生物化學(xué)：15自動(dòng)生化分析儀

第五章

自動(dòng)生化分析技術(shù)目錄第一節(jié)概述第二節(jié)自動(dòng)生化分析儀常用分析方法第三節(jié)自動(dòng)生化分析儀的參數(shù)設(shè)置第四節(jié)檢測(cè)系統(tǒng)的校準(zhǔn)和性能評(píng)價(jià)第五節(jié)自動(dòng)生化分析儀操作流程2第一節(jié)概述主要內(nèi)容：一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能

二、干化學(xué)式生化分析儀的結(jié)構(gòu)和功能三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展思考題：1.分立式自動(dòng)生化分析儀的主要結(jié)構(gòu)及各自的功能是什么？干式生化分析儀的檢測(cè)原理及特點(diǎn)是什么？

自動(dòng)生化分析儀有哪些主要類型？其未來(lái)的發(fā)展趨勢(shì)是什么？6continuousstreaming

movementstyle或管道式：已很少用centrifugationstyle：已很少用discretestyle：應(yīng)用最廣泛dryingstyle：急診多用自動(dòng)生化分析儀的主要類型一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能

分立式自動(dòng)生化分析儀（discreteautomaticbiochemicalanalyzer）是按人工操作的方式編排程序，并以有序的機(jī)械操作代替手工操作，按程序依次完成加樣、加試劑、攪拌、反應(yīng)杯保溫孵育、吸光度檢測(cè)等各項(xiàng)操作。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能分立式自動(dòng)生化分析儀的基本結(jié)構(gòu)一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能全自動(dòng)生化分析儀全貌及其內(nèi)部結(jié)構(gòu)一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（一）樣本和試劑處理系統(tǒng)1.樣本盤(pán)或樣本架

樣本盤(pán)為圓盤(pán)狀，盤(pán)上有兩圈放置采血管或樣本杯的插孔，通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)控制不同樣本到特定位置取樣。而樣本架類似于試管架，放置樣本后經(jīng)傳送帶運(yùn)送到特定位置進(jìn)樣。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能11樣品盤(pán)：放置待測(cè)樣品的轉(zhuǎn)盤(pán)，可放置一定數(shù)量的樣品杯或不同規(guī)格的采血試管，通過(guò)樣品盤(pán)的轉(zhuǎn)動(dòng)來(lái)控制不同樣品的進(jìn)樣。一次性裝載樣本大。轉(zhuǎn)動(dòng)恒定，故障率低。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能樣品架：每個(gè)樣品架可放數(shù)只樣品杯或采血試管（多為4只，5只或10只）。樣品架上的條形碼或編碼孔可識(shí)別樣品架號(hào)及樣品位置號(hào)。樣品架的移動(dòng)通過(guò)樣品傳送帶來(lái)進(jìn)行。樣品架適合模塊組合式自動(dòng)生化分析儀和全實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化系統(tǒng)。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（一）樣本和試劑處理系統(tǒng)2.試劑盤(pán)和試劑瓶

安裝在具有冷藏功能的試劑倉(cāng)內(nèi)。試劑盤(pán)可放置一定形狀的試劑瓶，不同分析儀試劑瓶的容量和形狀不同。二、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能

試劑盤(pán)二、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能試劑瓶：試劑瓶容量一般為10～100ml。通過(guò)試劑轉(zhuǎn)盤(pán)的轉(zhuǎn)動(dòng)來(lái)選用不同試劑。傳統(tǒng)的生化試劑瓶手工處理，失誤浪費(fèi)試劑可檢測(cè)量無(wú)法統(tǒng)計(jì)效期短，易揮發(fā)不穩(wěn)定，定標(biāo)頻率高儲(chǔ)存不便一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能無(wú)需預(yù)處理-避免操作浪費(fèi)具體測(cè)試數(shù)-便于統(tǒng)計(jì)成本上機(jī)更穩(wěn)定-更加節(jié)省試劑密封效果好-避免揮發(fā)污染儲(chǔ)存很便利-更加節(jié)省空間一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（一）樣本和試劑處理系統(tǒng)3.取液裝置樣本和試劑的吸取由帶定量吸液器和樣品針或試劑針的機(jī)械臂完成。樣品針和試劑針具有多種功能：液面感應(yīng)功能、防撞功能、阻塞報(bào)警功能。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能取樣裝置：由取樣針、取樣臂、取樣管路、取樣注射器和閥門(mén)組成，能定量吸取樣品并加入到反應(yīng)杯。不同分析儀的取樣容量有不同的范圍，一般為2～35μl，步進(jìn)0.1微升不等。試劑針一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（二）反應(yīng)系統(tǒng)1.反應(yīng)盤(pán)和反應(yīng)杯：反應(yīng)盤(pán)為擱置反應(yīng)杯的圓盤(pán)狀裝置。反應(yīng)杯由透光性好的石英玻璃、硬質(zhì)玻璃或丙烯酸塑料制成，容量為80μl～500μl不等，是樣本與試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)的場(chǎng)所。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能反應(yīng)盤(pán)：100只或更多的反應(yīng)杯圍成一圈組成。在測(cè)定過(guò)程中反應(yīng)盤(pán)作恒速的圓周運(yùn)動(dòng)。在靜止時(shí)向反應(yīng)杯中加入樣品、試劑或進(jìn)行攪拌混勻。當(dāng)反應(yīng)盤(pán)恒速圓周運(yùn)動(dòng)經(jīng)過(guò)檢測(cè)窗口的比色杯可進(jìn)行吸光度檢測(cè)。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能反應(yīng)杯（比色杯）：是樣品與試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)的場(chǎng)所，同時(shí)用作比色杯。由透光特性好的硬塑料或硬質(zhì)石英玻璃或丙烯酸塑料制成，自動(dòng)沖洗備用。比色杯光徑：不同分析儀光徑0.5～1cm不等，大多數(shù)分析儀在計(jì)算時(shí)將其折算為1厘米光徑?，F(xiàn)代生化儀多具備比色杯自動(dòng)沖洗裝置和自動(dòng)空白檢查功能。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（二）反應(yīng)系統(tǒng)

2.混勻裝置：

混勻的方式有機(jī)械振動(dòng)、攪拌和超聲混勻等，目前多采用攪拌方式，超聲混勻可杜絕攜帶污染，極大程度減少泡沫產(chǎn)生。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能混勻器：反應(yīng)杯里的樣品與試劑通過(guò)攪拌棒攪拌而充分混勻，攪拌棒的形狀為扁平棒狀或扁平螺旋狀，表面的疏水材料能防止反應(yīng)液被攪拌棒所攜帶。其工作方式大多為旋轉(zhuǎn)式攪拌，也有震動(dòng)式攪拌方式。也設(shè)置了防止攪拌棒在不同反應(yīng)液之間攜帶交叉污染的清洗措施。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（二）反應(yīng)系統(tǒng)

3.恒溫裝置：保持恒溫有3種方式：①水浴，優(yōu)點(diǎn)是溫度均勻穩(wěn)定，缺點(diǎn)是需加防腐劑來(lái)保持水的潔凈，并要定期更換和清洗；②空氣浴，即由加熱器加熱比色杯周圍的空氣，保養(yǎng)簡(jiǎn)單，但升溫慢，溫度不太穩(wěn)定，易受環(huán)境溫度影響；③恒溫液循環(huán)間接加熱法，采用一種無(wú)污染、惰性的不蒸發(fā)液體，比色杯與恒溫液之間有極小的空氣狹縫，恒溫液將縫隙的空氣加熱，其優(yōu)點(diǎn)是升溫快，溫度穩(wěn)定、均勻，不需要特殊保養(yǎng)。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（三）檢測(cè)系統(tǒng)1.光路系統(tǒng)：由光源、比色杯和分光元件（濾光片、棱鏡或光柵）等組成。主要以后分光光路系統(tǒng)為主：光源→反應(yīng)液→分光元件→單色光→信號(hào)檢測(cè)器。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能后分光：光源先透過(guò)比色杯中的反應(yīng)液再照射到光柵上，經(jīng)色散后所有固定單色光同時(shí)通過(guò)各自的光纖傳輸?shù)綄?duì)應(yīng)的檢測(cè)器后分光光路示意圖一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（三）檢測(cè)系統(tǒng)2.信號(hào)檢測(cè)器：光信號(hào)由信號(hào)檢測(cè)器接收，轉(zhuǎn)換成電信號(hào)并加以放大，再通過(guò)模數(shù)轉(zhuǎn)換電路將模擬信號(hào)轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)，傳送到微處理器，后者按各測(cè)定項(xiàng)目的分析參數(shù)選擇其中一個(gè)（單波長(zhǎng)）或兩個(gè)波長(zhǎng)（雙波長(zhǎng)）的吸光度值，用于計(jì)算樣本結(jié)果。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能（四）計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)包括自動(dòng)開(kāi)關(guān)機(jī)、系統(tǒng)自檢、樣本和試劑識(shí)別、分析測(cè)定、結(jié)果計(jì)算、數(shù)據(jù)儲(chǔ)存和輸出、自動(dòng)維護(hù)和保養(yǎng)等功能。一、分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)與功能計(jì)算機(jī)系統(tǒng)：自動(dòng)生化分析儀的核心部件，可實(shí)現(xiàn)識(shí)別標(biāo)本、吸加樣本和試劑、混合恒溫、數(shù)據(jù)處理、結(jié)果打印。校準(zhǔn)方法和測(cè)定方法的選擇、質(zhì)量監(jiān)控等內(nèi)容也均由計(jì)算機(jī)控制完成。特點(diǎn)：多種數(shù)據(jù)處理功能，實(shí)現(xiàn)了檢測(cè)的自動(dòng)化

計(jì)算測(cè)定結(jié)果判斷結(jié)果準(zhǔn)確性

保存各種數(shù)據(jù)

自我診斷功能1.鍵盤(pán)2.顯示器3.鼠標(biāo)4.計(jì)算機(jī)二、干化學(xué)式生化分析儀的結(jié)構(gòu)和功能

干化學(xué)式生化分析儀（drychemistryautomaticbiochemicalanalyzer）與配套干片試劑組成一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)，采用的是干化學(xué)分析技術(shù)，即將生化檢測(cè)所需的試劑固定在具有多層復(fù)合膜結(jié)構(gòu)的載體上，形成固相試劑，稱為干片試劑。多涂層薄膜干片技術(shù)擴(kuò)散層擴(kuò)散層試劑層試劑層指示劑層指示劑層支持層支持層標(biāo)本多涂層薄膜干片技術(shù)：將所需試劑預(yù)固相在多層薄膜和郵票大小的透明支持基墊之上。當(dāng)血漿，血清，尿液或腦脊液與這些已含化學(xué)物質(zhì)的干式薄膜接觸時(shí)發(fā)生反應(yīng)并對(duì)反應(yīng)信號(hào)進(jìn)行測(cè)量。干片分類CM/RTPMIR干片(MicroSlide)鈉鉀氯地高辛苯巴比妥卡馬西平苯妥因C反應(yīng)蛋白膽固醇 甘油三酯總蛋白 白蛋白高密度酯蛋白脂肪酶尿蛋白

腦脊液蛋白谷丙轉(zhuǎn)氨酶谷氨酸轉(zhuǎn)移酶堿性磷酸酶 r谷氨酰轉(zhuǎn)酞酶乳酸脫氫酶 肌酸激酶肌酸激酶同工酶尿素氮肌酐 尿酸

乳酸 鐵、總鐵結(jié)合力磷 鋰淀粉酶膽堿脂酶總膽紅素結(jié)合/非結(jié)合膽紅素血氨乙醇水楊酸茶堿醋氨酚鎂二氧化碳比色/速率法干片免疫速率法干片電極法干片

指示劑層支持層擴(kuò)散層試劑層比色/速率法干片通過(guò)測(cè)定干片顏色變化來(lái)確定化合物濃度

指示劑層支持層

多孔結(jié)構(gòu)，允許標(biāo)本通過(guò)均勻分布標(biāo)本過(guò)濾大分子（蛋白質(zhì)，脂肪等）去除干擾物質(zhì)（溶血，黃疸等）提供反射測(cè)定的背景擴(kuò)散層試劑層擴(kuò)散層比色/速率法干片結(jié)構(gòu)試劑層

擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層

包含檢測(cè)反應(yīng)所需的酶，緩沖液，催化劑等多層試劑，控制反應(yīng)順序比色/速率法干片結(jié)構(gòu)葡萄糖干片指示劑層

擴(kuò)散層試劑層

指示劑層支持層試劑層產(chǎn)物與指示劑層中的染料結(jié)合時(shí)，形成有色復(fù)合物，其與分析物濃度成正比。比色/速率法干片結(jié)構(gòu)支持層

擴(kuò)散層試劑層

指示劑層

支持層

提供反應(yīng)支持基墊允許光路自由通過(guò)比色/速率法干片結(jié)構(gòu)均勻分布標(biāo)本比色/速率法干片功能演示擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層均勻分布標(biāo)本標(biāo)本進(jìn)入擴(kuò)散層均勻分布標(biāo)本擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層比色/速率法干片功能演示標(biāo)本迅速向四周擴(kuò)散均勻分布標(biāo)本擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層比色/速率法干片功能演示標(biāo)本均勻向下層滲透擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層比色/速率法干片功能演示標(biāo)本與試劑反應(yīng)擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層比色/速率法干片功能演示反應(yīng)物在指示劑層被固定擴(kuò)散層試劑層指示劑層支持層比色/速率法干片功能演示反射光的測(cè)定干擾物質(zhì)反光背景成色層生成純凈的反射光光源濾光片接收器比色/速率法干片功能演示接收器接收器透射與反射光線經(jīng)過(guò)干擾物質(zhì)光線不經(jīng)過(guò)干擾物質(zhì)受影響不受影響二、干化學(xué)式生化分析儀的結(jié)構(gòu)和功能儀器優(yōu)點(diǎn)：完全脫離了傳統(tǒng)的采用試管和吸管的分析方法，儀器操作簡(jiǎn)便，測(cè)定速度快，靈敏度和準(zhǔn)確度與典型的分立式儀器相近。儀器缺點(diǎn)：對(duì)環(huán)境要求比較高，尤其是空氣的溫度和濕度。成本較“濕化學(xué)”略高，多用于急診。VITROS350-干化學(xué)式生化分析儀12341、系統(tǒng)控制中心2、樣本處理中心3、干片處理中心4、廢物回收中心VITROS350－儀器內(nèi)部結(jié)構(gòu)VITROS350－系統(tǒng)控制中心VITROS350－樣本處理中心共計(jì)40個(gè)可調(diào)標(biāo)本位置，多種適配器可讓操作者選擇使用不同的標(biāo)本容器一個(gè)標(biāo)本一個(gè)吸樣頭-杜絕交叉污染一次性的稀釋杯-杜絕交叉污染提供多樣的稀釋液–使結(jié)果更加準(zhǔn)確VITROS350－樣本處理中心全方位標(biāo)本監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，氣泡，凝塊探測(cè)－減少因標(biāo)本質(zhì)量引起的重復(fù)檢測(cè)自動(dòng)機(jī)上預(yù)稀釋和后稀釋－減少手工操作的失誤精確的微量加樣系統(tǒng)，僅需5-11μl微量標(biāo)本－滿足兒童或老人等不易采血人群的需求各自獨(dú)立的輔助液體加樣系統(tǒng)－杜絕污染VITROS350－干片處理中心23個(gè)孵育位由計(jì)算機(jī)控制干片的分配精準(zhǔn)的溫度控制系統(tǒng)確保最佳反應(yīng)溫度－保證可靠的檢測(cè)結(jié)果全自動(dòng)控制反射光系統(tǒng)提供穩(wěn)定的測(cè)定手段－保證可靠的檢測(cè)結(jié)果動(dòng)態(tài)的參考白參比設(shè)計(jì)保證儀器的良好重復(fù)性VITROS350－干片盒裝載通道試劑干片可隨時(shí)裝載進(jìn)入儀器機(jī)內(nèi)兩個(gè)環(huán)狀儲(chǔ)藏器可存儲(chǔ)共60個(gè)干片盒機(jī)內(nèi)干片存儲(chǔ)環(huán)境受嚴(yán)格溫濕度控制–保證測(cè)試質(zhì)量全自動(dòng)干片識(shí)別記憶系統(tǒng)VITROS350－廢物回收中心干燥劑、保濕劑吸頭回收干片回收彈夾回收VITROS350－日常保養(yǎng)無(wú)上下水系統(tǒng)，電源接通即可工作VITROS350－報(bào)警提示VITROS350－數(shù)據(jù)輸出VITROS?5,1FSChemistrySystemCommandCenter控制中心SamplingCenter樣品中心DisposableTip

ProcessingCenter一次性吸頭處理中心MicroTipSpecial

ChemistryCenter特殊生化項(xiàng)目處理中心VITROSMicroSlideTMCenter干片中心VITROS?5,1FS全自動(dòng)生化分析系統(tǒng)BusinessConfidentialBusinessConfidentialBack（一）實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)（二）生化檢驗(yàn)自動(dòng)化帶來(lái)的變革（三）發(fā)展趨勢(shì)三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展（一）實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)（laboratoryinformationsystem，LIS）是借助計(jì)算機(jī)技術(shù)、網(wǎng)絡(luò)技術(shù)、數(shù)字化與智能化技術(shù)等現(xiàn)代技術(shù)手段，對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室內(nèi)樣本信息和各種自動(dòng)化儀器運(yùn)行信息進(jìn)行收集、處理、存儲(chǔ)、輸送、分析、應(yīng)用的綜合管理系統(tǒng)。LIS往往與醫(yī)院信息系統(tǒng)（hospitalinformationsystem，HIS）連接，它能夠配合醫(yī)生、護(hù)士工作站，完成檢驗(yàn)申請(qǐng)、樣本采集管理、樣本核收、檢驗(yàn)報(bào)告?zhèn)鬏數(shù)裙δ埽箤?shí)驗(yàn)室信息更好更快地服務(wù)于臨床。三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展（二）生化檢驗(yàn)自動(dòng)化帶來(lái)的變革提高臨床實(shí)驗(yàn)室技術(shù)和管理水平降低實(shí)驗(yàn)室的生物安全風(fēng)險(xiǎn)提升實(shí)驗(yàn)室的服務(wù)水平三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展（三）發(fā)展趨勢(shì)

20世紀(jì)90年代中期，推出模塊式生化分析系統(tǒng)，將兩臺(tái)或兩臺(tái)以上的分析模塊組合在一起，這些分析模塊包含了分光光度法、離子選擇電極法的生化分析模塊和免疫比濁法、免疫化學(xué)發(fā)光法的免疫分析模塊，各分析模塊既有各自獨(dú)立的控制系統(tǒng)又有共用的控制系統(tǒng)，樣本通過(guò)傳送帶在各模塊之間進(jìn)行傳遞并完成所有項(xiàng)目的測(cè)定。三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展電解質(zhì)模塊生化模塊免疫模塊生化模塊三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展主軌道回傳軌道運(yùn)行軌道MSB智能樣本架穿梭控制站三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展模塊速度（T/H）試劑通道數(shù)ISE模塊900/1800K、Na、Cl

生化模塊12000

70（cpack）生化模塊2600

60（cpack）免疫模塊17025（epack）三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展年份樣本數(shù)(個(gè)/天)總測(cè)試數(shù)(t/d)速度（t/h）檢測(cè)時(shí)間2010年5005,0002,6002.0

小時(shí)2011年5755,7502,6002.2小時(shí)2012年6736,7302,6002.6

小時(shí)2013年7747,7402,6003.0小時(shí)2014年9069,0604,6002.0小時(shí)三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展

目前正向自動(dòng)化程度更高的全實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化（totallaboratoryautomation，TLA）方向發(fā)展。TLA將樣本前處理系統(tǒng)、樣本運(yùn)送系統(tǒng)、樣本分析系統(tǒng)（血細(xì)胞系統(tǒng)、凝血系統(tǒng)、生化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等）串聯(lián)起來(lái)，組成流水線，再加上LIS和計(jì)算機(jī)硬件，形成大規(guī)模的全檢驗(yàn)過(guò)程的自動(dòng)化。TLA系統(tǒng)的組成實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化流水線模式圖三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展TLA系統(tǒng)的組成實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化流水線模式圖三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展樣本前處理系統(tǒng)三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展BulkLoader離心機(jī)條碼識(shí)別照相系統(tǒng)開(kāi)蓋分類，封蓋，歸檔三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展血清工作區(qū)血球工作區(qū)血凝工作區(qū)尿液等其他樣本前處理系統(tǒng)三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展黃疸溶血脂血檢測(cè)前發(fā)現(xiàn)問(wèn)題血清樣本，及時(shí)干預(yù)處理樣本前處理系統(tǒng)三、自動(dòng)生化分析技術(shù)的發(fā)展樣本后處理系統(tǒng)2°C4°C6°C8°C10°C溫度控制自動(dòng)查找和取出過(guò)期樣本自動(dòng)丟棄樣本自動(dòng)保存第二節(jié)自動(dòng)生化分析儀常用分析方法一、終點(diǎn)法當(dāng)反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)產(chǎn)物不再增加，吸光度不改變，根據(jù)平衡點(diǎn)吸光度的大小即能算出被測(cè)物濃度，這種方法稱為終點(diǎn)法（endassay）。分為：一點(diǎn)終點(diǎn)法（onepointendassay）兩點(diǎn)終點(diǎn)法（twopointendassay）一、終點(diǎn)法A單試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法B雙試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法（一）一點(diǎn)終點(diǎn)法（onepointendassay）一、終點(diǎn)法（二）兩點(diǎn)終點(diǎn)法（twopointendassay）常應(yīng)用于具有雙試劑的測(cè)定項(xiàng)目中。第二試劑（R2）加入前，選擇某個(gè)時(shí)間點(diǎn)作為第一個(gè)測(cè)光點(diǎn)，此時(shí)的吸光度相當(dāng)于樣本空白（Am）。加入第二試劑后待測(cè)物開(kāi)始反應(yīng)，并經(jīng)過(guò)一定時(shí)間反應(yīng)達(dá)到平衡，此時(shí)選擇第二個(gè)測(cè)光點(diǎn)測(cè)定吸光度（An），兩個(gè)測(cè)光點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算待測(cè)物濃度，稱為兩點(diǎn)終點(diǎn)法。

一、終點(diǎn)法A單試劑二點(diǎn)終點(diǎn)法B雙試劑二點(diǎn)終點(diǎn)法（二）兩點(diǎn)終點(diǎn)法（twopointendassay）一、終點(diǎn)法（二）兩點(diǎn)終點(diǎn)法（twopointendassay）該法能有效地消除溶血、黃疸和脂濁等樣品本身光吸收造成的干擾。血紅蛋白、膽紅素和脂濁的光吸收曲線二、固定時(shí)間法

固定時(shí)間法（fixed-timeassay）

指在時(shí)間-吸光度曲線上選擇兩個(gè)計(jì)算點(diǎn)，此兩點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點(diǎn)吸光度，這兩點(diǎn)的吸光度差值用于結(jié)果計(jì)算。

二、固定時(shí)間法固定時(shí)間法（fixed-timeassay）固定時(shí)間法的時(shí)間-吸光度曲線二、固定時(shí)間法在自動(dòng)生化分析儀上，苦味酸法測(cè)定肌酐、溴甲酚氯法測(cè)定血清白蛋白采用的即是固定時(shí)間法。

三、連續(xù)監(jiān)測(cè)法

連續(xù)監(jiān)測(cè)法（continuousmonitoringassay）又稱速率法（rateassay），是在測(cè)定酶活性或用酶法測(cè)定代謝產(chǎn)物時(shí)，連續(xù)選取時(shí)間-吸光度曲線的線性期內(nèi)4個(gè)以上測(cè)光點(diǎn)測(cè)定吸光度，計(jì)算單位時(shí)間吸光度變化值ΔA/min，此即為酶促反應(yīng)的初速度，其大小與被測(cè)酶活性成正比。三、連續(xù)監(jiān)測(cè)法A單試劑連續(xù)監(jiān)測(cè)法B雙試劑連續(xù)監(jiān)測(cè)法連續(xù)監(jiān)測(cè)法反應(yīng)曲線三、連續(xù)監(jiān)測(cè)法第一試劑與樣本混合第二試劑與樣本混合預(yù)孵育期延滯期線性期非線性期速率法終點(diǎn)法A1A2①②③④⑤⑥四、比濁法比濁法（turbidimetricAssay）是通過(guò)測(cè)定微粒性物質(zhì)對(duì)光的散射或透射強(qiáng)度來(lái)測(cè)定物質(zhì)的濃度，主要用于測(cè)定能形成懸浮體的顆粒物質(zhì)。比濁法也采用終點(diǎn)法尤其是兩點(diǎn)終點(diǎn)法進(jìn)行檢測(cè)。比濁法可分為化學(xué)比濁法和免疫比濁法。四、比濁法1．化學(xué)比濁法

基本原理：待測(cè)物在一定條件下反應(yīng)形成不可溶的微細(xì)沉淀（微粒），這些微粒的存在使透過(guò)的光減弱，通過(guò)檢測(cè)透光強(qiáng)度，計(jì)算出樣本中物質(zhì)的濃度。四、比濁法2．免疫比濁法

基本原理：抗原與抗體發(fā)生反應(yīng)形成的可溶性免疫復(fù)合物，通過(guò)某種方法使其自液相析出，形成微粒，這些微粒具有對(duì)光的反射和折射能力，通過(guò)檢測(cè)散射光或透射光的強(qiáng)度，計(jì)算樣本中待測(cè)物的濃度。四、比濁法

2．免疫比濁法根據(jù)測(cè)定的光線不同分為：免疫散射比濁法（Immunescatterturbidimeter）、免疫透射比濁法（immunitytransmissionturbidimeter），在自動(dòng)生化分析儀上只能采用免疫透射比濁法。四、比濁法連續(xù)監(jiān)測(cè)法的時(shí)間-吸光度曲線第三節(jié)自動(dòng)生化分析儀的參數(shù)設(shè)置自動(dòng)生化分析儀在測(cè)定分析前，需要設(shè)置各項(xiàng)目的分析參數(shù)（analysisparameters），如樣本和試劑用量、溫度選擇、反應(yīng)時(shí)間、測(cè)定波長(zhǎng)、檢測(cè)方法等。分為：基本分析參數(shù)（也稱通用分析參數(shù)）和特殊分析參數(shù)（或稱質(zhì)量保證參數(shù)）。一、基本分析參數(shù)

1．項(xiàng)目名稱：項(xiàng)目名稱是測(cè)定項(xiàng)目標(biāo)示符，常以項(xiàng)目的英文縮寫(xiě)來(lái)表示。

2．樣本量與試劑量：樣本量、第一試劑和第二試劑量，需按照各種分析儀的可加樣／試劑體積范圍、反應(yīng)液總體積范圍以及試劑樣本體積比來(lái)確定。樣本量和試劑量由樣本體積分?jǐn)?shù)（SampleVolumeFraction，SVF）來(lái)決定。

一、基本分析參數(shù)3．試劑的選擇：反應(yīng)過(guò)程中一般加入一種或兩種試劑，分別稱為單試劑法和雙試劑法。（1）單試劑：把某種生化反應(yīng)所需要的全部試劑科學(xué)地混合在一起，組合成一種試劑。（2）雙試劑：將某些生化檢測(cè)項(xiàng)目所用到的試劑按照用途科學(xué)地分成兩類，分別配成兩種試劑（R1、R2）。一、基本分析參數(shù)

4．溫度的選擇：生化分析儀通常有37℃，部分還有30℃和25℃，一般將溫度設(shè)定在37℃。

5．分析方法選擇：根據(jù)試劑說(shuō)明書(shū)選擇檢驗(yàn)項(xiàng)目的分析方法為終點(diǎn)法或連續(xù)監(jiān)測(cè)法。

6．測(cè)定時(shí)間選擇：（1）終點(diǎn)法測(cè)定時(shí)間的選擇要充分考慮到干擾問(wèn)題。（2）連續(xù)監(jiān)測(cè)法需要設(shè)置延遲時(shí)間和監(jiān)測(cè)時(shí)間。一、基本分析參數(shù)102

7.波長(zhǎng)的選擇

（1）波長(zhǎng)大小的選擇測(cè)定波長(zhǎng)的選擇要兼顧待測(cè)物和干擾物，使待測(cè)物在該波長(zhǎng)下光吸收最大，同時(shí)使常見(jiàn)的干擾物在該波長(zhǎng)下光吸收最小。（2）單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)的選擇分析儀可設(shè)置單波長(zhǎng)法或雙波長(zhǎng)法。雙波長(zhǎng)法即采用兩個(gè)不同的波長(zhǎng)即測(cè)量波長(zhǎng)（又叫主波長(zhǎng)，primarywavelength）和參比波長(zhǎng)（又叫次波長(zhǎng)，secondwavelength）同時(shí)測(cè)定。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置1．試劑吸光度檢查（1）試劑空白吸光度：是檢查試劑質(zhì)量的指標(biāo)之一。每種試劑本身有一定吸光度（AB），需在分析儀上設(shè)定AB的范圍，超出時(shí)儀器會(huì)報(bào)警，提示試劑變質(zhì)。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置（2）試劑空白速率（Rateofreagentblank）：在反應(yīng)溫度下，某些試劑于檢測(cè)過(guò)程的短時(shí)間內(nèi)可能發(fā)生較為明顯的自身分解等變化，使測(cè)定結(jié)果偏高或偏低，設(shè)置此參數(shù)便能在待測(cè)物反應(yīng)的吸光度變化速率中減去試劑空白速率，從而消除或減少這類誤差。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置2．酶活性測(cè)定準(zhǔn)確度的監(jiān)測(cè)（1）線性檢查：用于連續(xù)監(jiān)測(cè)法，設(shè)定一個(gè)非線性度對(duì)監(jiān)測(cè)時(shí)間進(jìn)行線性判斷。通過(guò)將監(jiān)測(cè)時(shí)間內(nèi)的吸光度值進(jìn)行線性回歸，計(jì)算各點(diǎn)的方差，根據(jù)方差值的大小來(lái)判斷該監(jiān)測(cè)時(shí)間是否處于線性期。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置（2）彈性速率設(shè)置：在酶活性測(cè)定中，當(dāng)酶活性太高，在監(jiān)測(cè)時(shí)間內(nèi)已不呈線性反應(yīng)時(shí)，有些儀器具有彈性速率功能可設(shè)置，即選擇監(jiān)測(cè)時(shí)間前的線性段吸光度值計(jì)算結(jié)果，使酶活性測(cè)定的線性范圍得以擴(kuò)大。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置（3）底物消耗限值：在連續(xù)監(jiān)測(cè)法的測(cè)定項(xiàng)目中，可設(shè)置化學(xué)反應(yīng)后吸光度升高（正反應(yīng)）或下降（負(fù)反應(yīng)）的限值。超過(guò)此限值說(shuō)明酶反應(yīng)的底物消耗過(guò)多，已不足以維持底物的零級(jí)反應(yīng)，則該檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確，儀器能自動(dòng)提示。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置3．樣本性狀監(jiān)測(cè)

樣本的溶血、脂濁、黃疸等會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生干擾，根據(jù)各自的光譜吸收特性，用雙波長(zhǎng)測(cè)定樣本在600nm/570nm、700nm/660nm和505nm/480nm吸光度比值來(lái)分別判斷樣本溶血、脂濁和黃疸程度，并可在檢驗(yàn)報(bào)告單中顯示這些信息。二、特殊分析參數(shù)設(shè)置4．線性范圍的選擇

只有當(dāng)反應(yīng)吸光度處于線性區(qū)間時(shí)，檢測(cè)結(jié)果才與吸光度變化成正比，因此需設(shè)定恰當(dāng)?shù)木€性范圍。設(shè)置線性范圍后，檢測(cè)結(jié)果若超過(guò)此范圍，分析儀將提示，且多數(shù)會(huì)自動(dòng)將樣本減量或增量重新測(cè)定。第四節(jié)檢測(cè)系統(tǒng)的校準(zhǔn)和性能評(píng)價(jià)

測(cè)定一個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目除了涉及自動(dòng)生化分析儀，還涉及儀器所使用的試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和檢測(cè)程序等，如有手工操作步驟，還應(yīng)包括操作人員，這些要素組成的分析測(cè)定系統(tǒng)稱為檢測(cè)系統(tǒng)（testingsystem）。一、檢測(cè)系統(tǒng)的校準(zhǔn)

1．校準(zhǔn)的定義

校準(zhǔn)（calibration）也稱定標(biāo)，是指在規(guī)定條件下，為確定測(cè)量?jī)x器或測(cè)量系統(tǒng)所指示的值、實(shí)物量具或參考物質(zhì)所代表的值與相對(duì)應(yīng)的由標(biāo)準(zhǔn)所復(fù)現(xiàn)的量值之間關(guān)系的一組操作。一、檢測(cè)系統(tǒng)的校準(zhǔn)

2．校準(zhǔn)方法

如果實(shí)驗(yàn)室采用的是標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)系統(tǒng)，其校準(zhǔn)品和校準(zhǔn)方法由廠商提供。如果是自建的檢測(cè)系統(tǒng)必須建立校準(zhǔn)方法，包括：①選擇合適的校準(zhǔn)品及校準(zhǔn)品的數(shù)量、類型和濃度。②確定校準(zhǔn)驗(yàn)證的頻度。一、檢測(cè)系統(tǒng)的校準(zhǔn)

3．校準(zhǔn)品

校準(zhǔn)品（Calibration

materials）是含有已知量的待測(cè)物，用以校準(zhǔn)檢測(cè)系統(tǒng)的測(cè)定值。它與該方法及試劑、儀器相關(guān)聯(lián)。校準(zhǔn)品的作用是為了給檢測(cè)結(jié)果賦值，并減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)誤差。一、檢測(cè)系統(tǒng)的校準(zhǔn)4．酶活性測(cè)定的校準(zhǔn)

以往臨床上血清酶的測(cè)定廣泛使用理論K值或?qū)崪y(cè)K值計(jì)算酶活性。但各實(shí)驗(yàn)室采用的檢測(cè)系統(tǒng)不同，使酶活性的測(cè)定出現(xiàn)明顯室間變異。解決方案：①推薦統(tǒng)一的測(cè)定方法即標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)系統(tǒng)；②用校準(zhǔn)品對(duì)各檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)一校準(zhǔn)。二、檢測(cè)系統(tǒng)主要的性能指標(biāo)1．準(zhǔn)確度和精密度2．分析速度

指1小時(shí)內(nèi)完成的測(cè)試數(shù)（所有已測(cè)定樣本的項(xiàng)目數(shù)之和），用tests/h來(lái)表示。（1）加樣周期（samplingcycle）（2）測(cè)試循環(huán)3．實(shí)用性①檢測(cè)能力；②便捷性；③檢測(cè)成本。第五節(jié)自動(dòng)生化分析儀的操作流程一、儀器準(zhǔn)備

保證穩(wěn)定的電壓，環(huán)境溫度在18～25℃，實(shí)驗(yàn)用水一般要達(dá)到II級(jí)純水，酶活性測(cè)定和電解質(zhì)分析等應(yīng)選用I級(jí)純水。開(kāi)機(jī)前：操作人員首先檢查實(shí)驗(yàn)用水、清潔液、稀釋液等是否足量，盛廢液的容器是否騰空。一、儀器準(zhǔn)備

開(kāi)機(jī)后：儀器進(jìn)行自檢，通過(guò)儀器自帶的多個(gè)傳感器檢測(cè)加樣針、試劑針、比色杯、攪拌棒、沖洗臺(tái)的位置和運(yùn)動(dòng)是否正常，加樣針、試劑針是否需要特別清潔處理。審查每種試劑的測(cè)試數(shù)是否足夠滿足當(dāng)天使用。二、室內(nèi)質(zhì)控分析室內(nèi)質(zhì)控（internalqualitycontrol，IQC）是各實(shí)驗(yàn)室為了監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)本室工作質(zhì)量，以決定常規(guī)檢驗(yàn)報(bào)告能否發(fā)出所采取的一系列檢查、控制手段，主要目的是檢測(cè)和控制本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作的精密度，以提高本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作中批間和日間樣本檢測(cè)結(jié)果的一致性。二、室內(nèi)質(zhì)控分析1．設(shè)定均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）（1）質(zhì)控圖暫定均值和標(biāo)準(zhǔn)差的建立（2）常用均值和標(biāo)準(zhǔn)差的建立以最初計(jì)算暫定均值和標(biāo)準(zhǔn)差的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)和3～5個(gè)月在控?cái)?shù)據(jù)匯集的所有數(shù)據(jù)累積計(jì)算結(jié)果作為質(zhì)控品有效期內(nèi)的常用均值和標(biāo)準(zhǔn)差，并以此作為該批次質(zhì)控品的室內(nèi)質(zhì)控圖的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。二、室內(nèi)質(zhì)控分析

2．失控的處理程序操作失誤，試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品失效，儀器性能不良，以及采用太小的質(zhì)控限范圍和不恰當(dāng)?shù)馁|(zhì)控規(guī)則等等，都將導(dǎo)致某批次質(zhì)控品失控。操作人員應(yīng)記錄失控結(jié)果和違背的質(zhì)控規(guī)則，然后分析和查找失控原因。二、室內(nèi)質(zhì)控分析分析失控原因及其處理的步驟為：①重新測(cè)定同一質(zhì)控品，能查出人為誤差和偶然誤差。認(rèn)真、規(guī)范操作后結(jié)果在控，說(shuō)明為這一類誤差。②新開(kāi)一瓶質(zhì)控品重測(cè)失控項(xiàng)目，如果正常，說(shuō)明原來(lái)那瓶可能過(guò)期，或保存不當(dāng)變質(zhì)或被污染。二、室內(nèi)質(zhì)控分析③進(jìn)行儀器維護(hù)或更換試劑，重測(cè)失控項(xiàng)目，如果在控，說(shuō)明是試劑質(zhì)量問(wèn)題。要注意有時(shí)候僅僅是試劑位置放錯(cuò)。④用新的校準(zhǔn)品分析儀，再測(cè)失控項(xiàng)目，排除校準(zhǔn)品的原因。⑤若所有的工作都做了，仍然失控，可能是更復(fù)雜的原因，只能聯(lián)系儀器廠商提供技術(shù)支援。

二、室內(nèi)質(zhì)控分析1253．特殊質(zhì)控項(xiàng)目的處理方法

某些不是每天開(kāi)展的項(xiàng)目，20次測(cè)定完成之前有無(wú)失控難以發(fā)現(xiàn)，需要有一個(gè)能及時(shí)反映檢測(cè)過(guò)程是否在控的方法。

“即刻性”質(zhì)控法即Crubbs氏法：連續(xù)測(cè)定三次，計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差，再計(jì)算上限值=（最大值－）/s和下限=（－最小值）/s，二者在規(guī)定的范圍內(nèi)即判斷在控，如果發(fā)現(xiàn)失控，應(yīng)去掉該數(shù)據(jù)，再重新測(cè)定。三、樣本檢測(cè)

1．項(xiàng)目錄入直接上機(jī)，生化分析儀安裝有讀碼器，通過(guò)條形碼所攜帶的患者信息自動(dòng)識(shí)別臨床醫(yī)生申請(qǐng)的檢驗(yàn)項(xiàng)目。

2．樣本上機(jī)及測(cè)定將樣本按編號(hào)順序依次插入樣本架，如果采用條形碼可隨意放置，但注意條形碼不能遮蔽和污染。三、樣本檢測(cè)

3．急診檢驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)室工作人員對(duì)申請(qǐng)單或樣品管上標(biāo)記有“緊急”或“急”字樣的樣本應(yīng)在核收、登記、檢驗(yàn)和報(bào)告的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行優(yōu)先處理，盡可能縮短樣本周轉(zhuǎn)時(shí)間（turnaroundtime，TAT），盡快發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告，并及時(shí)通知臨床醫(yī)護(hù)人員領(lǐng)取報(bào)告。三、樣本檢測(cè)

4．過(guò)程監(jiān)控

在分析儀運(yùn)行過(guò)程中，隨時(shí)關(guān)注儀器狀態(tài)，注意有沒(méi)有出現(xiàn)報(bào)警、突然中斷檢測(cè)等情況。熟悉儀器各種警示符號(hào)的含義與作用，利用警示符提高發(fā)現(xiàn)問(wèn)題和解決問(wèn)題的效率。四、檢驗(yàn)報(bào)告審核審核的內(nèi)容包括：1．內(nèi)容的完整性被檢者和申請(qǐng)者信息資料是否完整，有無(wú)漏項(xiàng)和錯(cuò)檢。2．?dāng)?shù)據(jù)的有效性生化分析儀均以數(shù)據(jù)報(bào)告檢驗(yàn)結(jié)果，但不是所有的數(shù)據(jù)都是合理有效的。四、檢驗(yàn)報(bào)告審核3．結(jié)果的符合性審查檢驗(yàn)結(jié)果與申請(qǐng)目的和臨床診斷是否相符，與被檢者以往的檢驗(yàn)結(jié)果是否吻合，有協(xié)同性的指標(biāo)之間（如總膽紅素和直接膽紅素）、同類指標(biāo)之間（如LDL-C與ApoB100）結(jié)果是否一致。四、檢驗(yàn)報(bào)告審核4．結(jié)果的正確性

系統(tǒng)一般設(shè)置有高于（↑）或低于（↓）參考區(qū)間的標(biāo)識(shí)，對(duì)明顯異常的結(jié)果，要查找本項(xiàng)目的歷史記錄，或與本項(xiàng)目相關(guān)的其他檢驗(yàn)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果，判斷是否相符。5．報(bào)告的時(shí)效性

注意檢驗(yàn)報(bào)告的時(shí)效性。五、檢驗(yàn)危急值

危急值（criticalvalues）是指某項(xiàng)或某類檢驗(yàn)結(jié)果異常升高或降低，一旦出現(xiàn)這樣的檢驗(yàn)結(jié)果，表明患者可能正處于有生命危險(xiǎn)的邊緣狀態(tài)，需要立刻報(bào)告給臨床醫(yī)生，以便其立刻采取相應(yīng)的治療措施，否則將會(huì)因?yàn)殄e(cuò)過(guò)最佳的治療時(shí)機(jī)而使患者的生命安全受到威脅。五、檢驗(yàn)危急值1．危急值項(xiàng)目

由于