/n以下/r/n條件：/r/n同一份標(biāo)本中/r/n病毒/r/n2/r/n個(gè)靶標(biāo)（ORF1ab、N）特異性/r/n實(shí)時(shí)熒光RT-PCR/r/n檢測(cè)結(jié)果均/r/n為/r/n陽性/r/n。如果/r/n出現(xiàn)單/r/n個(gè)/r/n靶標(biāo)陽性的檢測(cè)結(jié)果/r/n，/r/n則需要重新采樣，重新檢測(cè)。/r/n陰性結(jié)果也不能排除/r/n病毒/r/n，/r/n需要/r/n排除可能產(chǎn)生假陰性/r/n的/r/n因素，包括：樣本質(zhì)量差，比如口咽等部位的呼吸道樣本；樣本收集的過早或過晚；沒有正確的保存、運(yùn)輸和處理樣本；技術(shù)本身存在的原因，如病毒變異、PCR抑制等。/r/n/r/n三、/r/n實(shí)時(shí)熒光/r/nRT-PCR方法檢測(cè)/r/n病毒/r/n核酸/r/n（/r/n一/r/n）目的/r/n。/r/n規(guī)范/r/n實(shí)時(shí)熒光RT-PCR/r/n方法檢測(cè)/r/n病毒/r/n核酸的工作程序，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確可靠。/r/n（/r/n二/r/n）范圍/r/n。/r/n適用于/r/n實(shí)時(shí)熒光RT-PCR/r/n方法檢測(cè)/r/n病毒/r/n核酸。/r/n（/r/n三/r/n）職責(zé)/r/n。/r/n檢測(cè)人員：負(fù)責(zé)按照本檢測(cè)細(xì)則對(duì)被檢樣本進(jìn)行檢測(cè)。/r/n復(fù)核人員：負(fù)責(zé)對(duì)檢測(cè)操作是否規(guī)范以及檢測(cè)結(jié)果是否準(zhǔn)確進(jìn)行復(fù)核。/r/n部門負(fù)責(zé)人：負(fù)責(zé)對(duì)科室綜合管理和檢測(cè)報(bào)告的審核。/r/n（/r/n四/r/n）樣本接收和準(zhǔn)備/r/n。/r/n核對(duì)被檢樣本姓名、性別、年齡、編號(hào)及檢測(cè)項(xiàng)目等；待檢樣本的狀態(tài)如有異常，需注明；待檢樣本應(yīng)存放于-70/r/n℃/r/n冰箱保存/r/n。/r/n（/r/n五/r/n）檢測(cè)項(xiàng)目/r/n。/r/n1./r/n病毒/r/n核酸測(cè)定（/r/n實(shí)時(shí)熒光RT-PCR/r/n方法）/r/n推薦選用針對(duì)/r/n病毒/r/n的ORF1ab/r/n、/r/nN/r/n基因區(qū)域的/r/n引物和探針。/r/n靶標(biāo)/r/n一/r/n（/r/nORF1ab/r/n）/r/n:/r/n正向引物（F）：CCCTGTGGGTTTTACACTTAA/r/n反向引物（R）：ACGATTGTGCATCAGCTGA/r/n熒光探針（P）：5'-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1-3'/r/n靶標(biāo)/r/n二（N）:/r/n正向引物（F）：GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT/r/n反向引物（R）：CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG/r/n熒光探針（P）：/r/n5'-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-3'/r/n核酸/r/n提取和/r/n實(shí)時(shí)熒光RT-PCR反應(yīng)/r/n體系/r/n及反應(yīng)條件參考相關(guān)/r/n廠家試劑盒說明/r/n。/r/n2.結(jié)果判斷/r/n陰性:無Ct值或Ct/r/n≥/r/n40。/r/n陽性：Ct值<37，可報(bào)告為陽性。/r/n灰度區(qū)/r/n：Ct值在37-40之間，建議重復(fù)實(shí)驗(yàn)，若重做結(jié)果Ct值<40，擴(kuò)增曲線有明顯起峰，該樣本判斷為陽性,否則為陰性。/r/n注：/r/n如果用的是商品化試劑盒，則/r/n以/r/n廠家提供的說明書為準(zhǔn)。/r/n/r/n四、病原生物安全實(shí)驗(yàn)活動(dòng)要求/r/n根據(jù)目前掌握的/r/n病毒/r/n的生物學(xué)/r/n特點(diǎn)/r/n、/r/n流行病學(xué)/r/n特征、臨床資料等信息，/r/n該病原體/r/n暫按照病原微生物危害程度分類中第二類病原微生物進(jìn)行管理，具體