藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法驗證培訓(xùn)課件

第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證一、目的證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求。二、用途（一）藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草時，分析方法需經(jīng)驗證。（二）藥物生產(chǎn)方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時，分析方法需經(jīng)驗證。三、需驗證的分析項目

1.鑒別試驗；

2.雜質(zhì)定量或限度檢查；

3.原料或制劑中有效成分含量測定；

4.制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測定；

5.溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法。

四、驗證內(nèi)容

驗證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性

（一）準(zhǔn)確度（accuracy）準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。

測定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗法”和“加樣回收試驗法”。

回收試驗空白+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M

加樣回收試驗已準(zhǔn)確測定藥物含量P的真實樣品+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M

數(shù)據(jù)要求規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備高、中、低三個不同濃度樣品各測三次。1.含量測定方法的準(zhǔn)確度

原料藥可用已知純度的對照品或樣品進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。

制劑可用含己知量被測物的各組分混合物進(jìn)行測定，即采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定，或與另一個已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果。中藥藥分分析析的的準(zhǔn)準(zhǔn)確確度度一一般般用用加加樣樣回回收收試試驗驗衡衡量量。。中中藥藥回回收收率率一一般般要要求求在在95～～105%范范圍圍內(nèi)內(nèi)，，有有些些方方法法操操作作步步驟驟繁繁多多時時，，可可要要求求在在90～～110%范范圍圍內(nèi)內(nèi)。。RSD一一般般在在2%以以內(nèi)內(nèi)。。2．雜質(zhì)質(zhì)定量測測定的準(zhǔn)準(zhǔn)確度可向原料料藥或制制劑中加加入已知知量雜質(zhì)質(zhì)進(jìn)行測測定。如如果不能能得到雜雜質(zhì)或降降解產(chǎn)物物，可用用本法測測定結(jié)果果與另一一成熟的的方法進(jìn)進(jìn)行比較較。（二）精精密度（（precision）精精密密度是指指在規(guī)定定條件下下，同一一個均勻勻樣品，，經(jīng)多次次取樣測測定所得得結(jié)果之之間的接接近程度度。用偏偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)偏差(SD)、相對對標(biāo)準(zhǔn)偏偏差(RSD)（變異異系數(shù)，，CV）表示。。偏差（d）：測量量值與平平均值之之差相對偏差差＝允允許差：：容量分分析（中中和法、、非水滴滴定法、、銀量法法、絡(luò)合合滴定法法、重氮氮化法、、氧化還還原法））≤0.3%；；重量法法≤0.5%；氧瓶瓶燃燒法法≤0.5%；儀器器分析≤≤3%、凱氏氏定氮法法≤1%標(biāo)準(zhǔn)（偏偏）差（（SD或或S）相對標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)（偏））差（RSD）），也稱稱變異系系數(shù)（CV）1.重重復(fù)性(repeatability):在相同同條件下下，由同同一個分分析人員員測定所所得結(jié)果果的精密密度；在在規(guī)定的的范圍內(nèi)內(nèi)，至少少用9次次測定結(jié)結(jié)果評價價，如制制備三個個不同濃濃度樣品品各測三三次或把把被測物物濃度當(dāng)當(dāng)作100%，，至少測測6次進(jìn)進(jìn)行評價價。2.中中間精密密度同同一實實驗室，，不同時時間由不不同分析析人員用用不同設(shè)設(shè)備所得得結(jié)果的的精密度度。3.重重現(xiàn)性(reproducibility)不同同實驗室室，不同同分析人人員測定定結(jié)果的的精密度度。數(shù)據(jù)要求求：需報報告RD，RSD和可可信限。。（三）檢檢測限（limitofdetection，LOD））檢測限系系指試樣樣在確定定的實驗驗條件下下，被測測物能被被檢測出出的最低低濃度或或含量。。是限度檢檢驗效能能指標(biāo)，，無需定定量測定定，只要要指出高高于或低低于該規(guī)規(guī)定濃度度即可。。1．非儀儀器分析析目視法法用已知濃濃度的被被測物，，試驗出出能被可可靠地檢檢測出的的最低濃濃度或量量。2．信噪噪比法用于能顯顯示基線線噪音的的分析方方法（儀儀器分析析方法）），是把把已知低低濃度試試樣測出出的信號號與空白白樣品測測出的信信號進(jìn)行行比較，，算出能能被可靠靠地檢測測出的最最低濃度度或量。。一般以以信噪比比（S/N）3∶1或或2∶1時的相相應(yīng)濃度度或注入入儀器的的量確定定檢測限限。（1）空空白值＝＝0時；；①測定定背景10次以以上，求求出標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)差σb。②將σσb乘以三倍倍；③在在工作曲曲線上求求出3σσb相對應(yīng)的的濃度Xb；即為方方法的檢檢出值；；

（2）空白白值不等等于0；；①測定定背景10次以以上，求求出標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)差σb；②將σσb乘以三倍倍；③在在工作曲曲線上求求出3σσb相對應(yīng)的的濃度Xb；④將求求得的對對應(yīng)濃度度值加上上空白值值即得該該方法的的檢出限限。（四）定定量限（（1imitofquantitation，LOQ）指樣品中中被測物物能被定定量測定定的最低低量，結(jié)結(jié)果應(yīng)具具有一定定準(zhǔn)確度度和精密密度要求求。常用信噪噪比法確確定定量量限，一一般以信信噪比（（S/N）為10∶1時相應(yīng)應(yīng)的濃度度或注入入儀器的的量進(jìn)行行確定，，也可按按1984年國國際純粹粹和應(yīng)用用化學(xué)聯(lián)聯(lián)合會(IVPAC)規(guī)定：：用儀器器所測空空白背景景響應(yīng)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)差（（SD））的10倍為估估計值，，再經(jīng)試試驗確定定方法的的實際測測定下限限。儀器分析析：通過過測定一一組空的的樣品的的背景信信號后計計算標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)差S。。以1OS來估估算定量量限度。。（以定定量限度度制備的的樣品來來驗證））非非儀儀器分析析：通過過分析己己知被測測物濃度度的樣品品并確定定一個樣樣品中被被測物可可被準(zhǔn)確確和精密密測定出出的最低低濃度（（量）。。（五）專屬性性（specificity）（（選擇性））：指有其他成分分（雜質(zhì)、降降解物、輔料料等）可能存存在情況下采采用的方法能能準(zhǔn)確測定出出被測物的特特性，能反映映該方法在有有共存物時對對供試物準(zhǔn)確確而專屬的測測定能力，是是指該法用于于復(fù)雜樣品分分析時是否受受到相互干擾擾程度的度量量。通常通過分析析含有加了雜雜質(zhì)、降解產(chǎn)產(chǎn)物、有關(guān)化化學(xué)物質(zhì)或安安慰劑成分的的樣品，將所所獲分析結(jié)果果與未加前述述成分之樣品品的測試結(jié)果果進(jìn)行比較，，兩組測試結(jié)結(jié)果之差即專專屬性。1．鑒別反應(yīng)應(yīng)應(yīng)能與與可能共存的的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)構(gòu)相似化合物物區(qū)別，不含含被分析的樣樣品，以及結(jié)結(jié)構(gòu)相似或組組分中的有關(guān)關(guān)化合物，均均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)應(yīng)。

2．含含量測定和雜雜質(zhì)測定色色譜法和其其他方法，應(yīng)應(yīng)附代表性圖圖譜，亦說明明專屬性。圖圖中應(yīng)標(biāo)明各各組份的位置置，色譜法中中的分離度應(yīng)應(yīng)符合要求。。（六）線性性（Linearity）在設(shè)計的范圍圍內(nèi)，測試結(jié)結(jié)果與試樣中中被測物濃度度直接呈正比比關(guān)系的程度度。線形通常用最最小二乘法處處理數(shù)據(jù)求得得回歸曲線的的斜率（Slope）來來表示。數(shù)據(jù)據(jù)要求：至少少需要五個濃濃度考察線形形，需提供相相關(guān)系數(shù)、y截距（是檢檢定的可能偏偏差）、回歸歸斜率及方差差等參數(shù)，應(yīng)應(yīng)列出回歸方方程數(shù)和線性性圖。（七）范圍（（Range）：指達(dá)到一定精精密度、準(zhǔn)確確度和線性的的條件下，測測試方法適用用的高、低限限濃度或量的的區(qū)間。范圍的確定可可因測定項目目不同而有不不同要求：含量測定范圍圍為80%-120%；；含量均勻度度范圍為70%-130%；雜質(zhì)測測定應(yīng)為被測測雜質(zhì)限度的的50%-120%；溶溶出度應(yīng)為測測定范圍的±±20%。（八）耐用用性指測測定條件稍有有變動時，結(jié)結(jié)果不受影響響的承受程度度，為常規(guī)檢檢驗提供依據(jù)據(jù)。是衡量實實驗室和工作作人員之間在在正常情況下下實驗結(jié)果重重現(xiàn)性的尺度度。分析方法重現(xiàn)現(xiàn)性的測定是是通過在不同同的實驗室內(nèi)內(nèi)不同的實驗驗者對同一樣樣品的分別測測試而獲得的的。（獲得的的這種再與正正常檢定下的的精密度進(jìn)行行比較，從而而確定該法的的耐用性，或或稱粗放度））（九）應(yīng)用1.鑒別試試驗除專屬性性、耐用性外外，其它都不不要求。2.雜質(zhì)的的限量檢查除除專屬性、檢檢測限、耐用用性外，其它它都不要求。。雜質(zhì)的含量測測定除檢測限限外，其它都都要求。3.含量測定及溶溶出量測定除除檢測限、定定量限外，其其它都要求。。（十）各種含含量測定方法法對效能指標(biāo)標(biāo)的要求1.容量分分析法：用原原料藥精制品品(含量>99.5％)或?qū)φ掌房伎疾旆椒ǖ木芏?，相對對?biāo)準(zhǔn)差一般般應(yīng)不大于0.2％；進(jìn)行回收率率試驗?；厥章室话阍谠?9.7～～100.3％之間。2.UV法法：用適當(dāng)濃濃度的精制品品進(jìn)行測定，，其RSD一一般不大于1％。制劑的測定定，回收率一一般應(yīng)在98％～102％之間。線性：吸光度度A一般在0.2～0.7，濃度點(diǎn)點(diǎn)n＝5。用用濃度c對A作線性回歸歸處理，得一一直線方程，，r應(yīng)達(dá)到0.9999(n＝5)，方程的截截距應(yīng)近于零零。3.HPLC法：要求求RSD<2％％，回收率98％～102％之間。線性范圍：用用精制品配制制一系列標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)溶液，濃度度點(diǎn)n應(yīng)為5～7，用濃濃度c對峰高高h(yuǎn)或被測物物的響應(yīng)值之之比進(jìn)行回歸歸處理，建立立回歸方程，，r應(yīng)大于0.999，，截距應(yīng)趨于于零。99：73.精密密度是指（（B）A.測得得的測量值值與真值接接近的程度度B.測得得的一組測測量值彼此此符合的程程度C.表示示該法測量量的正確性性D.在各各種正常試試驗條件下下，對同一一樣品分析析所得結(jié)果果的準(zhǔn)確程程度E.對供供試物準(zhǔn)確確而專屬的的測定能力力99x：76．精密密度是指該該法（D））A.測得得的測量值值與真值接接近的程度度B.測得得的測量值值與回收率率接近的程程度C.測量量的正確性性D.測得得的一組測測量值彼此此符合的程程度E.對供供試物準(zhǔn)確確而專屬的的測定能力力96：138．在藥藥物分析中中，精密度度是表示該該法的（BD）A.測量量值與真值值接近程度度B.一組組測量值彼彼此符合程程度C.正確確性D.重現(xiàn)現(xiàn)性E.專屬屬性95：[106—110]應(yīng)應(yīng)要求的效效能指標(biāo)：：A.檢測測限B.定定量限C.兩者者均要求D.兩兩者均不要要求95：106.含含量測定方方法評估（（D）95：107.雜雜質(zhì)限量檢檢查（A））95：108.雜雜質(zhì)定量測測定（B））95：109.溶溶出度測定定（D）95：110.中中間體含量量測定（D）97：126．藥物物雜質(zhì)檢查查所要求的的效能指標(biāo)標(biāo)為（CDE）A.準(zhǔn)確確度B.精密密度C．選擇性性D.檢測測限E.耐用用性98：138．評價價藥物分析析所用的測測定方法的的效能指標(biāo)標(biāo)有（BCD）A.含量量均勻度B.精密密度C.準(zhǔn)確確度D.粗放放度E.溶出出度例[1～5]A．精密度度B．定定量限C．兩者皆皆是D．兩者者皆不是1.某法法測得一組組測量值間間彼此符合合程度（A）2.測量量值和真值值接近的程程度（D））3.測定定結(jié)果的重重現(xiàn)性（A）4.可定定量測得被被測藥物的的最低水平平參數(shù)（B）5.藥物物分析方法法的效能指指標(biāo)（C））例6.相相對標(biāo)準(zhǔn)差差表示（C）A.準(zhǔn)確確度B.回收收率C.精密密度D.純凈凈度E.限度度例7.精精