液相色譜檢測器的介紹-實(shí)驗(yàn)室word版本

液相色譜檢測器的介紹-實(shí)驗(yàn)室檢測器的分類1.紫外檢測器(UV)2.光電二極管陣列檢測器(PDA)3.熒光檢測器(FD)4.示差檢測器(RI)5.蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)6.納克級激光計數(shù)檢測器（NQAD）2用于HPLC的檢測器沒有任何一種單獨(dú)的檢測器可以適應(yīng)所有的液相色譜分離！HPLC檢測器可以分為：溶質(zhì)性質(zhì)檢測器（選擇型）對溶質(zhì)的物理或化學(xué)性質(zhì)響應(yīng)，一般不反應(yīng)流動相的變化（選擇型）整體性質(zhì)檢測器（通用型）不管是否有溶質(zhì)，對流動相任何物理性質(zhì)的變化作出響應(yīng)（通用型）3理想的HPLC檢測器高靈敏度；可忽略的基線噪音寬的線性范圍獨(dú)立于流動相及操作參數(shù)的響應(yīng)對壓力、溫度及流速等變化不敏感長時間操作的穩(wěn)定性低死體積非破壞性選擇性4靈敏度：信噪比靈敏度是信號與噪音的比值；即峰高與基線噪音的比值（S/N）檢測限（LOD）：S/N=3定量限（LOQ）：S/N=10好的信噪比有利于：更好的色譜峰確認(rèn)更好的定量更好地完成色譜峰純度/均一性 6:1NS5選擇液相色譜的檢測器要考慮的因素：你要分離的化合物/樣品的化學(xué)特性化學(xué)結(jié)構(gòu)、分子量及紫外光譜等等流動相的影響（溶劑、緩沖鹽改性劑等）梯度還是等度靈敏度需求是否有雙檢測的需求6紫外可見吸收檢測器紫外可見吸收檢測器是HPLC分析中最常見的檢測器，幾乎所有的液相儀器都配有這種檢測器，屬于選擇性檢測器7紫外檢測原理原理：基于被分析組分對特定波長紫外光的選擇性吸收優(yōu)點(diǎn)：1）對溫度和流速不敏感

2）可用于梯度洗脫

3）靈敏度較高，ng級檢測

4）費(fèi)用相對低廉5）易于操作，可靠性強(qiáng)缺點(diǎn)：選擇性檢測器，僅適用于測定有紫外吸收的物質(zhì)8紫外檢測的應(yīng)用大多數(shù)有機(jī)化合物有一定程度的吸光度，可以測定大多數(shù)的化合物，是目前實(shí)驗(yàn)室中使用最多的檢測器

--多數(shù)公司售出的檢測器中75%以上是吸光度檢測器（其中50%以上是紫外/可見檢測器，25%是PDA）9光電二極管陣列檢測器

（PhotoDiodeArray）

PhotoDiodeArray簡稱：PDA或DAD10原理：檢測器的接收是由一組光電二極管（數(shù)量由35-1024個不等）接收，并轉(zhuǎn)換為電信號。光電二極管的排列（數(shù)字分辨）和狹縫寬度（光學(xué)分析）決定了檢測器的全波長分析能力。光電二極管陣列檢測器原理11光電二極管陣列檢測器特點(diǎn)

一種三維水平的吸光度檢測器--采集三維譜圖兼顧紫外檢測器及可見分光光度計的信息在收集色譜圖的同時，得到光譜圖提供許多有用的功能

-色譜峰的純度鑒定，色譜峰的確認(rèn)

-可以發(fā)現(xiàn)單波長檢測時未測到的峰

-任意波長的色譜再處理

-光譜信息-光譜庫的建立檢索和擬合

12優(yōu)點(diǎn)：靈敏度比紫外檢測器高，噪音低，線性范圍寬，對流速和溫度的波動不靈敏，適用于梯度洗脫及制備色譜局限：對紫外吸收差的化合物靈敏度很低，紫外吸收大的溶劑不能做流動相13新增PDA檢測器原PDAPDA85池光路長50mm85mm池容量10uL9uL14靈敏度更高！15通信相關(guān)網(wǎng)線連接：設(shè)置相對應(yīng)IP地址35900E:PDA信號通過35900E傳送給電腦操作軟件：EzchromforShiseidoOpenLABEEPDA16熒光（Fluorescence）檢測原理

原理：發(fā)熒光的化合物吸收光（UV或VIS）使其分子達(dá)到激發(fā)態(tài)，當(dāng)其返回到基態(tài)時發(fā)射光的現(xiàn)象即熒光優(yōu)點(diǎn)：1）熒光檢測器靈敏度高,pg級檢測

2）受流速溫度變化影響較小缺點(diǎn)：1）不是所有化合物都有熒光，必要時需要衍生

2）線性范圍窄

3）衍生方法復(fù)雜

17熒光檢測器的應(yīng)用

環(huán)境中的污染物多環(huán)芳烴(PAH)，多酚，氨基甲酸酯等食品、飲料食品中的毒素；例如：黃曲霉毒素染料維生素及衍生氨基酸生物技術(shù)及制藥氨基甲酸酯類殺蟲劑黃曲霉毒素多環(huán)芳烴（PAH）維生素18示差折光（RefractiveIndex）檢測示差折光檢測器（RI）是第一個商品化的液相色譜檢測器（上世紀(jì)六十年代末、七十年代初）通常被認(rèn)為是一種通用檢測器檢測溶液中所有被溶解的溶質(zhì)－非特異性任何光學(xué)介質(zhì)的折光率都被定義為光在該介質(zhì)中與真空中的速度之比值RS19

示差折光（RI）檢測的原理原理：連續(xù)測定流通池中溶液折射率來測定試樣各組分濃度。優(yōu)點(diǎn)：通用型檢測器缺點(diǎn)：1）對溫度壓力變化敏感

2）不能用于梯度檢測

3）靈敏度低，ug級檢測

4）平衡時間長20示差檢測器的應(yīng)用示差折光檢測器是通用型檢測器,如果選擇合適的溶劑，幾乎所有的物質(zhì)都可以檢測特別適用于檢測沒有紫外吸收的化合物,例如糖類,醇類,酯類以及脂肪酸等高分子化合物GPC,GFC分析以及復(fù)雜樣品純化21蒸發(fā)光散射（ELSD）原理用氮?dú)獍蚜鲃酉啻党杉?xì)霧狀流動相的液滴通過一個預(yù)加熱的腔體后被蒸發(fā)掉蒸發(fā)的溶劑被從檢測器中除去溶質(zhì)的揮發(fā)性小于流動相，因此產(chǎn)生顆粒束與光束相交被顆粒散射的光由光電倍增管（PMT）收集PMT的輸出與溶質(zhì)的存在量呈比

例關(guān)系22ELSD－優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用領(lǐng)域通用型－比流動相揮發(fā)性小的物質(zhì)都能被檢測可以作梯度實(shí)驗(yàn)；檢測下限可到納克級水平(靈敏度大概是RI檢測器的十倍)對環(huán)境條件不敏感；可以使用有強(qiáng)紫外吸收的溶劑作流動相應(yīng)用領(lǐng)域：碳水化合物油脂及脂肪酸未衍生的氨基酸制藥行業(yè)表面活性劑天然產(chǎn)物23ELSD－缺點(diǎn)不能使用不揮發(fā)性的流動相（例如：磷酸鹽）要求使用霧化氣源（典型的是氮?dú)饣蚩諝猓┎煌纳V條件下霧化及除溶劑的參數(shù)需要重新優(yōu)化破壞性技術(shù)蒸發(fā)出的溶劑要引到戶外或通風(fēng)櫥里對揮發(fā)性化合物的檢測不理想一般得到的是非線性校正曲線某些化合物的檢測靈敏度不如其他檢測器24Corona電噴霧檢測器（Corona?CAD?：Corona?ChargedAerosolDetector?）

加不揮發(fā)性物質(zhì)的微粒子正電，檢測帶正電的粒子。所有的物質(zhì)靈敏度基本都一樣。靈敏度，比ELSD高一些。動態(tài)檢測范圍寬信號響應(yīng)一致25Corona電噴霧檢測器和蒸發(fā)光散射檢測器使用目的基本相同。價格也差不多（30-40萬RMB).不太適合對天然物質(zhì)和生物樣品的分析（選擇性不夠）。適合對化學(xué)產(chǎn)品的純度分析等，尤其是工業(yè)上的應(yīng)用。26新的通用型檢測器（NanoQuantityAnalyteDetector）納克級（水凝粒子）激光計數(shù)檢測器一般來說，選澤性和靈敏度是檢測器最重要的兩個要素。NQAD是通用型、高靈敏度檢測器，適用于幾乎所有物質(zhì)（揮發(fā)性物質(zhì)除外）的檢測。FLECDUV(PDA)MS適用于：1)沒有紫外吸收的物質(zhì)2)離子化比較難的物質(zhì)

3)沒有電化學(xué)活性的物質(zhì)

4)性質(zhì)不明的物質(zhì)等能夠檢測所有不揮發(fā)性及半揮發(fā)性物質(zhì)ng級的高靈敏度從ng到μg，寬的動態(tài)響應(yīng)范圍使用干燥空氣，更加環(huán)保操作簡便、外觀設(shè)計更加緊湊27的檢測原理?xiàng)食瞿s噴霧汽化使用空氣（或氮?dú)猓┩ㄟ^霧化器進(jìn)行噴霧。流動相和其他揮發(fā)性成分在蒸發(fā)器中汽化剩下的不揮發(fā)、難揮發(fā)物質(zhì)顆粒進(jìn)入到WCPC。在水蒸氣飽和環(huán)境下，以該顆粒為核，水分凝聚體生成，并長大到微米水平。激光計數(shù)器計數(shù)水分凝聚體。核物質(zhì)的性質(zhì)對靈敏度影響不大，信號響應(yīng)基本只與質(zhì)量濃度相關(guān)。（Water-basedCondensationParticleCounter）（水凝聚粒子計數(shù)器）28檢測凝結(jié)噴霧汽化檢測荷電噴霧汽化檢測噴霧汽化激光電散射與同類（氣溶膠型）檢測器的比較---原理

直接計數(shù)粒子CAD

檢測粒子的電荷量（電霧式檢測器）ELSD 檢測粒子造成的光散射量（蒸發(fā)光散射檢測器）29

LC上廣泛使用的各種檢測器與NQAD的比較對于沒有紫外吸收的化合物，通常使用示差折光檢測器（RI）來進(jìn)行檢測。RI的優(yōu)點(diǎn)是不需要優(yōu)化條件就可以直接進(jìn)行測定，但卻不能進(jìn)行梯度分析，靈敏度也比較低。使用質(zhì)譜(MS)可以解決這些問題，并且能夠獲得更多的信息，具有更高的選擇性，但成本也頗高。除了以上兩種方法，對于沒有紫外吸收的物質(zhì)，也可以使用蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）來進(jìn)行檢測。而NQAD與ELSD非常相似，但卻具有更高的靈敏度。各種檢測器的特長詳見下表。對無紫外吸收物質(zhì)的適用性靈敏度梯度分析檢測選擇性經(jīng)濟(jì)性UV