葛根芩連湯抗豬傳染性胃腸炎病毒課件

葛根芩連湯抗豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）增殖的初步研究學(xué)生姓名：王蕾學(xué)號(hào)：2225指導(dǎo)老師：宋振輝選題依據(jù)、研究現(xiàn)狀中藥制備及細(xì)胞活性測(cè)定工作進(jìn)展及安排研究意義研究?jī)?nèi)容研究進(jìn)度Contents研究意義1.在抗生素被廣泛應(yīng)用的今天，病毒性疾病對(duì)動(dòng)物機(jī)體健康的危害就上升為所有感染性疾病中最重要的一類。而天然藥物具有許多化學(xué)藥物所不具備的優(yōu)點(diǎn)，而中藥是其中十分重要的組成部分。2.研究表明，中藥復(fù)方抗病毒感染臨床應(yīng)用廣泛，具有療效肯定、不良反應(yīng)少、價(jià)格低廉等特點(diǎn)。3.近年來(lái)也有一些關(guān)于葛根芩連湯抗病毒的研究，并且也得到證實(shí)葛根芩連湯是具有抗病毒的作用的，對(duì)許多可引起腹瀉性的疾病有治療作用，但對(duì)豬病的研究不多。4.多年來(lái)，豬的傳染性胃腸炎（TGE)都對(duì)我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失（豬傳染性胃腸炎(TGE)是由豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）引起的豬的一種高度接觸性消化道傳染?。?，并且該疾病至今也沒(méi)有找到很好的方法進(jìn)行防治，因此進(jìn)行葛根芩連湯抗豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）增殖的初步研究，以證實(shí)葛根芩連湯是否能防治豬傳染性胃腸炎。研究?jī)?nèi)容（細(xì)胞活性測(cè)定方法）一、細(xì)胞病變法（CPE）

以CPE（在體外實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)和接種殺細(xì)胞性病毒，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后，可用顯微鏡觀察到細(xì)胞變圓，壞死，從瓶壁脫落等現(xiàn)象，稱之細(xì)胞病變作用）為指標(biāo)，方法簡(jiǎn)便，能夠?qū)Χ鄶?shù)藥物抑制病毒增殖的效果進(jìn)行測(cè)定與評(píng)價(jià)。一般以加號(hào)表示細(xì)胞病變程度：（1）細(xì)胞病變<25%為+（2）細(xì)胞病變25%~50%為++（3）病變細(xì)胞50%~75%為+++（4）細(xì)胞病變>75%為++++研究?jī)?nèi)容（細(xì)胞活性測(cè)定方法）

二、噻唑藍(lán)（MTT）染色法

MTT可被活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成紫色不溶性結(jié)晶（顆粒）并沉積在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞周圍，而死細(xì)胞則無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）或酸化異丙醇能溶解細(xì)胞中的紫色不溶性結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光密度值（OD），可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶物形成量與細(xì)胞數(shù)成正比，因此可用于抗病毒藥物的活性篩選。研究?jī)?nèi)容（細(xì)胞活性測(cè)定方法）

三、蝕斑減少法

實(shí)驗(yàn)證明，將病毒接種于單層培養(yǎng)細(xì)胞，數(shù)天后固定細(xì)胞并染色，因病毒感染而導(dǎo)致變性的細(xì)胞不被染色，形成蝕斑（空斑）。蝕斑降低法以此為基礎(chǔ)，利用蝕斑的形成，以接種病毒后，在為添加試驗(yàn)藥物的培養(yǎng)基上形成的蝕斑數(shù)為100%對(duì)照，通過(guò)計(jì)算添加試驗(yàn)藥物的培養(yǎng)基上形成的蝕斑減少率，來(lái)研究試驗(yàn)藥物的抗病毒活性。通常用于對(duì)照的蝕斑數(shù)為50~100個(gè)。超過(guò)該范圍，藥物的感受性即降低，且會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。另外蝕斑縮小也是抗病毒活性的指標(biāo)。因此，蝕斑降低法是一種定量測(cè)定法。理論上一個(gè)蝕斑代表一個(gè)有感染性顆粒。藥物處理后，蝕斑數(shù)減少，表示病毒復(fù)制受到抑制，子代毒粒產(chǎn)生減少。蝕斑降低法定量準(zhǔn)確，結(jié)果可靠。用一系列藥物濃度，可得到劑量反應(yīng)曲線，適用于不同藥物抑制強(qiáng)度的比較。研究進(jìn)度2015年5—6月做試驗(yàn)的前期準(zhǔn)備，試驗(yàn)設(shè)計(jì)，查閱文獻(xiàn)；2015