醫(yī)學(xué)免疫學(xué)試驗(yàn)教學(xué)大綱

?醫(yī)學(xué)免疫學(xué)?實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱實(shí)驗(yàn)名稱：醫(yī)學(xué)免疫學(xué)學(xué)時(shí)：6學(xué)時(shí)學(xué)分：適應(yīng)專業(yè)：護(hù)理學(xué)專業(yè)執(zhí)筆人：邊藏麗審定人：王愷兵一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c任務(wù)實(shí)驗(yàn)教學(xué)是醫(yī)學(xué)免疫學(xué)教學(xué)的重要組成局部,通過(guò)實(shí)驗(yàn)教學(xué)加深對(duì)根底理論知識(shí)的理解,了解常用的免疫學(xué)檢查方法,掌握免疫學(xué)根本實(shí)驗(yàn)技術(shù)〔試管凝集、玻片凝集、對(duì)流免疫電泳、免疫細(xì)胞形態(tài)觀察、淋巴細(xì)胞別離、ELISA等〕,培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的科學(xué)態(tài)度以及觀察、分析、綜合水平、創(chuàng)造思維水平和初步的科研水平.、教學(xué)根本要求醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)象多為具有傳染性的材料,要求學(xué)生在實(shí)驗(yàn)教學(xué)中嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)那么,牢固樹(shù)立無(wú)菌觀念,認(rèn)真操作與觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果,實(shí)事求是的記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果,并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行認(rèn)真分析和討論.三、實(shí)驗(yàn)工程與類型序號(hào)實(shí)驗(yàn)工程學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)類型備注驗(yàn)證設(shè)計(jì)綜合創(chuàng)新必做選做1凝集反響〔試管凝集、玻片凝集〕3V????,?2對(duì)流免疫電泳、血型鑒定2V????,?3小鼠吞噬細(xì)胞及轉(zhuǎn)化細(xì)胞形態(tài)觀察2???,?,?4酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)一ELISA〔HBsAg檢測(cè)〕3?,????,5豚鼠過(guò)敏試驗(yàn)2?,????,四、實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容及學(xué)時(shí)分配實(shí)驗(yàn)一凝集反響〔試管凝集、玻片凝集〕3學(xué)時(shí).目的要求掌握體外抗原抗體反響的特點(diǎn)和影響因素；掌握凝集反響原理、方法和用途..方法原理顆粒性抗原與相應(yīng)抗體在一定條件下特異性結(jié)合而出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象..主要實(shí)驗(yàn)儀器及材料試管、玻片、水浴箱、吸管、傷寒桿菌"H〞"O'診斷菌液、大腸埃希菌、大腸埃希菌診斷血清等..掌握要點(diǎn)掌握凝集反響原理、方法和用途；血清效價(jià)；凝集現(xiàn)象的觀察..實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：(1)玻片凝集(抗原定性試驗(yàn))(2)試管凝集(抗體定量試驗(yàn))實(shí)驗(yàn)二對(duì)流免疫電泳、血型鑒定2學(xué)時(shí).目的要求掌握沉淀的反響原理、方法和用途；了解對(duì)流免疫電泳的操作步驟,結(jié)果觀察；掌握血型鑒定的反響原理、方法及結(jié)果判斷..方法原理對(duì)流免疫電泳是將經(jīng)典沉淀反響與電泳技術(shù)結(jié)合而設(shè)計(jì)的一項(xiàng)實(shí)驗(yàn).沉淀反響是指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在一定條件下發(fā)生結(jié)合并出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀物的一種血清學(xué)反響.帶電的膠體顆粒可在電場(chǎng)中移動(dòng),其移動(dòng)方向與膠體顆粒所帶電荷有關(guān).抗原在的緩沖帶負(fù)電荷,將抗原加于瓊脂板陰極端的小孔中,由陰極向陽(yáng)極移動(dòng)；抗體為球蛋因電滲作用而流向陰極.當(dāng)抗原抗體在兩孔間相遇時(shí),在兩者比例適當(dāng)處形成白色沉淀線.此種在雙向瓊指擴(kuò)散根底上加電泳的方法,稱為對(duì)流免疫電泳.血型鑒定屬直接凝集反響.將標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血型抗體分別與待測(cè)紅細(xì)胞混合.如果抗原與抗體相對(duì)應(yīng),那么引起紅細(xì)胞凝集,反之那么不凝集,據(jù)其凝集現(xiàn)象可判斷血型..主要實(shí)驗(yàn)儀器及材料標(biāo)準(zhǔn)白^抗A和抗B單克隆抗體(抗A為藍(lán)色,抗B為黃色)、酒精棉球、采血針、載玻片、待測(cè)血清、甲胎蛋白診斷血清,肝癌病人陽(yáng)性血清,L巴比妥緩沖液,瓊脂對(duì)流免疫板、打孔器、加樣器、電泳儀等..掌握要點(diǎn)(1)對(duì)流免疫電泳的操作步驟,結(jié)果觀察；(2)血型鑒定的方法及結(jié)果判斷..實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：(1)講述沉淀的反響原理、方法和用途；對(duì)流免疫電泳的操作步驟,結(jié)果觀察；血型鑒定的反響原理、方法及結(jié)果判斷；(2)對(duì)流免疫電泳的操作及結(jié)果觀察；(3)血型鑒定的操作及結(jié)果觀察；實(shí)驗(yàn)三小鼠吞噬細(xì)胞及轉(zhuǎn)化細(xì)胞形態(tài)觀察2學(xué)時(shí).目的要求觀察吞噬細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象；了解機(jī)體的非特異性免疫功能.觀察轉(zhuǎn)化細(xì)胞、淋巴母細(xì)胞的形態(tài)了解機(jī)體的特異性免疫功能..方法原理巨噬細(xì)胞可吞噬異種或異體細(xì)胞等體積較大的異物,中性粒細(xì)胞可吞噬多種細(xì)菌.觀察這兩類細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象,可計(jì)算出吞噬異物的細(xì)胞數(shù)和吞噬細(xì)胞中吞入的異物數(shù),用以評(píng)價(jià)機(jī)體的免疫狀態(tài).淋巴細(xì)胞,在受抗原的刺激后,可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞,淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的上下可反映機(jī)體細(xì)胞免疫水平..主要實(shí)驗(yàn)儀器及材料昆明小白鼠、表皮葡萄球菌、瑞氏染液、顯微鏡、玻片等..掌握要點(diǎn)小白鼠腹腔解剖；觀察吞噬細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象；觀察轉(zhuǎn)化細(xì)胞、淋巴母細(xì)胞的形態(tài)..實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：(1)小白鼠腹腔解剖；(2)標(biāo)本片制作(3)瑞氏染液、(4)油鏡下觀察轉(zhuǎn)化細(xì)胞、淋巴母細(xì)胞的形態(tài).實(shí)驗(yàn)四酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)一ELISA(HBsAg檢測(cè))2學(xué)時(shí).目的要求了解ELISA的類型,雙抗體夾心法的操作方法,掌握結(jié)果觀察及實(shí)際應(yīng)用..方法原理酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是一種用酶標(biāo)化抗原或抗體,以提升抗原抗體反響的靈敏度的免疫學(xué)檢測(cè)方法.本技術(shù)肯有敏感性高,特異性強(qiáng),易觀察結(jié)果,便于大規(guī)模檢測(cè)的特點(diǎn).ELISA的類型有間接法、雙抗體夾心法、抗原競(jìng)爭(zhēng)法等.雙抗體夾心法是將抗原結(jié)合于已預(yù)先包被的抗體上,再以酶標(biāo)抗體與抗原結(jié)合,通過(guò)觀察酶對(duì)底物的摧化反響所產(chǎn)和的顏色變化,來(lái)判斷抗原的存在及含量..主要實(shí)驗(yàn)儀器及材料HBAg酶標(biāo)試劑盒,內(nèi)含：已包被抗-HBs微量反響板、陽(yáng)性限制血清、陰性限制血清、酶標(biāo)抗-HBs、酶底物A、酶底物以中止液、洗滌液.待檢血清、微量加樣器、吸頭等..掌握要點(diǎn)準(zhǔn)確加樣；準(zhǔn)確掌握每步操作時(shí)間；認(rèn)真觀察分析結(jié)果.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：ELISA檢測(cè)HBsAg(或抗一HBsAg)實(shí)驗(yàn)五豚鼠過(guò)敏試驗(yàn)2學(xué)時(shí).目的要求了解實(shí)驗(yàn)性過(guò)敏性休克的方法及結(jié)果觀察；在此根底上掌握I型超敏反響的機(jī)制、臨床表現(xiàn)及特點(diǎn)..方法原理豚鼠過(guò)敏反響屬I型超敏反響,與人類的青霉素和異種血清所引起的過(guò)敏性休克相似.先給豚鼠注射異種蛋白,經(jīng)過(guò)一定時(shí)間,動(dòng)物產(chǎn)生IgE后處于致敏狀態(tài).當(dāng)?shù)诙蜗嗤^大量抗原注射時(shí),抗原與IgE結(jié)合,導(dǎo)致肥大細(xì)胞和堿性粒細(xì)胞脫顆粒,釋放活性介質(zhì),作用于效應(yīng)器官,產(chǎn)生嚴(yán)重的過(guò)敏性休克..主要實(shí)驗(yàn)儀器及材料豚鼠：體重150g左右的幼小豚鼠、馬血清(或人血清)、注射器、剪刀、酒精棉球等..掌握要點(diǎn)掌握抗原注射劑量；第二次相同抗原注射時(shí)間；豚鼠發(fā)敏、過(guò)敏性休克現(xiàn)象觀察..實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：(1)豚鼠致敏注射(2)豚鼠發(fā)敏、過(guò)敏性休克現(xiàn)象觀察.五、考核方法考勤、實(shí)驗(yàn)操作50%實(shí)驗(yàn)報(bào)告