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pET表達(dá)系統(tǒng)的原理pET表達(dá)系統(tǒng)的原理強(qiáng)大、靈活的pET表達(dá)系統(tǒng)使用乳糖或乳糖類似物進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)的時(shí)機(jī)完全由人為決定，可控性強(qiáng)。非誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下，采用一定的措施可以使目的基因完全處于沉默狀態(tài)而不轉(zhuǎn)錄。充分誘導(dǎo)時(shí)，幾乎所有的細(xì)胞資源都用于表達(dá)目的蛋白；誘導(dǎo)表達(dá)后僅幾個(gè)小時(shí)，目的蛋白通?？梢哉嫉郊?xì)胞總蛋白的50%以上?？煽刂频谋磉_(dá)低本底的表達(dá)高效率的表達(dá)內(nèi)容介紹乳糖操縱子的正負(fù)調(diào)控T7RNA聚合酶pET表達(dá)系統(tǒng)123乳糖操縱子的負(fù)調(diào)控IPOZYAImRNAImRNA翻譯出的阻遏蛋白結(jié)合到啟動(dòng)子部位，阻止lac

操縱子基因的轉(zhuǎn)錄IPOZYAImRNAlacmRNA誘導(dǎo)物與阻遏蛋白結(jié)合使阻遏蛋白無法與啟動(dòng)子結(jié)合，轉(zhuǎn)錄順利進(jìn)行，表達(dá)相應(yīng)的酶誘導(dǎo)物存在時(shí)誘導(dǎo)物不存在時(shí)誘導(dǎo)物誘導(dǎo)物乳糖操縱子的正調(diào)控IPOZYAlacmRNA在細(xì)菌饑餓時(shí)，胞內(nèi)的cAMP濃度會(huì)上升，與CAP結(jié)合促使后者活化。蛋白復(fù)合體可以結(jié)合到lac啟動(dòng)子區(qū)域，提高啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄效率。誘導(dǎo)物誘導(dǎo)物cAMPCAPlacUV5與cAMP-CAP復(fù)合體的親和能力大大降低在沒有cAMP-CAP復(fù)合體的情況下能更好的轉(zhuǎn)錄laclacUV5只受lacI阻遏蛋白調(diào)控T7RNA聚合酶

λ(DE3)噬菌體，單鏈蛋白。

只識別λ噬菌體啟動(dòng)子，不識別大腸桿菌啟動(dòng)子。

噬菌體啟動(dòng)子不能被大腸桿菌RNA聚合酶識別。

RNA的合成速度是大腸桿菌RNA聚合酶的5倍來源專一性轉(zhuǎn)錄效率pET系統(tǒng)表達(dá)原理lacUV5T7RNAPolymerasegeneE.Coli基因組lacI阻遏蛋白誘導(dǎo)的情況下pET目標(biāo)基因T7啟動(dòng)子乳糖或

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