色譜分析 平面色譜法課件

平面色譜法《色譜分析法》系列課件第五章平面色譜法第一節(jié)概述1938年俄國人首先實現(xiàn)了在氧化鋁薄層上分離一種天然藥物。1965年德國化學家出版了“薄層色譜法”一書，推動了這一技術的發(fā)展。因TLC法設備簡單，分析速度快，分離效率高，結果直觀，很快被用作定性和半定量的方法。70年代中后期發(fā)展了高效薄層色譜。80年代以后發(fā)展了薄層色譜光密度掃描儀，和各步操作的儀器化，并實現(xiàn)了計算機化。Thin-layerchromatographyofstandardPLsamplesFig.1Description:Thethermo-stabilityofphospholipidsandlysophospholipidswasdeterminedbyonedimensionalthin-layerchromatography(TLC).Achloroform-methanol-28%aqueousammoniasolventsystem(65:35:8,v/v)providedclearseparationofmajorphospholipids(PL)andtheirlysoforms.The5%(w/v)dodecamolybdophosphoricacidsolutioninethanolwasusedassprayreagent.ThethermostabilityofphospholipidswasevaluatedbycomparethespotsdensityandareaofPLsampleswithvaryingheattreatment.Rapiddeterminationofthermo-stabilityofphospholipidsbyTLC二、平面色譜法的基本流程確定樣品的預處理方法選擇吸附劑和展開劑制備層析用薄板點樣層析分離顯色定性或定量分析分析結果，給出結論三、平面色譜法參數(shù)（一）定性參數(shù)1.比移值Rf(retardationfactor;Rf)溶質移動的距離與流動相移動距離之比

Rf范圍：

0<Rf<1Rf=0.2~0.8（常用）

Rf=0.3~0.5（最佳）Lds1ds2圖18－12.相對比移值Ris

討論參考物與被測組分在完全相同條件下展開可以消除系統(tǒng)誤差，大大提高重現(xiàn)性和可靠性；參考物可以是后加入純物質，也可是樣品中已知組分相對比移值Ris與組分、參考物性質及色譜條件有關，范圍可以大于或小于1（三）容量因子k’與比移值Rf的關系容量因子：k’=ts/tmts

、tm分別為組分在固定相和展開劑中的保留時間保留值的定義：2.分離數(shù)(separationnumber;SN)定義：相鄰斑點分離度為1.177時，在Rf=0(原點)到Rf=1(溶劑前沿)之間能容納的色譜斑點數(shù)。

W(1/2)0,W(1/2)1為實驗測得的某組分色譜峰的半峰寬對ds作圖外推至在原點處和溶劑前沿處的半峰寬。

一般薄層板的分離數(shù)為7~10，高效薄層板可達10~20。SN是衡量分離容量的重要參數(shù)。概述1．TLC定義：將固定相均勻涂布在表面光滑的平板上，形成薄層而進行色譜分離和分析的方法2．操作過程：鋪板→活化

→點樣

→

展開

→定位(定性)/洗脫(定量)3．分離機制：吸附*、分配*、離子交換、空間排阻4．特點；分離能力強、靈敏度高、展開時間較短、顯色方便。5．應用：藥物雜質檢查、純度測定、定性及定量等。一、主要類型（一）吸附薄層色譜

固定相為吸附劑的薄層色譜。利用吸附劑對不同組分的吸附能力差異而實現(xiàn)分離.經過吸附、解吸、再吸附、再解吸……最后混合物得到分離.K大，Rf值小，移動慢；K小，Rf大，移動快。（二）分配薄層色譜

固定相為液體，吸留在載體上的薄層色譜。利用被分離組分在固定相與流動相中的分配系數(shù)不同而被分離。常用的是反相薄層色譜法，固定相是烷基化學鍵合相，展開劑是水及與水相溶的有機溶劑。二、吸附劑與展開劑(一）吸附劑1.硅膠：硅膠H------不含黏合劑硅膠G------含煅石膏（13-15%）硅膠F254---既含煅石膏，又含熒光指示劑2.氧化鋁：可分為中性（pH7.5)、堿性（pH9.0）和酸性（pH4.0）（二）展開劑常用的有：

石油醚<環(huán)己烷<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烷<苯<甲苯<二氯甲烷<乙醚<氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<吡啶<酸<水吸附劑與展開劑的選擇展開劑的選擇：根據(jù)被測組分、吸附劑和展開劑本身的極性吸附劑的選擇：根據(jù)被測物極性和吸附劑的吸附能力

被測物極性強——弱極性吸附劑

被測物極性弱——強極性吸附劑圖18－3連續(xù)展開：層析缸，預飽和，防止邊緣效應浸入展開劑深度0.51.0cm，展開至整板3/4距離,標記。1,2樣品3標準品前沿原點

???1.5-2.0cm2.0cm123展開方式展開方式二維展開——在兩個垂直的方向上進行展開。將樣品點在薄層板的一個角上，展開適當距離后，揮干溶劑，再將薄層板以與原展開方向成90

的方向進行展開。原點12定量分析1.目視比較半定量2.測量斑點面積3.洗脫法4.薄層掃描法五、高效薄層色譜法高效薄層色譜法（highperformancethinlayerchromatography；HPTLC)所用的吸附劑顆粒很?。?μm或10μm），用噴霧法制成高效薄層板。常用的有硅膠、氧化鋁、纖維素和化學鍵合相預制薄層板。第四節(jié)紙色譜法以紙做載體的色譜法，分離原理屬于液-液分配色譜法，操作與薄層法類似。選紙→點樣

→

展開

→顯色(定性)/洗脫(定量)固定相：紙纖維吸附的水流動相：與水不互溶的有機溶劑（水飽和正丁醇）分離機制：同液-液分配色譜定性參數(shù)：討論：Rf與組分性質、流動相及溶解度有關極性組分→易保留，Rf?。鲃酉鄻O性↑，Rf↑）非極性組分→易流出，Rf大（流動相極性↑，Rf↓）本章小結掌握:平面色譜法的基本分離原理及相關參數(shù)的計算（比移值、相對比移值，分離度）；薄層色譜法的特點；吸附薄層色譜中吸附劑和展開劑的選擇原則。熟悉:薄層色譜法的主要操作步驟。了解:薄層掃描法的應用及技術；紙色譜法的分離原理及實驗條件。參考書及文獻1.《分析化學》（第四版）下冊，孫毓慶主編，人民衛(wèi)生出版社2．周同惠等．紙色譜和薄層色譜。分析化學叢書．第三卷．第五冊．北京：科學出版社，1989．3．林珍安等譯．高效薄層色譜．上海：上?？萍汲霭嫔?，1984．4.孫毓慶主編．薄層掃描法及其在藥物分析中的應用．北京，人民衛(wèi)生出版社，1990．5.FriedBandShermaJ．Thin-layerChromatography．NewYork：MarcelDekkerlnc，1982．6.GrinbergN．ModernThin-layerChromatography．NewYork：MarcelDekkerlnc，1990。7.ShermaJandFriedB．HandbookofThin-LayerChromatography.NewYork：MarcelDekkerlnc，1991.（二）相平衡參數(shù)相平衡參數(shù)：分配系數(shù)K和容量因子k前面推導出R’表示單位時間內一個分子在流動相中出現(xiàn)的幾率，也可以表示組分分子在平面上移動的速度.Rf＝L/L0=ut/u0t，定時展開時R’＝Rf討論

⑴

Rf與K有關，即