醫(yī)院細(xì)胞遺傳室各類儀器設(shè)備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

3.53.5水純化裝置醫(yī)院細(xì)胞遺傳室各類儀器設(shè)備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程目的規(guī)范各類儀器的正常使用和保養(yǎng)，延長儀器的使用壽命，確保各結(jié)果的準(zhǔn)確性。儀器使用環(huán)境：1）無灰塵、通風(fēng)環(huán)境良好。2）避免陽光直射。3）室內(nèi)溫度18?30C,變化不超過±2c4）室內(nèi)濕度2?80%RH。5）電源電壓變化再20V±10V之內(nèi)，5m內(nèi)不能有配電器。3使用儀器程序超凈工作臺(tái)超凈工作臺(tái)是目前實(shí)驗(yàn)室內(nèi)普遍應(yīng)用的無菌操作裝置，在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無菌操作，可明顯地減少細(xì)菌污染的機(jī)會(huì)。超凈工作臺(tái)的工作原理是利用鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣，通過高效空氣微粒濾層凈化，使操作范圍形成無菌環(huán)境。CO2培養(yǎng)箱實(shí)驗(yàn)室一般應(yīng)置備二臺(tái)CO2培養(yǎng)箱，將來自同一標(biāo)本的培養(yǎng)瓶分兩線放入不同的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，以保證細(xì)胞培養(yǎng)的成功率。 CO2培養(yǎng)箱常見的是隔水式培養(yǎng)箱。培養(yǎng)的細(xì)胞需要一個(gè)恒定的溫度，過低或過高的環(huán)境溫度均可導(dǎo)致細(xì)胞死亡，因此對培養(yǎng)箱的靈敏度要求在±0.5℃。此外，一定濃度的CO也是細(xì)胞培養(yǎng)所必需的。 CO培養(yǎng)箱可恒定地提供細(xì)胞所需的CO（通常是5%），使培養(yǎng)液的pH值保持穩(wěn)定，適用于開放性培養(yǎng)。使用時(shí)應(yīng)注意每三個(gè)月定期校正，如有異常應(yīng)及時(shí)調(diào)整。培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須保持清潔，應(yīng)定期用酒精擦拭消毒，消毒時(shí)每層隔板均需洗刷干凈，并用 75％酒精紗布擦拭。每周定期更換箱底水盤中的水，以保持相對濕度。為防污染可在水盤內(nèi)加入 1%。新潔爾滅。箱內(nèi)高效空氣過濾器堵塞時(shí)，指示燈提示后需及時(shí)更換烤箱烤箱用于玻璃器皿的烘干和干熱滅菌，一般以 650mm<500mm<500mm勺比較適用?？鞠涠佳b有豉風(fēng)裝置， 豉風(fēng)與升溫同時(shí)開始。干熱滅菌物品時(shí)一般為 180℃維持 1.5h，滅菌后應(yīng)待箱內(nèi)溫度下降至80℃時(shí)方可開門，以免驟冷而致玻璃器皿損壞。應(yīng)注意的是橡皮制品、塑料培養(yǎng)板、有機(jī)玻璃制品禁用烤箱滅菌。恒溫水浴鍋恒溫水浴鍋是實(shí)驗(yàn)室不可缺少的設(shè)備。主要用于顯帶處理和培養(yǎng)基的加溫。由專人負(fù)責(zé)每周更換蒸餾水并添加防腐劑。4.1.24.1.2每周保養(yǎng)3.93.9高壓蒸汽滅菌裝置離體培養(yǎng)的細(xì)胞對水的要求特別高，培養(yǎng)細(xì)胞用的器皿清洗最后一道程序應(yīng)用二蒸水沖洗，培養(yǎng)基的配制也應(yīng)用二蒸水或超純水。目前常用的有自動(dòng)雙重純水蒸餾器（石英管加熱），因?yàn)槠胀ǖ南鹌?xì)胞是有毒的，所以制備好的二蒸水應(yīng)避免通過橡皮管放出。冰箱實(shí)驗(yàn)室必須配備有普通冰箱和低溫冰箱（-20℃），普通冰箱用于培養(yǎng)液、生理鹽水、Hanks溶液等試劑和標(biāo)本短期的存放，低溫冰箱用于貯存需要冷凍保持生物活性及長時(shí)間存放的試劑如血清等。細(xì)胞冷凍貯存器細(xì)胞冷凍裝置一般分為運(yùn)輸用和儲(chǔ)存用二種液氮罐，用于細(xì)胞株和標(biāo)本的保存，液氮罐雙層結(jié)構(gòu)中間為真空層，其內(nèi)膽頸部與體部經(jīng)焊接相連，故搬動(dòng)和裝入液氮時(shí)，應(yīng)緩慢加入，使容器內(nèi)的溫度均勻下降，有條件可配備有程控降溫儀的液氮儲(chǔ)存系統(tǒng)，該系統(tǒng)的特點(diǎn)是可自動(dòng)控制冷凍箱的降溫速度。離心機(jī)細(xì)胞培養(yǎng)需要經(jīng)常消化分離細(xì)胞、漂洗制備細(xì)胞懸液和進(jìn)行傳代以及染色體的收獲，因此接種培養(yǎng)室與細(xì)胞處理室內(nèi)可各配置一臺(tái)可調(diào)速的小型臺(tái)式離心機(jī)。高壓滅菌是利用高壓蒸汽使細(xì)菌體內(nèi)蛋白凝固而達(dá)到滅菌，是最常用的滅菌方法。在115.5℃，30分鐘就能殺死所有繁殖型細(xì)菌的芽胞。高壓蒸汽滅菌比其它滅菌方法效果都好。由于蛋白質(zhì)的凝固需有水分存在，當(dāng)細(xì)菌體內(nèi)含有水分在 25％以下時(shí)，蛋白質(zhì)的凝固溫度如下：水分含量凝固溫度TOC\o"1-5"\h\z25 ％ 74-80 ℃8 ％ 80-90 ℃6 ％ 145 ℃由此可見，在細(xì)菌體內(nèi)有水分存在的條件下可以大大降低滅菌所需的溫度。高壓滅菌主要用于細(xì)胞培養(yǎng)所需的二蒸水、生理鹽水、手術(shù)器械、布類、橡皮類等。顯微鏡與細(xì)胞遺傳圖象分析工作站顯微鏡是分析染色體的必備工具，一般要求每位實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員配備一臺(tái)。有條件的實(shí)驗(yàn)室可配備細(xì)胞遺傳圖象分析工作站。維護(hù)保養(yǎng)記錄每日保養(yǎng)每日登記各儀器的運(yùn)行和使用情況，保證每臺(tái)儀器的正常運(yùn)行。每周對各儀器進(jìn)行清潔維護(hù)，檢查各儀器是否存在各類使用的隱患。每月保養(yǎng)每月不定期的對各儀器進(jìn)行抽樣檢查運(yùn)行使用情況的檢查。小型設(shè)備天平普通稱量0.1克的電子天平以及分析天平是實(shí)驗(yàn)室所必需的，要求每年做一次校正。真空泵培養(yǎng)液的配制都用過濾的方法進(jìn)行除菌，一般30升旋轉(zhuǎn)式的真空泵即可。酸度計(jì) 又稱為氫離子測定計(jì)或 pH計(jì)，是測定各種液體酸堿度的必須工具，要求每半年做一次校正。加樣器 加樣器是細(xì)胞培養(yǎng)不可缺少的用具，其規(guī)格有0.5-10ul、10-100ul、100-1000ul,末端可安裝不同容量吸管，吸入和注入液體較方便。使用時(shí)吸入的液體量不能在其設(shè)定范圍之外，而且要求每半年做一次校正。常用玻璃器皿及器械 培養(yǎng)器皿是供細(xì)胞接種生長等用的器皿，可用透明度好，中性硬質(zhì)的玻璃制成。另外，還可使用透明、平滑、無毒、干凈并經(jīng)放射性核素照射滅菌密封包裝的一次性使用塑料培養(yǎng)器皿，其優(yōu)點(diǎn)是打開包裝即可用于培養(yǎng)操作，缺點(diǎn)是費(fèi)用較高。目前國內(nèi)一般實(shí)驗(yàn)室使用的還是玻璃器皿。溶液瓶其規(guī)格常為500ml、250ml、100ml的配膠塞的鹽水瓶和配塑料螺旋蓋的盛液瓶，用于貯存各種試劑等。培養(yǎng)瓶有玻璃和塑料二種，常用的規(guī)格有25cm2(70ml)和75cM(275ml),160-175cm2(600ml)等規(guī)格，國內(nèi)培養(yǎng)瓶常用的規(guī)格有25ml，100ml和250ml等規(guī)格，主要用于細(xì)胞培養(yǎng)，早期的玻璃培養(yǎng)瓶是用膠塞封口，僅能用于密閉培養(yǎng)，現(xiàn)被螺旋蓋培養(yǎng)瓶取代。螺旋蓋培養(yǎng)瓶適宜在CO2培養(yǎng)箱中使用， 瓶的底壁是供細(xì)胞貼壁生長的生長面，而其它內(nèi)壁為非生長面。培養(yǎng)皿有玻璃和塑料二種，常用的有 120mm，100mm和60mm#規(guī)格，主要用于培養(yǎng)和分離組織用，也可用作單細(xì)胞分離及單層細(xì)胞貼壁培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)，。多孔培養(yǎng)板 材料僅有塑料的一種，其規(guī)格有96孔，24孔，12孔，6孔，4孔，用于少量細(xì)胞或單個(gè)細(xì)胞的克隆生長，細(xì)胞轉(zhuǎn)化及細(xì)胞毒性等各種檢測實(shí)驗(yàn)。吸管有玻璃和塑料二種，主要用于移送培養(yǎng)基，玻璃吸管有直頭和彎頭二種，直頭吸管用于吸加少量培養(yǎng)基，加抗菌素，加NaHCO調(diào)pH等用；彎頭吸管用于吹打分散和混懸細(xì)胞用。離心管有玻璃和塑料二種，主要用于離心、漂洗和分離細(xì)胞，常用的規(guī)格有50ml，10ml，5ml三種規(guī)格，此外還有微量離心管，規(guī)格有1.5ml，1ml，0.5ml，以供貯存少量試劑或其它實(shí)驗(yàn)用。器械主要用于取材和原代培養(yǎng)中切割組織。常用的器械有：組織剪、鑷子等。使用過程中應(yīng)注意保護(hù)刀鋒，用畢擦凈、晾干、以防生銹，消毒以煮、高壓滅菌或 75%酒精浸泡。其它如配制溶液的量筒、容量瓶以及試管、高壓