實驗室生物安全

實驗室生物安全當前1頁，總共54頁。材料來源：實驗室生物安全手冊當前2頁，總共54頁。總述一、實驗室生物安全概述二、實驗室生物安全有關的法律法規(guī)三、病原微生物風險等級與危害等級分類四、實驗室生物安全分級五、生物安全防護實驗室的設施和設備要求六、藥品微生物實驗室生物安全防護當前3頁，總共54頁。實驗室生物安全概述常見術語1、實驗室生物安全：是指以實驗室為科研和工作場所時，避免危險生物因子造成實驗室人員暴露、向實驗室外擴散并導致危害的綜合措施。2、生物因子

：一切微生物和生物活性物質。3、病原體

：可使人、動物或植物致病的生物因子。當前4頁，總共54頁。實驗室生物安全概述常見術語4、危險

：傷害發(fā)生的概率及其嚴重性的綜合。5、危險廢棄物

：有潛在生物危險、可燃、易燃、腐蝕、有毒、放射和起破壞作用的對人、環(huán)境有害的一切廢棄物。6、氣溶膠：懸浮于氣體介質中的固態(tài)或液態(tài)微小粒子（粒徑一般為0.001-100μm）形成的相對穩(wěn)定的分散體系。當前5頁，總共54頁。實驗室生物安全概述實驗室感染可控性：嚴格執(zhí)行生物安全有關的法律法規(guī)，加強和重視實驗室安全監(jiān)督管理，是可以防止和控制實驗室感染事故的發(fā)生。

具體：

領導重視：生物安全意識、態(tài)度和責任。

科學管理：條例、預案、完善、可行。

可靠硬件：設備齊全、設施過硬、完善驗證。

高素質隊伍：培養(yǎng)、提高、堅持。

標準和程序：不斷完善、SOP。當前6頁，總共54頁。實驗室生物安全概述實驗室生物安全屏障：當實驗室工作人員所處理的實驗對象含有致病的微生物及其毒素時，通過使用個體防護裝置（一級屏障）、實驗室的設計建造（二級屏障）和嚴格遵從標準化的工作及操作程序（三級屏障）等綜合措施:

1、確保實驗室工作人員不受實驗對象侵染。

2、確保周圍環(huán)境不受其污染。當前7頁，總共54頁。實驗室生物安全概述實驗室生物安全管理的要求：國家對實驗室的生物安全管理省、市對實驗室的生物安全管理從事病原微生物工作機構對實驗室的生物安全管理單位生物安全管理委員會實驗室安全負責人實驗室安全員生物安全手冊當前8頁，總共54頁。實驗室生物安全概述生物安全手冊：（1）個人安全防護器材使用程序（2）病原微生物實驗室的使用及管理制度（3）實驗室設施安全檢查和維護制度（4）試驗操作技術規(guī)程的論證和審批制度（5）菌（毒）種使用和保存制（6）試驗設備的安全檢測校準和使用程序（7）試驗操作程序（8）緊急情況及意外事故處理和報告程序（9）污物及廢棄物處理程序當前9頁，總共54頁。實驗室生物安全有關的法律法規(guī)1、2003年，國務院380號令《醫(yī)療廢物管理條例》2、2004年，國務院424號令《病原微生物實驗室生物安全管理條例》。3、GB19489－2004《實驗室生物安全通用要求》，已修訂為2008版，并于2009年7月1日實施。4、GB50346－2004《生物安全實驗室建筑技術規(guī)范》，已修訂為2011版，并于2011年7月1日實施當前10頁，總共54頁。實驗室生物安全有關的法律法規(guī)5、2005年，衛(wèi)生部第45號令《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》。6、2006年，衛(wèi)生部第50號令《人間傳染的高致病性病原微生物實驗室和實驗活動生物安全審批管理辦法》。7、2006年，衛(wèi)生部《人間傳染的病原微生物名錄》8、2002年，衛(wèi)生部WS233－2002《微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則》。當前11頁，總共54頁。實驗室生物安全有關的法律法規(guī)9、2003年，農業(yè)部第302號令《獸醫(yī)實驗室生物安全管理規(guī)范》10、2005年，農業(yè)部第52號令《高致病性動物病原微生物實驗室生物安全管理審批辦法。11、2005年，農業(yè)部第53號令《動物病原微生物分類名錄》12、2005年，農業(yè)部第503號公告《高致病性動物病原微生物菌（毒）種或者樣本運輸包裝規(guī)范》。13、國家食品藥品監(jiān)督管理局《生物安全柜》YY0569－2006，已修訂為2011版，于2013年6月1日執(zhí)行。當前12頁，總共54頁。實驗室生物安全有關的法律法規(guī)14、2006年，國家環(huán)境保護總局第32號令《病原微生物實驗室環(huán)境安全管理辦法》。15、2011年8月，國家科技部令第15號《高等級病原微生物實驗室建設審查辦法》當前13頁，總共54頁。實驗室生物安全有關的法律法規(guī)到目前為止，由國家、科技部、衛(wèi)生部和藥監(jiān)局、農業(yè)部、環(huán)保部和國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局等各行政主管部門已頒布實施的與實驗室生物安全有關的法律法規(guī)、技術標準大約有近20項。系統(tǒng)地規(guī)范和要求了病原微生物實驗室建設標準、審批、管理、設施、安全設備、人員等要求。

主要有：1、病原微生物分類管理的要求2、實驗室分級管理的要求3、實驗室生物安全管理的要求4、高等級生物安全實驗室的系列審批要求當前14頁，總共54頁。病原微生物風險等級與危害等級分類1、病原微生物風險等級分類

第一類病原微生物第二類病原微生物第三類病原微生物第四類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物當前15頁，總共54頁。病原微生物風險等級與危害等級分類2、病原微生物風險等級分類依據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度將病原微生物分：一類是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。

二類是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。當前16頁，總共54頁。病原微生物風險等級與危害等級分類2、病原微生物風險等級分類依據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度將病原微生物分：三類是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。四類是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。當前17頁，總共54頁。病原微生物風險等級與危害等級分類3、病原微生物危害等級分類（GB19489）危害等級I（低個體危害，低群體危害）：不會導致健康工作者和動物致病的細菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。危害等級Ⅱ(中等個體危害，有限群體危害)：能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴重危害的病原微生物。實驗室感染不導致嚴重疾病，具備有效治療和預防措施，并且傳播風險有限。當前18頁，總共54頁。病原微生物風險等級與危害等級分類3、病原微生物危害等級分類（GB19489）危害等級III（高個體危害，低群體危害）：能引起人類或動物嚴重疾病，或造成嚴重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原微生物。危害等級Ⅳ(高個體危害，高群體危害)：能引起人類或動物非常嚴重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與動物間傳播的病原微生物。當前19頁，總共54頁。病原微生物風險等級與危害等級分類4、病原微生物危害等級分級依據(jù)GB19489-2008《實驗室生物安全通用要求》，分級依據(jù)：微生物的致病性；傳播方式和宿主范圍；具有的有效預防措施；具有的有效治療措施。當前20頁，總共54頁。實驗室生物安全分級根據(jù)所操作的生物因子的危害程度和采取的防護措施，將實驗室生物安全防護水平分為四級，一級防護水平最低，四級防護水平最高。

1、一級生物安全防護實驗室（BSL-1和ABSL-1實驗室）－基礎實驗室2、二級生物安全防護實驗室（BSL-2和ABSL-2實驗室）－基礎實驗室3、三級生物安全防護實驗室（BSL-3和ABSL-3實驗室）－防護實驗室4、四級生物安全防護實驗室

（BSL-4和ABSL-4實驗室）－最高防護實驗室當前21頁，總共54頁。實驗室生物安全分級1、BSL－1實驗室適用于實驗對象已知對健康成年人無致病作用，對實驗室工作人員和環(huán)境的潛在危害很小。防護水平最低,普通建筑物即可。當前22頁，總共54頁。實驗室生物安全分級2、BSL－2實驗室

2.1適用于：

實驗對象對人和環(huán)境具有中等潛在危害。如：(1)含漱液、血清和血液等樣品的診斷檢測(2)溶液、固定或用其他方法處理滅活的病毒和/或無傳染性病毒基因片段(3）常規(guī)的細菌和毒素檢測(4）能產(chǎn)生氣溶膠的樣品處理(5）臨床樣品的包裝、分裝(6）離心管和離心機轉頭的封閉與開啟當前23頁，總共54頁。實驗室生物安全分級2、BSL－2實驗室

2.2、特殊情況:（1）致病微生物氣溶膠或濺出的操作（2）處理高濃度或大容量感染性材料2.3、要求：在生物安全柜或物理抑制設備中進行，并使用個體防護設備。當前24頁，總共54頁。實驗室生物安全分級3、BSL－3實驗室適用于：主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素（如禽流感），通常已（可）有預防傳染的疫苗。艾滋病病毒的研究（血清學實驗除外）-------自成隔離區(qū)有出入控制或為獨立建筑物。當前25頁，總共54頁。實驗室生物安全分級3、BSL－3實驗室設備結構：

當前26頁，總共54頁。實驗室生物安全分級4、BSL－4實驗室戲稱為魔鬼實驗室當前27頁，總共54頁。實驗室生物安全分級當前28頁，總共54頁。實驗室生物安全分級4、BSL－4實驗室當前29頁，總共54頁。實驗室生物安全分級5、病原微生物風險等級與生物安全分級BSL－1：第四類病原微生物BSL－2：第三類病原微生物BSL—3：第二類病原微生物BSL—4：第一類病原微生物試驗設施、設備要求應與所開展檢測的微生物要求一致?！度碎g傳染的病原微生物名錄》（衛(wèi)生部2006）規(guī)定藥典涉及的陽性菌的活菌操作應在BSL-2實驗室進行當前30頁，總共54頁?！度碎g傳染的病原微生物名錄》（衛(wèi)生部2006）

藥品檢驗有關的細菌危害程度

當前31頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求1、BSL-1實驗室

(1)、應有防止節(jié)肢動物和嚙齒動物進入的設計。(2)、每個實驗室在靠近出口處應設洗手池。(3)、在實驗室門口處應設掛衣裝置，個人便裝與實驗室工作服分開設置。(4)、實驗室的墻壁、天花板和地面應平整、易清潔、不滲水、耐化學品和消毒劑的腐蝕。地面應防滑，不得鋪設地毯(5)、實驗臺面應防水，耐腐蝕、耐熱。(6)、實驗室如有可開啟的窗戶，應設置紗窗。參照(7)、應有適當?shù)南驹O備。當前32頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求2、BSL-2實驗室擋鼠板：進門處。水池：門口設洗手池、感應龍頭。門扇：可自閉、有可視窗、外開。可開窗：防蟲紗窗地墻頂：防滑、平整、易清潔、不滲水、耐擦拭、耐腐蝕。實驗臺：防水，耐腐蝕、耐熱。足夠空間：擺放存儲物品專用工作服；應戴乳膠手套。II級生物安全柜

高壓蒸汽滅菌器溫度：18-28℃濕度：30-70%噪聲：≤60dB（A）照度：300LX標示：出入及各種警示標識當前33頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求3、生物安全柜（BSC）(1)概念：用來保護操作者本人，實驗室環(huán)境及實驗材料，使其避免暴露于操作過程中產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設計的負壓排氣柜。(2)執(zhí)行標準

YY0569－2005《生物安全柜》

YY0569－2011《二級生物安全柜》當前34頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求3、生物安全柜（BSC）

（3）I級生物安全柜適用于樣品不需保護的工作當前35頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求3、生物安全柜（BSC）

（4）Ⅱ級生物安全柜A型(B3)30%外排進入環(huán)境30%外界空氣補充70%經(jīng)過濾后循環(huán)使用當前36頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求3、生物安全柜（BSC）

（5）Ⅱ級生物安全柜B2型100%外排進入環(huán)境100%外界空氣補充無循環(huán)使用的氣流當前37頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求3、生物安全柜（BSC）

（6）Ⅱ級生物安全柜B1型70%

外排進入環(huán)境70%

外界空氣補充30%

過濾后循環(huán)使用當前38頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求3、生物安全柜（BSC）（7）Ⅱ級生物安全柜的級別差異

生物安全柜工作口平均進風速m/s循環(huán)風比例（%）排風比例（%）連接方式II級A10.38～0.517030可排到房間或套管連接處外排型A20.517030B10.513070密閉連接，硬管B20.510100密閉連接，硬管可排到房間或套管連接處當前39頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求3、生物安全柜（BSC）（8）Ⅱ級生物安全柜防護特征比較

當前40頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求3、生物安全柜（BSC）（9）Ⅱ級生物安全柜的選擇①Ⅱ級生物安全柜的4個級別對微生物氣溶膠的防護性能是一樣的。②正常情況下，Ⅱ級生物安全柜的使用壽命為5年，如果使用全新風的Ⅱ級B2型生物安全柜，其使用壽命會縮短。③頻繁更換HEPA，也會嚴重影響工作。

當前41頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求3、生物安全柜（BSC）（9）Ⅱ級生物安全柜的選擇④選擇Ⅱ級A型還是B型生物安全柜的關鍵：是取決于操作人員是否會用到揮發(fā)性的有害物質或放射性物質的因素來決定的，而不是病原微生物的因素。當操作揮發(fā)性或有毒化學試劑時，不應該使用Ⅱ級A型生物安全柜。

當前42頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求3、生物安全柜（BSC）（9）Ⅱ級生物安全柜的選擇⑤Ⅱ級B1型生物安全柜用于操作少量揮發(fā)性化學試劑和放射性核素。⑥

Ⅱ級B2型生物安全柜是全排放型安全柜，在需要操作大量放射性核素和揮發(fā)性化學試劑時，必須使用Ⅱ級B2型生物安全柜。

當前43頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求3、生物安全柜（BSC）（9）生物安全柜操作注意事項①將實驗器具放置于安全柜中，紫外滅菌15分鐘后，通風10-15分鐘。②檢測氣流是否正常。③規(guī)范有序進行試驗，即雙手緩慢進入前面的開中，等待約1分鐘，等安全柜調整完畢后才可對樣品進行處理。④避免手臂快速移動和頻繁進出安全柜，以免紊亂氣流，同時避免實驗材料擋住風口。⑤在生物安全柜內進行操作不能進行文字工作。

當前44頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求3、生物安全柜（BSC）（9）生物安全柜操作注意事項⑥操作應在安全柜的中后部進行。⑦前送風格柵不得被實驗材料堵住，以防干擾氣流，可能使實驗材料受到污染，人員暴露。⑧由于剩余的培養(yǎng)基可能會使微生物生長繁殖，因此在實驗結束時，包括儀器設備在內的生物安全柜里的所有物品都應清除表面污染，并移出安全柜。⑨實驗完畢，用合適的消毒劑清潔安全柜內部。紫外滅菌15分鐘，通風10-15分鐘后關閉安全柜。

當前45頁，總共54頁。生物安全防護實驗室的設施和設備要求3、生物安全柜（BSC）（9）生物安全柜操作注意事項⑩HEPA濾器不能截留化學氣體，同時，揮發(fā)的化學品可能損壞HEPA濾器。

⑾濾器風扇以及安全柜內插座可能產(chǎn)生電火花，如果在安全柜中操作易燃易揮發(fā)液體易引起火災或者爆炸。

⑿生物安全柜在移動以及更換過濾器之前，必須清除污染。⒀在使用生物安全柜時應穿著個體防護服。

當前46頁，總共54頁。藥品微生物實驗室生物安全防護1、基本原則⑴確保實驗操作人員的安全。⑵確保實驗操作場所和周邊環(huán)境的安全。⑶確保實驗樣品的安全（不被染污）。⑷確保實驗儀器和設備正常運作的安全。

當前47頁，總共54頁。藥品微生物實驗室生物安全防護2、技術措施

（1）樣品隔離技術（機械、氣幕）

（2）定向流