細(xì)胞培養(yǎng)前準(zhǔn)備課件

實驗總體安排一.細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù)實驗前準(zhǔn)備細(xì)胞傳代細(xì)胞凍存與復(fù)蘇細(xì)胞計數(shù)與接種孔板二.專題1.細(xì)胞生長曲線：MTT實驗2.細(xì)胞凋亡：JC-1檢測線粒體膜電位3.免疫熒光技術(shù)：核蛋白（PCNA)的免疫熒光4.流式細(xì)胞儀的應(yīng)用：細(xì)胞周期的檢測5.電鏡細(xì)胞培養(yǎng)實驗器材準(zhǔn)備

玻璃器皿的處理玻璃器皿用于培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞凍存、培養(yǎng)用液的存放等。提供細(xì)胞生長的玻璃表面不但要清潔干凈，而且要帶適當(dāng)電荷?？列詨A清洗劑會使玻璃表面帶的電荷不適于細(xì)胞附著，需以HCL或H2SO4中和。清洗玻璃器皿不僅要求干凈透明、無油跡，且不能殘留任何毒性物質(zhì)。為了保證清洗的質(zhì)量，一般玻璃器皿的處理分為六個個步驟：浸泡，刷洗，浸酸，沖洗，包裝，消毒滅菌。浸泡：新的玻璃器皿首先用清水浸泡及簡單刷洗以便去除玻璃器皿表面的灰塵和軟化溶解附著物，新購的玻璃器皿表面常呈堿性，并帶有許多干涸的灰塵和一些對細(xì)胞有毒的物質(zhì)（如鉛，砷等）。然后用5％稀鹽酸溶液中浸泡過夜，中和其中的堿性物質(zhì)。使用過的玻璃器皿常常附有大量的蛋白質(zhì)，干涸后難以刷洗掉，因此用后就要立即浸入清水中，浸泡時應(yīng)將器皿完全浸入水中，使水進(jìn)入器皿內(nèi)而無氣泡空隙遺留。對已用過且有污染的器皿必須先消毒。刷洗：一般多用軟毛刷和洗滌劑或洗衣粉進(jìn)行洗滌，以去除器皿內(nèi)外表面的雜質(zhì)。浸酸：酸就是清潔液，由濃硫酸、重鉻酸鉀及蒸餾水桉一定比例配制而成。具有很強(qiáng)的氧化作用，去污能力很強(qiáng)，對玻璃器皿無腐蝕作用。經(jīng)清潔液浸泡后，玻璃器皿殘留的未刷洗掉的微量雜質(zhì)可被完全清除。刷洗后的玻璃器皿需干燥后才能浸入酸中，浸泡的時間不應(yīng)少于6小時，一般浸泡過夜。表1清潔液配方配方成分常用方弱酸次強(qiáng)酸強(qiáng)酸重鉻酸鉀（g）1005010060清水(ml)80010001000200濃硫酸(ml)20090160800硫酸濃度(%)2081480沖洗：玻璃器皿經(jīng)浸酸后，必須徹底沖洗，否則對細(xì)胞生長不利。使用流水徹底沖洗，吸管要用流水沖洗10min,器皿用流水灌滿、倒掉，須重復(fù)10-20次以上，然后，再用蒸餾水漂洗3次，烤箱內(nèi)烘干備用。消毒滅菌：包括干熱消毒和濕熱消毒。干熱消毒一般在烤箱中進(jìn)行，主要用于消毒玻璃器皿，需加溫到160℃～170℃，保持90～120min方能殺死芽孢。濕熱消毒是一種有效的消毒方法,一般使用高壓蒸汽滅菌器進(jìn)行消毒。一般物品（如布類、金屬器械、玻璃器皿等）消毒的要求是121℃20min，某些培養(yǎng)用液、橡膠制品、塑料器皿等的消毒要求為115℃10min。如果要重復(fù)使用塑料器皿，可以按以下步驟處理:自來水充分浸泡→沖洗→2%Na0H浸泡過夜→自來水沖洗→2%~5%鹽酸浸泡30min→自來水沖洗→蒸餾水漂洗3次→晾干→紫外線照射30min(或先用75%酒精浸泡、擦拭，再用紫外線照射30min)。凡能耐熱的塑料器皿，最好經(jīng)101.3kPa高壓滅菌。（三）膠塞等橡膠類處理新購置者先經(jīng)自來水沖洗→2%NaOH煮沸15min→自來水沖洗→2%~5%HCl煮沸15min→自來水沖洗5次以上→蒸餾水沖洗5次以上→蒸餾水煮沸10min，然后烘干

包裝消毒。（四）金屬器械的清洗新購進(jìn)的金屬器械常涂有防銹油，先