實(shí)驗三細(xì)菌鑒定中的幾種生化試驗

實(shí)驗三細(xì)菌鑒定中的幾種生化試驗第一頁，共二十八頁，2022年，8月28日

用生化的方法來檢測細(xì)菌對各種基質(zhì)的代謝作用及代謝產(chǎn)物，借以鑒別細(xì)菌種類，這種生化試驗稱為細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗；是鑒別細(xì)菌的重要依據(jù)。細(xì)菌的生化試驗

第二頁，共二十八頁，2022年，8月28日

常見的生化反應(yīng)碳水化合物代謝試驗碳源和氮源利用試驗蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗各種酶類試驗糖發(fā)酵試驗甲基紅試驗（MR）V-P試驗檸檬酸鹽利用試驗吲哚試驗硫化氫試驗IMViC試驗硝酸還原酶試驗，淀粉水解試驗第三頁，共二十八頁，2022年，8月28日內(nèi)容一、糖發(fā)酵試驗2、V-P試驗1、吲哚試驗三、淀粉水解試驗二、IMViC試驗3、MR試驗第四頁，共二十八頁，2022年，8月28日說明2、本次實(shí)驗均按傳統(tǒng)的生化試驗方法進(jìn)行檢測現(xiàn)代快速生化檢測1、本次細(xì)菌的生化試驗僅選擇5項代表性試驗第五頁，共二十八頁，2022年，8月28日現(xiàn)代快速生化檢測現(xiàn)代快速生化檢測采用的方式：

簡化試劑配制簡化操作過程底物，指示劑、抑制劑的改良操作、檢測的高度自動化第六頁，共二十八頁，2022年，8月28日4、自動化微生物鑒定系統(tǒng)

現(xiàn)代快速生化檢測1、顯色培養(yǎng)基3、快速檢測試紙2、生化鑒定管第七頁，共二十八頁，2022年，8月28日海博金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基環(huán)凱沙門氏菌顯色培養(yǎng)基顯色培養(yǎng)基第八頁，共二十八頁，2022年，8月28日生化鑒定管檸檬酸鹽生化鑒定管木糖生化鑒定管第九頁，共二十八頁，2022年，8月28日大盒生化鑒定管第十頁，共二十八頁，2022年，8月28日快速檢測試紙第十一頁，共二十八頁，2022年，8月28日

使用生化鑒定試劑盒對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌進(jìn)行細(xì)菌鑒定。全自動微生物鑒定系統(tǒng)VITEK?全自動化微生物鑒定系統(tǒng)第十二頁，共二十八頁，2022年，8月28日1、掌握細(xì)菌生理生化反應(yīng)原理，掌握細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)的測定方法；2.通過不同細(xì)菌對不同含碳、含氮化合物的分解利用情況，了解細(xì)菌代謝類型的多樣性；3、了解細(xì)菌在不同培養(yǎng)基中的不同生長現(xiàn)象及其代謝產(chǎn)物在鑒別細(xì)菌中的意義。[目的要求]第十三頁，共二十八頁，2022年，8月28日一、糖發(fā)酵試驗[實(shí)驗原理]

根據(jù)細(xì)菌分解利用糖能力的差異表現(xiàn)出是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣作為鑒定菌種的依據(jù)。各種糖細(xì)菌有機(jī)酸（乳酸、醋酸、丙酸等）氣體

（氫氣，二氧化碳等）產(chǎn)酸：指示劑（溴甲酚紫），由紫色（pH6.8以上)變?yōu)辄S色（pH5.4以下)產(chǎn)氣

倒置的德漢氏小管第十四頁，共二十八頁，2022年，8月28日二、IMViC試驗

是一組試驗；

IMViC是靛基質(zhì)試驗或稱吲哚試驗（I）、甲基紅試驗（M）、V-P試驗（V）和檸檬酸鹽利用試驗（C）的縮寫，i是為了發(fā)音的需要加上的；常用于革蘭氏陰性的腸道細(xì)菌檢測中，可用于區(qū)分產(chǎn)氣桿菌屬和大腸桿菌屬。第十五頁，共二十八頁，2022年，8月28日

1、吲哚（靛基質(zhì)）試驗

[原理]

色氨酸幾乎存在所有蛋白質(zhì)中，某些細(xì)菌如大腸桿菌等具有色氨酸酶。蛋白胨中的色氨酸色氨酸酶靛基質(zhì)（無色吲哚）

吲哚試劑（對二甲基氨基苯甲醛）

玫瑰吲哚（陽性反應(yīng)）第十六頁，共二十八頁，2022年，8月28日

2、V-P試驗

[原理]葡萄糖丙酮酸縮合乙酰乳酸脫羧乙酰甲基甲醇堿性條件二乙酰與培養(yǎng)基中精氨酸的胍基結(jié)合紅色化合物（陽性反應(yīng)）第十七頁，共二十八頁，2022年，8月28日3、MR試驗

[原理]葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH值降至4.5以下培養(yǎng)基變紅(陽性反應(yīng))甲基紅指示劑非酸性末端產(chǎn)物(醇、醛等）pH值＞6.2甲基紅指示劑培養(yǎng)基橘黃色(陰性反應(yīng))第十八頁，共二十八頁，2022年，8月28日淀粉三、淀粉水解試驗

[原理]檢測細(xì)菌是否可以產(chǎn)生分泌到胞外的淀粉酶。淀粉酶糊精，雙糖和單糖等碘液不出現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)，菌落周圍呈現(xiàn)透明圈藍(lán)色第十九頁，共二十八頁，2022年，8月28日

[實(shí)驗材料]培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基，乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，蛋白胨水培養(yǎng)基，固體淀粉培養(yǎng)基。菌種：大腸桿菌，枯草桿菌，普通變形菌，產(chǎn)氣腸桿菌試劑：盧戈氏碘液，甲基紅指示劑，40%KOH，

5%α-萘酚，吲哚試劑，1.6%溴甲酚紫儀器：略第二十頁，共二十八頁，2022年，8月28日[方法和步驟]1、

試管（平板）標(biāo)記

葡萄糖發(fā)酵管乳糖發(fā)酵管吲哚試驗管V-P試驗管淀粉水解試驗平板：4個各9支用記號筆或者標(biāo)簽紙在平板底部劃成或者區(qū)分為2部分第二十一頁，共二十八頁，2022年，8月28日

2、接種培養(yǎng)

試管接種：以無菌操作分別接種少量待測菌到以上相應(yīng)試管中，每菌接2支管,留1管作空白對照不接種，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。

葡萄糖和乳糖微量發(fā)酵管接種:采用接種針平板接種：以無菌操作分別接種少量待測菌到以上相應(yīng)平板中,每平板接2種菌,將平板倒置在37℃溫箱中培養(yǎng)24h.

第二十二頁，共二十八頁，2022年，8月28日

①確定有無細(xì)菌生長？②確定各菌對糖的分解利用情況：不利用：用

“－”

表示產(chǎn)酸：用“+”

表示產(chǎn)酸產(chǎn)氣：用⊕

表示3、

觀察記錄（直接觀察記錄或加入試劑反應(yīng)后再觀察記錄）

糖發(fā)酵試驗（直接觀察記錄）第二十三頁，共二十八頁，2022年，8月28日

1、確定有無細(xì)菌生長？2、向蛋白胨水培養(yǎng)液內(nèi)加入乙醚1-2mL，用力振蕩，靜置分層后，沿管壁緩緩加入5-10滴吲哚試劑，若上層乙醚層呈玫瑰紅色者，為吲哚試驗反應(yīng)陽性。吲哚（靛基質(zhì)）試驗

3、“+”表示陽性反應(yīng)，“-”表示陰性反應(yīng)。第二十四頁，共二十八頁，2022年，8月28日1、確定有無細(xì)菌生長？并用空試管將葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液分為2半；2、將其中1半葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液內(nèi)加入5-10滴

40%KOH，然后加入等量的5%α-萘酚溶液，用力振蕩，再放入37℃溫箱中保溫15-30min。若培養(yǎng)物呈紅色者，為VP試驗反應(yīng)陽性V-P試驗

3、“+”表示陽性反應(yīng)，“-”表示陰性反應(yīng)。第二十五頁，共二十八頁，2022年，8月28日

1、將另一半葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液內(nèi)加入甲基紅試劑2滴，培養(yǎng)基變?yōu)榧t色者為陽性，變黃色者為陰性。MR試驗2、“+”表示陽性反應(yīng)，“-”表示陰性反應(yīng)。第二十六頁，共二十八頁，2022年，8月28日1、觀察各種細(xì)菌的生長情況；2、將平板打開蓋子，滴入少量碘液于平皿中，輕輕旋轉(zhuǎn)平板，使碘液均勻鋪滿整個平板。如菌苔周圍出現(xiàn)無色透明圈，說明淀粉己被水解，為陽性。透明