實(shí)驗(yàn)七培養(yǎng)基的制備及干濕滅菌法課件

實(shí)驗(yàn)五培養(yǎng)基配制及干、濕熱滅菌

一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?/p>

1.了解配制培養(yǎng)基的基本原理，掌握配制方法2.了解并掌握干、濕熱滅菌的原理及方法二.實(shí)驗(yàn)原理

(一)培養(yǎng)基培養(yǎng)基是人工配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存各種微生物或積累代謝產(chǎn)物。不同微生物選用不同培養(yǎng)基，但是，不同種類的培養(yǎng)基中，一般應(yīng)含有水分、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素等。（二）干、濕熱滅菌

干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時(shí)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之含水量越小，凝固緩慢。高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。三.材料儀器1.藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、可溶性淀粉、K2HPO4、KH2PO4、蒸餾水、瓊脂、1mol氫氧化鈉、花生油、葡萄糖、溴甲酚紫、中性紅、乙醇

2.器材：天平、藥匙、瓷缸、玻璃棒、電爐、PH試紙、試管、三角瓶、移液管、牛皮紙、棉花、線繩、高壓鍋。四.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及方法

1.稱量

按照培養(yǎng)基配方，準(zhǔn)確稱量各成份放于燒杯（液體培養(yǎng)基）或三角瓶（固體培養(yǎng)基）中。

2.溶解

向上述燒杯中加入所需要的水量，攪拌，加熱使其溶解。如是配制固體培養(yǎng)基，在瓊脂的熔化過程中，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。待完全熔化后，補(bǔ)足所失水分。

培養(yǎng)基的制備過程

稱量---溶解----調(diào)節(jié)pH值----過濾----分裝及包扎----滅菌----滅菌后試管擺放斜面

3.調(diào)節(jié)pH值用玻璃棒沾少許液體，測(cè)量PH值。用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH。4.過濾

用濾紙或多層紗布過濾，一般無(wú)特殊要求可省去。5.分裝及包扎根據(jù)不同的需要，可將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)（用分裝漏斗）或三角瓶?jī)?nèi)，管（瓶）口塞上棉塞。最后用牛皮紙將棉塞部分包好。6.滅菌：高壓蒸汽滅菌，121℃滅菌20分鐘。7.滅菌后試管擺放斜面。

注意事項(xiàng)固體培養(yǎng)基直接在三角瓶中配；液體培養(yǎng)基在燒杯中配制，后分裝于試管中，每管10ml稱取牛肉膏時(shí)，用玻璃棒挑取適量放在小稱量紙上，直接放入三角瓶中，待牛肉膏完全溶化后，取出稱量紙（注意：不要將玻璃棒插入瓶底）馬鈴薯去皮，切成小塊（1cm×1mm）放在白瓷缸（加水300ml）中煮，待水煮沸后繼續(xù)煮30分鐘，并不停攪拌和補(bǔ)水，然后過濾，在加入其它成分稱取適量可溶性淀粉，加入適量水中，加熱使其充分溶化后在加入其它成分。糖發(fā)酵培養(yǎng)基（藍(lán)紫色）、三倍濃縮的乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基（藍(lán)紫色）及普通濃度的乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基（藍(lán)紫色）配好后，分裝于試管中，加入德漢氏小管（倒置）配制固體培養(yǎng)基時(shí)，瓊脂在調(diào)好pH值后加調(diào)pH值時(shí)注意慢慢加NaOH，不要一下子調(diào)過頭稱量要準(zhǔn)確，最后一位同學(xué)稱完藥品后，將藥勺取出來(lái)，蓋好瓶蓋,收好砝碼含葡萄糖及乳糖的培養(yǎng)基在115攝氏度滅菌，其余在121攝氏度滅菌加水至外筒內(nèi)，被滅菌物品放入內(nèi)筒。蓋上滅菌器蓋，擰緊螺旋使之密閉。通電加熱，同時(shí)打開排氣閥門，排凈其中冷空氣。待冷空氣全部排出后（即水蒸氣從排氣閥中連續(xù)排出時(shí)），關(guān)閉排氣閥。繼續(xù)加熱，待壓力表漸漸升至所需壓力時(shí)(一般是101.53kPa，即15磅/英寸2，溫度為121.3℃)，開始計(jì)時(shí)，維持15-30min。滅菌時(shí)間到達(dá)后，停止加熱，待壓力降至零時(shí)，慢慢打開排氣閥，排除余氣，開蓋取物。切不可在壓力尚未降低為零時(shí)突然打開排氣閥門，以免滅菌器中液體噴出。

高壓蒸汽滅菌器使用方法手提式高壓蒸汽滅菌器示意圖作業(yè)：

1.在配制培養(yǎng)基的操作過程中應(yīng)注意些什么問題？為什么？2.你配制的高氏一號(hào)培養(yǎng)基有沉淀產(chǎn)生嗎？說(shuō)明產(chǎn)生或未產(chǎn)生的原因。3.高壓蒸氣滅菌開始之前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么待壓力降低為“0”時(shí)才能打開排氣閥，開蓋取物？