甲醇蛋白蛋氨酸肌苷酸左旋肉堿介紹生產(chǎn)工藝

生物化工產(chǎn)品甲醇蛋白蘋果酸L-肉堿肌苷酸甲醇蛋白一.產(chǎn)品介紹甲醇蛋白（methanolSCP）是以甲醇為原料、利用生物技術(shù)生產(chǎn)的單細胞蛋白。SCP即是微生物蛋白或菌體蛋白，是微生物在各種原料中生長而得到的含有豐富蛋白質(zhì)的微生物。在SCP中，能夠工業(yè)化大量生產(chǎn)的甲醇蛋白被稱為第二代單細胞蛋白。營養(yǎng)價值高，粗蛋白含量在70%以上，含有豐富的氨基酸如賴氨酸、蛋氨酸、胱氨酸，礦物質(zhì)以及維生素等。原料來源豐富，糖蜜、蔗糖渣、石油、液蠟、泥炭、甲烷、甲醇、丙酸、工業(yè)有機廢水、城市垃圾等。無毒，主要用作動物飼料添加劑。目前正在研究將其用作人類食品的蛋白質(zhì)添加劑和調(diào)味料。二.生產(chǎn)方法與分離工藝1.英國ICI法采用空氣提升加壓外循環(huán)式發(fā)酵罐，將滅菌后的培養(yǎng)液及甲醇和含氮空氣從底部加入，空氣攪拌發(fā)酵。過程中產(chǎn)生的CO2和過?？諝忭敳糠懦?。重度增大后的溶液順發(fā)酵罐一邊下流，在底部冷卻器完成熱交換。培養(yǎng)液和空氣在另一邊上升循環(huán)。Tempreture：35-40℃pH：6.5-7.5Time：30h通過連續(xù)抽出培養(yǎng)液維持菌體濃度穩(wěn)定，發(fā)酵結(jié)束調(diào)節(jié)發(fā)酵罐底部pH值，使菌體凝聚、絮凝。離心、閃蒸脫水、干燥等獲得粗產(chǎn)品。粒狀用作家畜、家禽、魚等的飼料蛋白，粉狀用作代奶粉。ICI法甲醇蛋白生產(chǎn)流程圖對發(fā)酵罐的要求保證空氣和能量利用良好能迅速供給發(fā)酵所需的大量氧氣能長期穩(wěn)定運轉(zhuǎn)有較大容積傳熱良好上游操作須在無菌條件下ICI法甲醇蛋白工藝特點氧氣傳遞速度快攪拌效率高培養(yǎng)基循環(huán)良好內(nèi)部無活動部件，不易被污染冷卻迅速，易控制溫度能迅速除去CO2，單位產(chǎn)品耗電少固體的分離、干燥、濃縮方方便2.德國的Hoechst-Uhde（HU）法發(fā)酵罐為空氣提升內(nèi)循環(huán)的氣升式罐。將磷酸、水、鹽、微量元素滅菌后加入發(fā)酵罐，甲醇單獨加入。發(fā)酵過程中加氨水維持pH7.0左右，發(fā)酵溫度40℃。發(fā)酵結(jié)束，經(jīng)離心、干燥得產(chǎn)品。產(chǎn)品主要供人食用，也作飼料添加劑。當菌體蛋白中含核酸＜1%，就可供人食用，如加入面包作強化劑。赫斯特-伍德法HU法的優(yōu)點點：細長結(jié)構(gòu)構(gòu)，加大大毒氣擴擴散強度度內(nèi)循環(huán)獲獲得一定定流動模模型，對對壓力力、加料料量的變變化敏感感性小循環(huán)間隔隔時間與與培養(yǎng)液液生長的的動力學學一致，，明顯提提高效率率罐內(nèi)無死死角，供供料均勻勻無機械傳傳動，混混合和通通風的能能耗僅為為攪拌式式一半，，能量量散失少少如增大罐罐頂橫截截面，環(huán)環(huán)形區(qū)向向下流動動可將附附在罐壁壁的泡沫沫沖刷下下來，可可以解決決發(fā)酵過過程中難難以控制制的泡沫沫問題3.日本的三三棱瓦斯斯化學法法（MGC）原料經(jīng)滅滅菌、過過濾后加加入發(fā)酵酵罐，發(fā)發(fā)酵罐罐內(nèi)設置置多層多多孔隔板板，以空空氣攪拌拌進行氧氧的遷移移發(fā)酵罐出出來的培培養(yǎng)液經(jīng)經(jīng)離心機機分離，，清液返返回發(fā)酵酵罐。離心后的的物料經(jīng)經(jīng)預處理理、混合合、粒化化、干燥燥(可用氣體體透平的的廢氣進進行菌體體干燥)后得粒狀狀產(chǎn)品。。4.法國的IFP法培養(yǎng)基液液體經(jīng)噴噴管系統(tǒng)統(tǒng)吸入需需要的空空氣量，，然后進進入一段段(或兩段)發(fā)酵罐;發(fā)酵罐出出來的物物料經(jīng)離離心分離離、過濾濾、干燥燥后得到產(chǎn)產(chǎn)品。該發(fā)酵罐罐有一特特殊的雙雙相泵使使罐中心心所有物物高速循環(huán)環(huán)，并由由回路中中的換熱熱器移走走熱量，，然將有有活性的的液體返返回罐中中。IFP升氣式發(fā)發(fā)酵罐優(yōu)點①適宜于酵酵母產(chǎn)生生凝絮作作用;②系統(tǒng)內(nèi)有有不同相相的混合合，可迅迅速除去去由通風風和生產(chǎn)過過程所產(chǎn)產(chǎn)生的熱熱量。5.瑞典的Norprotein法原料：甲甲醇、營營養(yǎng)鹽、、氨、空空氣、水水發(fā)酵罐發(fā)酵絮凝過濾干燥產(chǎn)品原料發(fā)酵罐排排出氣體體的能量量通過透透平得到到回收，，與熱空空氣混合合后用于于產(chǎn)品干干燥。三.國內(nèi)外研研究進展展甲醇蛋白白是高營營養(yǎng)、無無毒的優(yōu)優(yōu)質(zhì)飼料料蛋白添添加劑，，世界許許多國家家都在積積極研究究、改進進其生產(chǎn)產(chǎn)工藝，，并已建建成工業(yè)業(yè)化生產(chǎn)產(chǎn)裝置。。我國人多多地少，，動、植植物蛋白白缺乏，，開發(fā)生生產(chǎn)甲醇醇蛋白對對緩解蛋蛋白資源源緊缺、、促進畜畜牧業(yè)發(fā)發(fā)展意義義重大。。國內(nèi)從20世紀70年代開始始投人大大量的人人力物力力對甲醇醇蛋白生生產(chǎn)和應應用進行行了廣泛泛的研究究和工作作，如如中國科科學院微微生物研研究所，，等并取取得了一一定進展展，如北北京市營營養(yǎng)研究究所已掌掌握了生生產(chǎn)甲醇醇蛋白的的生產(chǎn)技技術(shù)。但目前我我國還沒沒有工業(yè)業(yè)化裝置置,近幾年隨隨著蛋白白質(zhì)飼料料的日益益短缺和和甲醇產(chǎn)產(chǎn)量的增增長，國國內(nèi)很多多企業(yè)經(jīng)經(jīng)過各方方面論證證，紛紛紛準備新新建大型型甲醇蛋蛋白生產(chǎn)產(chǎn)裝置。。蘋果酸一.產(chǎn)品介紹紹蘋果酸又又名羥基基琥珀酸酸，羥基基丁二酸酸或1-羥基乙烷烷二羧酸酸。英文文名MalicAcid.白色結(jié)晶晶顆?；蚧蚪Y(jié)晶粉粉末。蘋果酸含含有一個個不對稱稱碳原子子，有兩兩個對映映體：L-蘋果酸呈呈左旋，，以S符號表示示；D-蘋果酸呈呈右旋，，以R符號表示示。易溶于水水，是一一種酸性性很強的的有機酸酸，自然然界存在在的蘋果果酸均為為L-蘋果酸，，它是三三羧酸循循環(huán)的重重要成員員。蘋果、櫻櫻桃、葡葡萄、檸檸檬等水水果中含含有豐富富的蘋果果酸，尤尤其是未未成熟的的蘋果中中含有0.5%左右的有有機酸，，其中蘋蘋果酸占占97.2%以上，，蘋果酸酸因此而而得名。。L-蘋果酸無無毒、酸酸度大、、味道柔柔和、滯滯留時間間長等特特點，成成為繼檸檸檬酸、、乳酸酸之后用用量排第第三位的的食品酸酸味劑。。蘋果酸的的其他應應用有染染料工業(yè)業(yè)，化工工方面可可作牙膏膏及煙草草的調(diào)味味劑、皮皮膚清潔潔劑、焊焊錫助焊焊劑、洗洗滌劑、、廢氣脫脫硫劑、、鍋爐水水垢清潔潔劑、空空氣清潔潔劑、除除臭劑和和除銹劑劑，還可可作為飼飼料添加加劑。二.生產(chǎn)工藝藝蘋果酸生生產(chǎn)工藝藝化學法微生物法法提取法化學合成成法直接發(fā)酵酵法（一一步合成成法）混合發(fā)酵酵法（二二步合成成法）固定化酶酶或細胞胞轉(zhuǎn)化法法1.提取法將石灰乳乳直接加加入富含含L-蘋果酸的的果汁中中，形成成蘋果酸酸鈣鹽，，再用H2SO4溶解收集集到的鈣鈣鹽，然然后濃縮縮回收蘋蘋果酸。。局限性：果汁中含量相相對較少，原原料來源有限限，生產(chǎn)成本本很高，批量量生產(chǎn)有困難難。2.化學合成法在催化劑存在在下，苯氧化化生成富馬酸酸或馬來酸，，然后加壓與與水蒸汽共熱熱形成L-,D-蘋果酸，也可可以糠醛為原原料，經(jīng)雙氧氧水處理，在在超聲波作用用下轉(zhuǎn)變而成成。局限性：生產(chǎn)工藝比較較復雜，工藝藝條件要求高高，分離精制制技術(shù)難度大大，加之原料料為化工產(chǎn)品品。3.直接發(fā)酵法定義：一種采采用微生物直直接發(fā)酵糖質(zhì)質(zhì)原料或非糖糖質(zhì)原料如正正構(gòu)烷烴生成成L-蘋果酸的方法法。常用菌：黃曲曲霉、米曲曲霉、寄生生曲霉、根霉霉、頂青霉、、出芽短梗霉霉原理：微生物物三羧酸循環(huán)環(huán)中蘋果酸到到草酰乙酸這這一步的蘋果果酸脫氫酶缺缺失或處于低低水平使得蘋蘋果酸得以積積累。直接發(fā)酵法發(fā)發(fā)酵流程優(yōu)勢：原料來源十分分豐富，生產(chǎn)產(chǎn)成本低；潛力大、產(chǎn)產(chǎn)品安全性高高；發(fā)酵工藝條件件溫和；產(chǎn)品為L-型。缺點：L-蘋果酸產(chǎn)生菌菌常常在產(chǎn)生生L-蘋果酸同時，，也產(chǎn)生許許多雜酸，如如檸檬酸、富富馬酸、琥珀珀酸等，仍需需進一步選育育優(yōu)良的蘋果果酸產(chǎn)生菌。。4.混合發(fā)酵法采用兩種不同同功能的微生生物,其中之一先將將糖質(zhì)或其他他原料轉(zhuǎn)化生生成富馬酸，，另一種微生生物將富馬酸酸轉(zhuǎn)化成L-蘋果酸，兩種種微生物可先先后加入，也也可同時加入入。常用菌先用少少根根霉或華華根霉把糖質(zhì)質(zhì)原料轉(zhuǎn)化成成富馬酸，然然后利用膜醭醭畢赤酵母普普通變形桿菌菌及宛氏擬青青霉之一，把把富馬酸轉(zhuǎn)化化成蘋果酸酸的研究。混合培養(yǎng)發(fā)酵酵蘋果酸進程程FU：富馬酸LMA：L-蘋果酸RG：殘?zhí)莾?yōu)勢：L-蘋果酸的轉(zhuǎn)化化率高缺點：培養(yǎng)條件要求求比較嚴格發(fā)酵周期較長長產(chǎn)酸率相對較較低副產(chǎn)物較多5.固定化酶或細細胞轉(zhuǎn)化法利用具有高活活性富馬酸酶酶的微生物細細胞或富馬酸酸酶，采用固固定化酶或細細胞反應器，，將富馬酸轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化成L-蘋果酸微生物：短桿桿菌、產(chǎn)氨短短桿菌、黃氣氣短桿菌、解解脂假絲酵酵母及溫特曲曲霉等載體：藻酸鈣鈣凝膠、角叉叉菜膠及聚丙丙烯酰胺凝膠膠等生產(chǎn)過程一是固定化細細胞的制備：：將產(chǎn)酶菌株株培養(yǎng)成熟后后，收集菌體體細胞，包埋埋菌體，制備備固定化酶或或細胞。二是L-蘋果酸制備：：先將富馬酸酸和CaCO3反應轉(zhuǎn)化成為為富馬酸鈣，，再經(jīng)轉(zhuǎn)化柱柱作用生成蘋蘋果酸鈣,經(jīng)提取得L-蘋果酸。局限性固定化酶的轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化率低、半半衰期短國產(chǎn)富馬酸質(zhì)質(zhì)量不穩(wěn)定，，生產(chǎn)成本相相對較高L-蘋果酸中殘留留的富馬酸分分離去除有困困難需要考慮細胞胞透性以化工產(chǎn)品富富馬酸為原料料，人們食用用存有疑慮，，使得絕大大多數(shù)廠子處處于關(guān)停狀態(tài)態(tài)6.蘋果酸的測定定與分離蘋果酸定性：：紙層析法；；或者，在試試管中加入約約5ml待測試溶液，，加入3滴15%三氯化鈦溶液液，幾分鐘內(nèi)內(nèi)出現(xiàn)白色沉沉淀，表明有有L-蘋果酸的存在在。蘋果酸定量：：紫外分光光光度法（α-2,7-萘二酚法）；；富馬酸測定：：高錳酸鉀滴滴定法；總酸的測定：：酸堿滴定定法。產(chǎn)品分離鈣鹽沉淀法溶劑萃取法離子交換樹脂脂法兩性離子交換換樹脂法堿性離子交換換樹脂法鈣鹽沉淀法缺缺點酸化時消耗大大量硫酸，產(chǎn)產(chǎn)生大量難以以處理的CaSO4廢渣和廢糖水水;發(fā)酵過程中常常有其它有機機酸產(chǎn)生，也也能形成鈣鹽鹽沉淀，所以以鈣鹽沉淀本本身不能實現(xiàn)現(xiàn)蘋果酸的分分離，而須借借助于離子交交換進行精制制;此工藝提取收收率低，一般般只有70%左右。溶劑萃取法將發(fā)酵液中的的有機酸用萃萃取劑三烷基基氧化膦(TRPO)將其全部萃入入有機相。在反萃過程中中，利用反萃萃分配比之間間的差異，使使蘋果酸與雜雜酸相分離。。溶劑萃取法缺缺點萃取劑在食品品級蘋果酸生生產(chǎn)產(chǎn)品中的的殘留毒害;蘋果酸萃取過過程的乳化及及污染;連續(xù)化生產(chǎn)時時萃取劑難以以循環(huán)使用。。離子交換樹脂脂法室溫下將發(fā)酵酵液通過裝填填有離子交換換樹脂的色譜譜柱，使其中中的蘋果酸被被吸附，發(fā)酵酵廢水回發(fā)酵酵罐循環(huán)發(fā)酵酵，然后用熱熱水洗脫吸附附于樹脂上的的蘋果酸，如如此反復使用用。優(yōu)勢:生產(chǎn)收率提高高，生產(chǎn)成本本降低，幾乎乎可完全消除除生產(chǎn)中的三三廢。三.國內(nèi)外研究進進展目前，世界上上只有美國和和日本采用生生物技術(shù)生產(chǎn)產(chǎn)該產(chǎn)品。日日本自二十世世紀70年代開始小批批量生產(chǎn)，發(fā)發(fā)展不快，產(chǎn)產(chǎn)量至今不大大，但日本扶扶桑公司開發(fā)發(fā)的蘋果酸制制劑已應用于于海帶養(yǎng)殖業(yè)業(yè)。目前國內(nèi)外正正在積極研究究及已經(jīng)中試試或批量生產(chǎn)產(chǎn)的方法主要要是轉(zhuǎn)化法和和一步發(fā)酵法法，又以一步步發(fā)酵法生產(chǎn)產(chǎn)蘋果酸的工工藝最經(jīng)濟、、最有發(fā)展前前途。全球整體來說說，L-蘋果酸還沒有有大規(guī)模生產(chǎn)產(chǎn)，但隨著市市場需求日益益增加，發(fā)展展?jié)摿薮?。。L-肉堿一、產(chǎn)品介紹紹1.性質(zhì)L-肉堿又稱肉毒毒堿、左旋肉肉堿、維生素素BT，化學名為L-β-羥基-γ-三甲銨銨丁酸酸。分分L-，D-型兩種種光學學旋光光體，，只有有L-型有生生理活活性。。分子式式為C7H15NO3，相對對分子子質(zhì)量量161.20，結(jié)構(gòu)構(gòu)式如如下：：呈白色色吸水水性結(jié)結(jié)晶，，易溶溶于水水和乙乙醇，，穩(wěn)定定性較較好。。2.生理功功能脂肪酸酸代謝謝中脂脂?；鶊F在在線粒粒體內(nèi)內(nèi)膜上上的載載體。。緩沖線線粒體體酰基基CoA和CoA的比率率。捕捉酰?；鶊F，，排除除有毒毒的多多余酰?；?。。參與膜膜修復復過程程中膜膜磷脂脂的去去酰化化-重?；?，利利于膜膜的穩(wěn)穩(wěn)定。?？辜毎蛲鐾龅取?。在動物物體內(nèi)內(nèi)肝、、腎、、腦的的合成成路徑徑如下下：人體必必需從從膳食食中獲獲取一一定量量L-肉堿才才能最最佳健健康狀狀態(tài)，，其中中動物物性食食品中中含量量最豐豐富。。蔬菜菜、谷谷類水水果中中基本本不含含或含含極少少量。。3.應用食品添添加劑劑（奶粉、、運動動飲料料、減減肥、、抗衰衰老）飼料添添加劑劑（促進素素食類類、食食草類類動物物生長長）治療用用藥物物（助消化化、降降血脂脂、治治療血血管疾疾病、、急性性氨中中毒、、昏迷迷、神神經(jīng)系系統(tǒng)疾疾?。┒?生產(chǎn)工工藝1.化學合合成法法上世紀紀60年代已已經(jīng)工工業(yè)化化生產(chǎn)產(chǎn)，但但缺點點較多多，如如產(chǎn)物物是D-,L-型的混混合物物（消消旋肉肉堿）），拆拆分操操作復復雜，，產(chǎn)品品得率率低，，生產(chǎn)產(chǎn)成本本高。。近年來來，以以蘋果果酸為為原料料探索索出一一條無無需拆拆分無無毒的的合成成L-肉堿的的路徑徑。化學合合成法法新工工藝2.提取法法1905年，就就開始始從動動物浸浸膏中中提取取，但但成本本較高高，提提取工工藝復復雜，，收率率低。。1952年，Carter等用450克牛肉肉浸膏膏提取取得到到0.6克純品品肉堿堿。因此不不具備備工業(yè)業(yè)化生生產(chǎn)的的優(yōu)越越性，，已很很少使使用。。3.微生物物發(fā)酵酵法原理:微生物物普遍遍具有有產(chǎn)肉肉堿的的能力力，通通過篩篩選選高產(chǎn)產(chǎn)菌株株利用用微生生物發(fā)發(fā)酵L-肉堿堿，，從從發(fā)發(fā)酵酵液液或或菌菌體體中中直直接接提提取取。。微生生物物：：放放線線菌菌、、酵酵母母、、曲曲霉霉、、青青霉霉、、根根霉霉、、醋醋酸酸桿桿菌菌、、芽芽孢孢桿桿菌菌、、大大腸腸桿桿菌菌、、變變形形桿桿菌菌、、假假單單胞胞桿桿菌菌、、毛毛霉霉主要要原原料料：：葡葡萄萄糖糖、、可可溶溶性性淀淀粉粉（（大大豆豆粉粉））、、無無機機鹽鹽等等生產(chǎn)產(chǎn)工工藝藝的的關(guān)關(guān)鍵鍵在在于于如如何何篩篩選選穩(wěn)穩(wěn)定定的的L-肉堿堿高高產(chǎn)產(chǎn)菌菌株株和和提提取取工工藝藝。。腸桿桿菌菌霉菌菌酵母母菌菌4.酶法法轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化A.DL-肉堿堿衍衍生生物物的的酶酶法法拆拆分分DL-肉堿堿微生生物物（（產(chǎn)產(chǎn)酯酯酶酶、、酰酰胺胺酶酶或或腈腈水水解解酶酶））高產(chǎn)產(chǎn)菌菌株株酰胺胺、、乙乙酰酰肉肉堿堿、、腈腈L-肉堿堿篩選選催化化乙酰?；x擇擇性性水水解解Charles篩選選到到一一株株在在含含DL-肉堿堿20g/L(D:L=1:1)的培培養(yǎng)養(yǎng)基基中中于于25℃℃培養(yǎng)養(yǎng)44h，D-肉堿堿全全部部消消失失，，L-肉堿堿剩剩下下38%的菌菌株株。。在在含含DL-肉堿堿50g/L(D:L=2:8)的培培養(yǎng)養(yǎng)基基中中于于25℃℃培養(yǎng)養(yǎng)69h，D-肉堿堿全全部部消消失失，，L-肉堿堿剩剩下下75%。由于于合合成成DL-肉堿堿的的過過程程復復雜雜，，而而DL-肉堿堿衍衍生生物物容容易易通通過過環(huán)環(huán)氯氯丙丙烷烷制制得得，，所所以以工工業(yè)業(yè)上上主主要要是是DL-肉堿堿衍衍生生物物的的酶酶法法拆拆分分來來生生產(chǎn)產(chǎn)L-肉堿堿。。Joers用DL-肉堿堿酞酞胺胺作作為為碳碳源源和和氮氮源源篩篩選選出出含含有有肉肉堿堿酞酞胺胺酶酶的的菌菌株株，，該該酶酶能能水水解解肉肉堿堿酞酞胺胺得得到到L-肉堿堿，，產(chǎn)產(chǎn)物物純純度度達達97%。Kula用旋旋光光性性的的肉肉堿堿篩篩選選到到1株專專一一性性水水解解L-肉堿堿酞酞胺胺的的酶酶，，制制得得光光學學純純度度為為99%的L-肉堿堿。。B.巴豆豆甜甜菜菜堿堿的的酶酶法法轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化原理理：：利用用微微生生物物含含有有水水解解巴巴豆豆甜甜菜菜堿堿為為左左旋旋肉肉堿堿的的酶酶來來制制備備L-肉堿堿。。酶活活力力較較高高微微生生物物：：變形形桿桿菌菌、、大大腸腸桿桿菌菌、、假假單單胞胞菌菌等等研究究進進展展范立立強強等等用用大大腸腸桿桿菌菌以以厭厭氧氧pH7.6，40℃℃左右右為為細細胞胞生生長長和和游游離離酶酶轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化巴巴豆豆甜甜菜菜堿堿的的有有利利條條件件，，轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化率率達達80%。Glulinao等用用固固定定化化變變形形桿桿菌菌細細胞胞連連續(xù)續(xù)轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化巴巴豆豆甜甜菜菜堿堿為為L-肉堿堿，，巴巴豆豆甜甜菜菜堿堿作作為為底底物物誘誘導導產(chǎn)產(chǎn)生生肉肉堿堿脫脫酶酶，，轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化底底物物的的產(chǎn)產(chǎn)率率達達0.72g/L。我國國這這方方面面研研究究進進展展迅迅速速，，孫孫志志浩浩等等已已經(jīng)經(jīng)采采用用合合成成、、拆拆分分、、微微生生物物酶酶轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化相相結(jié)結(jié)合合的的方方法法，，生生產(chǎn)產(chǎn)水水平平達達15g/L，處處于于國國際際先先進進地地位位。。優(yōu)點點：：底物物便便宜宜；；可利利用用拆拆分分廢廢物物D-肉堿進行行脫水制制備。缺點：產(chǎn)品底物物難以回回收，影影響成本本和產(chǎn)品品質(zhì)量。。C.γ-丁基甜菜菜堿的酶酶法羥化化微生物羥化酶γ-丁基甜菜菜堿L-肉堿原理典型工藝藝流程1991年，已有有報道，，γ-丁基甜菜菜堿法轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化率達達95%以上，目目前已經(jīng)經(jīng)實現(xiàn)連連續(xù)化工工業(yè)生產(chǎn)產(chǎn)。三.檢測方法法1.化學法原理利用溴酚酚藍與L-肉堿反應應會生成成有色物物質(zhì)，對對反應產(chǎn)產(chǎn)物進行行比色以以測定L-肉堿和含含量。缺點特異性差差，樣品品中含有有其他季季胺基團團的物質(zhì)質(zhì)也會顯顯色劑發(fā)發(fā)生顯色色反應，，影響測測定結(jié)果果的準確確性。2.酶法乙酰輔酶酶A與L-肉堿在L-肉堿乙酰酰轉(zhuǎn)移酶酶（CAT）下反應應生成乙乙酰L-肉堿和輔輔酶A。輔酶A與DTNB反應呈黃黃色，用用比色法法間接測測定L-肉堿的含含量。酶法測定定評價優(yōu)點靈敏度高高重復性好好回收率較較好CAT作用專一一，排除除了D-肉堿的干干擾缺點DTNB會很緩慢慢的抑制制CAT的活性3.色譜法主要是HPLC和GC，前者運運用較多多。運用用紫外檢檢測器檢檢測將其其與類似似物分開開進行定定量。此此法特異異性高，，但靈敏敏度低。。4.光譜法質(zhì)譜技術(shù)術(shù)放射酶學學對乙酰輔輔酶A進行14C標記，反反應后分分離檢測測，靈敏敏度達到到皮摩爾爾水平。。肌苷酸一、產(chǎn)品品介紹1、結(jié)構(gòu)與與性質(zhì)肌苷酸又又名次黃嘌呤呤核苷酸酸或次黃苷酸酸，英文簡簡稱IMP，分子式式為C10H13N408P。白色細結(jié)結(jié)晶，味味鮮，無無臭。不吸濕，，易溶于于水，在在乙醇或或者其他他有機溶溶劑中溶溶解度極極小。結(jié)晶狀態(tài)態(tài)的IMP穩(wěn)定性較較好。在水溶液液和堿溶溶液中也也穩(wěn)定，，但在酸酸性(pH小于4)溶液中穩(wěn)穩(wěn)定性較較差。2、生物物體內(nèi)內(nèi)合成成途徑徑原料：：天冬氨氨酸甘氨酸酸CO2谷氨酰酰胺一碳單單位5-磷酸核核糖3、應用用：主主要用用作各各種調(diào)調(diào)味食食品的的助鮮鮮劑。。二、生生產(chǎn)方方法1、一步步發(fā)酵酵法（（直接接發(fā)酵酵法））原理：：挑選選以腺腺嘌呤呤缺陷陷型為為主要要遺傳傳標記記的變變異菌菌株，，配以以最佳佳發(fā)酵酵條件件，在在培養(yǎng)養(yǎng)液中中直接接積累累肌苷苷酸。。常用菌菌：產(chǎn)產(chǎn)氨短短桿菌菌、谷谷氨酸酸棒桿桿菌、、短小小芽孢孢桿菌菌2、兩步步發(fā)酵酵法（（分段段合成成法））在發(fā)酵酵過程程中添添加次次黃嘌嘌呤，，由微微生物物產(chǎn)生生的胞胞外酶酶催化化生成成肌苷苷酸。。斜面培培養(yǎng)種子培培養(yǎng)發(fā)酵培培養(yǎng)次黃嘌嘌呤肌苷酸酸催化三、提提取工工藝1、樹脂脂提取取法發(fā)酵液液清液酸化液液流出液液用NaOH調(diào)pH9.5洗脫液液濃縮液液肌苷酸酸粗結(jié)結(jié)晶肌苷酸酸精品品放冷庫庫結(jié)晶晶壓濾除除菌體體Hcl調(diào)pH1.5陽離子子樹脂脂陰離子子樹脂脂、水水洗、、Hcl加Nacl洗脫減壓濃濃縮加兩倍倍乙醇醇水溶解解加乙醇醇過濾烘烘干2、活性性炭提提取法法發(fā)酵液液pH2.5酸化液液過濾壓壓濾液液加熱緩慢加加鹽酸酸加1.5%活性白白土流經(jīng)酚酚醛氫氫型樹樹脂脫色液液加粉末末活性性碳3%80-90℃熱水洗洗0.1mol/lNaOH洗脫洗脫液液Hcl調(diào)pH7-8中性肌肌苷酸酸溶液液減壓濃濃縮含肌苷苷酸8%左右過濾濾液酸化酚醛樹樹脂脫脫色脫色液液堿液中中和pH7.0肌苷酸酸溶液液加1-2倍體積積乙醇醇肌苷酸酸粗結(jié)結(jié)晶水溶解解加乙醇醇放冷庫庫結(jié)晶晶過濾烘烘干精產(chǎn)品品四、檢檢測方方法薄層層層析高壓電電泳+紫外分分光光光度法法高相液液相色色譜法法高壓電電泳+紫外分分光光光度法法原理針對物物質(zhì)在在一定定的pH溶液中中電離離程度度的不不同，，因所所帶的的電荷荷不同同，在在高壓壓電場場作用用下，，各種種物質(zhì)質(zhì)移動動的速速率不不同，，因而而體現(xiàn)現(xiàn)在濾濾紙不不同區(qū)區(qū)域而而加以以分離離。肌苷酸酸含有有五元元的雜雜環(huán)，，在波波長250-260nm處有最最大的的吸收收峰。。高相液液相色色譜法法是目前前較常常用的的檢測測肌苷苷酸的的方法法。缺點相對標標準偏偏差和和回收收率差差異較較大操作嚴嚴格花費較較多耗時多多，復復雜五、研研究前前景1、遺傳傳育種種方面面當前國國內(nèi)對對肌肉肉中肌肌苷酸酸的研研究報報道，，較多多的是是在生生理、、病理理、免免疫、、神經(jīng)經(jīng)領域域。研究肌肌苷酸酸的沉沉積規(guī)規(guī)律，，并從從遺傳傳育種種和飼飼養(yǎng)管管理方方面改改善肌肌苷酸酸的沉沉積，，從而而改善善肉的的品質(zhì)質(zhì)，這這是動動物學學家們們的努努力方方向。。2、食品品加工工方面面對于加加工方方面影影響肌肌苷酸酸含量量的因因素的的研究究，國國內(nèi)還還未從從正規(guī)規(guī)刊物物上見見報道道。對于加加工方方法、、包裝裝方法法以及及貯藏藏方法法和食食品中中其他他物質(zhì)質(zhì)的存存在對對肌苷苷酸含含量的的影響響，這這需要要食品品科研研工作作者進進一步步深入入研究究，以以揭示示其規(guī)規(guī)律，，改善善食品品的風風味。。3、評價價新鮮鮮度方方面用肌苷苷酸來來評價價肉的的新鮮鮮度，，是肌肌苷酸酸研究究的一一個方方向。。這一方方面的的研究究國外外比較較深入入，現(xiàn)現(xiàn)在國國內(nèi)此此方面面的報報道很很少。。李燕等等曾用用肌苷苷酸和和肌苷苷來評評價蝦蝦的新新鮮程程度。。王勝利利等探探索了了腺苷苷酸含含量與與硫化化氫和和細菌菌總量量的關(guān)關(guān)系。。報告結(jié)結(jié)束，，謝謝謝！9、靜夜四無鄰鄰，荒居舊業(yè)業(yè)貧。。12月-2212月-22Thursday,December29,202210、雨雨中中黃黃葉葉樹樹，，燈燈下下白白頭頭人人。。。。18:32:5818:32:5818:3212/29/20226:32:58PM11、以我我獨沈沈久，，愧君君相見見頻。。。12月月-2218:32:5918:32Dec-2229-Dec-2212、故人江江海別，，幾度隔隔山川。。。18:32:5918:32:5918:32Thursday,December29,202213、乍見翻疑疑夢，相悲悲各問年。。。12月-2212月-2218:32:5918:32:59December29,202214、他他鄉(xiāng)鄉(xiāng)生生白白發(fā)發(fā)，，舊舊國國見見青青山山。。。。29十十二二月月20226:32:59下下午午18:32:5912月月-2215、比比不不了了得得就就不不比比，，得得不不到到的的就就不不要要。。。。。十二二月月226:32下下午午12月月-2218:32December29,202216、行動出成成果，工作作出財富。。。2022/12/2918:32:5918:32:5929December202217、做前，能能夠環(huán)視四四周；做時時，你只能能或者最好好沿著以腳腳為起點的的射線向前前。。6:32:59下下午6:32下下午18:32:5912月-229、沒有有失敗敗，只只有暫暫時停停止成成功??！。12月月-2212月月-22Thursday,December29,202210、很多事情情努力了未未必有結(jié)果果，但是不不努力卻什什么改變也也沒有。。。18:32:5918:32:5918:3212/29/20226:32:59PM11、成功功就是是日復復一日日那一一點點點小小小努力力的積積累。。。12月月-2218:32:5918:32Dec-2229-Dec-2212、世間成事事，不求其