標(biāo)準(zhǔn)解讀

GB 31655-2021食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)《哺乳動物體內(nèi)堿性彗星試驗(yàn)》為評估食品及其成分在哺乳動物體內(nèi)引起的DNA損傷提供了一套標(biāo)準(zhǔn)化方法。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了試驗(yàn)原理、試驗(yàn)材料、試驗(yàn)步驟、結(jié)果判定及數(shù)據(jù)處理等方面的要求，旨在確保測試結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性，進(jìn)而評價食品的安全性。

試驗(yàn)原理：

堿性彗星試驗(yàn)是一種靈敏的生物檢測技術(shù)，用于檢測單個細(xì)胞水平上的DNA斷裂情況。通過將細(xì)胞暴露于電場中，受損的DNA形成彗星狀尾巴，其長度和形狀反映了DNA損傷的程度。本標(biāo)準(zhǔn)采用哺乳動物（如大鼠、小鼠）作為試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，評估食品或食品成分潛在的遺傳毒性。

試驗(yàn)材料：

  • 試驗(yàn)動物：需符合特定的健康與年齡條件。
  • 細(xì)胞樣本：通常取自肝臟、腎臟等靶器官。
  • 試驗(yàn)樣品：待檢測的食品或食品成分需按一定濃度準(zhǔn)備。

試驗(yàn)步驟：

  1. 樣品處理：將試驗(yàn)動物暴露于待測樣品，確定合適的劑量和暴露時間。
  2. 組織采集：收集指定器官的細(xì)胞樣本。
  3. 細(xì)胞鋪片：將細(xì)胞均勻鋪展于載玻片上。
  4. 細(xì)胞裂解與堿性處理：去除蛋白質(zhì)，使DNA暴露。
  5. 電泳：在電場作用下，受損DNA向陽極遷移形成彗星。
  6. 染色與分析：對形成的彗星進(jìn)行染色，通過顯微鏡觀察并拍照記錄。
  7. 圖像分析：利用專業(yè)軟件測量彗星尾部長度等參數(shù)，評估DNA損傷程度。

結(jié)果判定與數(shù)據(jù)處理：

  • 根據(jù)彗星尾部的長度和/或其他形態(tài)學(xué)參數(shù)，量化DNA損傷水平。
  • 設(shè)定陰性對照組和陽性對照組，用以校驗(yàn)試驗(yàn)的有效性和可靠性。
  • 應(yīng)對多組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，判斷樣品是否引起顯著的DNA損傷。

該標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)操作的規(guī)范性和數(shù)據(jù)分析的嚴(yán)謹(jǐn)性，為食品安全評估提供了科學(xué)依據(jù)，有助于監(jiān)管機(jī)構(gòu)、科研單位及生產(chǎn)廠商評估食品的遺傳毒性風(fēng)險，保障公眾健康。


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  • 正在執(zhí)行有效
  • 2021-02-22 頒布
  • 2021-08-22 實(shí)施
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文檔簡介

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB31655—2021

食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)

哺乳動物體內(nèi)堿性彗星試驗(yàn)

2021-02-22發(fā)布2021-08-22實(shí)施

中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布

國家市場監(jiān)督管理總局

GB31655—2021

食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)

哺乳動物體內(nèi)堿性彗星試驗(yàn)

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了哺乳動物體內(nèi)堿性彗星試驗(yàn)的基本試驗(yàn)方法和技術(shù)要求

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于評價受試物對哺乳動物組織細(xì)胞的損傷作用

DNA。

2術(shù)語和定義

21彗星

.

受損片段受到電場作用后產(chǎn)生的拖尾現(xiàn)象在顯微圖像下形似彗星彗星頭是核

DNA,“”。DNA,

彗星尾由在電場中遷移出核的受損片段組成

DNA。

22可評分細(xì)胞

.

有清晰輪廓的彗星頭尾且未受鄰近細(xì)胞干擾的細(xì)胞

、,。

23刺猬狀細(xì)胞

.“”

顯微圖像下由小或模糊不清的頭以及大的彌漫性尾組成的細(xì)胞

。

24尾部DNA百分比

.

彗星尾部含量相對于總含量頭尾之和的比值它反映了損傷的相對程度

DNADNA(、)。DNA,

以百分比表示

。

25關(guān)鍵變量

.

小的改變會對試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響的試驗(yàn)參數(shù)包括取材時間裂解條件電泳時間等關(guān)鍵變

,、、。

量可以是組織特異性的

。

3試驗(yàn)?zāi)康暮驮?/p>

哺乳動物體內(nèi)堿性彗星試驗(yàn)可用于檢測強(qiáng)堿性條件下單鏈和雙鏈的斷裂包括受

(pH≥13)DNA,

試物直接作用引起的鏈斷裂堿性不穩(wěn)定性位點(diǎn)引起的鏈斷裂和切割修復(fù)所引起的

DNA、DNADNA

瞬時鏈斷裂動物通過適當(dāng)?shù)耐緩浇o予受試物在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)解剖分離靶組織制備單細(xì)胞細(xì)

DNA。。,,/

胞核懸浮液嵌入軟瓊脂并固定在載玻片上除去細(xì)胞膜和或核膜后暴露在強(qiáng)堿性條件下使

,/(pH≥13),

解旋并釋放游離的環(huán)和片段核進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳未損傷的保留在瓊脂

DNADNA。DNA。DNA

糖凝膠的原位置形成彗星頭部彗頭由鏈斷裂造成的損傷片段和游離的環(huán)向陽極

(),DNADNA

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