肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會講課課件

肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會1（優(yōu)選）肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會（優(yōu)選）肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會22.石蠟切片每張玻片上應放置超過6個連續(xù)組織切片，有助于肝纖維化的病理診斷。2.石蠟切片33.染色除常規(guī)ＨＥ染色供病理診斷用之外，根據條件和需要作以下特殊染色

①網狀纖維染色，

②Masson三色染色，

③膠原纖維染色(Siriusred或免疫組化)

3.染色除常規(guī)ＨＥ染色供病理診斷用之外，根據條件4④Dm-HSC⑤α-SMA-MFbDmα-SMA④Dm-HSCDmα-SMA5S1S2S3S4各種病因引起肝纖維的病理學特點及分期1.慢性肝炎肝纖維化(Dr.Scheuer方案）S1S2S3S4各種病因引起肝纖維的病理學特點及分期6活動性纖維間隔靜止性纖維間隔活動性纖維間隔靜止性纖維間隔7脂肪性肝病肝纖維化穿刺肝組織呈淡黃色，標本懸浮于固定液小葉中央區(qū)纖維化竇周纖維化脂肪性肝病肝纖維化小葉中央區(qū)纖維化83.肝糖原累積病肝纖維3.肝糖原累積病肝纖維94.Wilson病紅氨酸(Rubeanicacid)染色,銅被染成深綠色4.Wilson病紅氨酸(Rubeanicacid)105.血色病

穿刺肝組織因含有大量含鐵血黃素沉著呈火焰紅色肝細胞普魯氏藍染色陽性5.血色病肝細胞普魯氏藍染色陽性116.自身免疫性肝炎肝纖維化（AIH）

門管區(qū)肝細胞呈花環(huán)狀排列HepaticRosette，表現為數個水樣變性的肝細胞被炎癥細胞和塌陷的網狀支架包繞成花環(huán)狀結構。6.自身免疫性肝炎肝纖維化（AIH）127.原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）

3期（間隔期）90%出現自身抗體(A-Mit)，Floridductlesion+BiliaryPN，

纖維間隔形成，肝細胞羽毛狀變性4期（肝硬化）靜止-纖維間隔內無炎癥或輕度炎癥活動–FibrousPN.7.原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）138.血吸蟲性肝纖維化8.血吸蟲性肝纖維化14肝癌(LIVERCANCER)HCCICCCombinedhepatocellularandcholangiocarcinoma肝癌(LIVERCANCER)HCC15ELPS(二步法)轉移性腺癌74100%+HCC:011%+膽管型CK:CK19,CK7HCC陽性率1582%EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,活動性纖維間隔靜止性纖維間隔液氮法:將OCT包埋的組織塊投入液氮數秒,等組織塊凍結后,立即移入低溫冰箱(裝入封口塑料袋內密封)或放入恒冷切片機恒冷箱內以備切片;速凍:目的是使溫度很快下降迅速通過冰點,防止冰結晶產生。免疫組織化學染色的幾點體會⑤α-SMA-MFb20世紀80年代（1981）許世民ABC（親和免疫組化）(2)最大限度地保存抗原性?！锓乐贡Y晶!!!RB200(四乙基羅達明B200)用570nm光激發(fā),596～600nm濾片觀察,呈橘紅色ICC:10%+肝癌(LIVERCANCER)選擇最合適的固定劑,如用福爾馬林,必須用緩沖福爾馬林4期（肝硬化）靜止-纖維間隔內無炎癥或輕度炎癥纖維間隔形成，肝細胞羽毛狀變性肝癌病理診斷常用免疫組化和特染HepPar1線粒體相關抗原，與AFP無關對胎兒和成人肝細胞高度特異(HCC:陽性率8297%）

ELPS(二步法)肝癌病理診斷常用免疫組化和特染HepPa16AFPHCC陽性率1582%AFP17CD34:HCC型染色長條分枝，管壁纖細，管腔狹窄，分布均勻彌漫.而非癌肝組織內極少見.CD34:18CK18:HCC,ICC,Metastaticcarcinoma:100%+

上皮性腫瘤標志物CK18:19CK19:膽管型CK:CK19,CK7肝細胞－膽管上皮，ICC77100%ICC最好的標志物CK19:20CEAmonoclonalCEA:毛細膽管－ICC，轉移性肝癌6075%+HCC:011%+polyclonalCEA:毛細膽管＋HCC特異標志物之一

CEA21CK20:胃腸道腺癌的主要標志物轉移性腺癌74100%+ICC:10%+HCC:0%+CK20:22MOC31:抗人上皮相關抗原轉移性腺癌100%+ICC:92.9%+HCC:0%+胃癌肝轉移MOC31:抗人上皮相關抗原23HBsAg:HCC:7080%+胞質型，胞核型陽性胞質型，核周型陽性HBsAg:胞質型，胞核型陽性胞質型，核周型陽性24黏液染色AB/PAS酸性黏多糖蘭色（膽管腺瘤,ICC腔內黏液）中性黏多糖,糖原紅色（假腺管型HCC)

黏液染色AB/PAS25免疫組織化學染色的幾點體會一、組織和細胞標本制備目的(1)最大限度地保存組織結構。(2)最大限度地保存抗原性。注意事項在選擇組織處理方法前，先根據實驗目的，參考抗體說明，確定組織處理方式(冰凍?石蠟?)。免疫組織化學染色的幾點體會一、組織和細胞標本制備261.取材（1）原則盡可能新鮮，動物標本可選用動脈灌注固定。（2）取材部位盡量包括病灶和正常組織交界處，避免選擇壞死組織。（3）避免擠壓受擠壓組織不但影響HE切片的觀察，還造成非特異性免疫組化組織著色。1.取材（1）原則盡可能新鮮，動物標本可選272.固定根據不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時組織越新鮮越好。組織塊厚薄大小要合適。容器要大,固定液要寬余.固定時間既要考慮充分固定,又不能太長(依組織塊厚薄大小從24hr至3～5天,太長可溶性抗原會滲漏,陽性會減弱甚至轉陰.選擇最合適的固定劑,如用福爾馬林,必須用緩沖福爾馬林2.固定根據不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時組織越新28用于培養(yǎng)細胞效果較好,石蠟切片因常有自發(fā)熒光,背景熒光較強,用時要注意EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,4期（肝硬化）靜止-纖維間隔內無炎癥或輕度炎癥轉移性腺癌74100%+而非癌肝組織內極少見.直接免疫熒光法:干冰丙酮法:將200ml丙酮注入小型廣口保溫瓶或保溫杯內,逐漸加入干冰至飽和不再冒泡為止,溫度可達70℃;將裝有50ml異戊烷的小燒杯緩慢置入干冰丙酮飽和液中;然后將OCT包埋的組織塊投入異戊烷內速凍半分至一分鐘。自身免疫性肝炎肝纖維化（AIH）根據不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時組織越新鮮越好。（1）原則盡可能新鮮，動物標本可選注意事項在選擇組織處理方法前，先根據實驗目的，參考抗體說明，確定組織處理方式(冰凍?石蠟?)。EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,ICC:10%+常用蘇木精或甲基綠襯染細胞核。HCC陽性率1582%ICC:10%+免疫熒光染色后應盡快觀察、拍照。絕大多數免疫酶染色后都可用樹膠封固，但如用DAB以外的底物應注意有色沉淀物如為脂溶性，應改用水溶性封固物如明膠、甘油緩沖液等。③膠原纖維染色(Siriusred或免疫組化)穿刺肝組織呈淡黃色，標本懸浮于固定液3.制備蠟塊沖水、脫水、透明、包埋。盡可能采用低溫石蠟包埋,如無低溫石蠟,可將組織塊盡可能修薄,以縮短脫水、透明、包埋時間,盡可能保存組織內抗原穩(wěn)定。用于培養(yǎng)細胞效果較好,石蠟切片因常有自發(fā)熒光,背景熒光較強294.制備冰凍切片冷凍包埋能較好保存抗原,新鮮及已固定材料均適合于冷凍包埋、切片?！锓乐贡Y晶!!!預處理:目的是減少組織中的水分以減少冰結晶的產生,方法是將已固定、沖洗的組織塊放入20～30%蔗糖緩沖液內,4℃冰箱過夜,再將組織塊埋于OCT包埋劑速凍:目的是使溫度很快下降迅速通過冰點,防止冰結晶產生。4.制備冰凍切片冷凍包埋能較好保存抗原,新鮮及已固定材料均適30速凍方法液氮法:將OCT包埋的組織塊投入液氮數秒,等組織塊凍結后,立即移入低溫冰箱(裝入封口塑料袋內密封)或放入恒冷切片機恒冷箱內以備切片;干冰丙酮法:將200ml丙酮注入小型廣口保溫瓶或保溫杯內,逐漸加入干冰至飽和不再冒泡為止,溫度可達70℃;將裝有50ml異戊烷的小燒杯緩慢置入干冰丙酮飽和液中;然后將OCT包埋的組織塊投入異戊烷內速凍半分至一分鐘。速凍方法液氮法:將OCT包埋的組織塊投入液氮數秒,等組織塊凍31免疫組化染色后的襯染常用蘇木精或甲基綠襯染細胞核。但如果陽性信號在細胞核,切勿襯染細胞核!!!細胞質襯染:1%亮綠,但退色較快,可改用堅固綠(FASTBLUE)染,則保存時間較長免疫組化染色后的襯染常用蘇木精或甲基綠襯染細胞核。但如果陽性32封固和保存絕大多數免疫酶染色后都可用樹膠封固，但如用DAB以外的底物應注意有色沉淀物如為脂溶性，應改用水溶性封固物如明膠、甘油緩沖液等。酶免疫染色切片可保存數周甚至數月。免疫熒光染色后應盡快觀察、拍照。封固和保存絕大多數免疫酶染色后都可用樹膠封固，但如用DAB以33一.常用免疫組織化學方法免疫熒光:

用于培養(yǎng)細胞效果較好,石蠟切片因常有自發(fā)熒光,背景熒光較強,用時要注意

FITC(異硫氰酸熒光素)用450～490nm光激發(fā),515nm濾片觀察,呈翠綠色

RB200(四乙基羅達明B200)用570nm光激發(fā),596～600nm濾片觀察,呈橘紅色

TRITC(四甲基異硫氰酸羅達明)用530～560nm光激發(fā),580nm濾片觀察,呈紅色

Texasred

用595nm光激發(fā),615nm濾片觀察,呈紅色直接免疫熒光法:

間接免疫熒光法雙重熒光染色一.常用免疫組織化學方法342.免疫組織化學常用方法:PAPABC或LSABELPS(二步法)2.免疫組織化學常用方法:3520世紀70年（1970）SternbergPeroxidase-anti-Peroxidase(PAP)肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會講課課件3620世紀80年代（1981）許世民ABC（親和免疫組化）

Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex20世紀80年代（1981）許世民ABC（親和免疫組37（3）避免擠壓受擠壓組織不但影響4期（肝硬化）靜止-纖維間隔內無炎癥或輕度炎癥肝細胞普魯氏藍染色陽性肝細胞普魯氏藍染色陽性一、組織和細胞標本制備TRITC(四甲基異硫氰酸羅達明)用530～560nm光激發(fā),580nm濾片觀察,呈紅色固定時間既要考慮充分固定,又不能太長(依組織塊厚薄大小從24hr至3～5天,太長可溶性抗原會滲漏,陽性會減弱甚至轉陰.③膠原纖維染色(Siriusred或免疫組化)織交界處，避免選擇壞死組織。TRITC(四甲基異硫氰酸羅達明)用530～560nm光激發(fā),580nm濾片觀察,呈紅色干冰丙酮法:將200ml丙酮注入小型廣口保溫瓶或保溫杯內,逐漸加入干冰至飽和不再冒泡為止,溫度可達70℃;將裝有50ml異戊烷的小燒杯緩慢置入干冰丙酮飽和液中;然后將OCT包埋的組織塊投入異戊烷內速凍半分至一分鐘。干冰丙酮法:將200ml丙酮注入小型廣口保溫瓶或保溫杯內,逐漸加入干冰至飽和不再冒泡為止,溫度可達70℃;將裝有50ml異戊烷的小燒杯緩慢置入干冰丙酮飽和液中;然后將OCT包埋的組織塊投入異戊烷內速凍半分至一分鐘。活動性纖維間隔靜止性纖維間隔干冰丙酮法:將200ml丙酮注入小型廣口保溫瓶或保溫杯內,逐漸加入干冰至飽和不再冒泡為止,溫度可達70℃;將裝有50ml異戊烷的小燒杯緩慢置入干冰丙酮飽和液中;然后將OCT包埋的組織塊投入異戊烷內速凍半分至一分鐘。(1)最大限度地保存組織結構。ICC最好的標志物對胎兒和成人肝細胞高度特異90年代中期：EnhancedPolymerOneStep(EPOS)EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,ELPS)簡稱二步法

1mol含70molHRP+10molAB（3）避免擠壓受擠壓組織不但影響90年代中期：Enhance38肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會39（優(yōu)選）肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會（優(yōu)選）肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會402.石蠟切片每張玻片上應放置超過6個連續(xù)組織切片，有助于肝纖維化的病理診斷。2.石蠟切片413.染色除常規(guī)ＨＥ染色供病理診斷用之外，根據條件和需要作以下特殊染色

①網狀纖維染色，

②Masson三色染色，

③膠原纖維染色(Siriusred或免疫組化)

3.染色除常規(guī)ＨＥ染色供病理診斷用之外，根據條件42④Dm-HSC⑤α-SMA-MFbDmα-SMA④Dm-HSCDmα-SMA43S1S2S3S4各種病因引起肝纖維的病理學特點及分期1.慢性肝炎肝纖維化(Dr.Scheuer方案）S1S2S3S4各種病因引起肝纖維的病理學特點及分期44活動性纖維間隔靜止性纖維間隔活動性纖維間隔靜止性纖維間隔45脂肪性肝病肝纖維化穿刺肝組織呈淡黃色，標本懸浮于固定液小葉中央區(qū)纖維化竇周纖維化脂肪性肝病肝纖維化小葉中央區(qū)纖維化463.肝糖原累積病肝纖維3.肝糖原累積病肝纖維474.Wilson病紅氨酸(Rubeanicacid)染色,銅被染成深綠色4.Wilson病紅氨酸(Rubeanicacid)485.血色病

穿刺肝組織因含有大量含鐵血黃素沉著呈火焰紅色肝細胞普魯氏藍染色陽性5.血色病肝細胞普魯氏藍染色陽性496.自身免疫性肝炎肝纖維化（AIH）

門管區(qū)肝細胞呈花環(huán)狀排列HepaticRosette，表現為數個水樣變性的肝細胞被炎癥細胞和塌陷的網狀支架包繞成花環(huán)狀結構。6.自身免疫性肝炎肝纖維化（AIH）507.原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）

3期（間隔期）90%出現自身抗體(A-Mit)，Floridductlesion+BiliaryPN，

纖維間隔形成，肝細胞羽毛狀變性4期（肝硬化）靜止-纖維間隔內無炎癥或輕度炎癥活動–FibrousPN.7.原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）518.血吸蟲性肝纖維化8.血吸蟲性肝纖維化52肝癌(LIVERCANCER)HCCICCCombinedhepatocellularandcholangiocarcinoma肝癌(LIVERCANCER)HCC53ELPS(二步法)轉移性腺癌74100%+HCC:011%+膽管型CK:CK19,CK7HCC陽性率1582%EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,活動性纖維間隔靜止性纖維間隔液氮法:將OCT包埋的組織塊投入液氮數秒,等組織塊凍結后,立即移入低溫冰箱(裝入封口塑料袋內密封)或放入恒冷切片機恒冷箱內以備切片;速凍:目的是使溫度很快下降迅速通過冰點,防止冰結晶產生。免疫組織化學染色的幾點體會⑤α-SMA-MFb20世紀80年代（1981）許世民ABC（親和免疫組化）(2)最大限度地保存抗原性。★防止冰結晶!!!RB200(四乙基羅達明B200)用570nm光激發(fā),596～600nm濾片觀察,呈橘紅色ICC:10%+肝癌(LIVERCANCER)選擇最合適的固定劑,如用福爾馬林,必須用緩沖福爾馬林4期（肝硬化）靜止-纖維間隔內無炎癥或輕度炎癥纖維間隔形成，肝細胞羽毛狀變性肝癌病理診斷常用免疫組化和特染HepPar1線粒體相關抗原，與AFP無關對胎兒和成人肝細胞高度特異(HCC:陽性率8297%）

ELPS(二步法)肝癌病理診斷常用免疫組化和特染HepPa54AFPHCC陽性率1582%AFP55CD34:HCC型染色長條分枝，管壁纖細，管腔狹窄，分布均勻彌漫.而非癌肝組織內極少見.CD34:56CK18:HCC,ICC,Metastaticcarcinoma:100%+

上皮性腫瘤標志物CK18:57CK19:膽管型CK:CK19,CK7肝細胞－膽管上皮，ICC77100%ICC最好的標志物CK19:58CEAmonoclonalCEA:毛細膽管－ICC，轉移性肝癌6075%+HCC:011%+polyclonalCEA:毛細膽管＋HCC特異標志物之一

CEA59CK20:胃腸道腺癌的主要標志物轉移性腺癌74100%+ICC:10%+HCC:0%+CK20:60MOC31:抗人上皮相關抗原轉移性腺癌100%+ICC:92.9%+HCC:0%+胃癌肝轉移MOC31:抗人上皮相關抗原61HBsAg:HCC:7080%+胞質型，胞核型陽性胞質型，核周型陽性HBsAg:胞質型，胞核型陽性胞質型，核周型陽性62黏液染色AB/PAS酸性黏多糖蘭色（膽管腺瘤,ICC腔內黏液）中性黏多糖,糖原紅色（假腺管型HCC)

黏液染色AB/PAS63免疫組織化學染色的幾點體會一、組織和細胞標本制備目的(1)最大限度地保存組織結構。(2)最大限度地保存抗原性。注意事項在選擇組織處理方法前，先根據實驗目的，參考抗體說明，確定組織處理方式(冰凍?石蠟?)。免疫組織化學染色的幾點體會一、組織和細胞標本制備641.取材（1）原則盡可能新鮮，動物標本可選用動脈灌注固定。（2）取材部位盡量包括病灶和正常組織交界處，避免選擇壞死組織。（3）避免擠壓受擠壓組織不但影響HE切片的觀察，還造成非特異性免疫組化組織著色。1.取材（1）原則盡可能新鮮，動物標本可選652.固定根據不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時組織越新鮮越好。組織塊厚薄大小要合適。容器要大,固定液要寬余.固定時間既要考慮充分固定,又不能太長(依組織塊厚薄大小從24hr至3～5天,太長可溶性抗原會滲漏,陽性會減弱甚至轉陰.選擇最合適的固定劑,如用福爾馬林,必須用緩沖福爾馬林2.固定根據不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時組織越新66用于培養(yǎng)細胞效果較好,石蠟切片因常有自發(fā)熒光,背景熒光較強,用時要注意EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,4期（肝硬化）靜止-纖維間隔內無炎癥或輕度炎癥轉移性腺癌74100%+而非癌肝組織內極少見.直接免疫熒光法:干冰丙酮法:將200ml丙酮注入小型廣口保溫瓶或保溫杯內,逐漸加入干冰至飽和不再冒泡為止,溫度可達70℃;將裝有50ml異戊烷的小燒杯緩慢置入干冰丙酮飽和液中;然后將OCT包埋的組織塊投入異戊烷內速凍半分至一分鐘。自身免疫性肝炎肝纖維化（AIH）根據不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時組織越新鮮越好。（1）原則盡可能新鮮，動物標本可選注意事項在選擇組織處理方法前，先根據實驗目的，參考抗體說明，確定組織處理方式(冰凍?石蠟?)。EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,ICC:10%+常用蘇木精或甲基綠襯染細胞核。HCC陽性率1582%ICC:10%+免疫熒光染色后應盡快觀察、拍照。絕大多數免疫酶染色后都可用樹膠封固，但如用DAB以外的底物應注意有色沉淀物如為脂溶性，應改用水溶性封固物如明膠、甘油緩沖液等。③膠原纖維染色(Siriusred或免疫組化)穿刺肝組織呈淡黃色，標本懸浮于固定液3.制備蠟塊沖水、脫水、透明、包埋。盡可能采用低溫石蠟包埋,如無低溫石蠟,可將組織塊盡可能修薄,以縮短脫水、透明、包埋時間,盡可能保存組織內抗原穩(wěn)定。用于培養(yǎng)細胞效果較好,石蠟切片因常有自發(fā)熒光,背景熒光較強674.制備冰凍切片冷凍包埋能較好保存抗原,新鮮及已固定材料均適合于冷凍包埋、切片?！锓乐贡Y晶!!!預處理:目的是減少組織中的水分以減少冰結晶的產生,方法是將已固定、沖洗的組織塊放入20～30%蔗糖緩沖液內,4℃冰箱過夜,再將組織塊埋于OCT包埋劑速凍:目的是使溫度很快下降迅速通過冰點,防止冰結晶產生。4.制備冰凍切片冷凍包埋能較好保存抗原,新鮮及已固定材料均適68速凍方法液氮法:將OCT包埋的組織塊投入液氮數秒,等組織塊凍結后,立即移入低溫冰箱(裝入封口塑料袋內密封)或放入恒冷切片機恒冷箱內以備切片;干冰丙酮法:將200ml丙酮注入小型廣口保溫瓶或保溫杯內,逐漸加入干冰至飽和不再冒泡為止,溫度可達70℃;將裝有50ml異戊烷的小燒杯緩慢置入干冰丙酮飽和液中;然后將OCT包埋的組織塊投入異戊烷內速凍半分至一分鐘。速凍方法液氮法:將OCT包埋的組織塊投入液氮數秒,等組織塊凍69免疫組化染色后的襯染常用蘇木精或甲基綠襯染細胞核。但如果陽性信號在細胞核,切勿襯染細胞核!!!細胞質襯染:1%亮綠,但退色較快,可改用堅固綠(FASTBLUE)染,則保存時間較長免疫組化染色后的襯染常用蘇木精或甲基綠襯染細胞核。但如果陽性70封固和保存絕大多數免疫酶染色后都可用樹膠封固，但如用DAB以外的底物應注意有色沉淀物如為脂溶性，應改用水溶性封固物如明膠、甘油緩沖液等。酶免疫染色切片可保存數周甚至數月。免疫熒光染色后應盡快觀察、拍照。封固和保存絕大多數免疫酶染色后都可用樹膠封固，但如用DAB以71一.常用免疫組織化學方法免疫熒光:

用于培養(yǎng)細胞效果較好,石蠟切片因常有自發(fā)熒光,背景熒光較強,用時要注意

FITC(異硫氰酸熒光素)用450～490nm光激發(fā),515nm濾片觀察,呈翠綠色

RB200(四乙基羅達明B200)用570nm光激發(fā),596～600nm濾片觀察,呈橘紅色

TRITC(四甲基異硫氰酸羅達明)用530～560nm光激發(fā),580nm濾片觀察,呈紅色

Texasred

用595nm光激發(fā),615nm濾片觀察,呈紅色直接免疫熒光法:

間接免疫熒光法雙重熒光染色一.常用免疫組織化學方法722.免疫組織化學常用方法:PAPABC或LSAB