臨床微生物標本的采集方法與運送

臨床微生物標本的采集與運送微生物檢驗的重要性在醫(yī)學高度發(fā)展，新的抗菌藥物不斷涌現(xiàn)的今天，感染性疾病的發(fā)病率和病死率仍然居高不下。主要原因之一是當代的感染性疾病，在病原上發(fā)生了較大的變化，形成了現(xiàn)代感染性疾病在病原學上的新特點現(xiàn)代感染性疾病的新特點以條件致病菌為主：很多低致病、弱毒的細菌，在外環(huán)境、人體體表以及與外界相通的腔道中廣泛存在的細菌，引起感染甚至造成嚴重后果的現(xiàn)象日益增多。病原菌的種類更為廣泛：包括需氧菌、厭氧菌、苛氧菌、分枝桿菌和真菌等。細菌的耐藥性不斷增強：同一種細菌對抗生素的耐藥性可以完全不同，甚至出現(xiàn)同時耐多種抗生素的“多重耐藥”細菌，往往使臨床醫(yī)師的“經(jīng)驗性”治療或所謂的常規(guī)治療根本無效?，F(xiàn)代感染性疾病的新特點出現(xiàn)一些新的感染性病原：有人統(tǒng)計，20世紀后期，全世界一共出現(xiàn)種31種新的傳染病，其中病毒14種，細菌11種，寄生物6種，由于人們的認識不足，缺乏有效的預防、治療辦法，人群又無免疫力，這些新出現(xiàn)的病菌在不同的地區(qū)和范圍內流行，來勢猛，傳播快，造成巨大的損失和社會恐慌。例如：瘋牛病、埃博拉出血熱、新型肝炎病毒、大腸桿菌O157、出血性腸炎、O139霍亂、艾滋病、萊姆病等。現(xiàn)代感染性疾病的新特點

我們應該追求：

“準確的病原學診斷”

“針對性病原學治療”

正確的微生物標本采集和運送，是準確的病原學診斷的前提！

微生物讓人類步步為營，檢驗誤差發(fā)生率哪個階段最高？60%以上實驗誤差發(fā)生在分析前

1997年，一位意大利著名檢驗專家就對急診檢驗誤差發(fā)生的種類和發(fā)生率進行了統(tǒng)計。結果顯示，約有68.2%的檢驗誤差發(fā)生在檢驗前期，而來自于檢驗中期和檢驗后期的誤差率分別為13.3%和18.5%。

2007年，這位檢驗專家又進行了類似統(tǒng)計，結果顯示，檢驗前期的誤差發(fā)生率仍高達61.9%。摘自：分析前質量控制獲得準確結果的重要環(huán)節(jié)基本原則1.及時采集微生物標本作病原學檢查2.在抗菌藥物使用前采集標本3.采樣時嚴格執(zhí)行無菌操作4.采樣后立即送檢5.標本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑6.送檢標本應注明來源和檢驗目的如何提高細菌菌陽性檢出率率？標本采集時機機標本采集方法法標本的質與量量標本的運送與與保存鏡檢篩選合格格標本（退檢檢制度）高質量、多種種分離培養(yǎng)基基培養(yǎng)環(huán)境常見不合格標標本主要有以以下問題：標本采集時間間錯誤容器錯誤標本量不足標本采集延誤誤標本未及時正正確運送以及暫存條件件錯誤。。。。。。。。最有價值的細細菌學檢測項項目血液培養(yǎng)腦脊液培養(yǎng)膽汁培養(yǎng)胸腹水培養(yǎng)關節(jié)液其他無菌體液液或分泌液血培養(yǎng)標本采集與運送血培養(yǎng)是進行行血流感診斷斷的最佳手段段血培養(yǎng)概念:采集患者的血血液或無菌體體液標本,送至微生物實實驗室培養(yǎng)檢檢測.檢測原本無菌菌的血液及體體液中是否有有細菌存在.如有細菌,則極有可能為為致病的細菌菌.進一步進行鑒鑒定/藥敏試驗.完整的血培養(yǎng)養(yǎng)過程醫(yī)師開出醫(yī)囑囑護理人員收集集送檢樣本實驗室檢測、、分離并鑒定定導致血流感感染的微生物物三級報告：為為臨床醫(yī)生提提供抗菌藥物物敏感性試驗驗結果目前血培養(yǎng)的的問題：采血時機不合合適采血套數(shù)不夠夠采血量不足只做需氧培養(yǎng)養(yǎng)，不同時做做厭氧培養(yǎng)采血前或采血血時正在使用用抗生素治療療血流感染與血血培養(yǎng)的規(guī)范實踐“只有在發(fā)熱熱時，才需要要進行血培養(yǎng)養(yǎng)?！薄P于血培養(yǎng)指指征想采就采？答案：血培培養(yǎng)的指征當懷疑血流感感染或膿毒癥癥時，應常規(guī)規(guī)行血培養(yǎng)懷疑患者有血血流感染的癥癥狀有：不明原因的發(fā)發(fā)燒(＞38℃)或體溫過低(＜36℃)白細胞增多（（＞10,000/ul），粒細胞減減少（＜1,000ul）休克，寒顫，，僵直嚴重的局部感感染(腦膜炎，心內內膜炎，肺炎炎，腎盂腎炎炎，腹部術后后感染，…)心率異常加快快低血壓或高血血壓呼吸頻率加快快“何時采血進進行血培養(yǎng)，，無特殊時間間要求?！薄P于于采采血血時時機機？03060時間間(分鐘鐘)體溫溫血培培養(yǎng)養(yǎng)采采血血時時機機細菌菌濃濃度度答案案：：采采集集血血培培養(yǎng)養(yǎng)樣樣本本的的最最佳佳時時間間盡可可能能在在患患者者寒寒戰(zhàn)戰(zhàn)或或開開始始發(fā)發(fā)熱熱時時采采血血在患患者者接接受受抗抗生生素素治治療療前前采采血血如患患者者已已經(jīng)經(jīng)應應用用抗抗菌菌藥藥物物進進行行治治療療，，應應在在下下一一次次用用藥藥之之前前采采血血培培養(yǎng)養(yǎng)“為為減減輕輕患患者者痛痛苦苦，，只只從從一一個個穿穿刺刺部部位位采采一一份份血血液液標標本本即即可可。?！薄薄P于于采采血血套套數(shù)數(shù)及及部部位位？基本本概概念念成人人““一一套套””血血培培養(yǎng)養(yǎng)應應該該包包括括需需氧氧瓶瓶和和厭厭氧氧瓶瓶各各一一個個，，也也叫叫““一一份份””注意意：：一一次次穿穿刺刺采采血血，，算算““一一套套””，，采采集集第第二二套套應應從從另另一一個個穿穿刺刺點點獲獲得得。。兒童童一一般般只只做做需需氧氧培培養(yǎng)養(yǎng)，，但但仍仍需需從從多多個個部部位位采采集集多多次次。。特特殊殊患患者者才才考考慮慮厭厭氧氧培培養(yǎng)養(yǎng)。。采血血套套數(shù)數(shù)Weinsteinetal.DetectionofBloodstreamInfectionsinAdults:HowManyBloodCulturesAreNeededJClinMicrobiol.2007;45:3546-3548表皮皮葡葡萄萄球球菌菌的的臨臨床床意意義義2－3套血血培培養(yǎng)養(yǎng)，，有有助助于于污污染染的的判判斷斷。。Tokars,JI.ClinInfectDis2004;39:333污染染菌菌致病病菌菌？采集集1套無無法法判判斷斷是是病病原原菌菌還還是是污污染染菌菌。。答案：關關于血培養(yǎng)套套數(shù)與采血部部位每位患者每次次采血最少2套，3套更好初發(fā)患者，絕絕不能只采1套標本多個穿刺部位位采血。因多多部位同時發(fā)發(fā)生污染的幾率率較小，便于于對結果進判判斷“兩套血培養(yǎng)養(yǎng)采集間隔無無特殊要求。?！薄P于采血間隔隔？答案：關于標標本采集間隔隔時間對于非持續(xù)性性菌血癥，同同時或短時間間內采集2－3套血培養(yǎng)，因因為體內巨噬噬細胞吞噬系系統(tǒng)會在15～30min內清除掉進入入人體內的細細菌。可疑急性心內內膜炎患者要要立即取血作作血培養(yǎng)，30分鐘內完成3套血培養(yǎng)的采采集，采集后后立即進行抗抗菌藥的經(jīng)驗驗治療。如果果24小時內報告陰陰性，則繼續(xù)續(xù)采集2套血培養(yǎng)?？梢傻膩喖毙孕孕膬饶ぱ谆蓟颊呙块g隔30分鐘至1h采集1套，連續(xù)采集集3套標本。如果果24小時內報告陰陰性，則繼續(xù)續(xù)采集2套血培養(yǎng)?！懊科坎杉喽嗌傺簾o特特殊要求?！薄薄P于采血量？采血量(ml)與檢出率的關關系Overall血培養(yǎng)物每增增加一毫升，，真性菌血癥癥成年人微生物物的檢出率增增加3％但并非越多越越好，超過一一定數(shù)量的采采血量會稀釋釋培養(yǎng)瓶內的的肉湯，使肉肉湯無法有效效中和血中的的抑制物質（（補體、抗體體、抗生素））。所以血液液與肉湯的最最佳比例為1：4－1：10答案：關于于采集血液量量采血量是影響響靈敏度最關關鍵因素成人一份標本本2個培養(yǎng)瓶（需需氧＋厭氧）），每瓶8－10ml，共20ml；要求至少采采兩份標本，，即40ml。兒童一般只需需采集需氧瓶瓶，在保證采采集血量＜1％總血量下，，一般為1－3ml采血量不足時時應優(yōu)先保證證需氧瓶，因因臨床90％以上的感染染為需氧菌或或兼性需氧菌菌感染先采生化、凝凝血標本，再再采血培養(yǎng)標標本?！薄P于各種血液標本本的采集順序序？血培養(yǎng)對無菌菌操作的要求求比注射、采采集生化、凝凝血等其它標標本要高。所以要最先采采集血培養(yǎng)標標本。污染率的指標標是<3%（100份標本里只能能有不到3個標本出現(xiàn)污污染。）答案：采各種種血液標本的的先后順序“消毒的重點點是足夠量的的消毒劑。””———關于皮膚及培培養(yǎng)瓶消毒？皮膚消毒程序序：推薦使用碘町町、洗必泰或或碘伏作為皮皮膚消毒劑。。碘町作用1min碘伏作用1.5-2min洗必泰作用時時間與碘町一一樣（但不能能用于少于2個月嬰兒皮膚膚消毒）培養(yǎng)瓶的消毒毒程序：去掉培養(yǎng)瓶口口的塑料瓶蓋蓋。75%酒精消毒血培培養(yǎng)瓶橡皮塞塞子60秒。自然待干。將標本注入培培養(yǎng)瓶內。5.顛倒混勻標本本與肉湯，以避免血液液凝集?！芭囵B(yǎng)瓶未使使用時，需要要冷藏或冷凍凍。”———關于培養(yǎng)瓶的儲存存溫度？不需冷藏，更更不能冷凍。。保存在15－25℃的室溫即可，，溫度過低會會導致對溫度度敏感的耐瑟瑟氏菌等死亡亡。答案：關于未未用培養(yǎng)瓶的的儲存溫度“加入標本后后的培養(yǎng)瓶夜夜班未能及時時送到檢驗科科，可以冷藏藏或放入35℃的溫箱?！薄P于夜班血培養(yǎng)的的送檢？培養(yǎng)瓶夜班未未能及時送到到檢驗科，存在室溫即可可，不能冷藏藏也不能放入入35℃的溫箱。過夜不會對檢檢測造成影響響，但仍需盡盡快送檢。冷冷藏可能導致致對溫度敏感感的耐瑟氏菌菌等死亡。溫溫箱會導致細細菌進入生長長對數(shù)期，從從而錯過檢測測的最佳時期期。答案：關于夜夜班血培養(yǎng)的的送檢“患者靜脈中中插有導管，，可直接從導導管采血。””———關于采血部位？不可以，常規(guī)血培養(yǎng)養(yǎng)不宜從靜脈脈導管或靜脈脈留置裝置中中采集，檢出出污染或定植植菌的可能性性較大。除非非懷疑導管相相關性血流感感染，請參照照導管相關性性血流感染的的采血方法。。答案：關于從從靜脈留置裝裝置直接采血血血培養(yǎng)標本的的拒收瓶子上帖的標標簽錯誤或未未帖標簽。血培養(yǎng)瓶打破破的、損壞的的或滲漏。血液凝固。培養(yǎng)基的選擇擇推薦使用商品品化的培養(yǎng)基基使用添加抗菌菌藥物吸附劑劑的血培養(yǎng)瓶瓶有助于提高高已接受抗菌菌藥物治療患患者血培養(yǎng)的的檢出率，增增加細菌的分分離率和分離離速度，但同同時也會增加加污染菌的檢檢出率。上呼吸道標本本上呼吸道感染染：絕大部分呼吸吸道感染局限限于口咽、鼻咽和和鼻腔部位；導致咽痛、鼻涕、、常常會發(fā)熱熱。感染喉部部、中耳、鼻鼻竇炎、結膜膜炎或角膜炎炎。可能與嚴重疾疾病百日咳、、流行性感冒冒、麻疹和傳傳染性單核細細胞增多癥并并存。不同的采樣拭拭子

對標本本的檢測結果果有影響嗎??棉+木棍抑菌區(qū)域的產(chǎn)產(chǎn)生由于棉中中所含的脂肪肪酸以及從木木棒中滲出的的樹脂和甲醛醛。咽拭子運送培培養(yǎng)基可以運送需氧氧、厭氧、苛苛養(yǎng)菌4℃或RT24或48小時建議用于病原原菌培養(yǎng)而不是是涂片片的標標本送送檢。。痰培養(yǎng)養(yǎng)標本本采集與與運送送病原體體種類類繁多多而復復雜使下呼呼吸道道感染染病原原診斷斷成為為難題題細菌（（包括括放線線菌與與奴卡卡菌，，厭氧氧菌與與分枝枝桿菌菌）真菌（（包括括肺孢孢子菌菌）病毒支原體體、衣衣原體體與立立克次次體原蟲寄生蟲蟲咳痰途途經(jīng)口口咽部部唾液中中口咽咽部定定植菌菌的濃濃度可可達108-109/ml。研究顯顯示，，國內內常規(guī)規(guī)痰標標本中中約半半數(shù)存存在唾唾液嚴嚴重污污染現(xiàn)現(xiàn)象。。不可避避免地地受到到污染染我國痰痰細菌菌培養(yǎng)養(yǎng)現(xiàn)狀狀標本送送檢率率低苛養(yǎng)菌菌檢出出率極極低結果重重復性性差報告速速度慢慢感染菌菌與污污染菌菌不易易區(qū)分分藥敏結結果與與治療療反應應存在在差距距下呼吸吸道感感染病病原學學診斷斷注意意事項項痰標本本的正正確采采集（（包括括導痰痰）痰標本本及時時運送送和處處理的的重要要性痰標本本的洗洗滌與與勻化化痰涂片片：質質量評評估和和細菌菌、真真菌初初步報報告接種平平板：：質量量與質質控，，血、、巧克克力、、麥康康凱、、沙保保弱培養(yǎng)環(huán)環(huán)境：：CO2培養(yǎng)時時間：：24h，48h菌落觀觀察要要點結果報報告：：所有有菌種種（群群），，包括括半定定量臨床意意義判判定其他病病原體體的檢檢測：：結核核、真真菌、、厭氧氧菌、、非典典型病病原體體下呼吸吸道感感染病病原學學診斷斷注意意事項項咳痰標標本的的采集集標本采采集方方法醫(yī)師或或護士士直視視下采采集標標本病人先先漱口口，去去除表表面的的菌群群教育病病人深深咳，，收集集從下下呼吸吸道咳咳出的的痰液液臨床上約半半數(shù)咳痰標標本不合格格！關于咳痰標標本在抗生素應應用前采集集痰標本;標本采集后后1～2h內必須立即即進行實驗驗室處理咳痰標本應應用最早且且廣泛，但但也是最受受爭議的標標本取標本前應應摘去牙托托，清潔口口腔如刷牙牙和漱口深咳，采集集標本過程程中要有專專業(yè)的醫(yī)務務人員指導導無痰可用3％～5％NaCl5ml霧吸約5min導痰也可用物理理療法、體體位引流、、鼻導管抽抽吸等法取取痰5種篩選標準準判斷14001份痰標本合合格率比較較

合格不合格不能歸類

標本數(shù)率％標本數(shù)率％標本數(shù)率％標準1474033.9925366.1*80.1標準2358325.611097.9*930966.5標準3483234.5916965.5－－標準4911565.1488634.9－－標準5637845.6762354.4－－注：標準2：衛(wèi)生部醫(yī)醫(yī)政局《全國臨床檢檢驗操作規(guī)規(guī)程》咳痰標本不不合格，退退檢嗎？如果低倍視視野下鱗狀狀上皮細胞胞大于25個，白細胞胞小于10個，應不做做或僅在特特殊要求時時做培養(yǎng)。。如做培養(yǎng)，，報告中注注明“鏡檢檢結果表明明標本口咽咽分泌物污污染明顯””。幾種下呼吸吸道直接采采集的標本本經(jīng)氣管穿刺刺吸引（transtrachealaspiration,TTA）經(jīng)胸壁針刺刺吸引（transthoracicneedleaspiration,TNA）經(jīng)支氣管鏡鏡采樣支氣管肺泡泡灌洗（bronchoalveolarlavage,BAL）經(jīng)支氣管鏡鏡直接吸引引防污染樣本本毛刷（protectivespecimenbrush,PSB）開胸肺活檢檢（open-lungbiopsy，OLB）經(jīng)人工氣道道吸引分泌泌物（endotrachealaspirates，ETA）痰培養(yǎng)的送送檢次數(shù)對于普通細細菌性肺炎炎，痰標本送檢檢每天1次，連續(xù)2～3天。不建議24h內多次采集集，除非痰痰液外觀性性狀出現(xiàn)改改變；懷疑分枝桿桿菌感染者者，應連續(xù)續(xù)收集3天清晨痰液液送檢；懷疑軍團菌菌或深部真真菌感染，，痰標本理理想的送檢檢次數(shù)尚無無定論。痰培養(yǎng)的運運送和保存存盡快（<2h）送至實驗驗室。如不能及時時送達，應應將標本暫暫存于4℃，但放置時時間不可超超過24h。厭氧培養(yǎng)標標本的最佳佳運送時間間取決于標標本量。被口口咽咽部部菌菌群群污污染染的的標標本本如如咳咳痰痰等等不不可可用用于于厭厭氧氧菌菌培培養(yǎng)養(yǎng)。。痰培培養(yǎng)養(yǎng)的的拒拒收收光學學顯顯微微鏡鏡細細胞胞學學檢檢查查發(fā)發(fā)現(xiàn)現(xiàn)口口咽咽分分泌泌物物污污染染明明顯顯。。沒有有標標簽簽或或貼貼錯錯標標簽簽。。運送送容容器器選選擇擇不不當當或或有有滲滲漏漏。。標本本采采集集不不符符合合要要求求。。同一一天天同同一一試試驗驗重重復復送送檢檢2次。。延時時送送至至實實驗驗室室的的標標本本。。尿培培養(yǎng)養(yǎng)標標本本采集集與與運運送送你知知道道嗎嗎？？尿液液通通常常是是無無菌菌的的或或一一過過性性有有少少量量微微生生物物，，但但是是尿尿道道內內或或尿尿道道周周圍圍皮皮膚膚的的菌菌群群會會污污染染尿尿液液標標本本，，從從而而可可能能導導致致錯錯誤誤的的培培養(yǎng)養(yǎng)結結果果。。診斷斷癥癥狀狀明明顯顯的的病病人人（（如如尿尿急急、、尿尿頻頻、、尿尿痛痛）），，一一份份標標本本就就已已足足夠夠，，治治療療48-72小時后后再采采集第第二份份標本本。對對于癥癥狀不不明顯顯的病病人，，需采采集2-3份標本本。懷懷疑腎腎結核核時，，應連連續(xù)3天采集集晨尿尿。多次收收集或或24小時尿尿不能能用作作培養(yǎng)養(yǎng)。申請單單上必必須注注明病病人癥癥狀是是否明明顯，，這對對于定定量培培養(yǎng)分分析非非常重重要，，尤其其只有有少量量尿液液標本本。室溫都都有利利于病病原菌菌和污污染菌菌會生生長繁繁殖，，因此此若30min內不能能及時時培養(yǎng)養(yǎng)尿液液則必必須冷冷藏，，但也也不能能超過過24小時。。尿培養(yǎng)養(yǎng)標本本清潔中中段尿尿導尿導導管尿尿經(jīng)恥骨骨上皮皮膚穿穿刺采采集膀膀胱內內尿液液送檢標標本以以晨起起第一一次尿尿液為為佳不能立立即送送檢者者，可可暫存存4℃冰箱，，但保保存不不超過過8h清潔中中段尿尿液盡量取取早晨晨第一