dgh呼吸系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型課件

中南大學(xué)湘雅基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院

病理生理學(xué)系

鄧恭華第六章

呼吸系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型1醫(yī)學(xué)ppt中南大學(xué)湘雅基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院

病理生理學(xué)系

鄧恭華第六章

呼吸系統(tǒng)一、慢性支氣管炎概述慢性支氣管炎(chronicbronchitis)：指由感染或非感染因素引起的氣管、支氣管黏膜及其周圍組織的慢性非特異性炎性反應(yīng)。第一節(jié)慢性支氣管炎動(dòng)物模型1.慢性支氣管炎的定義：2醫(yī)學(xué)ppt一、慢性支氣管炎概述慢性支氣管炎(chronic2.慢性支氣管炎的特點(diǎn)：2)咳痰或伴有喘息反復(fù)發(fā)作，每次持續(xù)3個(gè)月以上，連續(xù)2年以上的慢性病理過(guò)程。3)嚴(yán)重時(shí)可并發(fā)肺氣腫或肺心病。4)初期癥狀較輕，常在冬季發(fā)病，春季轉(zhuǎn)暖后癥狀緩解。晚期病性加重，季節(jié)性表現(xiàn)不明顯，可常年存在。1)發(fā)病以老年人居多。3醫(yī)學(xué)ppt2.慢性支氣管炎的特點(diǎn)：2)咳痰或伴有喘息反復(fù)發(fā)作，每次3.慢性支氣管炎的病因：1)吸煙：長(zhǎng)期煙民2)感染：各種病原菌3)理化因素：刺激性煙霧、毒氣、粉塵、二氧化硫氣體等。4)氣候因素：寒冷5)過(guò)敏反應(yīng)6)呼吸道局部防御及免疫功能降低7)自主神經(jīng)功能失調(diào)4醫(yī)學(xué)ppt3.慢性支氣管炎的病因：4醫(yī)學(xué)ppt二、慢性支氣管炎造模方法1.吸入毒氣方法造模有毒氣體造模方法造模時(shí)間總觀察時(shí)間含2%SO2的空氣每天1次，每次吸氣10秒連續(xù)14-18天為輕度，連續(xù)27為重度97天含0.001-.004mg/LCl2的空氣每天1次，每次吸氣25-30分鐘連續(xù)35天后可出現(xiàn)慢性支氣管炎癥狀50天含氨氣的空氣第天8次，每次吸氣2-3分鐘，每次間隔15-20分鐘連續(xù)32天后可出現(xiàn)慢性支氣管炎癥狀100天（一）吸入單一有毒氣體法5醫(yī)學(xué)ppt二、慢性支氣管炎造模方法1.吸入毒氣方法造模有毒氣體造模方2.吸入SO2法的特點(diǎn)1)小鼠出現(xiàn)刺激性咳嗽，體重不增，少數(shù)死亡。2)支氣管病理改變：早期為急性炎癥，12天后出現(xiàn)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)，繼而支氣管周圍結(jié)締組織增生，27天后顯示為重度慢性支氣管炎。3)支氣管腔內(nèi)粘液阻塞，氣管上皮壞死，杯狀細(xì)胞和氣管平滑肌增生，肺泡腔擴(kuò)大，部分肺泡融合成肺大泡。此法還可觀察到：氣道和肺組織毒蕈堿型受體(M受體)及功能改變。6醫(yī)學(xué)ppt2.吸入SO2法的特點(diǎn)1)小鼠出現(xiàn)刺激性咳嗽，體重不增，少3.吸入SO2法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)此法穩(wěn)定可靠，成功率高，為最常用的慢性支氣管炎模型；2)需要觀察氣道和肺組織毒蕈堿型受體(M受體)及功能改變的，吸入SO2法最好。缺點(diǎn)：1)此法需要每天檢測(cè)SO2濃度，所需設(shè)備和操作復(fù)雜，耗時(shí)費(fèi)力。2)SO2為有害氣體，吸入后動(dòng)物發(fā)生嚴(yán)重氣道內(nèi)病變，常導(dǎo)致動(dòng)物死亡。應(yīng)用：最常用的慢性支氣管炎動(dòng)物模型7醫(yī)學(xué)ppt3.吸入SO2法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：最常用的1.吸入煙霧方法造模有毒氣體造模方法造模時(shí)間含混合煙霧的空氣將大鼠置于27m2的煙室內(nèi)制煙，每天制煙1次，每周6次。連續(xù)44天含香煙煙霧的空氣將豚鼠置于21L容器中制煙，每天煙熏2次，每次10分鐘，每周煙熏6天。同時(shí)，置于7-8℃環(huán)境中，每次1小時(shí)，隔天1次。45天后改為每周2次。連續(xù)28-35天后輕度，42天后可出現(xiàn)重度慢性支氣管炎癥狀（二）吸入煙霧法8醫(yī)學(xué)ppt1.吸入煙霧方法造模有毒氣體造模方法造模時(shí)間含混合煙霧的空2.吸入煙霧法的特點(diǎn)1)隨著吸入煙霧時(shí)間延長(zhǎng)，氣管炎病變逐漸加重，至第7周形成慢性支氣管炎典型改變。2)氣管炎癥細(xì)胞特點(diǎn)：初期以巨噬細(xì)胞為主，隨后以淋巴細(xì)胞為主，中性粒細(xì)胞僅在接觸煙霧的早期短時(shí)間內(nèi)升高。9醫(yī)學(xué)ppt2.吸入煙霧法的特點(diǎn)1)隨著吸入煙霧時(shí)間延長(zhǎng)，氣管炎病變逐3.吸入煙霧法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)此法簡(jiǎn)單易行，合并出現(xiàn)其它疾病情況少。2)此法起病較緩，可以反映慢性支氣管炎早期炎癥形成的系列過(guò)程。缺點(diǎn)：煙霧吸入(煙熏)法需要較長(zhǎng)時(shí)間，考驗(yàn)?zāi)托?。?yīng)用：特別適用于研究慢性支氣管炎發(fā)生發(fā)展過(guò)程中需要探討不同階段的病理變化及相應(yīng)的炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)、炎性標(biāo)志物的變化。10醫(yī)學(xué)ppt3.吸入煙霧法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：10醫(yī)學(xué)p1.病菌滴鼻的方法造模菌液造模方法造模時(shí)間流感病毒液，1：320；或者流感桿菌液，7×108個(gè)/ml

小鼠乙醚麻醉后，將菌液(0.03ml/只)滴鼻，每天1次連續(xù)3-6天后，支氣管上皮輕度壞死，連續(xù)35天后，典型慢支癥狀4種細(xì)菌混合液3%戊巴比妥麻醉大鼠，將混合菌液(0.1ml/只)滴鼻，每周1次連續(xù)6周后可出現(xiàn)輕度慢支癥狀寒冷環(huán)境及8種細(xì)菌混合液將豚鼠置于7-8℃環(huán)境中，每次1小時(shí)，隔天1次。45天后改為每周2次。同時(shí)，8種細(xì)菌混合液(0.2ml/只)滴鼻。150天后可出現(xiàn)慢性支氣管炎癥狀（三）病菌滴鼻法11醫(yī)學(xué)ppt1.病菌滴鼻的方法造模菌液造模方法造模時(shí)間流感病毒液，1：2.病菌滴鼻法的特點(diǎn)1)更接近于臨床實(shí)際情況2)感染2天后小鼠出現(xiàn)毛松、咳嗽、食欲缺乏等3)感染3-6天后出現(xiàn)氣管上皮輕度壞死，杯狀細(xì)胞數(shù)目初期下降，約10天后逐漸升高4)感染35天后出現(xiàn)典型的慢性支氣管炎癥狀5)感染50天后逐漸恢復(fù)正常12醫(yī)學(xué)ppt2.病菌滴鼻法的特點(diǎn)1)更接近于臨床實(shí)際情況12醫(yī)學(xué)ppt3.病菌滴鼻法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)由于采用病原菌摸擬臨床感染狀況，故更接近臨床實(shí)際情況2)由于呼吸道感染病源菌眾多，故采用最合適的病菌滴鼻，對(duì)探討不同病源菌導(dǎo)致慢性支氣管炎的發(fā)病機(jī)制有很的應(yīng)用價(jià)值。缺點(diǎn)：1)致病菌混合的制備有一定難度2)不同致病菌引起的慢性支氣管炎有較大差異2)可能導(dǎo)致研究人員的感染應(yīng)用：主要適用于探討慢性支氣管炎病因（不同致病菌）、誘因，以及要求模擬臨床實(shí)際情況的實(shí)驗(yàn)研究13醫(yī)學(xué)ppt3.病菌滴鼻法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：主要適用于1.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素的方法1）將大鼠用1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉；2）仰臥位固定，拉出舌體，暴露聲門，快速將套管穿過(guò)聲門，插入氣管；3）將內(nèi)毒素（濃度200μg/200μl）注入氣管；4）大鼠飼養(yǎng)3－4周后，逐漸出現(xiàn)慢性支氣管炎表現(xiàn)。此法由于要做全麻手術(shù)和氣管插管，比較麻煩，對(duì)大鼠損傷也大。（四）氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法14醫(yī)學(xué)ppt1.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素的方法1）將大鼠用1%戊巴比妥鈉腹腔注2.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法的特點(diǎn)1)用毒素代替致病菌，克服了致病菌混合液難制備的問(wèn)題2)氣管滴注脂多糖(LPS)約21天后，小鼠出現(xiàn)倦怠、毛發(fā)失澤、進(jìn)食和飲水均減少3)支氣管病理改變：氣管、支氣管上皮脫落，杯狀細(xì)胞及粘液腺細(xì)胞增生，慢性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，平滑肌細(xì)胞增生肥大，管壁增厚4)支氣管腔內(nèi)充滿粘液及大量中性粒細(xì)胞15醫(yī)學(xué)ppt2.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法的特點(diǎn)1)用毒素代替致病菌，克服了致3.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)克服了致病菌混合液難制備的問(wèn)題2)避免了導(dǎo)致研究人員感染病菌的風(fēng)險(xiǎn)3)不需要象SO2吸入法那樣，天天測(cè)SO2濃度缺點(diǎn)：1)當(dāng)?shù)巫PS過(guò)量時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥，引起急性肺損傷。這與復(fù)制慢性支氣管炎疾病模型思路相沖突2)不象致病菌滴鼻法那樣貼近臨床，已經(jīng)與臨床實(shí)際情況有較大差異3)需要做全麻手術(shù)和氣管插管，比較麻煩，對(duì)大鼠損傷也大應(yīng)用：適用于嫌病致菌制備難，天天測(cè)SO2麻煩，專注于慢性支氣管炎發(fā)生發(fā)展機(jī)制研究16醫(yī)學(xué)ppt3.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：適用例一、構(gòu)建熏煙致慢性支氣管炎小鼠模型17醫(yī)學(xué)ppt例一、構(gòu)建熏煙致慢性支氣管炎小鼠模型17醫(yī)學(xué)ppt18醫(yī)學(xué)ppt18醫(yī)學(xué)ppt19醫(yī)學(xué)ppt19醫(yī)學(xué)ppt20醫(yī)學(xué)ppt20醫(yī)學(xué)ppt21醫(yī)學(xué)ppt21醫(yī)學(xué)ppt22醫(yī)學(xué)ppt22醫(yī)學(xué)ppt23醫(yī)學(xué)ppt23醫(yī)學(xué)ppt24醫(yī)學(xué)ppt24醫(yī)學(xué)ppt25醫(yī)學(xué)ppt25醫(yī)學(xué)ppt結(jié)論26醫(yī)學(xué)ppt結(jié)論26醫(yī)學(xué)ppt一、支氣管哮喘概述支氣管哮喘(bronchialasthma)：指由于某些過(guò)敏因素引起的以支氣管阻塞為特點(diǎn)的疾病。1.支氣管哮喘的定義：2.哮喘的特征：陣發(fā)性帶有哮鳴音的呼吸困難、咳嗽、咳痰，且反復(fù)發(fā)作。一般春、秋二季發(fā)病率較高，20%患者有家族史。第二節(jié)支氣管哮喘動(dòng)物模型27醫(yī)學(xué)ppt一、支氣管哮喘概述支氣管哮喘(bronchia3.支氣管哮喘的危險(xiǎn)因素：1)吸入性過(guò)敏原：花粉、真菌；塵螨、動(dòng)物毛發(fā)及排泄物等2)食入性過(guò)敏原：魚(yú)蝦等水產(chǎn)、海產(chǎn)品；牛奶、雞蛋、花生等3)呼吸道感染4)藥物5)工業(yè)粉塵、化學(xué)氣體或蒸氣6)冷空氣、過(guò)度通氣、運(yùn)動(dòng)7)強(qiáng)烈情緒變化28醫(yī)學(xué)ppt3.支氣管哮喘的危險(xiǎn)因素：1)吸入性過(guò)敏原4.支氣管哮喘發(fā)作的時(shí)相：患者在接觸過(guò)敏原后幾分鐘內(nèi)，出現(xiàn)哮喘發(fā)作的癥狀，最大呼氣流速顯著降低，一般持續(xù)2～3小時(shí)后即可恢復(fù)，稱為哮喘的速發(fā)相反應(yīng)。其機(jī)制與Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)有關(guān)。有一部分病人在速發(fā)相之后緊接著出現(xiàn)第二次哮喘發(fā)作，癥狀更重，持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，可達(dá)10小時(shí)甚至幾天，重癥者持續(xù)幾十天，稱為遲發(fā)相反應(yīng)。其機(jī)制與氣道過(guò)敏性炎癥有關(guān)。過(guò)敏性哮喘的臨床過(guò)程可分為速發(fā)相反應(yīng)和遲發(fā)相反應(yīng)兩個(gè)階段。病人可發(fā)生雙相反應(yīng)，也可只發(fā)生速發(fā)相或遲發(fā)相反應(yīng)。兒童哮喘的遲發(fā)相反應(yīng)要比成人多。29醫(yī)學(xué)ppt4.支氣管哮喘發(fā)作的時(shí)相：患者在接觸過(guò)敏原后幾二、支氣管哮喘造模方法（一）致敏源誘發(fā)的哮喘模型動(dòng)物造模因素致敏方法誘發(fā)哮喘時(shí)間與觀察時(shí)間小鼠20g左右1號(hào)卵清蛋白抗原液腹腔注射1號(hào)卵清蛋白抗原液1次，每次0.2ml;8天后重復(fù)注射1次第15天起將小鼠置于密閉容器中，以60g/L卵清蛋白液霧化激發(fā)，每天1次，每次30分鐘，連續(xù)7天，直至哮喘樣發(fā)作大鼠120-180g2號(hào)卵清蛋白抗原液腹腔注射2號(hào)卵清蛋白抗原液1次，每次1ml;7天后重復(fù)注射1次2周后起將大鼠置于密閉容器中，以1%卵清蛋白液霧化激發(fā)，每天1次，每次30分鐘，連續(xù)2周，直至哮喘樣發(fā)作豚鼠300-500g1%卵清蛋白生理鹽水溶液腹腔注射1%卵清蛋白生理鹽水溶液1次，每次10ml2周后起將豚鼠置于密閉容器中，以1%卵清蛋白生理鹽水溶液霧化激發(fā)，每天1次，每次20分鐘，直至哮喘樣發(fā)作1.方法30醫(yī)學(xué)ppt二、支氣管哮喘造模方法（一）致敏源誘發(fā)的哮喘模型動(dòng)物造模因2.致敏源誘發(fā)的哮喘特點(diǎn)小鼠：1)常用小鼠品系有：BALB/c品系較易產(chǎn)生氣道高反應(yīng)，并產(chǎn)生高滴度IgE；而C57BL/6品系不易出現(xiàn)氣道高反應(yīng)，且只產(chǎn)生低滴度IgE。大鼠：1)常用大鼠品系有：BrownNorway(國(guó)外)；SpragueDawley，Wistar(國(guó)內(nèi))。2)哮喘激發(fā)后3-5分鐘發(fā)生速發(fā)相反應(yīng)，2-4小時(shí)發(fā)生遲發(fā)相反應(yīng)，隨后出現(xiàn)肺部炎癥細(xì)胞(24小時(shí)內(nèi)主要是嗜酸性細(xì)胞)浸潤(rùn)。3)哮喘發(fā)作24小時(shí)內(nèi)氣道反應(yīng)性升高，增幅為7-10倍，持續(xù)4-5天。多次激發(fā)能延長(zhǎng)氣道高反應(yīng)性持續(xù)時(shí)間。4)能出現(xiàn)與人類哮喘類似的遲發(fā)相反應(yīng)，并有嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)和氣道反應(yīng)性增加。豚鼠：1)很容易致敏，并激發(fā)產(chǎn)生Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)。2)激發(fā)后的急性氣道過(guò)敏反應(yīng)，包括速發(fā)相和遲發(fā)相哮喘反應(yīng)。31醫(yī)學(xué)ppt2.致敏源誘發(fā)的哮喘特點(diǎn)小鼠：大鼠：豚鼠：31醫(yī)學(xué)ppt3.致敏源誘發(fā)的哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)卵清蛋白來(lái)源容易，且價(jià)格低廉。2)卵清蛋白免疫原性強(qiáng)，容易致敏和激發(fā)哮喘。3)是國(guó)內(nèi)外最常用的哮喘疾病模型。以下分別列舉：

小鼠、大鼠和豚鼠支氣管哮喘模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用32醫(yī)學(xué)ppt3.致敏源誘發(fā)的哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：以下分別列舉：3優(yōu)點(diǎn)：小鼠便宜，價(jià)格低，有利于大規(guī)模實(shí)驗(yàn)。小鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用缺點(diǎn)：1)幾乎所有暴露于變應(yīng)原(過(guò)敏原)的小鼠都可產(chǎn)生哮喘，故小鼠哮喘模型不宜應(yīng)用于基因多態(tài)性研究。2)小鼠與人類存在呼吸系統(tǒng)的解剖、生理學(xué)上的差異。呼吸頻率快，但潮氣量低。3)小鼠與人類還存在免疫學(xué)機(jī)制上的差異。大多數(shù)小鼠哮喘模型會(huì)出現(xiàn)過(guò)敏性肺泡炎和超敏性肺炎，而掩蓋了氣道病變。應(yīng)用：適用于需要大規(guī)模實(shí)驗(yàn)的情況，如:評(píng)價(jià)預(yù)防效果或哮喘療效。33醫(yī)學(xué)ppt優(yōu)點(diǎn)：小鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用缺點(diǎn)：應(yīng)用：適用于需要大規(guī)模大鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)大鼠品系純且全，易于繁殖，獲得容易。2)價(jià)格較便宜，能減輕研究經(jīng)費(fèi)壓力。3)與小鼠相比，可獲取的標(biāo)本量大很多。4)大鼠生物學(xué)特性與人有較多的相似性。缺點(diǎn)：1)國(guó)際上哮喘研究論文主要采用BrownNorway品系大鼠，但其價(jià)格較貴。BN大鼠哮喘模型的主要優(yōu)勢(shì)在于能產(chǎn)生針對(duì)吸入性變應(yīng)原的特異性IgE抗體，且更易誘發(fā)哮喘癥狀、明顯的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性。應(yīng)用：1)是最常用的哮喘動(dòng)物模型之一。2)適用于皮質(zhì)激素治療哮喘作用機(jī)理研究，以用非皮質(zhì)激素類抗哮喘免疫抑制劑的療效觀察和評(píng)價(jià)。34醫(yī)學(xué)ppt大鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：34醫(yī)學(xué)ppt豚鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)豚鼠價(jià)格較便宜；體型較大，方便實(shí)驗(yàn)操作；獲取標(biāo)本量大。2)變應(yīng)原誘發(fā)的支氣管哮喘與人類支氣管哮喘中的氣管收縮特點(diǎn)相同。包括：接觸抗原后的支氣管收縮反應(yīng)；氣道對(duì)介質(zhì)的高反應(yīng)性；以及嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)的特征。缺點(diǎn)：1)由于近交系豚鼠罕見(jiàn)，不利于用來(lái)研究遺傳因素的影響。2)皮質(zhì)激素對(duì)豚鼠哮喘模型的支氣管痙攣影響不顯著。3)可能出現(xiàn)種群依賴性的夸大反應(yīng)，如：過(guò)敏性休克，導(dǎo)致豚鼠死亡。應(yīng)用：1)是使用最廣泛的變應(yīng)原性支氣管哮喘模型。2)致敏性豚鼠的過(guò)敏性支氣管收縮(包括速發(fā)相和遲發(fā)相)在研究抗過(guò)敏藥、支氣管擴(kuò)張藥藥物療效方面就用非常廣泛。35醫(yī)學(xué)ppt豚鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：35醫(yī)學(xué)ppt（二）甲苯二異氰酸甲酯(TDI)誘發(fā)的職業(yè)性哮喘模型1.TDI誘發(fā)哮喘方法動(dòng)物造模因素致敏方法誘發(fā)哮喘時(shí)間與觀察時(shí)間豚鼠250-300g/只TDI/BSA抗原腹腔注射TDI/BSA抗原1次，每次0.5ml；2-3周后再重復(fù)加強(qiáng)免疫1-2次，致敏在初次免疫5-8周后，做抗原激發(fā)試驗(yàn)。先用1%BSA激發(fā)，無(wú)反應(yīng)后再用TDI/BSA激發(fā)。約有30%豚鼠會(huì)出現(xiàn)明顯哮喘反應(yīng)。36醫(yī)學(xué)ppt（二）甲苯二異氰酸甲酯(TDI)誘發(fā)的職業(yè)性哮喘模型1.2.TDI誘發(fā)哮喘特點(diǎn)1)經(jīng)TDI/BSA激發(fā)后，動(dòng)物呼吸頻率加快、幅度增大，哮喘時(shí)伴有咳嗽、躁動(dòng)不安，甚至出現(xiàn)痙攣性呼吸。2)85%動(dòng)物可同時(shí)出現(xiàn)不同滴度的抗原特異性IgE、IgG抗體。3)TDI是重要的職業(yè)性致哮喘化學(xué)品之一。37醫(yī)學(xué)ppt2.TDI誘發(fā)哮喘特點(diǎn)1)經(jīng)TDI/BSA激發(fā)后，動(dòng)物呼吸3.TDI誘發(fā)哮喘優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：是TDI致職業(yè)性哮喘的重要?jiǎng)游锬Ｐ汀氖耇DI作業(yè)者中約有5%-10%的人可發(fā)生職業(yè)性哮喘。缺點(diǎn)：1)TDI/BSA抗原制備難度大，步驟繁鎖。2)屬職業(yè)性哮喘，應(yīng)用范圍窄。應(yīng)用：適用于TDI職業(yè)性哮喘方面研究。38醫(yī)學(xué)ppt3.TDI誘發(fā)哮喘優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：38醫(yī)學(xué)ppt（三）鄰苯二甲酸酐(PA)誘發(fā)的哮喘模型1.PA誘發(fā)哮喘模型方法動(dòng)物造模因素致敏方法誘發(fā)哮喘時(shí)間與觀察時(shí)間豚鼠250-300g/只，2-3月齡PA-BSA抗原和PA-HSA抗原腹腔或后腿肌肉注射PA-BSA抗原或PA-HSA抗原1次，每次0.2-0.3ml，致敏在免疫3-8周后，做抗原吸入激發(fā)試驗(yàn)。先用1%HSA生理鹽水溶液霧化吸入1-3分鐘，激發(fā)。哮喘持續(xù)30-50分鐘。39醫(yī)學(xué)ppt（三）鄰苯二甲酸酐(PA)誘發(fā)的哮喘模型1.PA誘發(fā)哮喘2.PA誘發(fā)哮喘模型的特點(diǎn)1)苯酐(PA)為固體化學(xué)品，也可引起哮喘。為什么？2)霧化吸入激發(fā)后1-10分鐘，動(dòng)物呼吸頻率加快(由100-120次/分，上升至140-160次/分)，幅度增大，伴咳嗽、噴嚏，重癥者呼吸費(fèi)力，掙扎，可有暫窒息或死亡。苯酐40醫(yī)學(xué)ppt2.PA誘發(fā)哮喘模型的特點(diǎn)1)苯酐(PA)為固體化學(xué)品，3.PA誘發(fā)哮喘模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：PA是重要白色固體化工原料，也是一種常見(jiàn)的職業(yè)性致哮喘物質(zhì)。缺點(diǎn)：與TDI至哮喘一樣，屬職業(yè)性哮喘，應(yīng)用范圍窄。應(yīng)用：適用于PA所致職業(yè)性哮喘方面研究41醫(yī)學(xué)ppt3.PA誘發(fā)哮喘模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：適例二、卵清蛋白誘導(dǎo)小鼠建立支氣管哮喘模型42醫(yī)學(xué)ppt例二、卵清蛋白誘導(dǎo)小鼠建立支氣管哮喘模型42醫(yī)學(xué)ppt43醫(yī)學(xué)ppt43醫(yī)學(xué)ppt44醫(yī)學(xué)ppt44醫(yī)學(xué)ppt45醫(yī)學(xué)ppt45醫(yī)學(xué)pptB:模型組病理切片46醫(yī)學(xué)pptB:模型組病理切片46醫(yī)學(xué)ppt結(jié)論47醫(yī)學(xué)ppt結(jié)論47醫(yī)學(xué)ppt一、肺心病概述1.肺心病的定義：肺心病是指由慢性支氣管炎、肺氣腫和肺纖維化，以及肺血管病變而引起的心臟病。2.肺心病的病理特點(diǎn)：1)肺動(dòng)脈高壓；2)右心室肥大和右心衰竭。第三節(jié)肺心病動(dòng)物模型48醫(yī)學(xué)ppt一、肺心病概述1.肺心病的定義：肺心病是指由二、肺心病造模方法（一）肺循環(huán)高壓模型肺循環(huán)高壓：指包括肺動(dòng)脈高壓、肺靜脈高壓和混合性肺動(dòng)脈高壓的總稱。肺動(dòng)脈高壓：指肺動(dòng)脈壓增高，而肺靜脈壓正常。也稱為動(dòng)脈型肺動(dòng)脈高壓。特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓：指沒(méi)有任何原因(包括遺傳、病毒、藥物)而發(fā)生的肺動(dòng)脈高壓。肺循環(huán)高壓診斷標(biāo)準(zhǔn)：在海平面靜息狀態(tài)下經(jīng)右心導(dǎo)管檢查1)肺動(dòng)脈收縮壓>30mmHg2)肺動(dòng)脈平均壓>25mmHg3)運(yùn)動(dòng)時(shí)，肺動(dòng)脈平均壓>30mmHg

以上三項(xiàng)，居其一即可49醫(yī)學(xué)ppt二、肺心病造模方法（一）肺循環(huán)高壓模型(1)方法1、缺氧型肺循環(huán)高壓動(dòng)物模型動(dòng)物造模因素致艙內(nèi)低氧方法肺循環(huán)高壓觀察時(shí)間大鼠150-250g/只低氧氣體1.100%氮?dú)?.10%氧氣90%氮?dú)鈱?0-15只大鼠置入動(dòng)物艙室后，通入N2，使艙內(nèi)O2濃度降低至10%左右。以2升/分的速度通入低氧混合氣體(10%O2，90%N2)大鼠在缺氧5周后，出現(xiàn)低氧性肺血管收縮及肺血管形態(tài)改變。動(dòng)物艙室(250-300升)：1)頂部有三通，便于氣體樣本，檢測(cè)O2和N2濃度。使O2濃度保持在10%左右，CO2濃度保持在3%以下。2)底部有一小裂隙，便于艙內(nèi)、外氣體交換，氣壓相等。3)艙內(nèi)CO2用鈉石灰吸收，水蒸氣用無(wú)水氯化鈣吸收。4)艙內(nèi)有小風(fēng)扇將通入氣體混均。50醫(yī)學(xué)ppt(1)方法1、缺氧型肺循環(huán)高壓動(dòng)物模型動(dòng)物造模因素致艙內(nèi)低(2)缺氧型肺循環(huán)高壓模型的特點(diǎn)1)動(dòng)物艙室設(shè)計(jì)和制作有點(diǎn)難度。2)需要O2分析儀和CO2分析儀，且檢測(cè)麻煩。3)艙內(nèi)溫度難保持恒定，也難以消除CO2和水蒸氣的影響。51醫(yī)學(xué)ppt(2)缺氧型肺循環(huán)高壓模型的特點(diǎn)1)動(dòng)物艙室設(shè)計(jì)和制作有點(diǎn)難(3)缺氧型肺循環(huán)高壓模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：艙室設(shè)計(jì)，操作簡(jiǎn)單，能保持艙內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間低氧狀態(tài)。如能通過(guò)自動(dòng)化設(shè)計(jì)，時(shí)實(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)O2和CO2濃度，控制好艙內(nèi)溫度、濕度和氣壓，將是一個(gè)好的造模方法。缺點(diǎn)：1)每天檢測(cè)O2和CO2濃度很煩。2)通過(guò)調(diào)節(jié)艙室通氣量保持O2濃度和氣壓有難度。應(yīng)用：適用于因長(zhǎng)期缺氧導(dǎo)致肺循環(huán)高壓，繼發(fā)右心肥大，右心衰的肺心病模型。52醫(yī)學(xué)ppt(3)缺氧型肺循環(huán)高壓模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用(1)方法2、缺氧型肺循環(huán)高壓動(dòng)物模型動(dòng)物造模因素野百合堿注射方法肺循環(huán)高壓、右心肥大和右心衰觀察大鼠150-250g/只野百合堿將2%野百合堿(60mg/kg體重)，一次性腹腔注射。野百合堿入血后引起肺血管內(nèi)皮損傷，從而導(dǎo)致缺氧和肺血管重塑。大鼠在缺氧5周后，出現(xiàn)低氧性肺血管收縮及肺血管形態(tài)改變。注謝后第14天，21天和28天行右心導(dǎo)管術(shù)檢測(cè)肺動(dòng)脈和右心室壓力，以及心功能檢測(cè)。(2)特點(diǎn)1)肺動(dòng)脈壓升高顯著，可達(dá)正常值3倍。2)伴右心室肥厚和體重減輕。3)光鏡下可見(jiàn)肺血管重塑明顯，表現(xiàn)為：血管內(nèi)膜增生，中層增厚。4)野百合堿可重復(fù)誘導(dǎo)產(chǎn)生嚴(yán)重的進(jìn)展性肺動(dòng)脈高壓。53醫(yī)學(xué)ppt(1)方法2、缺氧型肺循環(huán)高壓動(dòng)物模型動(dòng)物造模因素野百合堿(2)優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)方法簡(jiǎn)便易行2)本模型為常壓缺氧肺循環(huán)高壓模型，更類似于平原地區(qū)的肺心病發(fā)病情況。缺點(diǎn)：與缺氧、酸中毒、內(nèi)毒素導(dǎo)致的肺血管損傷相比，野百合堿屬于化學(xué)品或藥物導(dǎo)致的肺血管損傷。應(yīng)用：適用于常壓缺氧肺循環(huán)高壓的肺心病方面研究54醫(yī)學(xué)ppt(2)優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：適用于常壓缺氧肺循（二）慢性阻塞性肺部疾病(COPD)模型1.方法動(dòng)物造模因素被動(dòng)吸煙方法支氣管、肺組織病變觀察大鼠150-250g/只煙霧吸入每個(gè)煙熏箱放入大鼠3只，每天上午、下午各被動(dòng)吸煙1次。每箱每次點(diǎn)燃香煙2支，每次持續(xù)吸入新鮮香煙煙霧1小時(shí)煙熏10周后，纖毛上皮異常并伴粘液高分泌；12周后，可見(jiàn)纖毛皮細(xì)胞部分脫落；12-24周后，可見(jiàn)少量肺泡融合形成肺大泡。24-36周后，上述病變更明顯；36周后，肺泡腔明顯擴(kuò)大，氣道管壁明顯增厚和纖維化，并可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。動(dòng)物煙熏箱(20×25×30cm3)：1)煙熏箱的一側(cè)下部留有一個(gè)直徑為0.5cm的通氣管，與箱外側(cè)的不銹鋼燃煙室相通。2)燃煙室進(jìn)氣孔連接一個(gè)小電風(fēng)扇。電扇風(fēng)力助燃并推動(dòng)煙霧和O2進(jìn)入煙熏箱。香煙：采用市售無(wú)過(guò)濾嘴的香煙(每支約含焦油25mg，煙氣煙堿量1.4mg)55醫(yī)學(xué)ppt（二）慢性阻塞性肺部疾病(COPD)模型1.方法動(dòng)物造模因(2)COPD模型特點(diǎn)1)采用香煙煙熏36周以上的方法制備大鼠COPD模型。是一個(gè)較長(zhǎng)期的慢性實(shí)驗(yàn)，更符合人類COPD的臨床實(shí)際情況。2)多種炎癥細(xì)胞參與。氣道內(nèi)主要是PMN和Mφ為主，肺細(xì)胞內(nèi)以Mφ(CD68+)和T-淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主。3)多種炎癥因子參與。如：IFNγ、MCP-1、ET-1、IL-2，4，6，10等。4)氣道高分泌，炎癥細(xì)胞增多，管壁增厚，膠原等細(xì)胞外基質(zhì)增多并過(guò)度沉積、纖維化(COPD氣道重塑的重要病理改變)。56醫(yī)學(xué)ppt(2)COPD模型特點(diǎn)1)采用香煙煙熏36周以上的方法制備(2)COPD模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)方法簡(jiǎn)便易行，不需要貴重儀器設(shè)備和藥品。2)屬較長(zhǎng)期的慢性實(shí)驗(yàn)，因此更符合人類COPD的臨床實(shí)際情況。缺點(diǎn)：1)長(zhǎng)期的慢性實(shí)驗(yàn)，考驗(yàn)的是人的耐心、恒心和毅力。2)能否導(dǎo)致繼發(fā)性肺心病，還需要更長(zhǎng)的煙熏時(shí)間和耐心等待。應(yīng)用：適用于COPD病理、病生及藥物療效方面的研究57醫(yī)學(xué)ppt(2)COPD模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：適用例三、低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的建立研究目的58醫(yī)學(xué)ppt例三、低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的建立研究目的58醫(yī)學(xué)ppt59醫(yī)學(xué)ppt59醫(yī)學(xué)ppt60醫(yī)學(xué)ppt60醫(yī)學(xué)ppt61醫(yī)學(xué)ppt61醫(yī)學(xué)ppt62醫(yī)學(xué)ppt62醫(yī)學(xué)ppt結(jié)論本研究結(jié)果提示肺動(dòng)脈高壓的大鼠模型成功建立。本研究模型的建立較好地模擬了患者肺動(dòng)脈高壓發(fā)生的病理過(guò)程，可以應(yīng)用于患者的臨床研究。陳麗英等低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的建立中華危重癥醫(yī)學(xué)雜志2015，vol.8(5):312-31463醫(yī)學(xué)ppt結(jié)論本研究結(jié)果提示肺動(dòng)脈高壓的大鼠模型成功建立。本研究模型一、肺栓塞概述肺栓塞的定義：肺栓塞：指以各種栓子阻塞肺動(dòng)脈系統(tǒng)為其發(fā)病原因的一組疾病或臨床綜合征的總稱。包括：血栓、脂肪、羊水、胎糞、空氣等栓子。肺血栓栓塞：是指來(lái)自靜脈系統(tǒng)或右心的血栓栓子阻塞肺動(dòng)脈或其分支所致肺部疾病。主要表現(xiàn)為：肺循環(huán)障礙和呼吸功能障礙。急性肺血栓栓塞導(dǎo)致較為廣泛肺動(dòng)脈阻塞時(shí)，可引起肺動(dòng)脈高壓，甚至發(fā)生急性肺源性心臟病。而缺血區(qū)可能發(fā)生肺梗死。由于肺組織多重供血、供氧機(jī)制，只有大約15%患者發(fā)生肺梗死。第四節(jié)肺栓塞動(dòng)物模型64醫(yī)學(xué)ppt一、肺栓塞概述肺栓塞的定義：肺栓塞：指以各種栓二、肺栓塞造模方法（一）血栓栓塞法動(dòng)物造模因素血栓形成栓塞方法觀察家兔或犬血栓栓子1.動(dòng)物麻醉后，分離一側(cè)的頸外V和頸總A，并分別插管。2.頸外V與頸總A連接在同一個(gè)三通管上。三通管余下的一個(gè)通道接上一個(gè)注射器(內(nèi)含10U/ml凝血酶0.6ml)。3.用注射器從動(dòng)脈插管抽取動(dòng)脈血1ml。4.將注射器內(nèi)動(dòng)脈血與凝血酶充分混勻。5.將混勻后的血液通過(guò)靜脈插管注入頸外V，立即夾閉頸外V近心端。6.等待10分鐘，讓血栓在頸外V內(nèi)形成。待頸外V內(nèi)血栓明顯形成后，松開(kāi)頸外V近心端的靜脈夾，血栓栓了入血后，栓塞肺動(dòng)脈。1.方法65醫(yī)學(xué)ppt二、肺栓塞造模方法（一）血栓栓塞法動(dòng)物造模因素血栓形成栓塞2.血栓栓塞法模型的特點(diǎn)：家兔血栓栓塞法：1)家兔體型適中，價(jià)格不高，性格溫順，插管較方便。2)與其它動(dòng)物相比，家兔的纖溶系統(tǒng)與人類的更接近。故，本模型是最普遍、最成熟的肺血栓栓塞模型。犬血栓栓塞法：1)犬體型大，血管粗，插管手術(shù)操作非常方便。2)犬血量大，多次抽血樣也不易發(fā)生低血容量的情況。66醫(yī)學(xué)ppt2.血栓栓塞法模型的特點(diǎn)：家兔血栓栓塞法：犬血栓栓塞法：663.血栓栓塞法模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：兔血栓栓塞法模型是最普遍、最成熟的肺血栓栓塞模型。因?yàn)榕c其它動(dòng)物相比，家兔的纖溶系統(tǒng)與人類的更接近。缺點(diǎn)：1)本法的血栓主要是在體外形成，與臨床上肺血栓栓塞時(shí)，體內(nèi)處于高凝狀態(tài)不一樣。2)用犬做實(shí)驗(yàn)，有被咬傷或感染狂犬病的可能。應(yīng)用：1)兔模型適用性廣，是最常用的肺血栓栓塞模型。2)犬模型更適用于取樣量多、需要?jiǎng)討B(tài)觀察的肺栓塞實(shí)驗(yàn)研究。67醫(yī)學(xué)ppt3.血栓栓塞法模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：67（一）藥物注射法動(dòng)物造模因素血栓形成及栓塞方法小鼠，也可用兔和犬膠原與腎上腺素的混合液小鼠尾靜脈注射制備好的膠原與腎上腺素的混合液1次，每次100μl。該混合液可導(dǎo)致體內(nèi)血液呈高狀態(tài)，先是形成血小板血栓，后者阻塞肺小血管并導(dǎo)致肺栓塞。1.方法2.藥物注射法模型的特點(diǎn)：1)藥物注射法致肺血栓栓塞，簡(jiǎn)單快捷，方法可靠，穩(wěn)定性好。2)利用藥物在體內(nèi)形成靜脈血栓，然后導(dǎo)致肺栓塞，比栓子栓塞法更符合臨床實(shí)際情況。68醫(yī)學(xué)ppt（一）藥物注射法動(dòng)物造模因素血栓形成及栓塞方法小鼠，也可用3.藥物注射法模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：此方法簡(jiǎn)單快捷，可靠性和穩(wěn)定性好。缺點(diǎn)：血小板血栓栓子較小，難以摸擬人肺內(nèi)大血管栓塞情況。應(yīng)用：1)小鼠肺栓塞模型，適合需要大規(guī)模樣體的實(shí)驗(yàn)研究。2)兔和犬肺栓塞模型，適合需要多次采樣、動(dòng)態(tài)觀察指標(biāo)變化的實(shí)驗(yàn)研究。69醫(yī)學(xué)ppt3.藥物注射法模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：69目的通過(guò)建立操作簡(jiǎn)便、成功率高、使用經(jīng)濟(jì)的急性肺血栓栓塞大鼠動(dòng)物模型,掌握自體肺血栓栓塞動(dòng)物模型的制備,檢測(cè)自體肺血栓栓塞的持久性。例四、大鼠自體肺血栓栓塞模型的成功制備一、材料70醫(yī)學(xué)ppt目的通過(guò)建立操作簡(jiǎn)便、成功率高、使用經(jīng)濟(jì)的急性肺血栓栓塞二、方法(體外制備血栓栓子)71醫(yī)學(xué)ppt二、方法(體外制備血栓栓子)71醫(yī)學(xué)ppt2大鼠麻醉后,行氣插管,連接呼吸機(jī)72醫(yī)學(xué)ppt2大鼠麻醉后,行氣插管,連接呼吸機(jī)72醫(yī)學(xué)ppt73醫(yī)學(xué)ppt73醫(yī)學(xué)ppt74醫(yī)學(xué)ppt74醫(yī)學(xué)ppt75醫(yī)學(xué)ppt75醫(yī)學(xué)ppt本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：大鼠自血栓注入后并沒(méi)有表現(xiàn)持續(xù)的肺動(dòng)脈壓升高或氧分壓降低,因?yàn)榇笫缶哂袠O高的纖溶能力,所以自體血栓不能產(chǎn)生一個(gè)持久固定的肺栓塞模型。結(jié)論因此與臨床肺血栓栓塞的病理生理過(guò)程更符的、持久固定血栓模型的研究應(yīng)成為今后肺栓塞動(dòng)物模型的主要研究方向。馮偉等大鼠自體肺血栓栓塞模型的成功制備臨床肺科雜志2015年5月第20卷第5期：785-78876醫(yī)學(xué)ppt本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：大鼠自血栓注入后并沒(méi)有表現(xiàn)持續(xù)theend謝謝！77醫(yī)學(xué)ppttheend謝謝！77醫(yī)學(xué)ppt混合煙霧制煙方法：1.配方：鋸末200g，煙葉15-20g，辣椒6-7g，硫黃1g。2.點(diǎn)燃后，在20-30分鐘燃化，混合煙霧含塵量150-200mg/m3，顆粒大小0.5-1.0μm以上。78醫(yī)學(xué)ppt混合煙霧制煙方法：1.配方：鋸末200g，煙葉15-20g香煙煙霧制煙方法：1.用香煙1.5支，在21L容器中燃化，豚鼠吸氣10分鐘。2.換氣5分鐘。3.用香煙1支，再次燃化，豚鼠再吸氣10分鐘。79醫(yī)學(xué)ppt香煙煙霧制煙方法：1.用香煙1.5支，在21L容器中燃化，流感病菌菌液制作方法：1.接種流感病毒后，37℃培育48小時(shí)的雞胚液，病毒液血凝滴度為1：320。接種流感桿菌后，37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，收集菌液備用。在滴鼻使用前，將菌液中流感桿菌的濃度稀釋為7×108個(gè)/ml。80醫(yī)學(xué)ppt流感病菌菌液制作方法：1.接種流感病毒后，37℃培育混合細(xì)菌菌液制作方法：1.流感桿菌，9×108個(gè)/ml。甲型鏈球菌，6×108個(gè)/ml?？ㄋ匝仔跃?，9×108個(gè)/ml。肺炎雙球菌，6×108個(gè)/ml。將上述4種菌液以4：3：2：1的比例混合，備用。81醫(yī)學(xué)ppt混合細(xì)菌菌液制作方法：1.流感桿菌，9×108個(gè)/ml1.溶液Ⅰ：卵清蛋白1000μg/ml2.溶液Ⅱ：氫氧化鋁10mg/ml3.將溶液Ⅰ與溶液Ⅱ以1：1的比例混合。注意混合液要新鮮配制1號(hào)卵清蛋白抗原液配制方法：2號(hào)卵清蛋白抗原液配制方法：1.溶液Ⅰ：卵清蛋白300mg/ml2.溶液Ⅱ：滅活百日咳桿菌疫苗15×109個(gè)/ml3.溶液Ⅲ：氫氧化鋁300mg/ml4.將溶液Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ，以1：1：1的比例混合。注意混合液要新鮮配制82醫(yī)學(xué)ppt1.溶液Ⅰ：卵清蛋白1000μg/ml1號(hào)卵清蛋白抗原液TDI-BSA抗原制備：1.溶液A：1%TDI/1,4-二氧六環(huán)液2.溶液B：1%BSA/碳酸氫鈉溶液3.將溶液B置于冰水浴中，開(kāi)磁力攪拌，逐滴加入溶液A，調(diào)節(jié)該溶液的pH值至8.5。4.1小時(shí)后移至透析袋中過(guò)夜，使1,4-二氧六環(huán)揮發(fā)。5.在pH為7.4的PBS中徹底透析6次，使溶液在紫外分光光度計(jì)245nm處有高吸收峰。6.將制備成的上述抗原，加卡介苗、費(fèi)氏完全佐劑混合，用乳缽研磨成油包水乳劑備用。83醫(yī)學(xué)pptTDI-BSA抗原制備：1.溶液A：1%TDI/1,4-二PA-BSA抗原制備：1.溶液A：PA丙酮溶液(30mgPA溶解于1ml丙酮中)。2.溶液B：2%BSA/碳酸氫鈉溶液(9%)。3.將溶液B置于冰水浴(4℃)中，開(kāi)磁力攪拌器，攪拌1小時(shí)。4.將制備好的PA-BSA抗原與弗氏完全佐劑1：1混合，乳缽中研磨，形成油包水乳劑備用。PA-HSA抗原制備：1.溶液A：PA丙酮溶液(30mgPA溶解于1ml丙酮中)。2.溶液B：2%HSA/碳酸氫鈉溶液(9%)。3.將溶液B置于冰水浴(4℃)中，開(kāi)磁力攪拌器，攪拌1小時(shí)。4.將制備好的PA-HSA抗原與弗氏完全佐劑1：1混合，乳缽中研磨，形成油包水乳劑備用。84醫(yī)學(xué)pptPA-BSA抗原制備：1.溶液A：PA丙酮溶液(30mgP膠原和腎上腺素混合液制備：1.膠原溶液：200μg/ml2.腎上腺素溶液：100μg/ml3.將以上兩種溶液以1：1比例混合、搖勻。85醫(yī)學(xué)ppt膠原和腎上腺素混合液制備：1.膠原溶液：200μg/ml以下是附錄1-586醫(yī)學(xué)ppt以下是附錄1-586醫(yī)學(xué)ppt常用藥物的最大給藥量動(dòng)物項(xiàng)目灌胃皮下注射肌肉注射腹腔注射靜脈注射大鼠最大給藥量2mLlmL0.4mL2mL4mL

使用針頭16號(hào)(鈍頭)6號(hào)6號(hào)6號(hào)5號(hào)小鼠最大給藥量lmL0.4mL0.4mLlmL0.8mL

使用針頭9號(hào)(鈍頭)5l/2號(hào)51/2號(hào)51/2號(hào)4號(hào)豚鼠最大給藥量3mLLmL0.5mL4mL5mL

使用針頭16號(hào)(鈍頭)61/2號(hào)61/2號(hào)7號(hào)5號(hào)家兔最大給藥量20mL2mL2mL5mL10mL

使用針頭10號(hào)導(dǎo)尿管61/2號(hào)61/2號(hào)7號(hào)6號(hào)87醫(yī)學(xué)ppt常用藥物的最大給藥量動(dòng)物項(xiàng)目灌人及不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間藥物量對(duì)應(yīng)值88醫(yī)學(xué)ppt人及不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間藥物量對(duì)應(yīng)值88醫(yī)學(xué)ppt例如：某藥物在60kg體重的病人的劑量為21.0g.kg-1.d-1，一只5kg的猴為53.6g.kg-1.d-1，一只10kg重的犬為40.4g.kg-1.d-1，一只20g的小鼠則為260.6g.kg-1.d-1。89醫(yī)學(xué)ppt例如：89醫(yī)學(xué)ppt常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的最大安全采血量與最小致死采血量動(dòng)物種類最大安全采血量(mL)最小致死采血量(mL)小鼠0.10.3大鼠12豚鼠510家兔1040狗50300猴156090醫(yī)學(xué)ppt常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的最大安全采血量與動(dòng)物種類最大安全采血量(mL)常用麻醉劑的用法及劑量

麻醉劑動(dòng)物種類給藥途徑劑量(mg/kg)常用濃度(％)戊巴比妥鈉犬、兔大鼠、小鼠、豚鼠靜脈腹腔腹腔3040～5040～50332硫噴妥鈉犬、兔靜脈15-202大鼠腹腔401小鼠腹腔15-201氯胺酮犬、貓腹腔10-4010

大鼠、小鼠腹腔100～20010氯醛糖兔靜脈80-1002

大鼠腹腔502烏拉坦兔靜脈750-100030大鼠、小鼠皮下或肌肉800-10002091醫(yī)學(xué)ppt常用麻醉劑的用法及劑量麻醉劑動(dòng)物種類給藥途徑劑量(m此課件下載可自行編輯修改，供參考！感謝您的支持，我們努力做得更好！此課件下載可自行編輯修改，供參考！中南大學(xué)湘雅基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院

病理生理學(xué)系

鄧恭華第六章

呼吸系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型93醫(yī)學(xué)ppt中南大學(xué)湘雅基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院

病理生理學(xué)系

鄧恭華第六章

呼吸系統(tǒng)一、慢性支氣管炎概述慢性支氣管炎(chronicbronchitis)：指由感染或非感染因素引起的氣管、支氣管黏膜及其周圍組織的慢性非特異性炎性反應(yīng)。第一節(jié)慢性支氣管炎動(dòng)物模型1.慢性支氣管炎的定義：94醫(yī)學(xué)ppt一、慢性支氣管炎概述慢性支氣管炎(chronic2.慢性支氣管炎的特點(diǎn)：2)咳痰或伴有喘息反復(fù)發(fā)作，每次持續(xù)3個(gè)月以上，連續(xù)2年以上的慢性病理過(guò)程。3)嚴(yán)重時(shí)可并發(fā)肺氣腫或肺心病。4)初期癥狀較輕，常在冬季發(fā)病，春季轉(zhuǎn)暖后癥狀緩解。晚期病性加重，季節(jié)性表現(xiàn)不明顯，可常年存在。1)發(fā)病以老年人居多。95醫(yī)學(xué)ppt2.慢性支氣管炎的特點(diǎn)：2)咳痰或伴有喘息反復(fù)發(fā)作，每次3.慢性支氣管炎的病因：1)吸煙：長(zhǎng)期煙民2)感染：各種病原菌3)理化因素：刺激性煙霧、毒氣、粉塵、二氧化硫氣體等。4)氣候因素：寒冷5)過(guò)敏反應(yīng)6)呼吸道局部防御及免疫功能降低7)自主神經(jīng)功能失調(diào)96醫(yī)學(xué)ppt3.慢性支氣管炎的病因：4醫(yī)學(xué)ppt二、慢性支氣管炎造模方法1.吸入毒氣方法造模有毒氣體造模方法造模時(shí)間總觀察時(shí)間含2%SO2的空氣每天1次，每次吸氣10秒連續(xù)14-18天為輕度，連續(xù)27為重度97天含0.001-.004mg/LCl2的空氣每天1次，每次吸氣25-30分鐘連續(xù)35天后可出現(xiàn)慢性支氣管炎癥狀50天含氨氣的空氣第天8次，每次吸氣2-3分鐘，每次間隔15-20分鐘連續(xù)32天后可出現(xiàn)慢性支氣管炎癥狀100天（一）吸入單一有毒氣體法97醫(yī)學(xué)ppt二、慢性支氣管炎造模方法1.吸入毒氣方法造模有毒氣體造模方2.吸入SO2法的特點(diǎn)1)小鼠出現(xiàn)刺激性咳嗽，體重不增，少數(shù)死亡。2)支氣管病理改變：早期為急性炎癥，12天后出現(xiàn)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)，繼而支氣管周圍結(jié)締組織增生，27天后顯示為重度慢性支氣管炎。3)支氣管腔內(nèi)粘液阻塞，氣管上皮壞死，杯狀細(xì)胞和氣管平滑肌增生，肺泡腔擴(kuò)大，部分肺泡融合成肺大泡。此法還可觀察到：氣道和肺組織毒蕈堿型受體(M受體)及功能改變。98醫(yī)學(xué)ppt2.吸入SO2法的特點(diǎn)1)小鼠出現(xiàn)刺激性咳嗽，體重不增，少3.吸入SO2法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)此法穩(wěn)定可靠，成功率高，為最常用的慢性支氣管炎模型；2)需要觀察氣道和肺組織毒蕈堿型受體(M受體)及功能改變的，吸入SO2法最好。缺點(diǎn)：1)此法需要每天檢測(cè)SO2濃度，所需設(shè)備和操作復(fù)雜，耗時(shí)費(fèi)力。2)SO2為有害氣體，吸入后動(dòng)物發(fā)生嚴(yán)重氣道內(nèi)病變，常導(dǎo)致動(dòng)物死亡。應(yīng)用：最常用的慢性支氣管炎動(dòng)物模型99醫(yī)學(xué)ppt3.吸入SO2法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：最常用的1.吸入煙霧方法造模有毒氣體造模方法造模時(shí)間含混合煙霧的空氣將大鼠置于27m2的煙室內(nèi)制煙，每天制煙1次，每周6次。連續(xù)44天含香煙煙霧的空氣將豚鼠置于21L容器中制煙，每天煙熏2次，每次10分鐘，每周煙熏6天。同時(shí)，置于7-8℃環(huán)境中，每次1小時(shí)，隔天1次。45天后改為每周2次。連續(xù)28-35天后輕度，42天后可出現(xiàn)重度慢性支氣管炎癥狀（二）吸入煙霧法100醫(yī)學(xué)ppt1.吸入煙霧方法造模有毒氣體造模方法造模時(shí)間含混合煙霧的空2.吸入煙霧法的特點(diǎn)1)隨著吸入煙霧時(shí)間延長(zhǎng)，氣管炎病變逐漸加重，至第7周形成慢性支氣管炎典型改變。2)氣管炎癥細(xì)胞特點(diǎn)：初期以巨噬細(xì)胞為主，隨后以淋巴細(xì)胞為主，中性粒細(xì)胞僅在接觸煙霧的早期短時(shí)間內(nèi)升高。101醫(yī)學(xué)ppt2.吸入煙霧法的特點(diǎn)1)隨著吸入煙霧時(shí)間延長(zhǎng)，氣管炎病變逐3.吸入煙霧法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)此法簡(jiǎn)單易行，合并出現(xiàn)其它疾病情況少。2)此法起病較緩，可以反映慢性支氣管炎早期炎癥形成的系列過(guò)程。缺點(diǎn)：煙霧吸入(煙熏)法需要較長(zhǎng)時(shí)間，考驗(yàn)?zāi)托?。?yīng)用：特別適用于研究慢性支氣管炎發(fā)生發(fā)展過(guò)程中需要探討不同階段的病理變化及相應(yīng)的炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)、炎性標(biāo)志物的變化。102醫(yī)學(xué)ppt3.吸入煙霧法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：10醫(yī)學(xué)p1.病菌滴鼻的方法造模菌液造模方法造模時(shí)間流感病毒液，1：320；或者流感桿菌液，7×108個(gè)/ml

小鼠乙醚麻醉后，將菌液(0.03ml/只)滴鼻，每天1次連續(xù)3-6天后，支氣管上皮輕度壞死，連續(xù)35天后，典型慢支癥狀4種細(xì)菌混合液3%戊巴比妥麻醉大鼠，將混合菌液(0.1ml/只)滴鼻，每周1次連續(xù)6周后可出現(xiàn)輕度慢支癥狀寒冷環(huán)境及8種細(xì)菌混合液將豚鼠置于7-8℃環(huán)境中，每次1小時(shí)，隔天1次。45天后改為每周2次。同時(shí)，8種細(xì)菌混合液(0.2ml/只)滴鼻。150天后可出現(xiàn)慢性支氣管炎癥狀（三）病菌滴鼻法103醫(yī)學(xué)ppt1.病菌滴鼻的方法造模菌液造模方法造模時(shí)間流感病毒液，1：2.病菌滴鼻法的特點(diǎn)1)更接近于臨床實(shí)際情況2)感染2天后小鼠出現(xiàn)毛松、咳嗽、食欲缺乏等3)感染3-6天后出現(xiàn)氣管上皮輕度壞死，杯狀細(xì)胞數(shù)目初期下降，約10天后逐漸升高4)感染35天后出現(xiàn)典型的慢性支氣管炎癥狀5)感染50天后逐漸恢復(fù)正常104醫(yī)學(xué)ppt2.病菌滴鼻法的特點(diǎn)1)更接近于臨床實(shí)際情況12醫(yī)學(xué)ppt3.病菌滴鼻法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)由于采用病原菌摸擬臨床感染狀況，故更接近臨床實(shí)際情況2)由于呼吸道感染病源菌眾多，故采用最合適的病菌滴鼻，對(duì)探討不同病源菌導(dǎo)致慢性支氣管炎的發(fā)病機(jī)制有很的應(yīng)用價(jià)值。缺點(diǎn)：1)致病菌混合的制備有一定難度2)不同致病菌引起的慢性支氣管炎有較大差異2)可能導(dǎo)致研究人員的感染應(yīng)用：主要適用于探討慢性支氣管炎病因（不同致病菌）、誘因，以及要求模擬臨床實(shí)際情況的實(shí)驗(yàn)研究105醫(yī)學(xué)ppt3.病菌滴鼻法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：主要適用于1.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素的方法1）將大鼠用1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉；2）仰臥位固定，拉出舌體，暴露聲門，快速將套管穿過(guò)聲門，插入氣管；3）將內(nèi)毒素（濃度200μg/200μl）注入氣管；4）大鼠飼養(yǎng)3－4周后，逐漸出現(xiàn)慢性支氣管炎表現(xiàn)。此法由于要做全麻手術(shù)和氣管插管，比較麻煩，對(duì)大鼠損傷也大。（四）氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法106醫(yī)學(xué)ppt1.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素的方法1）將大鼠用1%戊巴比妥鈉腹腔注2.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法的特點(diǎn)1)用毒素代替致病菌，克服了致病菌混合液難制備的問(wèn)題2)氣管滴注脂多糖(LPS)約21天后，小鼠出現(xiàn)倦怠、毛發(fā)失澤、進(jìn)食和飲水均減少3)支氣管病理改變：氣管、支氣管上皮脫落，杯狀細(xì)胞及粘液腺細(xì)胞增生，慢性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，平滑肌細(xì)胞增生肥大，管壁增厚4)支氣管腔內(nèi)充滿粘液及大量中性粒細(xì)胞107醫(yī)學(xué)ppt2.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法的特點(diǎn)1)用毒素代替致病菌，克服了致3.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)克服了致病菌混合液難制備的問(wèn)題2)避免了導(dǎo)致研究人員感染病菌的風(fēng)險(xiǎn)3)不需要象SO2吸入法那樣，天天測(cè)SO2濃度缺點(diǎn)：1)當(dāng)?shù)巫PS過(guò)量時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥，引起急性肺損傷。這與復(fù)制慢性支氣管炎疾病模型思路相沖突2)不象致病菌滴鼻法那樣貼近臨床，已經(jīng)與臨床實(shí)際情況有較大差異3)需要做全麻手術(shù)和氣管插管，比較麻煩，對(duì)大鼠損傷也大應(yīng)用：適用于嫌病致菌制備難，天天測(cè)SO2麻煩，專注于慢性支氣管炎發(fā)生發(fā)展機(jī)制研究108醫(yī)學(xué)ppt3.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：適用例一、構(gòu)建熏煙致慢性支氣管炎小鼠模型109醫(yī)學(xué)ppt例一、構(gòu)建熏煙致慢性支氣管炎小鼠模型17醫(yī)學(xué)ppt110醫(yī)學(xué)ppt18醫(yī)學(xué)ppt111醫(yī)學(xué)ppt19醫(yī)學(xué)ppt112醫(yī)學(xué)ppt20醫(yī)學(xué)ppt113醫(yī)學(xué)ppt21醫(yī)學(xué)ppt114醫(yī)學(xué)ppt22醫(yī)學(xué)ppt115醫(yī)學(xué)ppt23醫(yī)學(xué)ppt116醫(yī)學(xué)ppt24醫(yī)學(xué)ppt117醫(yī)學(xué)ppt25醫(yī)學(xué)ppt結(jié)論118醫(yī)學(xué)ppt結(jié)論26醫(yī)學(xué)ppt一、支氣管哮喘概述支氣管哮喘(bronchialasthma)：指由于某些過(guò)敏因素引起的以支氣管阻塞為特點(diǎn)的疾病。1.支氣管哮喘的定義：2.哮喘的特征：陣發(fā)性帶有哮鳴音的呼吸困難、咳嗽、咳痰，且反復(fù)發(fā)作。一般春、秋二季發(fā)病率較高，20%患者有家族史。第二節(jié)支氣管哮喘動(dòng)物模型119醫(yī)學(xué)ppt一、支氣管哮喘概述支氣管哮喘(bronchia3.支氣管哮喘的危險(xiǎn)因素：1)吸入性過(guò)敏原：花粉、真菌；塵螨、動(dòng)物毛發(fā)及排泄物等2)食入性過(guò)敏原：魚(yú)蝦等水產(chǎn)、海產(chǎn)品；牛奶、雞蛋、花生等3)呼吸道感染4)藥物5)工業(yè)粉塵、化學(xué)氣體或蒸氣6)冷空氣、過(guò)度通氣、運(yùn)動(dòng)7)強(qiáng)烈情緒變化120醫(yī)學(xué)ppt3.支氣管哮喘的危險(xiǎn)因素：1)吸入性過(guò)敏原4.支氣管哮喘發(fā)作的時(shí)相：患者在接觸過(guò)敏原后幾分鐘內(nèi)，出現(xiàn)哮喘發(fā)作的癥狀，最大呼氣流速顯著降低，一般持續(xù)2～3小時(shí)后即可恢復(fù)，稱為哮喘的速發(fā)相反應(yīng)。其機(jī)制與Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)有關(guān)。有一部分病人在速發(fā)相之后緊接著出現(xiàn)第二次哮喘發(fā)作，癥狀更重，持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，可達(dá)10小時(shí)甚至幾天，重癥者持續(xù)幾十天，稱為遲發(fā)相反應(yīng)。其機(jī)制與氣道過(guò)敏性炎癥有關(guān)。過(guò)敏性哮喘的臨床過(guò)程可分為速發(fā)相反應(yīng)和遲發(fā)相反應(yīng)兩個(gè)階段。病人可發(fā)生雙相反應(yīng)，也可只發(fā)生速發(fā)相或遲發(fā)相反應(yīng)。兒童哮喘的遲發(fā)相反應(yīng)要比成人多。121醫(yī)學(xué)ppt4.支氣管哮喘發(fā)作的時(shí)相：患者在接觸過(guò)敏原后幾二、支氣管哮喘造模方法（一）致敏源誘發(fā)的哮喘模型動(dòng)物造模因素致敏方法誘發(fā)哮喘時(shí)間與觀察時(shí)間小鼠20g左右1號(hào)卵清蛋白抗原液腹腔注射1號(hào)卵清蛋白抗原液1次，每次0.2ml;8天后重復(fù)注射1次第15天起將小鼠置于密閉容器中，以60g/L卵清蛋白液霧化激發(fā)，每天1次，每次30分鐘，連續(xù)7天，直至哮喘樣發(fā)作大鼠120-180g2號(hào)卵清蛋白抗原液腹腔注射2號(hào)卵清蛋白抗原液1次，每次1ml;7天后重復(fù)注射1次2周后起將大鼠置于密閉容器中，以1%卵清蛋白液霧化激發(fā)，每天1次，每次30分鐘，連續(xù)2周，直至哮喘樣發(fā)作豚鼠300-500g1%卵清蛋白生理鹽水溶液腹腔注射1%卵清蛋白生理鹽水溶液1次，每次10ml2周后起將豚鼠置于密閉容器中，以1%卵清蛋白生理鹽水溶液霧化激發(fā)，每天1次，每次20分鐘，直至哮喘樣發(fā)作1.方法122醫(yī)學(xué)ppt二、支氣管哮喘造模方法（一）致敏源誘發(fā)的哮喘模型動(dòng)物造模因2.致敏源誘發(fā)的哮喘特點(diǎn)小鼠：1)常用小鼠品系有：BALB/c品系較易產(chǎn)生氣道高反應(yīng)，并產(chǎn)生高滴度IgE；而C57BL/6品系不易出現(xiàn)氣道高反應(yīng)，且只產(chǎn)生低滴度IgE。大鼠：1)常用大鼠品系有：BrownNorway(國(guó)外)；SpragueDawley，Wistar(國(guó)內(nèi))。2)哮喘激發(fā)后3-5分鐘發(fā)生速發(fā)相反應(yīng)，2-4小時(shí)發(fā)生遲發(fā)相反應(yīng)，隨后出現(xiàn)肺部炎癥細(xì)胞(24小時(shí)內(nèi)主要是嗜酸性細(xì)胞)浸潤(rùn)。3)哮喘發(fā)作24小時(shí)內(nèi)氣道反應(yīng)性升高，增幅為7-10倍，持續(xù)4-5天。多次激發(fā)能延長(zhǎng)氣道高反應(yīng)性持續(xù)時(shí)間。4)能出現(xiàn)與人類哮喘類似的遲發(fā)相反應(yīng)，并有嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)和氣道反應(yīng)性增加。豚鼠：1)很容易致敏，并激發(fā)產(chǎn)生Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)。2)激發(fā)后的急性氣道過(guò)敏反應(yīng)，包括速發(fā)相和遲發(fā)相哮喘反應(yīng)。123醫(yī)學(xué)ppt2.致敏源誘發(fā)的哮喘特點(diǎn)小鼠：大鼠：豚鼠：31醫(yī)學(xué)ppt3.致敏源誘發(fā)的哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)卵清蛋白來(lái)源容易，且價(jià)格低廉。2)卵清蛋白免疫原性強(qiáng)，容易致敏和激發(fā)哮喘。3)是國(guó)內(nèi)外最常用的哮喘疾病模型。以下分別列舉：

小鼠、大鼠和豚鼠支氣管哮喘模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用124醫(yī)學(xué)ppt3.致敏源誘發(fā)的哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：以下分別列舉：3優(yōu)點(diǎn)：小鼠便宜，價(jià)格低，有利于大規(guī)模實(shí)驗(yàn)。小鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用缺點(diǎn)：1)幾乎所有暴露于變應(yīng)原(過(guò)敏原)的小鼠都可產(chǎn)生哮喘，故小鼠哮喘模型不宜應(yīng)用于基因多態(tài)性研究。2)小鼠與人類存在呼吸系統(tǒng)的解剖、生理學(xué)上的差異。呼吸頻率快，但潮氣量低。3)小鼠與人類還存在免疫學(xué)機(jī)制上的差異。大多數(shù)小鼠哮喘模型會(huì)出現(xiàn)過(guò)敏性肺泡炎和超敏性肺炎，而掩蓋了氣道病變。應(yīng)用：適用于需要大規(guī)模實(shí)驗(yàn)的情況，如:評(píng)價(jià)預(yù)防效果或哮喘療效。125醫(yī)學(xué)ppt優(yōu)點(diǎn)：小鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用缺點(diǎn)：應(yīng)用：適用于需要大規(guī)模大鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)大鼠品系純且全，易于繁殖，獲得容易。2)價(jià)格較便宜，能減輕研究經(jīng)費(fèi)壓力。3)與小鼠相比，可獲取的標(biāo)本量大很多。4)大鼠生物學(xué)特性與人有較多的相似性。缺點(diǎn)：1)國(guó)際上哮喘研究論文主要采用BrownNorway品系大鼠，但其價(jià)格較貴。BN大鼠哮喘模型的主要優(yōu)勢(shì)在于能產(chǎn)生針對(duì)吸入性變應(yīng)原的特異性IgE抗體，且更易誘發(fā)哮喘癥狀、明顯的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性。應(yīng)用：1)是最常用的哮喘動(dòng)物模型之一。2)適用于皮質(zhì)激素治療哮喘作用機(jī)理研究，以用非皮質(zhì)激素類抗哮喘免疫抑制劑的療效觀察和評(píng)價(jià)。126醫(yī)學(xué)ppt大鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：34醫(yī)學(xué)ppt豚鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)豚鼠價(jià)格較便宜；體型較大，方便實(shí)驗(yàn)操作；獲取標(biāo)本量大。2)變應(yīng)原誘發(fā)的支氣管哮喘與人類支氣管哮喘中的氣管收縮特點(diǎn)相同。包括：接觸抗原后的支氣管收縮反應(yīng)；氣道對(duì)介質(zhì)的高反應(yīng)性；以及嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)的特征。缺點(diǎn)：1)由于近交系豚鼠罕見(jiàn)，不利于用來(lái)研究遺傳因素的影響。2)皮質(zhì)激素對(duì)豚鼠哮喘模型的支氣管痙攣影響不顯著。3)可能出現(xiàn)種群依賴性的夸大反應(yīng)，如：過(guò)敏性休克，導(dǎo)致豚鼠死亡。應(yīng)用：1)是使用最廣泛的變應(yīng)原性支氣管哮喘模型。2)致敏性豚鼠的過(guò)敏性支氣管收縮(包括速發(fā)相和遲發(fā)相)在研究抗過(guò)敏藥、支氣管擴(kuò)張藥藥物療效方面就用非常廣泛。127醫(yī)學(xué)ppt豚鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：35醫(yī)學(xué)ppt（二）甲苯二異氰酸甲酯(TDI)誘發(fā)的職業(yè)性哮喘模型1.TDI誘發(fā)哮喘方法動(dòng)物造模因素致敏方法誘發(fā)哮喘時(shí)間與觀察時(shí)間豚鼠250-300g/只TDI/BSA抗原腹腔注射TDI/BSA抗原1次，每次0.5ml；2-3周后再重復(fù)加強(qiáng)免疫1-2次，致敏在初次免疫5-8周后，做抗原激發(fā)試驗(yàn)。先用1%BSA激發(fā)，無(wú)反應(yīng)后再用TDI/BSA激發(fā)。約有30%豚鼠會(huì)出現(xiàn)明顯哮喘反應(yīng)。128醫(yī)學(xué)ppt（二）甲苯二異氰酸甲酯(TDI)誘發(fā)的職業(yè)性哮喘模型1.2.TDI誘發(fā)哮喘特點(diǎn)1)經(jīng)TDI/BSA激發(fā)后，動(dòng)物呼吸頻率加快、幅度增大，哮喘時(shí)伴有咳嗽、躁動(dòng)不安，甚至出現(xiàn)痙攣性呼吸。2)85%動(dòng)物可同時(shí)出現(xiàn)不同滴度的抗原特異性IgE、IgG抗體。3)TDI是重要的職業(yè)性致哮喘化學(xué)品之一。129醫(yī)學(xué)ppt2.TDI誘發(fā)哮喘特點(diǎn)1)經(jīng)TDI/BSA激發(fā)后，動(dòng)物呼吸3.TDI誘發(fā)哮喘優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：是TDI致職業(yè)性哮喘的重要?jiǎng)游锬Ｐ?。從事TDI作業(yè)者中約有5%-10%的人可發(fā)生職業(yè)性哮喘。缺點(diǎn)：1)TDI/BSA抗原制備難度大，步驟繁鎖。2)屬職業(yè)性哮喘，應(yīng)用范圍窄。應(yīng)用：適用于TDI職業(yè)性哮喘方面研究。130醫(yī)學(xué)ppt3.TDI誘發(fā)哮喘優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：38醫(yī)學(xué)ppt（三）鄰苯二甲酸酐(PA)誘發(fā)的哮喘模型1.PA誘發(fā)哮喘模型方法動(dòng)物造模因素致敏方法誘發(fā)哮喘時(shí)間與觀察時(shí)間豚鼠250-300g/只，2-3月齡PA-BSA抗原和PA-HSA抗原腹腔或后腿肌肉注射PA-BSA抗原或PA-HSA抗原1次，每次0.2-0.3ml，致敏在免疫3-8周后，做抗原吸入激發(fā)試驗(yàn)。先用1%HSA生理鹽水溶液霧化吸入1-3分鐘，激發(fā)。哮喘持續(xù)30-50分鐘。131醫(yī)學(xué)ppt（三）鄰苯二甲酸酐(PA)誘發(fā)的哮喘模型1.PA誘發(fā)哮喘2.PA誘發(fā)哮喘模型的特點(diǎn)1)苯酐(PA)為固體化學(xué)品，也可引起哮喘。為什么？2)霧化吸入激發(fā)后1-10分鐘，動(dòng)物呼吸頻率加快(由100-120次/分，上升至140-160次/分)，幅度增大，伴咳嗽、噴嚏，重癥者呼吸費(fèi)力，掙扎，可有暫窒息或死亡。苯酐132醫(yī)學(xué)ppt2.PA誘發(fā)哮喘模型的特點(diǎn)1)苯酐(PA)為固體化學(xué)品，3.PA誘發(fā)哮喘模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：PA是重要白色固體化工原料，也是一種常見(jiàn)的職業(yè)性致哮喘物質(zhì)。缺點(diǎn)：與TDI至哮喘一樣，屬職業(yè)性哮喘，應(yīng)用范圍窄。應(yīng)用：適用于PA所致職業(yè)性哮喘方面研究133醫(yī)學(xué)ppt3.PA誘發(fā)哮喘模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：適例二、卵清蛋白誘導(dǎo)小鼠建立支氣管哮喘模型134醫(yī)學(xué)ppt例二、卵清蛋白誘導(dǎo)小鼠建立支氣管哮喘模型42醫(yī)學(xué)ppt135醫(yī)學(xué)ppt43醫(yī)學(xué)ppt136醫(yī)學(xué)ppt44醫(yī)學(xué)ppt137醫(yī)學(xué)ppt45醫(yī)學(xué)pptB:模型組病理切片138醫(yī)學(xué)pptB:模型組病理切片46醫(yī)學(xué)ppt結(jié)論139醫(yī)學(xué)ppt結(jié)論47醫(yī)學(xué)ppt一、肺心病概述1.肺心病的定義：肺心病是指由慢性支氣管炎、肺氣腫和肺纖維化，以及肺血管病變而引起的心臟病。2.肺心病的病理特點(diǎn)：1)肺動(dòng)脈高壓；2)右心室肥大和右心衰竭。第三節(jié)肺心病動(dòng)物模型140醫(yī)學(xué)ppt一、肺心病概述1.肺心病的定義：肺心病是指由二、肺心病造模方法（一）肺循環(huán)高壓模型肺循環(huán)高壓：指包括肺動(dòng)脈高壓、肺靜脈高壓和混合性肺動(dòng)脈高壓的總稱。肺動(dòng)脈高壓：指肺動(dòng)脈壓增高，而肺靜脈壓正常。也稱為動(dòng)脈型肺動(dòng)脈高壓。特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓：指沒(méi)有任何原因(包括遺傳、病毒、藥物)而發(fā)生的肺動(dòng)脈高壓。肺循環(huán)高壓診斷標(biāo)準(zhǔn)：在海平面靜息狀態(tài)下經(jīng)右心導(dǎo)管檢查1)肺動(dòng)脈收縮壓>30mmHg2)肺動(dòng)脈平均壓>25mmHg3)運(yùn)動(dòng)時(shí)，肺動(dòng)脈平均壓>30mmHg

以上三項(xiàng)，居其一即可141醫(yī)學(xué)ppt二、肺心病造模方法（一）肺循環(huán)高壓模型(1)方法1、缺氧型肺循環(huán)高壓動(dòng)物模型動(dòng)物造模因素致艙內(nèi)低氧方法肺循環(huán)高壓觀察時(shí)間大鼠150-250g/只低氧氣體1.100%氮?dú)?.10%氧氣90%氮?dú)鈱?0-15只大鼠置入動(dòng)物艙室后，通入N2，使艙內(nèi)O2濃度降低至10%左右。以2升/分的速度通入低氧混合氣體(10%O2，90%N2)大鼠在缺氧5周后，出現(xiàn)低氧性肺血管收縮及肺血管形態(tài)改變。動(dòng)物艙室(250-300升)：1)頂部有三通，便于氣體樣本，檢測(cè)O2和N2濃度。使O2濃度保持在10%左右，CO2濃度保持在3%以下。2)底部有一小裂隙，便于艙內(nèi)、外氣體交換，氣壓相等。3)艙內(nèi)CO2用鈉石灰吸收，水蒸氣用無(wú)水氯化鈣吸收。4)艙內(nèi)有小風(fēng)扇將通入氣體混均。142醫(yī)學(xué)ppt(1)方法1、缺氧型肺循環(huán)高壓動(dòng)物模型動(dòng)物造模因素致艙內(nèi)低(2)缺氧型肺循環(huán)高壓模型的特點(diǎn)1)動(dòng)物艙室設(shè)計(jì)和制作有點(diǎn)難度。2)需要O2分析儀和CO2分析儀，且檢測(cè)麻煩。3)艙內(nèi)溫度難保持恒定，也難以消除CO2和水蒸氣的影響。143醫(yī)學(xué)ppt(2)缺氧型肺循環(huán)高壓模型的特點(diǎn)1)動(dòng)物艙室設(shè)計(jì)和制作有點(diǎn)難(3)缺氧型肺循環(huán)高壓模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：艙室設(shè)計(jì)，操作簡(jiǎn)單，能保持艙內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間低氧狀態(tài)。如能通過(guò)自動(dòng)化設(shè)計(jì)，時(shí)實(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)O2和CO2濃度，控制好艙內(nèi)溫度、濕度和氣壓，將是一個(gè)好的造模方法。缺點(diǎn)：1)每天檢測(cè)O2和CO2濃度很煩。2)通過(guò)調(diào)節(jié)艙室通氣量保持O2濃度和氣壓有難度。應(yīng)用：適用于因長(zhǎng)期缺氧導(dǎo)致肺循環(huán)高壓，繼發(fā)右心肥大，右心衰的肺心病模型。144醫(yī)學(xué)ppt(3)缺氧型肺循環(huán)高壓模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用(1)方法2、缺氧型肺循環(huán)高壓動(dòng)物模型動(dòng)物造模因素野百合堿注射方法肺循環(huán)高壓、右心肥大和右心衰觀察大鼠150-250g/只野百合堿將2%野百合堿(60mg/kg體重)，一次性腹腔注射。野百合堿入血后引起肺血管內(nèi)皮損傷，從而導(dǎo)致缺氧和肺血管重塑。大鼠在缺氧5周后，出現(xiàn)低氧性肺血管收縮及肺血管形態(tài)改變。注謝后第14天，21天和28天行右心導(dǎo)管術(shù)檢測(cè)肺動(dòng)脈和右心室壓力，以及心功能檢測(cè)。(2)特點(diǎn)1)肺動(dòng)脈壓升高顯著，可達(dá)正常值3倍。2)伴右心室肥厚和體重減輕。3)光鏡下可見(jiàn)肺血管重塑明顯，表現(xiàn)為：血管內(nèi)膜增生，中層增厚。4)野百合堿可重復(fù)誘導(dǎo)產(chǎn)生嚴(yán)重的進(jìn)展性肺動(dòng)脈高壓。145醫(yī)學(xué)ppt(1)方法2、缺氧型肺循環(huán)高壓動(dòng)物模型動(dòng)物造模因素野百合堿(2)優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)方法簡(jiǎn)便易行2)本模型為常壓缺氧肺循環(huán)高壓模型，更類似于平原地區(qū)的肺心病發(fā)病情況。缺點(diǎn)：與缺氧、酸中毒、內(nèi)毒素導(dǎo)致的肺血管損傷相比，野百合堿屬于化學(xué)品或藥物導(dǎo)致的肺血管損傷。應(yīng)用：適用于常壓缺氧肺循環(huán)高壓的肺心病方面研究146醫(yī)學(xué)ppt(2)優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：適用于常壓缺氧肺循（二）慢性阻塞性肺部疾病(COPD)模型1.方法動(dòng)物造模因素被動(dòng)吸煙方法支氣管、肺組織病變觀察大鼠150-250g/只煙霧吸入每個(gè)煙熏箱放入大鼠3只，每天上午、下午各被動(dòng)吸煙1次。每箱每次點(diǎn)燃香煙2支，每次持續(xù)吸入新鮮香煙煙霧1小時(shí)煙熏10周后，纖毛上皮異常并伴粘液高分泌；12周后，可見(jiàn)纖毛皮細(xì)胞部分脫落；12-24周后，可見(jiàn)少量肺泡融合形成肺大泡。24-36周后，上述病變更明顯；36周后，肺泡腔明顯擴(kuò)大，氣道管壁明顯增厚和纖維化，并可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。動(dòng)物煙熏箱(20×25×30cm3)：1)煙熏箱的一側(cè)下部留有一個(gè)直徑為0.5cm的通氣管，與箱外側(cè)的不銹鋼燃煙室相通。2)燃煙室進(jìn)氣孔連接一個(gè)小電風(fēng)扇。電扇風(fēng)力助燃并推動(dòng)煙霧和O2進(jìn)入煙熏箱。香煙：采用市售無(wú)過(guò)濾嘴的香煙(每支約含焦油25mg，煙氣煙堿量1.4mg)147醫(yī)學(xué)ppt（二）慢性阻塞性肺部疾病(COPD)模型1.方法動(dòng)物造模因(2)COPD模型特點(diǎn)1)采用香煙煙熏36周以上的方法制備大鼠COPD模型。是一個(gè)較長(zhǎng)期的慢性實(shí)驗(yàn)，更符合人類COPD的臨床實(shí)際情況。2)多種炎癥細(xì)胞參與。氣道內(nèi)主要是PMN和Mφ為主，肺細(xì)胞內(nèi)以Mφ(CD68+)和T-淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主。3)多種炎癥因子參與。如：IFNγ、MCP-1、ET-1、IL-2，4，6，10等。4)氣道高分泌，炎癥細(xì)胞增多，管壁增厚，膠原等細(xì)胞外基質(zhì)增多并過(guò)度沉積、纖維化(COPD氣道重塑的重要病理改變)。148醫(yī)學(xué)ppt(2)COPD模型特點(diǎn)1)采用香煙煙熏36周以上的方法制備(2)COPD模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：1)方法簡(jiǎn)便易行，不需要貴重儀器設(shè)備和藥品。2)屬較長(zhǎng)期的慢性實(shí)驗(yàn)，因此更符合人類COPD的臨床實(shí)際情況。缺點(diǎn)：1)長(zhǎng)期的慢性實(shí)驗(yàn)，考驗(yàn)的是人的耐心、恒心和毅力。2)能否導(dǎo)致繼發(fā)性肺心病，還需要更長(zhǎng)的煙熏時(shí)間和耐心等待。應(yīng)用：適用于COPD病理、病生及藥物療效方面的研究149醫(yī)學(xué)ppt(2)COPD模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：應(yīng)用：適用例三、低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的建立研究目的150醫(yī)學(xué)ppt例三、低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的建立研究目的58醫(yī)學(xué)ppt151醫(yī)學(xué)ppt59醫(yī)學(xué)ppt152醫(yī)學(xué)ppt60醫(yī)學(xué)ppt153醫(yī)學(xué)ppt61醫(yī)學(xué)ppt154醫(yī)學(xué)ppt62醫(yī)學(xué)ppt結(jié)論本研究結(jié)果提示肺動(dòng)脈高壓的大鼠模型成功建立。本研究模型的建立較好地模擬了患者肺動(dòng)脈高壓發(fā)生的病理過(guò)程，可以應(yīng)用于患者的臨床研究。陳麗英等低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的建立中華危重癥醫(yī)學(xué)雜志2015，vol.8(5):312-314155醫(yī)學(xué)ppt結(jié)論本研究結(jié)果提示肺動(dòng)脈高壓的大鼠模型成功建立。本研究模型一、肺栓塞概述肺栓塞的定義：肺栓塞：指以各種栓子阻塞肺動(dòng)脈系統(tǒng)為其發(fā)病原因的一組疾病或臨床綜合征的總稱。包括：血栓、脂肪