中藥制劑的定性鑒別

第三章中藥制劑的定性鑒別

目的：檢定制劑的真實(shí)性。

方法：1.顯微鑒別法2.理化鑒別法1）一般化學(xué)反應(yīng)法2）升華法3）熒光法4）光譜法5）色譜法

第一節(jié)中成藥的顯微鑒別

一、制片方法1．散劑、膠囊劑取粉末，直接加水或水合氯醛透化裝片。

2．片劑用刀片直接從藥片斷面刮取少量粉末或研碎后取少量樣品透化裝片。

3．水丸、錠劑研成粉末后取少量直接透化裝片。

4．蜜丸取蜜丸切碎，加水?dāng)嚢?，洗滌后，置離心管中離心分離沉淀。如此反復(fù)處理以除去蜂蜜后透化裝片。若觀察細(xì)胞內(nèi)含物形狀，應(yīng)選用不同試劑制片。淀粉粒水或甘油醋酸試液；糊粉粒甘油；水溶性內(nèi)含物乙醇或水合氯醛試液(不加熱)。

固定標(biāo)本片制片方法取中成藥粉末置離心管中，加乙醇浸過上面，玻棒攪拌5～10分鐘后離心使粉末沉積，傾去稀醇液，再加無水乙醇二次，丙酮一次，丙酮、二甲苯等量混合液一次，如前操作，每次10～20分鐘；最后加入純二甲苯，略加攪拌，取處理后的樣品微量置載玻片上，滴加中性樹膠，加蓋玻片封藏，貼標(biāo)簽。

(三)莖類1．莖類表皮細(xì)胞及垂周壁的形狀，氣孔的類型，毛茸的類型及形態(tài)；導(dǎo)管的類型、直徑、長短。管胞的形態(tài)；纖維的形狀、直徑、長短、有無晶纖維等。草酸鈣結(jié)晶多為方晶及簇晶，單子葉植物偶見針晶。薄壁組織碎片、石細(xì)胞。

2．皮類纖維的直徑、長短及形狀，是否成束存在，細(xì)胞壁厚薄、木化與否，能否看到胞腔及壁孔等。石細(xì)胞的形狀、細(xì)胞壁增厚情況。草酸鈣結(jié)晶多為方晶及簇晶，砂晶及針晶較少。皮類藥材粉末不應(yīng)含有木質(zhì)部組織，如導(dǎo)管、管胞等。

3．木類可見導(dǎo)管、管胞、木纖維、木射線及木薄壁細(xì)胞。細(xì)胞壁通常均木化。不應(yīng)有木栓細(xì)胞及綠色組織等。

(四)花類1．苞片及花萼構(gòu)造類同葉片，表面上可見到氣孔及毛茸。

2．花冠上表皮細(xì)胞常呈乳頭狀或絨毛狀突起而無氣孔，下表皮細(xì)胞常不呈乳頭狀，細(xì)胞壁微波狀彎曲。維管束組織細(xì)小。

3．雄蕊1）花粉囊內(nèi)壁細(xì)胞的壁不均勻地增厚，呈網(wǎng)狀、螺旋狀、環(huán)紋狀及點(diǎn)狀等；2）花粉粒具圓形、長圓形或多面形等多種形狀。通常具內(nèi)外兩層壁，外壁多數(shù)具各種雕紋。

4．雌蕊柱頭的表皮細(xì)胞呈乳頭狀突起，或分化成絨毛狀。

(五)葉類1．表皮上下表皮細(xì)胞的形狀、大小，角質(zhì)層的形態(tài)，垂周壁的形狀、厚度或增厚情況以及有無氣孔、毛茸等。

2．氣孔氣孔的形狀、大小、型式，保衛(wèi)細(xì)胞的形狀及內(nèi)含物，副衛(wèi)細(xì)胞的數(shù)目、大小、形狀。

3．毛茸注意毛茸的種類。非腺毛：注意細(xì)胞的數(shù)目、形狀、長短、大小、細(xì)胞壁的厚薄及表面形態(tài)等。多為單列性多細(xì)胞毛，少為單細(xì)胞毛。形狀一般呈長圓錐形或線形；細(xì)胞壁一般較薄，外壁表面大都光滑。腺毛：注意頭部的形狀、大小、細(xì)胞的數(shù)目、排列情況以及柄部的長短、細(xì)胞數(shù)目及行列數(shù)目等。(七)種子類1．種皮表皮毛的形狀、細(xì)胞壁的厚薄、是否木化、有無紋理；石細(xì)胞形狀、大小、色澤散布及細(xì)胞壁的增厚情況。柵狀細(xì)胞及油細(xì)胞。

2．外胚乳細(xì)胞大小、形狀、壁厚、色澤、細(xì)胞內(nèi)含物。

3．內(nèi)胚乳細(xì)胞形狀、厚度、內(nèi)含物。

4．胚的子葉有無分泌組織及細(xì)胞的內(nèi)含物。

三、應(yīng)用實(shí)例

六味地黃丸的顯微定性鑒別

[顯微鑒別]取本品置顯微鏡下觀察，(1)薄壁組織棕色至黑棕色，細(xì)胞多皺縮，內(nèi)含棕色核狀物。(熟地黃)(2)果皮表皮細(xì)胞橙黃色，表面觀類多角形，垂周壁略連珠狀增厚。(山茱萸)(3)淀粉粒三角狀卵形或矩圓形，直徑24—40um，臍點(diǎn)短縫狀或人字狀。(山藥)3a草酸鈣針晶束3b淀粉粒(4)草酸鈣簇晶存在于無色薄壁細(xì)胞中，有時(shí)數(shù)個(gè)排列成行。(牡丹皮)(5)不規(guī)則分枝狀團(tuán)塊無色，遇水合氯醛溶化；菌絲無色，直徑4-6um。(茯苓)(6)薄壁細(xì)胞類圓形，有橢圓形紋孔，集成紋孔群。(澤瀉)第二節(jié)中藥制劑的一般理化鑒別法

一、一般化學(xué)反應(yīng)法中藥制劑一般選擇有效成分、特征成分作為鑒別的對象。一般化學(xué)反應(yīng)鑒別法多在試管中用濕法反應(yīng)進(jìn)行，制劑樣品要先制成適宜的供試液。一般情形下用50％-70％乙醇回流提取制備供試液。

一般化學(xué)反應(yīng)法用于中藥制劑鑒別應(yīng)該注意以下幾點(diǎn)：(1)慎重使用專屬性不好的分析反應(yīng)，如泡沫生成反應(yīng)、三氯化鐵顯色反應(yīng)等。(2)在分析前對樣品進(jìn)行分離、精制，除去干擾分析反應(yīng)的物質(zhì)，借此改善鑒別方法的專屬性。(3)采用陰性對照和陽性對照的方式，對擬定的鑒別方法進(jìn)行反復(fù)驗(yàn)證，防止出現(xiàn)假陽性。

二、顯微化學(xué)鑒別法

(一)取藥材的切片、粉末或中成藥粉末，置載玻片上，滴加各種試劑，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察產(chǎn)生的結(jié)晶或沉淀，以及特殊的顏色等，作為鑒別的特征。

例：黃連粉末滴加稀鹽酸，放置5分鐘，可見小檗堿鹽酸鹽黃色結(jié)晶析出。

穿心蓮用水濕潤，切成橫切片，滴加乙醇后加Kedde試液，葉肉組織顯紫紅色(穿心蓮內(nèi)酯成分的不飽和內(nèi)酯環(huán)反應(yīng))。

丁香切片滴加30％氫氧化鈉飽和溶液，略放置，可見油室內(nèi)有針狀丁香酚鈉結(jié)晶析出。

肉桂粉末加氯仿2～3滴，略浸漬，速加2％鹽酸苯肼1滴，可見黃色針狀或桿狀結(jié)晶(肉桂酸反應(yīng))。

(二)取藥材粗粉加適當(dāng)?shù)娜軇┙?，將浸提液置載玻片上，滴加各種試劑，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察反應(yīng)。

例如：檳榔粉末0.5g，加水3～4ml及稀鹽酸1滴，微熱數(shù)分鐘，過濾，取濾液1滴于載玻片上，加碘化鉍鉀試液1滴，即發(fā)生混濁，放置后可見石榴紅球形或方形結(jié)晶(檳榔堿)。

曼陀羅葉少許，加氯仿提取，提取液蒸干，加發(fā)煙硝酸1滴，顯黃色，加氫氧化鉀1粒，顯紫堇色(莨菪烷類成分Vitali反應(yīng))。

(三)取藥材切片或粉末，滴加各種試劑，直接觀察反應(yīng)現(xiàn)象。例如：鐘乳石少許，加濃鹽酸數(shù)滴，能產(chǎn)生大量氣泡(碳酸鹽分解產(chǎn)生CO2)。

番木鱉胚乳薄片，加1％釩酸銨-硫酸試液1滴，胚乳速顯紫色(番木鱉堿)，另取切片加發(fā)煙硝酸1滴，即顯橙紅色(馬錢子堿)。

大黃粉末少許，置白磁板上，加氫氧化鈉液l滴，顯深紅色(蒽醌鈉鹽)。

四、熒光法有些中藥材中含有能產(chǎn)生熒光的化學(xué)成分，在可見光、紫外光照射下能發(fā)出熒光，或經(jīng)試劑處理后發(fā)出熒光。含有這類藥材的中藥制劑可用熒光法進(jìn)行鑒別。通常的操作方法是取制劑的提取液點(diǎn)在濾紙上或試紙上，置紫外光燈下(365nm)觀察，有時(shí)則是加一定的試劑后再進(jìn)行觀察。

實(shí)例l元胡止痛片的熒光鑒別取本品適量，去糖衣，研細(xì)，取粉末1g，加0.25mol／L硫酸液10ml振搖片刻，濾過，取濾液數(shù)滴，點(diǎn)于濾紙上，陰干后置紫外光燈(365nm)下觀察，顯亮黃色熒光。

五、光譜法

(一)可見—紫外分光光度法

不同的藥材所含的成分不同，在一定條件下吸收光譜的特征可用于鑒別藥材。利用這一特點(diǎn)，可見-紫外分光光度法也可用于中藥制劑的鑒別。

(二)紅外光譜法

六、色譜法中藥制劑可用色譜法鑒定，包括薄層色譜法、紙色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法。(一)薄層色譜法使用本法鑒定中藥制劑，通常是在同一塊薄層板上點(diǎn)入樣品和適宜的對照物，采用同一條件依法層析展開，經(jīng)顯色或用其他方法檢出色譜斑點(diǎn)后，將樣品與對照物所得的色譜圖進(jìn)行對比，作出鑒定。

1．樣品應(yīng)作適當(dāng)?shù)念A(yù)處理對樣品進(jìn)行初步的分離精制。常用的預(yù)處理方法有：升華法，蒸餾法，溶劑提取法，小型層析柱的柱色譜法、離子交換法等。

2．展開劑的選擇選用能突出主要斑點(diǎn)，便于分析比較的展開劑，如果鑒別的對象相同，應(yīng)首先試用已有的、較成熟的展開劑。如無現(xiàn)有展開劑，可先以無水乙醇-苯（1∶4）展開，如主要物質(zhì)的Rf在0.8以上，改用苯-氯仿（1∶3），如主要物質(zhì)的Rf在0.3以下，改用丙酮-甲醇（1∶1）。

應(yīng)用實(shí)例1.大黃及含大黃的成藥

1）供試液制備取各樣品適量，加甲醇20ml浸漬1h，過濾，取濾液5ml，蒸干，加水10ml使溶解，再加HCl1ml，水浴加熱30min，立即冷卻，乙醚提取兩次，20ml/次，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)勇确氯芙獬?ml。

2）對照液制備取大黃對照藥材0.1g．按供試液制備作為對照藥材溶液；另取蘆薈大黃素，大黃酸，大黃素，大黃素甲醚，大黃酚對照品，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作為對照品溶液。

3）薄層板硅膠H加0.3％CMC-Na溶液的自制板；厚度：300um

4）點(diǎn)樣分別點(diǎn)樣4uL。

5）展開劑石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)放置后的上層溶液。

6）展開方式上行展開；展距：7cm。

7）顯色置紫外光燈(365nm)下檢視。

8）色譜識別紫外光燈(365nm)下，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)。

9）備注在部分成藥樣品的色譜中，除大黃的五個(gè)蒽醌成分的斑點(diǎn)外，尚有其它熒光斑點(diǎn)，為處方中的其它成分。1234567891011121314151617

樣品：1．蘆薈大黃素；2．大黃酸；3．大黃素；4．大黃素甲醚；5．大黃酚；6．大黃(掌葉大黃)對照藥材；7．大黃(唐古特大黃)對照藥材；8．大黃流浸膏；9．小兒化毒散；10．檳榔四消丸；11．木香