五磨飲合四逆散配方顆粒與傳統(tǒng)合煎劑的定性定量比較 3800字

五磨飲合四逆散配方顆粒與傳統(tǒng)合煎劑的定性定量比較3800字【摘要】目的:對(duì)五磨飲合四逆散配方顆粒和傳統(tǒng)合煎劑進(jìn)行定性定量比擬。辦法:采用薄層層析(TLC)進(jìn)行定性比擬和高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定芍藥苷的含量。結(jié)果:TLC結(jié)果顯示，配方顆粒與合煎劑的化學(xué)成分種類相似，但合煎劑的斑點(diǎn)比配方顆粒的斑點(diǎn)更明顯;HPLC研究說明，芍藥苷在0.0355～0.426mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9999)，平均加樣回收率為100.49%，RSD=1.07%(n=5)，配方顆粒中芍藥苷含量約為合煎劑的95%。結(jié)論:傳統(tǒng)合煎劑與配方顆粒兩者的化學(xué)成分根本相同，但芍藥苷含量略有差別。

【關(guān)鍵詞】五磨飲合四逆散;配方顆粒;芍藥苷;HPLC;薄層層析;定性;定量

五磨飲合四逆散是五磨飲子和四逆散兩個(gè)方劑的合方。五磨飲子首見于清《汪昂?醫(yī)方集解》，由沉香、木香、檳榔、枳實(shí)、烏藥5味中藥組成，成效為破滯降逆，“治暴怒氣厥卒死〞[1]。四逆散出自?傷寒論》，由柴胡、白芍、枳實(shí)、甘草組成，用于治療氣郁證，四肢厥逆[2]。五磨飲合四逆散是在這兩個(gè)方劑的根底上加減，由沉香、烏藥、木香、枳殼、柴胡、白芍、甘草、薤白、黃連以及肉桂10味中藥組成的合方，具有行氣理氣、和表解里、疏肝理脾等成效[3]。

中藥配方顆粒是運(yùn)用現(xiàn)代化科學(xué)技術(shù)將傳統(tǒng)中藥飲片分別提取、濃縮、枯燥成的顆粒劑，使用時(shí)按處方劑量取各味配方顆粒，直接加熱水溶解后飲用，具有不需煎煮、方便、快捷、平安、衛(wèi)生等特點(diǎn)，更能適應(yīng)現(xiàn)代快節(jié)奏的生活方式和臨床應(yīng)用的需要[4]。由于配方顆粒與傳統(tǒng)煎劑的水煎方式不同(前者為分煎，而后者為合煎)，可能存在提取成分的差別。為了比擬兩者之間的異同，本實(shí)驗(yàn)對(duì)五磨飲合四逆散的配方顆粒與合煎劑進(jìn)行了薄層層析(TLC)定性比擬和芍藥苷高效液相色譜(HPLC)定量比擬?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)辦法與結(jié)果報(bào)道如下。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1儀器

LC-6A高效液相色譜儀(日本島津公司);BS224S電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);AS3120A超聲波清洗器;LXJ-84-01離心機(jī)(北京醫(yī)療儀器修理廠)。

1.2試藥

芍藥苷對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110736，規(guī)格：95%;中藥飲片與配方顆粒由深圳三九現(xiàn)代中藥有限公司提供，根據(jù)生產(chǎn)記錄，中藥飲片為同批次配方顆粒生產(chǎn)原材料;乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

2辦法與結(jié)果

2.1薄層層析定性比擬

2.1.1供試品溶液的制備

按日處方量稱取藥材，加10倍量水浸泡30min，煎煮20min，濾過;藥渣再參加10倍量水，煎煮20min，濾過;合并兩次濾液，減壓濃縮至400mL，即得合煎劑母液。量取母液50mL，用石油醚(30～60℃)萃取2次，每次25mL，分取、合并石油醚層，減壓濃縮至干。殘留物用2mL甲醇溶解即得供試液A1。石油醚萃取后的水層，揮去殘留的石油醚后，再用水飽和的正丁醇萃取2次，每次25mL，分取、合并正丁醇層，減壓濃縮至干，殘留物用2mL甲醇溶解作為供試液B1。

按日處方量取相應(yīng)配方顆粒，參加400mL沸水溶解，作為配方顆粒母液。量取該母液50mL，下列按合煎劑供試液制備辦法同樣操作，分別制成配方顆粒供試液A2，B2。

2.1.2TLC比擬分析

分別取供試液A1和A2各100mL，點(diǎn)樣于同一硅膠薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(7∶3)為展開劑，展開約15cm后，取出，晾干，在紫外燈(265nm)察看斑點(diǎn)的數(shù)量及熒光的強(qiáng)弱;然后噴10%硫酸乙醇液，加熱至顯色，日光下察看斑點(diǎn)的數(shù)量及色澤的深淺。

另分別取供試液B1和B2各40mL，點(diǎn)樣于同一硅膠薄層板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)下層為展開劑，展開約15cm后，取出晾干，噴10%硫酸乙醇液，加熱至顯色。日光下察看斑點(diǎn)的數(shù)量及色澤的深淺。

2.1.3結(jié)果

供試液A1和A2的TLC在紫外燈(265nm)下顯示，兩者的熒光斑點(diǎn)數(shù)量根本一致，但供試液A1的斑點(diǎn)比供試液A2的斑點(diǎn)更明顯;噴10%硫酸乙醇液加熱顯色后，也顯示了相同的結(jié)果;供試液B1和B2的TLC硫酸顯色后，兩者的斑點(diǎn)數(shù)量根本一致，但供試液B1的斑點(diǎn)比供試液B2的斑點(diǎn)更明顯。

2.2芍藥苷含量測(cè)定

2.2.1色譜條件

色譜柱：Intersil-ODS色譜柱(4.6mm×150mm，5mm);流動(dòng)相：乙腈-水(15∶85);檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm;流速：1mL/min;柱溫：室溫。

2.2.2供試品溶液的制備精密量取“2.1〞項(xiàng)下合煎劑母液25mL，減壓濃縮至干后，精密參加70%乙醇25mL，稱質(zhì)量，超聲波震蕩20min，加溶劑補(bǔ)足質(zhì)量，離心(4000r/min)10min，精密量取上清液5mL，定容至25mL，作為合煎劑供試品溶液。另精密量取“2.1.1〞項(xiàng)下配方顆粒母液25mL，按合煎劑供試液制備辦法同樣操作，制成配方顆粒供試品溶液。

2.2.3對(duì)照品溶液的制備

精密稱定芍藥苷對(duì)照品0.0071g，用50%甲醇配制成0.0355mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.4規(guī)范曲線與線性關(guān)系考察

按“2.2.1〞的色譜條件，分別精密吸取對(duì)照品溶液1、2、4、8、12mL，進(jìn)樣分析，以芍藥苷的絕對(duì)進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制規(guī)范曲線。回歸方程為：

Y=1759.1X-6453.4(r=0.9999)

結(jié)果說明芍藥苷在0.0355～0.4260mg范圍的線性關(guān)系良好。

2.2.5陰性實(shí)驗(yàn)

按日處方量取除白芍配方顆粒以外的其他顆粒，按“2.2.2〞項(xiàng)下辦法制得陰性對(duì)照溶液，精密吸取陰性對(duì)照溶液10mL，按“2.2.1〞的色譜條件進(jìn)行分析。陰性對(duì)照溶液在芍藥苷色譜峰保存時(shí)間附近未見干擾峰，表明所確定的色譜條件可以用于芍藥苷的含量測(cè)定。對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液的HPLC色譜圖見圖1。

2.2.6精密度試驗(yàn)

精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10mL，測(cè)定峰面積，并計(jì)算其RSD為0.67%(n=6)，說明儀器精密度良好。

2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液10mL，間隔2h進(jìn)樣1次，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積值，計(jì)算其RSD為1.34%(n=5)，說明芍藥苷溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱取同一批樣品5份，按“2.2.2〞項(xiàng)下辦法制備供試品溶液，按“2.2.1〞的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算樣品中芍藥苷含量的RSD為0.67%，說明分析辦法重現(xiàn)性良好。

2.2.9加樣回收率試驗(yàn)

精密量取已知芍藥苷含量的樣品5份，等量參加對(duì)照品，按“2.2.2〞項(xiàng)下辦法制備供試品溶液，按“2.2.1〞的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.2.10樣品含量測(cè)定

按“2.2.2〞項(xiàng)下辦法制備配方顆粒和合煎劑的供試品溶液各5份，編號(hào)為1、2、3、4、5，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表2。

2.2.11結(jié)果

配方顆粒和合煎劑中均可測(cè)定芍藥苷的含量，但前者中的含量較后者低，約為后者的95%。

3討論

五磨飲合四逆散配方顆粒和合煎劑的TLC比擬結(jié)果說明，兩者的脂溶性成分(石油醚萃取液)和水溶性成分(正丁醇萃取)的種類根本相同，但合煎劑顯示斑點(diǎn)的色澤均較配方顆粒更明顯。

本實(shí)驗(yàn)成功的建立了芍藥苷含量的HPLC測(cè)定辦法。并對(duì)辦法的精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性等進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示該測(cè)定條件良好，可以用于五磨飲合四逆散配方顆粒及合煎劑中芍藥苷的含量測(cè)定。

采用所建立HPLC法分別對(duì)五磨飲合四逆散配方顆粒和合煎劑中芍藥苷的含量進(jìn)行了測(cè)定和比擬，結(jié)果顯示配方顆粒中芍藥苷的含量比合煎劑中的含量低