實驗室生物安全

實驗室生物安全當(dāng)前1頁，總共54頁。材料來源：實驗室生物安全手冊當(dāng)前2頁，總共54頁。總述一、實驗室生物安全概述二、實驗室生物安全有關(guān)的法律法規(guī)三、病原微生物風(fēng)險等級與危害等級分類四、實驗室生物安全分級五、生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求六、藥品微生物實驗室生物安全防護(hù)當(dāng)前3頁，總共54頁。實驗室生物安全概述常見術(shù)語1、實驗室生物安全：是指以實驗室為科研和工作場所時，避免危險生物因子造成實驗室人員暴露、向?qū)嶒炇彝鈹U(kuò)散并導(dǎo)致危害的綜合措施。2、生物因子

：一切微生物和生物活性物質(zhì)。3、病原體

：可使人、動物或植物致病的生物因子。當(dāng)前4頁，總共54頁。實驗室生物安全概述常見術(shù)語4、危險

：傷害發(fā)生的概率及其嚴(yán)重性的綜合。5、危險廢棄物

：有潛在生物危險、可燃、易燃、腐蝕、有毒、放射和起破壞作用的對人、環(huán)境有害的一切廢棄物。6、氣溶膠：懸浮于氣體介質(zhì)中的固態(tài)或液態(tài)微小粒子（粒徑一般為0.001-100μm）形成的相對穩(wěn)定的分散體系。當(dāng)前5頁，總共54頁。實驗室生物安全概述實驗室感染可控性：嚴(yán)格執(zhí)行生物安全有關(guān)的法律法規(guī)，加強(qiáng)和重視實驗室安全監(jiān)督管理，是可以防止和控制實驗室感染事故的發(fā)生。

具體：

領(lǐng)導(dǎo)重視：生物安全意識、態(tài)度和責(zé)任。

科學(xué)管理：條例、預(yù)案、完善、可行。

可靠硬件：設(shè)備齊全、設(shè)施過硬、完善驗證。

高素質(zhì)隊伍：培養(yǎng)、提高、堅持。

標(biāo)準(zhǔn)和程序：不斷完善、SOP。當(dāng)前6頁，總共54頁。實驗室生物安全概述實驗室生物安全屏障：當(dāng)實驗室工作人員所處理的實驗對象含有致病的微生物及其毒素時，通過使用個體防護(hù)裝置（一級屏障）、實驗室的設(shè)計建造（二級屏障）和嚴(yán)格遵從標(biāo)準(zhǔn)化的工作及操作程序（三級屏障）等綜合措施:

1、確保實驗室工作人員不受實驗對象侵染。

2、確保周圍環(huán)境不受其污染。當(dāng)前7頁，總共54頁。實驗室生物安全概述實驗室生物安全管理的要求：國家對實驗室的生物安全管理省、市對實驗室的生物安全管理從事病原微生物工作機(jī)構(gòu)對實驗室的生物安全管理單位生物安全管理委員會實驗室安全負(fù)責(zé)人實驗室安全員生物安全手冊當(dāng)前8頁，總共54頁。實驗室生物安全概述生物安全手冊：（1）個人安全防護(hù)器材使用程序（2）病原微生物實驗室的使用及管理制度（3）實驗室設(shè)施安全檢查和維護(hù)制度（4）試驗操作技術(shù)規(guī)程的論證和審批制度（5）菌（毒）種使用和保存制（6）試驗設(shè)備的安全檢測校準(zhǔn)和使用程序（7）試驗操作程序（8）緊急情況及意外事故處理和報告程序（9）污物及廢棄物處理程序當(dāng)前9頁，總共54頁。實驗室生物安全有關(guān)的法律法規(guī)1、2003年，國務(wù)院380號令《醫(yī)療廢物管理條例》2、2004年，國務(wù)院424號令《病原微生物實驗室生物安全管理條例》。3、GB19489－2004《實驗室生物安全通用要求》，已修訂為2008版，并于2009年7月1日實施。4、GB50346－2004《生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范》，已修訂為2011版，并于2011年7月1日實施當(dāng)前10頁，總共54頁。實驗室生物安全有關(guān)的法律法規(guī)5、2005年，衛(wèi)生部第45號令《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》。6、2006年，衛(wèi)生部第50號令《人間傳染的高致病性病原微生物實驗室和實驗活動生物安全審批管理辦法》。7、2006年，衛(wèi)生部《人間傳染的病原微生物名錄》8、2002年，衛(wèi)生部WS233－2002《微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通用準(zhǔn)則》。當(dāng)前11頁，總共54頁。實驗室生物安全有關(guān)的法律法規(guī)9、2003年，農(nóng)業(yè)部第302號令《獸醫(yī)實驗室生物安全管理規(guī)范》10、2005年，農(nóng)業(yè)部第52號令《高致病性動物病原微生物實驗室生物安全管理審批辦法。11、2005年，農(nóng)業(yè)部第53號令《動物病原微生物分類名錄》12、2005年，農(nóng)業(yè)部第503號公告《高致病性動物病原微生物菌（毒）種或者樣本運(yùn)輸包裝規(guī)范》。13、國家食品藥品監(jiān)督管理局《生物安全柜》YY0569－2006，已修訂為2011版，于2013年6月1日執(zhí)行。當(dāng)前12頁，總共54頁。實驗室生物安全有關(guān)的法律法規(guī)14、2006年，國家環(huán)境保護(hù)總局第32號令《病原微生物實驗室環(huán)境安全管理辦法》。15、2011年8月，國家科技部令第15號《高等級病原微生物實驗室建設(shè)審查辦法》當(dāng)前13頁，總共54頁。實驗室生物安全有關(guān)的法律法規(guī)到目前為止，由國家、科技部、衛(wèi)生部和藥監(jiān)局、農(nóng)業(yè)部、環(huán)保部和國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局等各行政主管部門已頒布實施的與實驗室生物安全有關(guān)的法律法規(guī)、技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)大約有近20項。系統(tǒng)地規(guī)范和要求了病原微生物實驗室建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)、審批、管理、設(shè)施、安全設(shè)備、人員等要求。

主要有：1、病原微生物分類管理的要求2、實驗室分級管理的要求3、實驗室生物安全管理的要求4、高等級生物安全實驗室的系列審批要求當(dāng)前14頁，總共54頁。病原微生物風(fēng)險等級與危害等級分類1、病原微生物風(fēng)險等級分類

第一類病原微生物第二類病原微生物第三類病原微生物第四類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物當(dāng)前15頁，總共54頁。病原微生物風(fēng)險等級與危害等級分類2、病原微生物風(fēng)險等級分類依據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度將病原微生物分：一類是指能夠引起人類或者動物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。

二類是指能夠引起人類或者動物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。當(dāng)前16頁，總共54頁。病原微生物風(fēng)險等級與危害等級分類2、病原微生物風(fēng)險等級分類依據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度將病原微生物分：三類是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險有限，實驗室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。四類是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。當(dāng)前17頁，總共54頁。病原微生物風(fēng)險等級與危害等級分類3、病原微生物危害等級分類（GB19489）危害等級I（低個體危害，低群體危害）：不會導(dǎo)致健康工作者和動物致病的細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。危害等級Ⅱ(中等個體危害，有限群體危害)：能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴(yán)重危害的病原微生物。實驗室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險有限。當(dāng)前18頁，總共54頁。病原微生物風(fēng)險等級與危害等級分類3、病原微生物危害等級分類（GB19489）危害等級III（高個體危害，低群體危害）：能引起人類或動物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原微生物。危害等級Ⅳ(高個體危害，高群體危害)：能引起人類或動物非常嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與動物間傳播的病原微生物。當(dāng)前19頁，總共54頁。病原微生物風(fēng)險等級與危害等級分類4、病原微生物危害等級分級依據(jù)GB19489-2008《實驗室生物安全通用要求》，分級依據(jù)：微生物的致病性；傳播方式和宿主范圍；具有的有效預(yù)防措施；具有的有效治療措施。當(dāng)前20頁，總共54頁。實驗室生物安全分級根據(jù)所操作的生物因子的危害程度和采取的防護(hù)措施，將實驗室生物安全防護(hù)水平分為四級，一級防護(hù)水平最低，四級防護(hù)水平最高。

1、一級生物安全防護(hù)實驗室（BSL-1和ABSL-1實驗室）－基礎(chǔ)實驗室2、二級生物安全防護(hù)實驗室（BSL-2和ABSL-2實驗室）－基礎(chǔ)實驗室3、三級生物安全防護(hù)實驗室（BSL-3和ABSL-3實驗室）－防護(hù)實驗室4、四級生物安全防護(hù)實驗室

（BSL-4和ABSL-4實驗室）－最高防護(hù)實驗室當(dāng)前21頁，總共54頁。實驗室生物安全分級1、BSL－1實驗室適用于實驗對象已知對健康成年人無致病作用，對實驗室工作人員和環(huán)境的潛在危害很小。防護(hù)水平最低,普通建筑物即可。當(dāng)前22頁，總共54頁。實驗室生物安全分級2、BSL－2實驗室

2.1適用于：

實驗對象對人和環(huán)境具有中等潛在危害。如：(1)含漱液、血清和血液等樣品的診斷檢測(2)溶液、固定或用其他方法處理滅活的病毒和/或無傳染性病毒基因片段(3）常規(guī)的細(xì)菌和毒素檢測(4）能產(chǎn)生氣溶膠的樣品處理(5）臨床樣品的包裝、分裝(6）離心管和離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的封閉與開啟當(dāng)前23頁，總共54頁。實驗室生物安全分級2、BSL－2實驗室

2.2、特殊情況:（1）致病微生物氣溶膠或濺出的操作（2）處理高濃度或大容量感染性材料2.3、要求：在生物安全柜或物理抑制設(shè)備中進(jìn)行，并使用個體防護(hù)設(shè)備。當(dāng)前24頁，總共54頁。實驗室生物安全分級3、BSL－3實驗室適用于：主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素（如禽流感），通常已（可）有預(yù)防傳染的疫苗。艾滋病病毒的研究（血清學(xué)實驗除外）-------自成隔離區(qū)有出入控制或為獨(dú)立建筑物。當(dāng)前25頁，總共54頁。實驗室生物安全分級3、BSL－3實驗室設(shè)備結(jié)構(gòu)：

當(dāng)前26頁，總共54頁。實驗室生物安全分級4、BSL－4實驗室戲稱為魔鬼實驗室當(dāng)前27頁，總共54頁。實驗室生物安全分級當(dāng)前28頁，總共54頁。實驗室生物安全分級4、BSL－4實驗室當(dāng)前29頁，總共54頁。實驗室生物安全分級5、病原微生物風(fēng)險等級與生物安全分級BSL－1：第四類病原微生物BSL－2：第三類病原微生物BSL—3：第二類病原微生物BSL—4：第一類病原微生物試驗設(shè)施、設(shè)備要求應(yīng)與所開展檢測的微生物要求一致?！度碎g傳染的病原微生物名錄》（衛(wèi)生部2006）規(guī)定藥典涉及的陽性菌的活菌操作應(yīng)在BSL-2實驗室進(jìn)行當(dāng)前30頁，總共54頁。《人間傳染的病原微生物名錄》（衛(wèi)生部2006）

藥品檢驗有關(guān)的細(xì)菌危害程度

當(dāng)前31頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求1、BSL-1實驗室

(1)、應(yīng)有防止節(jié)肢動物和嚙齒動物進(jìn)入的設(shè)計。(2)、每個實驗室在靠近出口處應(yīng)設(shè)洗手池。(3)、在實驗室門口處應(yīng)設(shè)掛衣裝置，個人便裝與實驗室工作服分開設(shè)置。(4)、實驗室的墻壁、天花板和地面應(yīng)平整、易清潔、不滲水、耐化學(xué)品和消毒劑的腐蝕。地面應(yīng)防滑，不得鋪設(shè)地毯(5)、實驗臺面應(yīng)防水，耐腐蝕、耐熱。(6)、實驗室如有可開啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗。參照(7)、應(yīng)有適當(dāng)?shù)南驹O(shè)備。當(dāng)前32頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求2、BSL-2實驗室擋鼠板：進(jìn)門處。水池：門口設(shè)洗手池、感應(yīng)龍頭。門扇：可自閉、有可視窗、外開?？砷_窗：防蟲紗窗地墻頂：防滑、平整、易清潔、不滲水、耐擦拭、耐腐蝕。實驗臺：防水，耐腐蝕、耐熱。足夠空間：擺放存儲物品專用工作服；應(yīng)戴乳膠手套。II級生物安全柜

高壓蒸汽滅菌器溫度：18-28℃濕度：30-70%噪聲：≤60dB（A）照度：300LX標(biāo)示：出入及各種警示標(biāo)識當(dāng)前33頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求3、生物安全柜（BSC）(1)概念：用來保護(hù)操作者本人，實驗室環(huán)境及實驗材料，使其避免暴露于操作過程中產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設(shè)計的負(fù)壓排氣柜。(2)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)

YY0569－2005《生物安全柜》

YY0569－2011《二級生物安全柜》當(dāng)前34頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求3、生物安全柜（BSC）

（3）I級生物安全柜適用于樣品不需保護(hù)的工作當(dāng)前35頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求3、生物安全柜（BSC）

（4）Ⅱ級生物安全柜A型(B3)30%外排進(jìn)入環(huán)境30%外界空氣補(bǔ)充70%經(jīng)過濾后循環(huán)使用當(dāng)前36頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求3、生物安全柜（BSC）

（5）Ⅱ級生物安全柜B2型100%外排進(jìn)入環(huán)境100%外界空氣補(bǔ)充無循環(huán)使用的氣流當(dāng)前37頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求3、生物安全柜（BSC）

（6）Ⅱ級生物安全柜B1型70%

外排進(jìn)入環(huán)境70%

外界空氣補(bǔ)充30%

過濾后循環(huán)使用當(dāng)前38頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求3、生物安全柜（BSC）（7）Ⅱ級生物安全柜的級別差異

生物安全柜工作口平均進(jìn)風(fēng)速m/s循環(huán)風(fēng)比例（%）排風(fēng)比例（%）連接方式II級A10.38～0.517030可排到房間或套管連接處外排型A20.517030B10.513070密閉連接，硬管B20.510100密閉連接，硬管可排到房間或套管連接處當(dāng)前39頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求3、生物安全柜（BSC）（8）Ⅱ級生物安全柜防護(hù)特征比較

當(dāng)前40頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求3、生物安全柜（BSC）（9）Ⅱ級生物安全柜的選擇①Ⅱ級生物安全柜的4個級別對微生物氣溶膠的防護(hù)性能是一樣的。②正常情況下，Ⅱ級生物安全柜的使用壽命為5年，如果使用全新風(fēng)的Ⅱ級B2型生物安全柜，其使用壽命會縮短。③頻繁更換HEPA，也會嚴(yán)重影響工作。

當(dāng)前41頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求3、生物安全柜（BSC）（9）Ⅱ級生物安全柜的選擇④選擇Ⅱ級A型還是B型生物安全柜的關(guān)鍵：是取決于操作人員是否會用到揮發(fā)性的有害物質(zhì)或放射性物質(zhì)的因素來決定的，而不是病原微生物的因素。當(dāng)操作揮發(fā)性或有毒化學(xué)試劑時，不應(yīng)該使用Ⅱ級A型生物安全柜。

當(dāng)前42頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求3、生物安全柜（BSC）（9）Ⅱ級生物安全柜的選擇⑤Ⅱ級B1型生物安全柜用于操作少量揮發(fā)性化學(xué)試劑和放射性核素。⑥

Ⅱ級B2型生物安全柜是全排放型安全柜，在需要操作大量放射性核素和揮發(fā)性化學(xué)試劑時，必須使用Ⅱ級B2型生物安全柜。

當(dāng)前43頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求3、生物安全柜（BSC）（9）生物安全柜操作注意事項①將實驗器具放置于安全柜中，紫外滅菌15分鐘后，通風(fēng)10-15分鐘。②檢測氣流是否正常。③規(guī)范有序進(jìn)行試驗，即雙手緩慢進(jìn)入前面的開中，等待約1分鐘，等安全柜調(diào)整完畢后才可對樣品進(jìn)行處理。④避免手臂快速移動和頻繁進(jìn)出安全柜，以免紊亂氣流，同時避免實驗材料擋住風(fēng)口。⑤在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行操作不能進(jìn)行文字工作。

當(dāng)前44頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求3、生物安全柜（BSC）（9）生物安全柜操作注意事項⑥操作應(yīng)在安全柜的中后部進(jìn)行。⑦前送風(fēng)格柵不得被實驗材料堵住，以防干擾氣流，可能使實驗材料受到污染，人員暴露。⑧由于剩余的培養(yǎng)基可能會使微生物生長繁殖，因此在實驗結(jié)束時，包括儀器設(shè)備在內(nèi)的生物安全柜里的所有物品都應(yīng)清除表面污染，并移出安全柜。⑨實驗完畢，用合適的消毒劑清潔安全柜內(nèi)部。紫外滅菌15分鐘，通風(fēng)10-15分鐘后關(guān)閉安全柜。

當(dāng)前45頁，總共54頁。生物安全防護(hù)實驗室的設(shè)施和設(shè)備要求3、生物安全柜（BSC）（9）生物安全柜操作注意事項⑩HEPA濾器不能截留化學(xué)氣體，同時，揮發(fā)的化學(xué)品可能損壞HEPA濾器。

⑾濾器風(fēng)扇以及安全柜內(nèi)插座可能產(chǎn)生電火花，如果在安全柜中操作易燃易揮發(fā)液體易引起火災(zāi)或者爆炸。

⑿生物安全柜在移動以及更換過濾器之前，必須清除污染。⒀在使用生物安全柜時應(yīng)穿著個體防護(hù)服。

當(dāng)前46頁，總共54頁。藥品微生物實驗室生物安全防護(hù)1、基本原則⑴確保實驗操作人員的安全。⑵確保實驗操作場所和周邊環(huán)境的安全。⑶確保實驗樣品的安全（不被染污）。⑷確保實驗儀器和設(shè)備正常運(yùn)作的安全。

當(dāng)前47頁，總共54頁。藥品微生物實驗室生物安全防護(hù)2、技術(shù)措施

（1）樣品隔離技術(shù)（機(jī)械、氣幕）

（2）定向流