實(shí)驗(yàn)二染色體標(biāo)本制備_第1頁
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實(shí)驗(yàn)二人類外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)

及染色體標(biāo)本的制備

溫州醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院生物系唐霄雯

1、學(xué)習(xí)人類外周血淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

2、掌握人類淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備。目的要求實(shí)驗(yàn)原理有絲分裂中期相的染色體具有一定形態(tài)和大小，且輪廓結(jié)構(gòu)最為典型。1952年美籍華人徐道覺發(fā)現(xiàn)低滲可以使細(xì)胞膨脹，染色體分散。1956年美籍華人蔣有興和Leran等人，在染色體制片中利用了可以破壞紡錘絲使細(xì)胞分裂停止在中期的秋水仙素。1960年Nowell等人發(fā)現(xiàn)植物凝集素（簡(jiǎn)稱PHA）可以使處于G1期或G0期的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，從而進(jìn)入分裂期。在制備人類染色體標(biāo)本時(shí)，外周血淋巴細(xì)胞常做為首選材料。加固定液至5ml,靜置15’5ml培養(yǎng)液+0.5ml血70h

加秋水仙素繼續(xù)培養(yǎng)至72h

收集細(xì)胞1000rpm,8’

棄上清

37℃0.075MKCl6ml,混勻37℃,水浴15’預(yù)固定(加固定液1ml,輕混勻)

1000rpm,8’

1000rpm,8’棄上清棄上清沉淀沉淀加固定液5ml，靜置15’

制備片：每人1張(滴片、微烤、晾干)

1000rpm,8’棄上清鏡檢

Ⅲ、Ⅳ號(hào)片待用Ⅱ號(hào)片染色5’,水洗正常人類染色體各組的主要形態(tài)組號(hào)染色體號(hào)形態(tài)著絲粒位置隨體A1-3最大1、3號(hào)中央著絲粒無2號(hào)亞中著絲粒B4-5次大亞中著絲粒無C6-12+X中等亞中著絲粒無D13-15中等近端著絲粒有E16-18小16號(hào)中央著絲粒無17、18號(hào)亞中著絲粒F19-20次小中央著絲粒無G21-22+Y最小近端著絲粒21、22有、Y無注意事項(xiàng)1、兩人一組，每組一個(gè)培養(yǎng)瓶，共制備四張染色體標(biāo)本，每張玻片請(qǐng)標(biāo)上Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。2、培養(yǎng)瓶分普通培養(yǎng)和加BrdU培養(yǎng)兩種，請(qǐng)拿到標(biāo)有Brdu培養(yǎng)瓶的小組在制備好的玻片上

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