臨床微生物檢驗標本的采集運送及接種要點

臨床微生物檢驗標本的采集運送及接種要點第一頁，共三十八頁，2022年，8月28日第一節(jié)標本的采集和處理原則第二頁，共三十八頁，2022年，8月28日1.早期采集2.無菌采集3.根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集4.采集適量標本5.安全采集一、標本采集的一般原則第三頁，共三十八頁，2022年，8月28日一些對環(huán)境敏感的細菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血桿菌等應(yīng)保溫并立即送檢厭氧性標本應(yīng)放在專門的運送瓶或試管內(nèi)運送，有時可直接用抽取標本的注射器運送。二、標本的處理第四頁，共三十八頁，2022年，8月28日其他所有的標本采集后最好在2h之內(nèi)送到實驗室。若不能及時送檢，標本應(yīng)置于一定環(huán)境中保存，如支氣管洗液、心包液、痰、尿等標本應(yīng)保存在4℃環(huán)境中，血標本需室溫保存或置35℃-37℃孵箱中,腦脊液等則要在25℃保存?；颊邩吮局锌赡芎写罅恐虏【?，不管標本運送距離遠近，都必須注意安全防護。標本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必須包裝好，防止送檢過程中倒翻或碰破流出。第五頁，共三十八頁，2022年，8月28日第六頁，共三十八頁，2022年，8月28日臨床常見微生物學(xué)檢驗標本通常有血液、腦脊液、尿液、傷口的膿液、胸水、腹水、糞便、痰液及泌尿生殖系統(tǒng)的分泌物等，下面分別介紹各種標本的采集方法及運送。第七頁，共三十八頁，2022年，8月28日第二節(jié)血液第八頁，共三十八頁，2022年，8月28日1.皮膚消毒程序嚴格執(zhí)行以下三步法:(1)70%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30秒以上。

(2)1%～2%碘酊作用60秒或10%碘伏60～90秒，從穿刺點向外畫圈消毒,至消毒區(qū)域直徑達3cm以上。

(3)70%酒精脫碘：對碘過敏的患者，用70%酒精消毒60秒，待酒精揮發(fā)干燥后采血。一、標本采集第九頁，共三十八頁，2022年，8月28日2.采血部位通常采血部位為肘靜脈。疑似細菌性心內(nèi)膜炎時，以肘動脈或股動脈采血為宜。對疑為細菌性骨髓炎或傷寒患者，在病灶或者髂前（后）上棘處嚴格消毒后抽取骨髓1ml作增菌培養(yǎng)。第十頁，共三十八頁，2022年，8月28日3.靜脈穿刺和培養(yǎng)瓶接種程序在穿刺前或穿刺期間，為防止靜脈滑動，可戴乳膠手套固定靜脈，不可接觸穿刺點。(2)用注射器無菌穿刺取血后，勿換針頭直接注入血培養(yǎng)瓶，或嚴格按廠商推薦的方法采血。(3)血標本接種到培養(yǎng)瓶后，輕輕顛倒混勻以防血液凝固。立即送檢，切勿冷藏。4.采血量

自動化儀器要求成人采血量是8～10ml/瓶，兒童1～5ml/瓶。第十一頁，共三十八頁，2022年，8月28日5.血培養(yǎng)次數(shù)和采血時間只要懷疑血液細菌感染，應(yīng)即刻采集。采血培養(yǎng)應(yīng)該盡量在使用抗菌藥物之前進行，在1h內(nèi)采集2～3次做血培養(yǎng)。對間歇性寒戰(zhàn)或發(fā)熱應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來之前0.5～1h采集血液，或于寒戰(zhàn)或發(fā)燒后1h進行。入院前兩周內(nèi)接受抗菌藥物治療的患者，連續(xù)3d，每天采2份。6.標本運送采血后應(yīng)該立即送檢,如不能立即送檢，可室溫保存，切勿冷藏。

第十二頁，共三十八頁，2022年，8月28日第三節(jié)腦脊液第十三頁，共三十八頁，2022年，8月28日以70%的酒精或2%碘酊消毒背部下方，并麻醉之，然后以一特制通管針，輕輕的由第三與第四腰椎間的中線部位穿刺入脊髓蜘蛛膜，采集約3-5ml腦脊液于3支無菌試管中，每支試管至少1-2ml,第一支做細菌培養(yǎng)，整個過程以最嚴格的無菌操作技術(shù)進行。做腦脊液培養(yǎng)時，建議同時做血培養(yǎng)。一、標本采集第十四頁，共三十八頁，2022年，8月28日二、標本運送采集后標本應(yīng)置于無菌密封容器立即送檢或在15min內(nèi)送至實驗室并且保溫（禁止放冰箱，因腦膜炎雙球菌遇冷死亡）。某些細菌具有自溶酶，放置時間過長易自溶死亡，實驗室收到標本后應(yīng)立即接種。第十五頁，共三十八頁，2022年，8月28日第四節(jié)膿液、穿刺液和引流液第十六頁，共三十八頁，2022年，8月28日膿液：用無菌鹽水或70%酒精拭去表面滲出物，盡可能抽吸或?qū)⑹米由钊雮冢o貼傷口前沿取樣（接近肉芽組織的膿液）。穿刺液及引流液：由臨床醫(yī)生無菌采集胸腔、腹腔積液、關(guān)節(jié)液及心包積液等，置無菌試管中送檢。。厭氧菌感染的膿液常有腐臭應(yīng)予注意。特別要注意避免正常菌群所污染以及由采集至接種前盡量避免接觸空氣。一、標本采集第十七頁，共三十八頁，2022年，8月28日第五節(jié)痰液第十八頁，共三十八頁，2022年，8月28日自然咳痰法以晨痰為佳，盡可能在用抗菌藥物之前采集標本。用力咳出呼吸道深部的痰，將痰液直接吐入無菌、清潔、干燥、不滲漏、不吸水的廣口帶蓋的容器中，標本量應(yīng)≥1ml。一、標本采集第十九頁，共三十八頁，2022年，8月28日支氣管鏡采集法、防污染毛刷采集法、環(huán)甲膜穿刺經(jīng)氣管吸引法、經(jīng)胸壁針穿刺吸引法和支氣管肺泡灌洗法均由臨床醫(yī)生按相應(yīng)操作規(guī)程采集，但必須注意采集標本時盡可能避免咽喉部正常菌群的污染。第二十頁，共三十八頁，2022年，8月28日小兒取痰法用彎壓舌板向后壓舌，將拭子伸入咽部，小兒經(jīng)壓舌刺激咳痰時，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。幼兒還可用手指輕叩胸骨柄上方，以誘發(fā)咳痰。

注意：對可疑烈性呼吸道傳染?。ㄈ鏢ARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集檢驗標本時必須注意生物安全防護。第二十一頁，共三十八頁，2022年，8月28日三、標本運送常溫2h內(nèi)送檢實驗室。因時間延長可能引起革蘭氏陰性菌的過度繁殖，嗜血桿菌和肺炎鏈球菌的死亡。注：鱗狀上皮細胞細胞<10個/低倍視野、白細胞>25/低倍視野為合格的痰標本特別是有細菌被白細胞吞噬的現(xiàn)象時更有臨床意義；

第二十二頁，共三十八頁，2022年，8月28日第六節(jié)糞便第二十三頁，共三十八頁，2022年，8月28日用藥前自然排便，采集膿血、黏液部分2～3g。外觀無異常的糞便應(yīng)從糞便的表面不同部位取材。液體便取絮狀物1～2ml,置無菌容器內(nèi)送檢。如排便困難或嬰幼兒患者，可用直腸拭子法采集標本。一、標本采集第二十四頁，共三十八頁，2022年，8月28日糞便標本送檢對住院的腹瀉成人患者，應(yīng)采集住院3日內(nèi)糞便標本送檢，標本采集后應(yīng)盡快送檢，有條件的提倡使用運送培養(yǎng)基。第二十五頁，共三十八頁，2022年，8月28日消化道潰瘍、幽門螺桿菌標本可取胃竇和胃體等部位各一塊胃黏膜活檢標本，置入無菌生理鹽水中立即送檢，或?qū)吮痉庞谶\送培養(yǎng)基，于4℃保存，24h內(nèi)送檢。第二十六頁，共三十八頁，2022年，8月28日第七節(jié)尿液第二十七頁，共三十八頁，2022年，8月28日力爭在使用抗生素之前，注意避免消毒劑污染標本。清潔中段尿：最好留取早晨清潔中段尿標本；囑咐患者睡前少飲水，清晨起床后按尿標本采集消毒程序消毒后，開始排尿，將前段尿排去，留取中段尿。恥骨上膀胱穿刺：使用無菌注射器直接從恥骨上經(jīng)皮膚消毒穿入膀胱吸取尿液。直接導(dǎo)尿：按尿標本采集消毒程序消毒后，用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，獲取尿液。留置導(dǎo)尿管收集尿液：利用留置管采集標本時，應(yīng)先消毒導(dǎo)尿管外部，按無菌操作方法用注射器穿刺導(dǎo)尿管吸取尿液。注意不能從尿液收集袋中采集尿液。一、標本采集第二十八頁，共三十八頁，2022年，8月28日采集容器的要求：潔凈、無菌、加蓋、封閉、防滲漏、廣口、容積應(yīng)>50ml、盒蓋易于開啟，不含防腐劑和抑菌劑。標本采集后應(yīng)及時送檢、及時接種，室溫下保存時間不得超過2小時（夏季保存時間應(yīng)適當縮短或冷藏保存），4℃冷藏保存時間不得超過8小時。但應(yīng)注意淋病奈瑟菌培養(yǎng)時標本不能冷藏保存。第二十九頁，共三十八頁，2022年，8月28日第八節(jié)生殖道標本第三十頁，共三十八頁，2022年，8月28日

一、標本采集

采集前清潔、消毒尿道口及外陰，尿道分泌物可將無菌棉拭子伸入尿道3～4cm捻轉(zhuǎn)拭子采集。陰道分泌物采集時可用無菌棉拭子自陰道深部或陰道穹隆后部，宮頸2～3cm處，轉(zhuǎn)動并停留10～30s取分泌物。淋球菌培養(yǎng)需保溫及時送檢，衣原體、支原體等培養(yǎng)無法及時送檢時應(yīng)4℃保存。第三十一頁，共三十八頁，2022年，8月28日第九節(jié)厭氧培養(yǎng)標本的采集第三十二頁，共三十八頁，2022年，8月28日

最好以針筒直接由病灶處抽取標本，一般情況下應(yīng)從無正常菌群寄居的部位采取標本一、標本采集與運送第三十三頁，共三十八頁，2022年，8月28日不宜做厭氧菌培養(yǎng)①鼻咽拭子；②齒齦拭子；③痰和氣管抽取物；④胃和腸道內(nèi)容物、肛拭；⑤接近皮膚和黏膜的分泌物；⑥褥瘡潰瘍及黏膜層表面；⑦排出的尿或?qū)?；⑧陰道或子宮拭子；⑨前列腺分泌物。第三十四頁，共三十八頁，2022年，8月28日經(jīng)皮膚黏膜組織采集標本時，皮膚表面需要2%碘酒消毒，以防正常菌群的污染。采取標本時應(yīng)盡量避免接觸空氣，多使用針筒抽取，減少標本與空氣接觸的機會。第三十五頁，共三十八頁，2022年，8月28日平板接種（分區(qū)劃線法）斜面接種法穿刺培養(yǎng)法液體培養(yǎng)基接種法細菌接種技術(shù)第三十六頁，共三十八頁，2022年，8月28日用于標本的分離培養(yǎng)，通常采用四區(qū)劃線法(尿液、留置管除外)1、操作者坐在微型加熱器前，右手持接種環(huán)將圈環(huán)至少燒紅兩次，再接觸標本或菌種。2、左手正持平板（蓋上底下），輕輕將平板蓋打開少許，將接種環(huán)涂于平板的1/4區(qū)域，將接種環(huán)燒紅，待冷卻后接觸第一區(qū)邊緣4-5次，再涂劃平板的另外1/4區(qū)域（第二劃線區(qū)），以同樣的方式進行第三區(qū)及第四區(qū)的涂劃。也可反持平板（底上蓋下）的底部迅速涂劃各區(qū)。3、尿液標本定量加入后，垂直劃線即可。4、導(dǎo)管標本直接放到血平板上用接種環(huán)滾動4次即可。5、涂劃完畢后，平板合蓋，標明標本的編號、標本種類、病人姓名和送檢時間，再倒置(蓋下底上)于CO2培養(yǎng)箱(糞便除外)培養(yǎng)。6、接種完畢后，接種環(huán)必須再通過火焰燒紅一次，作為滅菌。分區(qū)劃線法第三十七頁，共三十八頁，2022年，8月28日

用于鑒定或保存菌種，或觀察細菌