基因工程藥物EPO課件

最成功的基因工程藥物——EPO

主要內(nèi)容什么是EPO?

主要用途

如何生產(chǎn)國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀什么是EPO?

EPO是促紅細(xì)胞生成素（Erythropoietin）的英文簡(jiǎn)稱。人體中的EPO（促紅細(xì)胞生成素）是由腎臟和肝臟分泌的一種激素物質(zhì)，能夠促進(jìn)紅細(xì)胞生成。服用紅細(xì)胞生成素可以使患腎病貧血的病人增加血流比溶度（即增加血液中紅細(xì)胞百分比）。這種藥物近年進(jìn)入商業(yè)市場(chǎng)。人體缺氧時(shí)，此種激素生成增加，并導(dǎo)致紅細(xì)胞增生。EPO興奮劑正是根據(jù)促紅細(xì)胞生成素的原理人工合成，它能促進(jìn)肌肉中氧氣生成，從而使肌肉更有勁、工作時(shí)間更長(zhǎng)。

增加訓(xùn)練耐力和訓(xùn)練負(fù)荷，屬于國(guó)際奧委會(huì)規(guī)定的違禁藥物。在2008年北京奧運(yùn)會(huì)中第一例的興奮劑檢查呈陽(yáng)性的西班牙自行車(chē)選手瑪麗亞·莫里諾，就是被發(fā)現(xiàn)使用使用促紅細(xì)胞生成素(EPO)，國(guó)際奧委會(huì)于2008年8月11日宣布取消其參賽資格。體育用途EPO發(fā)展歷程

如何生產(chǎn)？方法一：用基因重組法生產(chǎn)紅細(xì)胞生成素(EPO)

1985年科學(xué)家應(yīng)用基因重組技術(shù)，在實(shí)驗(yàn)室獲得重組人EPO（rhEPO）。

以小鼠L一929細(xì)胞為宿主,使用病毒Sv一40中組入了EPO基因的載體時(shí),80%的轉(zhuǎn)化細(xì)胞能產(chǎn)生EPO,多代培養(yǎng)后產(chǎn)生能力仍穩(wěn)定目前國(guó)內(nèi)外均采用CHO細(xì)胞(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞)表達(dá)生產(chǎn)Epo,但是細(xì)胞表達(dá)的成本比較昂貴,而用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)Epo,可能是一條十分理想的途徑。我們將構(gòu)建的pGEM-7zf(+)β-LG-Epo表達(dá)載體轉(zhuǎn)基因小鼠,經(jīng)PCR擴(kuò)增,斑點(diǎn)雜交和Southern雜交檢測(cè)證實(shí),有4只轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠。其中3只母鼠在哺乳期,采集乳汁,用Epo-ELISA檢測(cè)為陽(yáng)性。又從部分G1代母鼠中篩出6只獲得遺傳的小鼠,經(jīng)Dot-ELISA檢測(cè),其中兩只母鼠乳汁中Epo含量為0.5μg/mL。實(shí)驗(yàn)證實(shí),867bp的山羊β-LG啟動(dòng)子可以指導(dǎo)外源基因在轉(zhuǎn)基因小鼠乳汁中表達(dá)。方法二：轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)Epo

1989年安進(jìn)（Amgen）公司的第一個(gè)基因重組藥物Epogen獲得FDA的批準(zhǔn)，適應(yīng)癥為慢性腎功能衰竭導(dǎo)致的貧血、惡性腫瘤或化療導(dǎo)致的貧血、失血后貧血等，其市場(chǎng)表現(xiàn)不俗，1999年銷(xiāo)售值達(dá)到17.6億美元，2000年19.6億美元，2002年22.6億美元，2003年24.4億美元，成為名副其實(shí)的“重磅炸彈”基因藥物。國(guó)外市場(chǎng)

國(guó)內(nèi)已有10多家單位獲準(zhǔn)生產(chǎn)紅細(xì)胞生成