外周血骨髓染色體教案培訓(xùn)課件

外周血骨髓染色體教案第一篇：細胞遺傳學(xué)的基本知識：

引言：細胞遺傳學(xué)的形成和發(fā)展：1910年澳地利學(xué)者摩爾根在果蠅中發(fā)現(xiàn)了性鎖遺傳規(guī)律；1925年他又發(fā)表了《基因論》；1955年，美籍華人徐道覺首先發(fā)現(xiàn)了哺乳動物細胞低滲染色體制備法，為醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)；1970年，卡斯伯森發(fā)現(xiàn)了人類染色體的分帶技術(shù)。2外周血骨髓染色體教案基本知識1：一、細胞遺傳學(xué)時期：該時期大致是在1910—1940年，這一時期通過對遺傳學(xué)規(guī)律和染色體行為的研究，確立了遺傳的染色體學(xué)說。二、什么是染色體的行為：它是指在細胞周期中，染色體在形態(tài)和結(jié)構(gòu)方面所表現(xiàn)出的一糸列有規(guī)律性的變化。這種變化對于生物的遺傳和變異，起著很重要的作用。3外周血骨髓染色體教案基本知識2：3、染色體是細胞核內(nèi)滿載遺傳信息編碼的重要物質(zhì)，它是由DNA、組蛋白、非組蛋白和少量的RNA所組成的一種核蛋白復(fù)合體。從DNA到染色體要經(jīng)過四級結(jié)構(gòu)的構(gòu)型變化，它們分別是：核小體、螺線體、超螺線體和染色體。4外周血骨髓染色體教案基本知識3：染色體組型：即根據(jù)每種生物染色體的數(shù)目、大小和形態(tài)等特征，借助顯微照相技術(shù)，將單個細胞內(nèi)的同源染色體剪下、依次配對和分組排列，這就構(gòu)成了該個體的染色體組型或核型。由于細胞在有絲分裂的中期，其染色體的形態(tài)最為典型，故此，通常把細胞分裂的中期，作為識別染色體的個體性和研究染色體組型的最佳時期。5外周血骨髓染色體教案基本知識4：染色體帶型：染色體經(jīng)過一定程序的處理并用特定的染料染色之后，在普通在光鏡或熒光鏡下，染色體可顯示出不同深淺顏色的條紋或不同強度的熒光區(qū)帶，這種區(qū)帶就稱之為染色體帶。染色體上染色體帶的形態(tài)表現(xiàn)，就稱之為染色體帶型。這種顯示染色體帶的過程，就稱之為染色體顯帶。6外周血骨髓染色體教案

第二篇：培養(yǎng)過程中的注意事項

7外周血骨髓染色體教案2：載玻片的清洗處理

把玻片逐片用皂粉液洗刷干凈（用粗紗布刷，不要用毛刷），然后用自來水徹底沖凈后，晾干。逐片放入清洗液中浸泡24小時，取出后用自來水徹底沖凈，泡蒸餾水一天，取出放入盛有80%乙醇的容器。（帶密封蓋）內(nèi)保存?zhèn)溆?/p>

*玻片的清潔直接影響染色體鋪展、形態(tài)及背景的清晰； 玻片之間粘在一起時，密封程度高，皂液和清洗液無法 浸入，故要逐片浸入。9外周血骨髓染色體教案

注意事項（二）

細胞培養(yǎng)中的有關(guān)知識

全血中含有紅、白細胞二類，它們均是處于未分裂的間期細胞。紅細胞沒有核

無分裂能力；白細胞雖有細胞核存在，但是在外周血中已處于休止期，因此要使白細

胞從間期進入分裂期必須加刺激藥物現(xiàn)在。最常用的促使分裂的藥品是PHA，它能使

白細胞中的淋巴細胞和單核細胞轉(zhuǎn)化為具有分裂作用

的母細胞，染色體只有在細胞分

裂時才能出現(xiàn)具有一定的形態(tài)，這樣才便于我們識別。此外，染色體的形態(tài)在細胞分

裂中期時最典型的，所以在培養(yǎng)過

程中還需用秋水仙素類藥物，這種藥物可以破壞細

胞分裂過程中紡錘絲的形成，使細胞分裂停止于中期，由于秋水仙素的作用破壞了紡

錘絲的形成，造成了染色體著絲粒不能分開，但染色體的兩臂卻在S期時已復(fù)制了，這

就構(gòu)成了染色體的形態(tài)為“X”形或“∧”形，稱之為中期染色體圖形。為了便于觀察和

計數(shù)，因而在制作過程中還需采用低滲處理，低滲處理的目的在于使細

胞膨脹，細胞

膜破裂，染色體分散，這樣可便于分析10外周血骨髓染色體教案一、培養(yǎng)中應(yīng)注意的問題1：

1、

標(biāo)本中的抗凝劑:

標(biāo)本中的抗凝劑常采用的是肝素，肝素是一種多

糖，能阻止白細胞和淋巴細胞與紅細胞集結(jié)在一起而

影響培養(yǎng)的質(zhì)量，但肝素濃度太高會導(dǎo)致溶血，同時也

可抑制淋巴細胞的轉(zhuǎn)化。一般劑量是100單位肝素液

可抗凝5毫升血液。11外周血骨髓染色體教案培養(yǎng)中應(yīng)注意的問題2：培養(yǎng)基中的PH值：

培養(yǎng)基中的紅色來自成分中的酚紅，因為它的變色范圍較適合作培養(yǎng)基的酸堿度指示劑。它在PH≥7時，顏色由紅變深紫色，PH≤7時，顏色則由紅色逐漸變成黃色。外周血的培養(yǎng)液PH=7.2-7.4。另外，因酚紅含量有時有差異，使培養(yǎng)液的紅色深淺略有差異，但不影響培養(yǎng)效果。另外，在培養(yǎng)中，應(yīng)注意觀察培養(yǎng)基PH的變化。因PH變酸，將不利于細胞的生長。12外周血骨髓染色體教案培養(yǎng)中應(yīng)注意的問題3培養(yǎng)基接種時的溫度：

培養(yǎng)基接種的溫度應(yīng)預(yù)熱至此37度才好接種。若培養(yǎng)基的溫度低于4度容易造成細胞的破裂，如果低于10度往往造成細胞進于休眠狀態(tài)，影響細胞分裂周期，從而使分裂相減少。外周血和骨髓的樣品應(yīng)是越新鮮培養(yǎng)效果就越好，但我們的標(biāo)本一般都是好幾天的，所以當(dāng)一旦接到標(biāo)本后應(yīng)盡快接種并記錄每一批標(biāo)本接種的時間，這樣有利于分析有時培養(yǎng)失敗的原因。暫時不能接種的應(yīng)將添加過抗凝劑的外周血樣品放在4℃-10℃的冰箱中保存，保存期為3天左右。超過七天后接種，培養(yǎng)效果很差。13外周血骨髓染色體教案培養(yǎng)中應(yīng)注意的問題4骨髓培養(yǎng)的問題：

骨髓細胞處于生長分裂期，可以直接取樣制備染色體標(biāo)本片，為了增加細胞的分裂相數(shù)量，可在加入秋水仙素的培養(yǎng)液中作短暫的培養(yǎng)。再收集細胞制備染色體標(biāo)本片，會獲得較滿意的分裂相數(shù)目。 但是，白血病的病人往往都有可能服用過抑制白細胞分裂增殖的藥品，再加上也未按停藥后一定時間來取材，所以這類病人的骨髓樣品往往經(jīng)培養(yǎng)后，白細胞仍受到藥物的抑制而不進行分裂增殖，因此標(biāo)本片很難找到分裂相。所以應(yīng)嚴格遵守細胞計數(shù)的原則。14外周血骨髓染色體教案培養(yǎng)中應(yīng)注意的問題5最佳培養(yǎng)時間：

外周血淋巴細胞在體外培養(yǎng)中，受到培養(yǎng)液中的PHA刺激，獲得有絲分裂能力，經(jīng)過68-72小時的培養(yǎng)后，大多數(shù)淋巴細胞進行了三次分裂增殖，數(shù)目達到制備標(biāo)本片的要求。培養(yǎng)時間過短，細胞量不足，培養(yǎng)時間過長，細胞老化，營養(yǎng)耗盡，又浪費時間。實驗證明，68-72小時的培養(yǎng)，效果最為理想。15外周血骨髓染色體教案第三篇：制片中應(yīng)注意的問題16外周血骨髓染色體教案制片中應(yīng)注意的問題1：秋水仙素的濃度：

秋水仙素的濃度和處理時間的長短，對染色體的

分析都有很大的影響。秋水仙素的使用濃度范圍比較

寬，可差幾十倍之多，一般終濃度為0.2-0.5微克/毫升。

處理4-6小時。秋水仙素的濃度和處理時間的長短，對

染色體的分析都有很大的影響。秋水仙素作用時間越長，

被阻止的中期細胞越多，但染色體也會收縮，收縮過度

會影響形態(tài)。17外周血骨髓染色體教案制片中應(yīng)注意的問題2低滲處理

低滲處理的時間長短對染色體分析也有很大的影響。

過長，細胞膜往往過早破裂，染色體丟失，過短染色體

分散不佳。低滲后離心速度不能過高，過高往往會使分

裂相過早破裂，完整的分裂相減少。18外周血骨髓染色體教案制片中應(yīng)注意的問題3-11、固定液的作用：

固定 液是穩(wěn)定染色體的形態(tài)結(jié)構(gòu)，清除染色體外層物質(zhì)對染色體在玻片上展開的影響，通過更換固定液2-3次，清除紅細胞的碎片，使標(biāo)本片的背景更為清晰，廣泛使用的固定液是甲醇和冰醋酸的混合物，二者的比例是甲醇∶冰醋酸=3∶1，現(xiàn)用現(xiàn)配。每次固定時間至少為30分鐘，已固定的細胞在固定液中置冰箱4℃密封保存一個月也不會變質(zhì)。19外周血骨髓染色體教案制片中應(yīng)注意的問題3-22、加固定液的注意點：

1：甲醇和冰醋酸的質(zhì)量要好；

2：固定液要新鮮，要現(xiàn)配現(xiàn)用，配好的固定液要蓋好蓋子，這是因為：甲醇和冰醋酸都很容易揮發(fā)，揮發(fā)后會影響固定效果，另外長期吸入，冰醋酸對人體是有害的，輕者會患鼻炎，重者會誘發(fā)其他疾病。

3：加固定液的速度不能太快，要沿著管壁慢慢的加；上述三點未注意將會造成如下結(jié)果：

（1）：染色體帶很模糊，

（2）：有殘留胞漿的痕跡，使背景不清。

（3）：加固定液的速度太快，則會使染色體容易扭轉(zhuǎn)；

（4）：

如固定作用不足，染色體會出現(xiàn)毛刷狀。20外周血骨髓染色體教案制片中應(yīng)注意的問題4胰酶配制要點及使用注意點：

胰酶的配制要注意兩點：一是要充分溶解，這一過程一般會觀察到

溶液由混濁變