常見病原微生物的檢測

常見病原微生物的檢測第一頁，共三十六頁，2022年，8月28日第一節(jié)禽流感病毒禽流感是禽流行性感冒（Avian

Influenza，AI）的簡稱，這是一種由甲型流感病毒的一種亞型引起的傳染性疾病綜合征，被國際獸疫局定為Ａ類傳染病，又稱真性雞瘟或歐洲雞瘟。第二頁，共三十六頁，2022年，8月28日一、生物學(xué)特性1、形態(tài)學(xué)特點(diǎn)禽流感病毒是正粘病毒，流感病毒屬的一個成員。禽流感病毒具有A型抗原,屬于A型流感病毒,列為禽流感病毒類。本病毒顆粒呈球形、桿狀或長絲狀,為多形性。其直徑為80－120nm,表面有一層棒狀和蘑菇狀的纖突，有囊膜,囊膜下面有一層膜蛋白,緊緊地包裹著呈螺旋狀對稱的核衣殼。第三頁，共三十六頁，2022年，8月28日2、禽流感病毒的分型流感病毒分為三個不同的抗原型,即A、B、C三型。其中B、C兩型僅能對人致病,A型可對人、豬、馬和禽致病。依據(jù)病毒表面的兩種糖蛋白血凝素〈HA〉和神經(jīng)氨酸酶〈NA〉可將A型流感病毒分成若干亞型。目前已有15種HA和9種NA。第四頁，共三十六頁，2022年，8月28日

3、抵抗力對熱的抵抗力較低，60℃10分鐘，70℃2分鐘即可致弱，普通消毒劑能很快將它殺死。低溫凍干或甘油保存可使病毒存活多年。第五頁，共三十六頁，2022年，8月28日4、流行病學(xué)禽流感在家禽中以雞和火雞及某些野禽的易感性最高，并呈急性致死性傳染病。鴨、鵝及其它水禽類的易感性較差，多為隱性感染或帶毒，有時也能大批死亡。鴿子可帶毒，但很少自然發(fā)病。第六頁，共三十六頁，2022年，8月28日5、臨床癥狀和病理變化禽流感的癥狀極為復(fù)雜.根據(jù)禽類的種類〈雞、火雞、鴨、鵝及野鳥等〉以及病毒的亞型類別的不同，表現(xiàn)各種各樣的變化：有最急性、急性、亞急性及隱性感染等。潛伏期一般較短，通常為4－5天，體溫急劇上升至43.3－，精神沉郁、拒食、病雞很快陷于昏睡狀態(tài)，有些頸部出現(xiàn)向后扭轉(zhuǎn)的神經(jīng)癥狀。病雞多呈急性死亡，有的也可能出現(xiàn)呼吸道癥狀，咳嗽、打噴嚏，氣管出現(xiàn)咯音，流淚等癥狀，羽毛蓬松，產(chǎn)蛋率下降，死亡率高低不等。第七頁，共三十六頁，2022年，8月28日二、診斷

1、病原的分離病原的分離和鑒定可以從活體或尸體分離病毒。用棉拭子法?？蓮幕铙w的氣管和泄殖腔中分離到病毒，可用不同大小的棉拭子擦取氣管或泄殖腔，然后將拭子放入滅菌的保存液〈25－50%甘油鹽水、肉湯或1000u/ml青霉素和10mg/mL鏈霉素的細(xì)胞維持液〉中。病料的采取時間很重要,一般在感染初期或發(fā)病急性期采取。如轉(zhuǎn)為后期則因機(jī)體已形成足夠的抗體而不易分離到病毒.第八頁，共三十六頁，2022年，8月28日2、病毒分離通常用雞胚來進(jìn)行。接種9－10日齡雞胚尿囊腔，繼續(xù)孵育48－72h。如材料中含有病毒時，則接種48h雞胚死亡，但在多數(shù)情況下初代分離時雞胚多不死，為此需將經(jīng)72h未死的雞胚置冰箱內(nèi)凍死后，收集尿囊液作第二代接種。如第二代接種的雞胚仍不死亡，即可判定分離病毒為陰性。第九頁，共三十六頁，2022年，8月28日三、介紹高致病性禽流感的其他知識鑒定高致病性禽流感的標(biāo)準(zhǔn):

最近國際上評價禽流感病毒致病力的經(jīng)典方法是接種易感雞。按照國際標(biāo)準(zhǔn)，能引起接種雞死亡75％以上的分離株，是高致病性毒株。盡管接種雞是確定致病的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”，但它不能反應(yīng)致死率小于75%的H5或H7亞型病毒的潛在致病力。因此0IE(國際獸疫局〉根據(jù)科學(xué)家的建議,推出新鑒定標(biāo)準(zhǔn)。

1任何分離到A型流感病毒，用0.2mL1:10稀釋的無菌尿囊液靜脈或肌肉注射8只4－8周齡易感雞,10天內(nèi)的死亡率不低于75%。

2.對所有低致病的H5、H7毒株,血凝素切割位點(diǎn)的氨基酸序列與高致病性禽流感病毒一致。

3.H5、H7以外的A型流感病毒,可以致死1－5只雞,在缺乏胰蛋白酶的情況下,能在細(xì)胞上生長形成蝕斑。

第十頁，共三十六頁，2022年，8月28日禽流感的傳播途徑是什么？禽流感的傳播有病禽和健康禽直接接觸和病毒污染物間接接觸兩種。禽流感病毒存在于病禽和感染禽的消化道、呼吸道和禽體臟器組織中。因此病毒可隨眼、鼻、口腔分泌物及糞便排出體外，含禽病毒的分泌物、糞便、死禽尸體污染的任何物體，如飼料、飲水、雞舍、空氣、籠具、飼養(yǎng)管理用具，運(yùn)輸車輛、昆蟲以及各種攜帶病毒的鳥類等均可機(jī)械性傳播。健康禽通過呼吸道和消化道感染，引起發(fā)病。第十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日如何防范禽流感

禽流感被國際獸疫局定為Ａ類傳染病，且變異后的病毒能威脅人類健康，但各國專家們說，及時、適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施可以使人類避免感染。

1、避免直接接觸病禽及其排泄物、分泌物等能有效防止感染病毒。

2、飼養(yǎng)員、屠宰工人等經(jīng)常與活禽密切接觸的人，必須做好保護(hù)工作，包括穿防護(hù)服、佩戴防護(hù)用具、及時接種流感疫苗、工作前后徹底消毒等。3、注重自身健康、保持良好的免疫力也是避免感染禽流感病毒的有效措施。4、不要去疫區(qū)旅游。5、食用烹熟的家禽肉、蛋不會傳染禽流感。第十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日禽流感與其他流感有什么關(guān)系？除禽流感以外，常見的流感還有人流感、馬流感和豬流感等。禽流感與人流感和人類健康的關(guān)系非常密切。由于豬與人的種間差異較小，禽流感病毒可以在中間宿主(豬)體內(nèi)與人流感病毒雜交，并產(chǎn)生能感染人的新的流感病毒。第十三頁，共三十六頁，2022年，8月28日禽流感病毒為何消滅不了？流感病毒為了生存而不斷發(fā)生變異，以逃脫動物產(chǎn)生的特異性抵抗力。人們?yōu)榱祟A(yù)防禽流感也研制出了各種疫苗。但機(jī)體在產(chǎn)生特異性抗體后，病毒為逃脫機(jī)體的撲殺而不斷地發(fā)生著變異，這樣原有的抗體即失去作用，病毒就可使動物重新發(fā)病。因此就目前的防疫技術(shù)和手段而言，禽流感病毒是消滅不了的。第十四頁，共三十六頁，2022年，8月28日第二節(jié)瘋牛病病毒第十五頁，共三十六頁，2022年，8月28日一、認(rèn)識瘋牛病

牛海綿狀腦?。˙ovinespongiformencephalopathy,BSE），又稱瘋牛病，是一種侵犯牛中樞神經(jīng)系統(tǒng)的慢性的致命性疾病，由一種非常規(guī)的病毒——朊病毒（Prion）引起的一種亞急性海綿狀腦病，這類病還包括綿羊的搔癢病、人的克-雅氏?。–reutzfeldt-JakobSyndrome,CJD）（又稱早老癡呆癥）、庫魯病以及最近發(fā)現(xiàn)的致死性家庭性失眠癥等等。共同特征是：生物體的認(rèn)知和運(yùn)動功能嚴(yán)重衰退直至死亡。其中人的克-雅氏病是一種罕見的主要發(fā)生在50-70歲的可傳播的腦病，產(chǎn)生的危害極大。第十六頁，共三十六頁，2022年，8月28日二、認(rèn)識朊病毒

朊病毒是一類非正常的病毒，它不含有通常病毒所含有的核酸，而是一種不含核酸僅有蛋白質(zhì)的蛋白感染因子。第十七頁，共三十六頁，2022年，8月28日對蛋白酶具有抗性，易溶于去污劑、有致病力和不誘發(fā)抗體等特性；朊病毒顆粒耐高溫，即使加熱到360℃仍有感染力，植物油的沸點(diǎn)（160℃一170℃）也不足以滅活，耐甲醛、強(qiáng)堿；朊病毒顆粒對一些理化因素的抵抗力之強(qiáng)，大大高于已知的各類微生物和寄生蟲，其傳染性強(qiáng)、危害性大的特性極不利于人類和動物的健康。法國專家發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致瘋牛病等疾病的朊病毒從一類動物傳染給另一類動物后，即這種病毒跨物種傳播后，其毒性更強(qiáng)，潛伏期更短。

第十八頁，共三十六頁，2022年，8月28日三、癥狀

臨床表現(xiàn)為腦組織的海綿體化、空泡化，星形膠質(zhì)細(xì)胞和微小膠質(zhì)細(xì)胞的形成以及致病型蛋白積累，無免疫反應(yīng)。

病原體通過血液進(jìn)入人的大腦，將人的腦組織變成海綿狀，如同糨糊，完全失去功能。

受感染的人會出現(xiàn)睡眠紊亂、失語癥、肌肉萎縮和進(jìn)行性癡呆等癥狀，并且會在發(fā)病的一年內(nèi)死亡。該病有常染色體家族遺傳傾向，并且有一個新的克雅氏病的報道（該病與牛海綿狀腦病有潛在的聯(lián)系）。此病的病理學(xué)特征包括以小腦和大腦皮層為主的海綿樣變性和朊病毒的出現(xiàn)。

第十九頁，共三十六頁，2022年，8月28日四、瘋牛病的傳染與防治

牛的感染過程通常是：被瘋牛病病原體感染的肉和骨髓制成的飼料被牛食用后，經(jīng)胃腸消化吸收，經(jīng)過血液到大腦，破壞大腦，使失去功能呈海綿狀，導(dǎo)致瘋牛病。

第二十頁，共三十六頁，2022年，8月28日人類感染通常是因?yàn)橄旅鎺讉€因素：

1、食用感染了瘋牛病的牛肉及其制品也會導(dǎo)致感染，特別是從脊椎剔下的肉（一般德國牛肉香腸都是用這種肉制成）；

2、某些化妝品除了使用植物原料之外，也有使用動物原料的成分，所以化妝品也有可能含有瘋牛病病毒（化妝品所使用的牛羊器官或組織成分有：胎盤素、羊水、膠原蛋白、腦糖）；

3、而有一些科學(xué)家認(rèn)為“瘋牛病”在人類變異成“克-雅氏病”的病因，不是因?yàn)槌粤烁腥警偱２〉呐Ｈ?，而是環(huán)境污染直接造成的。認(rèn)為環(huán)境中超標(biāo)的金屬錳含量可能是“瘋牛病”和“克-雅氏病”的病因。

第二十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日第三節(jié)布魯氏桿菌一、生物學(xué)性狀

1、形態(tài)染色本菌屬初次分離培養(yǎng)時多呈小球桿狀，毒力菌株有莢膜，經(jīng)傳代培養(yǎng)漸呈桿狀，革蘭氏染色陰性。第二十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日2、培養(yǎng)特性本菌為嚴(yán)格需氧菌。牛布氏桿菌在初次分離時，需在5～10%CO2環(huán)境中才能生長，最適溫度37℃，最適的pH6.6～7.1,營養(yǎng)要求高，生長時需硫胺素，煙草酸和生物素，泛酸鈣等，實(shí)驗(yàn)室常用肝浸液培養(yǎng)基或改良厚氏培養(yǎng)基。此菌生緩慢，培養(yǎng)48小時后才出現(xiàn)透明的小菌落，雞胚培養(yǎng)也能生長。

第二十三頁，共三十六頁，2022年，8月28日3、抵抗力在自然界中抵抗力較強(qiáng)，在病畜的臟器和分泌物中，一般能存活4個月左右，在食品中約能生存2個月。對低溫的抵抗力也強(qiáng)，對熱和消毒劑抵抗力弱。對鏈霉素、氯霉素和四環(huán)素等均敏感。

第二十四頁，共三十六頁，2022年，8月28日二、致病性和免疫性本菌侵入人體后，被吞噬細(xì)胞吞噬，由于本菌具有莢膜，能抵抗吞噬細(xì)胞的吞噬消毀，并能在該細(xì)胞內(nèi)增殖。反復(fù)出現(xiàn)菌血癥。由于內(nèi)毒素的作用，病人出現(xiàn)發(fā)熱、無力等中毒癥狀，血流中細(xì)菌逐步消失，體溫也逐漸消退。細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)繁殖至一定程度時，再次進(jìn)入血流又出現(xiàn)菌血癥，體溫再次上升，反復(fù)呈波浪熱型。本菌多為細(xì)胞內(nèi)寄生，治療難于徹底，易轉(zhuǎn)為慢性及反復(fù)發(fā)作，在全身各處引起遷徒性病變。第二十五頁，共三十六頁，2022年，8月28日三、主要癥狀

人感染布氏桿菌較家畜嚴(yán)重，病情復(fù)雜，表現(xiàn)乏力，全身軟弱，食欲不振，失眠，咳嗽，有白色痰，可聽到肺部干鳴，多呈波浪熱，也有稽留熱、不規(guī)則熱或不發(fā)熱。盜汗或大汗，一個或多個關(guān)節(jié)發(fā)生無紅腫熱的疼痛，肌肉酸痛，應(yīng)用一般鎮(zhèn)痛藥不能緩解，由于關(guān)節(jié)和肌肉疼痛難忍，即使不發(fā)燒也不能勞動，成為能吃不能活懶漢，故該病又被稱作"懶漢病"。病灶發(fā)生在生殖器官，影響生育，嚴(yán)重者可引起死亡。家畜患病沒有治療價值。應(yīng)全部淘汰，消滅傳染源。第二十六頁，共三十六頁，2022年，8月28日四、微生物學(xué)檢驗(yàn)本菌傳染性大，要注意防止實(shí)驗(yàn)室污染。（一）分離培養(yǎng)急性期采集血液，慢性期采取骨髓，接種于雙相肝浸液培養(yǎng)基（一半斜面，一半液體）置37℃10%CO2環(huán)境中培養(yǎng)，每隔2天檢查一次，如無細(xì)菌生長則搖蕩培養(yǎng)基，使液體浸過斜面上，有細(xì)菌生長，可依鑒定項(xiàng)目確定是否為布氏桿菌。經(jīng)一月培養(yǎng)無細(xì)菌生長，可報告陰性。

第二十七頁，共三十六頁，2022年，8月28日（二）血清學(xué)檢查通常作凝集試驗(yàn)，判定凝集效價1：50可疑，1：100以上為陽性。效價增高4倍以上時，更有診斷價值。第二十八頁，共三十六頁，2022年，8月28日第四節(jié)炭疽桿菌炭疽桿菌（Bacillusanthraci）屬于需氧芽胞桿菌屬，能引起羊、牛、馬等動物及人類的炭疽病。炭疽桿菌曾被帝國主義作為致死戰(zhàn)劑之一。平時，牧民、農(nóng)民、皮毛和屠宰工作者易受感染。皮膚炭疽在我國各地還有散在發(fā)生，不能放松警惕。第二十九頁，共三十六頁，2022年，8月28日一、生物學(xué)性狀（一）形態(tài)染色炭疽桿菌菌體粗大。排列似竹節(jié)狀，無鞭毛，無動力，革蘭氏染色陽性，本菌在氧氣充足，溫度適宜（25～30℃）的條件下易形成芽胞。在活體或未經(jīng)解剖的尸體內(nèi)，則不能形成芽胞。芽胞呈橢圓形，位于菌體中央，其寬度小于菌體的寬度。形成莢膜是毒性特征。炭疽桿菌受低濃度青霉素作用，菌體可腫大形成園珠，稱為“串珠反應(yīng)”。這也是炭疽桿菌特有的反應(yīng)。第三十頁，共三十六頁，2022年，8月28日（二）培養(yǎng)特性1、本菌專性需氧，在普通培養(yǎng)基中易繁殖。2、最適溫度為37℃，最適pH為7.2～7.43、在瓊脂平板培養(yǎng)24小時,粗糙菌落。菌落呈毛玻璃狀，邊緣不整齊，呈卷發(fā)狀，有一個或數(shù)個小尾突起，這是本菌向外伸延繁殖所致4、在5～10%綿羊血液瓊脂平板上，菌落周圍無明顯的溶血環(huán)，但培養(yǎng)較久后可出現(xiàn)輕度溶血。菌落有粘性，用接種針鉤取可拉成絲，稱為“拉絲”現(xiàn)象。5、在普通肉湯培養(yǎng)18～24小時，管底有絮狀沉淀生長，無菌膜，菌液清亮。有毒株在碳酸氫鈉平板，20%CO2培養(yǎng)下，形成粘液狀菌落（有莢膜），而無毒株則為粗糙狀。第三十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日（三）抵抗力繁殖體抵抗力不強(qiáng)，易被一般消毒劑殺滅，而芽胞抵抗力強(qiáng)，在干燥的室溫環(huán)境中可存活數(shù)十年，在皮毛中可存活數(shù)年。牧場一旦被污染，芽胞可存活數(shù)年至數(shù)十年。煮沸10分鐘或干熱140℃3小時可將芽胞殺死。炭疽芽胞對碘特別敏感，對青霉素、先鋒霉素、鏈霉素、卡那霉素等高度敏感。第三十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日二、致病性與免疫性

（一）致病性人類主要通過工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)而感染。機(jī)體抵抗力降低時，接觸污染物品可發(fā)生下列疾?。?．皮膚炭疽最常見，多發(fā)生于屠宰、制革或毛刷工人及飼養(yǎng)員。本菌由體表破損處進(jìn)入體內(nèi)，開始在入侵處形成水癤、水皰、膿皰、中央部呈黑色壞死，周圍有浸潤水腫、如不及時治療，細(xì)菌可進(jìn)一步侵入局部淋巴結(jié)或侵入血流，引起敗血癥死亡